微波暴露对原代培养大鼠海马神经元热休克蛋白家族表达的影响

目的 研究微波暴露对原代培养大鼠海马神经元中热休克蛋白(heat shock proteins,HSPs)表达调控的影响.方法 采用平均功率密度为90 mW/cm2微波辐照成熟的原代培养大鼠海马神经元10 min,于辐照后0、3、6、12、24 h提取细胞总蛋白,采用免疫印迹(Western blot)法检测HSP27、HSP70、HSP90和热休克转录因子(heat shock factor 1,HSF1)蛋白表达情况;于辐照后0、3、6、12、24 h分别提取细胞总RNA和总蛋白,采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测hsf1的mRNA表达水平;于辐照后20、40 min提取细胞核蛋白,凝胶迁移滞后实验(electrophoretic mobility shift assays,EMSA)法检测HSF1的活性变化.结果 90 mW/cm2微波辐照10 min后,HSP27蛋白表达水平在辐照后3、6、12 h分别明显升高22%、36%、18%,HSP70蛋白表达水平在辐照后3、6、12 h分别明显升高23%、32%、26%,与辐照前比较,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).HSP90蛋白表达水平在辐照后6、12 h分别明显升高27%、33%,与辐照前的差异亦有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).HSF1 mRNA和蛋白表达水平未见明显变化,但微波辐照可激活HSF1的DNA结合活力. 结论微波辐照后大鼠海马神经元发生热休克反应,被活化的HSF1在转录水平上调控HSPs的表达,从而发挥拮抗微波损伤的作用.     

诱导分化联合热休克处理对K562细胞JWA和热休克蛋白70表达的影响

目的　研究不同诱导分化剂单独或与热休克联合作用下 ,K562细胞JWA蛋白表达的特点和规律 ,探讨JWA与热休克蛋白 70 (Hsp70 )表达的关系以及可能涉及的信号调节机制。方法　建立诱导K562细胞定向分化以及和热休克联合作用的实验模型 ,用Westernblot方法检测JWA、Hsp70、热休克转录因子 1(HSF1)、HSF2等蛋白表达。结果　 (1)佛波酯 (TPA ,10 0、2 0 0ng/ml)或阿霉素 (adri amycin ,4× 10 - 8mol/L)处理细胞 48h后 ,再热休克 (42℃ )处理 2h ,JWA和Hsp70蛋白表达均增加 ;而氯化高铁血红素 (hemin ,3× 10 - 5 mol/L ,48h)、阿糖胞苷 (Ara C ,80ng/ml,48h)和三氧化二砷 (As2 O3,1× 10 - 6 mol/L ,48h)处理后再热休克处理细胞 2h ,则JWA和Hsp70蛋白表达均下调 ;全反式维A酸(ATRA ,1× 10 - 6 mol/L ,48h)处理细胞后 ,再热休克处理 ,则JWA和Hsp70蛋白表达无明显变化。 (2 )不同诱导分化剂处理K562细胞后再热休克处理 ,HSF1和HSF2表达变化均不明显。结论　JWA不但参与K562细胞的诱导分化调节 ,也参与细胞对热应激的调节 ,JWA可能是多种化学诱导分化剂和热休克的共同靶基因。诱导K562细胞分化过程中 ,Hsp70的表达不需要热休克转录因子介导 ,JWA可能是一种与Hsp70信号通路平行的新的信号分子。我们的实验结果首     

苯并〔a〕芘对内皮细胞HSF1与HSE结合特性分析

目的研究苯并〔a〕芘(BaP)作用下热休克转录因子1(HSF1)与热休克元件(HSE)结合特性,分析BaP对热应激蛋白70(HSP70)的表达的影响。方法取对数生长期的猪主动脉内皮细胞传代培养,分别以不同浓度的BaP染毒(0、0.1、0.5、1、5、10μmol/L)24h,提取细胞核蛋白,用凝胶阻滞电泳实验(EMSA)检测结合率。结果低(0.1μM)、中剂量(0.5,1μM)BaP可使HSF1-HSE结合率上升,高剂量(5,10μM)BaP使HSF1-HSE结合率明显降低。结论BaP可改变细胞HSF1-HSE结合能力,低、中剂量的BaP使HSF1-HSE结合率升高,提示可促进HSP70表达,高浓度BaP可抑制HSP70的表达。     

苯并[a]芘对内皮细胞HSF1与HSE结合特性分析

目的研究苯并[a]芘（BaP）作用下热休克转录因子1（HSF1）与热休克元件（HSE）结合特性，分析BaP对热应激蛋白70（HSP70）的表达的影响。方法取对数生长期的猪主动脉内皮细胞传代培养，分别以不同浓度的BaP染毒（0、0．1、0．5、1、5、10μmol／L）24h，提取细胞核蛋白，用凝胶阻滞电泳实验（EMSA）检测结合率。结果低（0．1μM）、中剂量（0．5，1μM）BaP可使HSF1-HSE结合率上升，高剂量（5，10μM）BaP使HSF1-HSE结合率明显降低。结论BaP可改变细胞HSF1-HSE结合能力，低、中剂量的BaP使HSF1-HSE结合率升高，提示可促进HSP70表达，高浓度BaP可抑制HSP70的表达。     

HSP 70高表达对射线诱导的前体血细胞凋亡的保护作用

目的研究诱导热休克蛋白(HSP70)高表达对射线引起的前体血细胞凋亡的保护作用。方法前体血细胞分别在41℃温浴2h和加入砷酸钠诱导HSP70，然后射线辐照。对照前体血细胞则只是射线辐照而不预热。并用HSP70反义寡核苷酸链抑制HSP70合成，进一步观察HSP70与细胞凋亡的关系。利用DNA碎片检测法检测细胞凋亡，HSP70的量利用Western Blotting检测。结果预热和砷酸钠都可以诱导前体血细胞HSP70高表达；预热同时可以增加细胞凋亡的基础量．HSP70高表达可以明显减少辐射诱导的细胞凋亡。在预热前导入HSP70反义核酸链到前体血细胞，就可以减少HSP70的抑制细胞凋亡的作用。结论不论何种因素诱导的HSP70高表达都可以保护前体血细胞因为辐射引起的细胞凋亡。     

槲皮素抑制HSP70表达的体外研究

目的探讨不同浓度槲皮素抑制正常细胞和肿瘤细胞热休克蛋白70(HSP70)的表达规律,寻找槲皮素抑制HSP70表达的最佳浓度,为研究HSP70的功能提供一种可行的方法。方法加入槲皮素至终浓度为50,100,150,200μmol/L,继续37℃培养6 h后,置42℃水浴受热1 h,于37℃恢复培养2 h,收获细胞。设立37℃培养组(正常对照)、42℃培养组(阳性对照)和0.1%DMSO组(溶剂对照)。分别处理肿瘤细胞株A549细胞和正常细胞株2BS细胞,用Western-blot检测细胞HSP70的表达水平。结果在A549细胞和2BS细胞中,随着槲皮素浓度的增加,HSP70表达逐渐降低。与正常对照组相比,阳性对照组和溶剂对照组的HSP70水平表达增高,差异有统计学意义(P<0.01)。在A549细胞中,当槲皮素浓度达到50μmol/L时,HSP70表达开始下调,但与阳性对照组相比,差异没有统计学意义(P>0.05);当槲皮素浓度达到100μmol/L时,与阳性对照组相比,HSP70表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);当槲皮素浓度达到150,200μmol/L时,与阳性对照组相比,A549细胞HSP70表达降低更加明显(P<0.01);150μmol/L组和200μmol/L组相比,HSP70水平差异无统计学意义(P>0.05)。在2BS细胞中,当槲皮素浓度达到50μmol/L时,HSP70表达开始下调,与阳性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);当槲皮素浓度达到100,150,200μmol/L时,与阳性对照组相比,HSP70水平也有显著性降低(P<0.01);150μmol/L组和200μmol/L组相比,HSP70水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论槲皮素可以抑制肿瘤细胞和正常细胞HSP70的表达,150μmol/L的槲皮素处理A549和2BS细胞,抑制HSP70表达的效果最佳。     

苯并(a)芘对热休克因子1的影响

[目的 ]研究苯并 (a)芘 (benzo(a)pyrene ,BaP)对热休克因子 1(heatshockfactor 1,HSF1)的影响。 [方法 ]离体原代培养猪主动脉内皮细胞 ,以不同浓度的BaP( 0、0 .1、0 .5、1、5、10 μmol/L)染毒 2 4h ,分别以Western blot法和凝胶阻滞电泳 (electrophoreticmobilityshiftassay ,EMSA)法检测各浓度组细胞HSF1表达及HSF1与热休克元件 (heatshockelement,HSE)结合水平的变化。 [结果 ]低、中浓度 ( 0 .1～ 1μmol/L)的BaP对HSF1总表达量基本无影响 ,胞质和胞核HSF1表达量与阴性对照组相比没有明显改变 (P >0 .0 5 ) ,但随BaP浓度的升高 ,HSF1有向胞核转移的趋势 ;而高浓度 ( 5、 10μmol/L)的BaP会导致胞浆和胞核HSF1均降低 (P <0 .0 5 )。低、中浓度 ( 0 .1～ 1μmol/L)BaP作用下 ,HSF1 HSE结合水平基本不变或略有上升 ,高浓度 ( 5、10 μmol/L)的BaP使HSF1 HSE结合水平明显降低。[结论 ]BaP作用时 ,内皮细胞HSF1表达水平与分布、HSF1 HSE结合能力的改变可能是BaP导致热休克蛋白 (heatshockprotein 70 ,HSP70 )表达降低原因之一 ;但BaP作用下 ,内皮细胞HSF1表达水平与分布、HSF1 HSE结合能力的改变与HSP70表达改变并不完全一致 ,提示研究HSF1与HSE结合之后的改变对进一步揭示BaP致HSP70的基因表达降低的     

热休克蛋白对癌的诊断、预后、预测及治疗的影响

热休克蛋门（heat shock protein,HSP）首次发现是作为一组蛋白,通过热休克反应及理化刺激诱导产生,存在于大多物种之中。随后发现,其具有分子伴侣特性。其表达在大多癌组织中是增高的,对癌逃逸凋亡起着重要作用,转录时需要转录因子1（HSF1）参与。     

酒精对胎鼠脑星型胶质细胞热休克蛋白70表达和细胞超微结构的影响

目的　研究酒精对大鼠胚胎脑星型胶质细胞热休克蛋白HSP70表达和细胞超微结构的影响。方法　对体外分离培养的大鼠胚胎脑星型胶质细胞分别施以不同剂量酒精 (1、5、2 5、5 0mmol L) ,以免疫细胞化学技术观察酒精对其HSP70表达的影响 ,并结合电镜技术观察其超微结构的变化。结果　随酒精剂量增加 ,胎鼠脑星型胶质细胞HSP70阳性表达与剂量成正相关 ;2 5mmol /L和 5 0mmol /L剂量组存活细胞个数减少 ,细胞膜和线粒体发生损伤 ,部分细胞出现凋亡和坏死。结论　提示酒精能通过增强星型胶质细胞HSP表达抑制维持正常功能蛋白质的表达 ,并可通过损伤星型胶质细胞的细胞膜和线粒体导致凋亡和坏死。     

bFGF对脑缺血大鼠脑组织HSP70 mRNA表达影响

目的 研究大鼠脑缺血再灌注后热休克蛋白70(HSP70)mRNA的表达,探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对脑组织缺血再灌注神经元HSP70 mRNA的调节作用及机制.方法 应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,大脑中动脉阻塞1h再灌注损伤24h,采用原位缺口末端标记法(TUNEL)、RT-PCR法检测海马及皮质内神经元凋亡和HSP70 mRNA的表达.结果 大鼠缺血再灌注海马及顶叶皮质内神经元凋亡数增加而HSP70mRNA表达较正常组增加.注射bFGF后神经元凋亡数减少,HSP70mRNA表达明显高于缺血再灌注组.结论 bFGF抑制缺血神经元凋亡,参与HSP70 mRNA的调节,对缺血神经元有保护作用.     

新的环境应答蛋白JWA在MCF-7细胞应答氧化应激中的表达

目的研究氧化应激诱导MCF-7细胞氧化损伤过程中，JWA表达的调节规律及其作用，尤其是与热休克蛋白(HSPs)间的关系。方法以不同浓度的H202(0．01、0．10、1．00mmol／L)分别处理MCF-7细胞10、30、60、180min，建立MCF-7细胞氧化损伤模型并用DNA琼脂糖凝胶电泳鉴定；用四唑蓝(MTT)法分析H2O2对MCF-7细胞的相对细胞增殖率和细胞毒性的影响；采用Western-blot方法检测JWA、HSPT0、HSP27和热休克转录因子(HSF1)蛋白表达水平的变化。结果H202对MCF-7细胞的增殖抑制和细胞毒性呈时间和剂量依赖关系，MCF-7细胞在最高剂量、最长处理时间(1．00mmol／L、180min)时，细胞增殖几乎完全受抑制。H2Ch活跃地调节JWA的表达，氧化损伤使JWA、HSPT0和HSF1表达上调并呈剂量依赖关系，而且JWA、HSPT0和HSF1的表达规律相似，而HSP27表达似乎与氧化应激的信号调节无关。结论在H2O2致MCF-7细胞氧化应激时，JWA作为有效的环境应答蛋白．其与HSP70共同参与的信号通路可能受HSF1调控。     

预热诱导K_(562)细胞热应激蛋白70高表达对高温引起细胞凋亡的影响

为初步观察预热诱导的应激蛋白 70 (HSP70 )高表达对高温所致细胞凋亡影响 ,用 40℃预热诱导K5 6 2 细胞产生应激蛋白 70高表达 ,用 RT- PCR半定量法检测细胞应激蛋白表达情况 ,然后分别将预热细胞和对照细胞置于 43℃用高温诱导细胞凋亡 ,用流式细胞仪检测细胞凋亡率 ,判断 HSP70高表达对细胞凋亡的影响。用 RT- PCR检测发现 ,随着细胞预热时间的延长 ,细胞 HSP70合成明显增加 ,到 12 0 min时达到最高 ,高水平可以维持数小时 ;43℃高温处理后 ,未预热组的细胞凋亡率明显高于预热细胞 ;预热时间长的细胞组细胞凋亡率明显低于预热时间短的细胞组。提示 HSP70高表达可以抑制高温所致的 K5 6 2 细胞凋亡。     

丝裂原活化蛋白激酶信号途径在苯并[a]芘影响内皮细胞热休克蛋白70基因表达中的作用

目的研究丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信号途径在苯并[a]芘(BaP)影响内皮细胞热休克蛋白70(HSP70)基因表达中的作用.方法猪主动脉内皮细胞以不同浓度BaP(0、0.1、0.5、1.0、5.0、10.0 μmol/L)染毒24 h,或以PD98059(10μmol/L)或SB203580(20μmol/L)预处理1 h后再加一定剂量的BaP共同孵育24 h.分别以Western-blot法检测各组细胞磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(extracellularsignal regulated protein kinase,ERK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(c-Jun amino-terminal kinase,JNK)、磷酸化p38和HSP70表达水平的改变.结果随BaP浓度的升高,MAPK途径的3种磷酸化激酶表达水平出现不同程度的改变,其中磷酸化ERK1表达改变最明显,呈剂量反应性增加.BaP抑制内皮细胞HSP70表达,在中、高剂量(≥1.0μmol/L)暴露时,HSP70表达明显低于对照组,差异有显著性(P＜0.05);尽管ERK途径抑制剂PD98059可部分减弱BaP对HSP70表达的抑制效应,但经PD98059预处理后内皮细胞HSP70表达水平仍明显低于正常状态下的表达水平,差异亦有显著性(P＜0.05).结论BaP可能通过ERK1途径而影响内皮细胞HSP70基因表达,同时可能还有其他信号途径在BaP影响HSP70基因表达过程中起作用.     

紫外线诱导HaCaT细胞IL10 mRNA及蛋白表达

目的探讨紫外线致机体免疫抑制的作用机制。方法体外培养人角质形成细胞系（HaCaT）,以0.6,1.2,1.8,2.4,3.0,3.6 J/cm^2长波紫外线（UVA）照射,采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法检测细胞活力。以2.4 J/cm^2UVA照射HaCaT细胞,于0,2,4,12,24,48 h收集细胞及培养掖,分别采用RT-PCR和双抗夹心ELISA方法,检测白细胞介素10（IL10）mRNA及其蛋白表达。结果3.0,3.6 J/cm^2UVA照射使体外培养的HaCaT细胞活力明显降低（P〈0.05）;0.6～2.4 J/cm^2UVA照射对细胞活力无明显影响（P〉0.05）。HaCaT细胞经2.4J/cm^2UVA照射后12h,IL19 mRNA呈弱表达;照射后24h,培养液中IL10蛋白水平为（17.45±0.65）pg/ml;照射组其他各检测时点及对照组细胞未见IL10 mRNA及蛋白表达。结论正常情况下HaCaT细胞并不表达IL10,UVA照射可诱导其表达。     

The aged and stress response]

It is generally considered that aged people have less potential for adapting to environmental changes. In this review, an attempt is made to see whether experimental results support the above working hypothesis and how lower adaptation potential is involved in the aging process. Studies with human beings, rats and human diploid fibroblasts showed a gradual reduction of heat shock proteins (HSPs) and their mRNA and DNA binding activity of heat shock factor (HSF) during aging. Furthermore, the activation of HSF from monomer to trimer was reduced irrespective of the presence of comparative amounts of HSF in the aged cells. Cells from elder organisms or late-staged fibroblasts in culture may have altered the redox state and/or abnormal proteins. A clear interpretation of how these changes influence the activation of HSF in aged cells is impossible at present. Stress kinase JNK (Jun NH2kinase) promotes the signal transduction pathway of apoptosis. In contrast, overexpression of HSP suppresses apoptosis mediated by JNK, resulting in the increase of carcinogenic risk of aged cells. HSP as chaperone maintains unfolded intermediate protein to protect aggregation or to form native conformation of nascent protein. On the contrary, this intermediate (rich in beta-sheet) with aid from such as apoprotein E can make insoluble amyloid fibers in the brain of aged people. In certain cases, overexpression of HSP is rather toxic to the cells.     

电磁辐射诱导PC12细胞凋亡中丝裂原活化蛋白激酶的差别激活

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导系统的差别激活与电磁辐射诱导PC12细胞凋亡的关系。方法以65mWcm2电磁波辐照离体培养PC12细胞20min,分为辐照后即刻及3、12、24h共4个观察时相点,采用流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率,采用蛋白质免疫印迹法检测ERK12、JNK、P38MAPK蛋白质磷酸化水平。结果电磁波辐照后即刻PC12细胞凋亡开始增加;3h后凋亡细胞进一步明显增多,凋亡率约为23.5%;12h后细胞凋亡率与3h相比,差异无统计学意义(P>0.05);24h后细胞凋亡再次明显增加,并达到高峰。电磁辐射后PC12细胞ERK12和JNK蛋白质磷酸化都明显增加,但ERK12的增加持续到3h,JNK蛋白磷酸化水平增高一直持续到12h,24h后两者都较对照组明显降低。P38MAPK蛋白质磷酸化水平在辐照后一直处于较高水平,其变化趋势呈双峰状,即在3h和24h出现2次磷酸化高峰。结论电磁辐射可以激活MAPK信号转导系统,但ERK12、JNK、P38MAPK表现为差别激活。MAPK信号转导系统可能参与了电磁辐射诱导的PC12细胞凋亡,正是MAPK这种差别激活才导致PC12细胞出现特有的凋亡变化形式。     

谷氨酰胺对肝癌细胞热休克蛋白70表达的影响

目的研究谷氨酰胺(Gln)对体外培养肝癌细胞株SMMC-7721内热休克蛋白70(HSP70)表达的影响,及其与细胞增殖的关系。方法SMMC-7721细胞株分别与0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0和16.0mmol/L的Gln培养24小时后,采用MTT法检测SMMC-7721细胞的增殖,RT-PCR和Western blot方法检测细胞内HSP70 mRNA和蛋白质的表达。结果Gln能显著促进SMMC-7721细胞增殖,当Gln浓度为2.0mmol/L时,SMMC-7721细胞的增殖达峰值。SMMC-7721细胞内有HSP70表达,Gln显著增加HSP70 mRNA和蛋白质的表达(P<0.05),当Gln浓度为2mmol/L时,HSP70表达量最高。结论诱导SMMC-7721细胞HSP70表达增高可能是Gln促肿瘤生长的作用机制之一。