姜黄素联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对前列腺癌细胞的抑制作用

目的:探讨姜黄素(curcumin,Cur)联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)对前列腺癌细胞的抑制作用。方法:CCK-8法测定Cur、TRAIL及Cur联合TRAIL作用于PC-3细胞后的细胞生存率,流式细胞技术测定细胞周期及凋亡率,光学显微镜下观察细胞形态,Western blot检测凋亡蛋白caspase-3表达水平的变化。结果:与对照组比较,Cur联合TRAIL组能显著抑制PC-3细胞增殖(P<0.05),呈时间依赖性,且使PC-3细胞阻滞于G2/M期比例明显增多(P<0.05)。镜下可见联合应用Cur和TRAIL处理的PC-3细胞凋亡形态改变明显,凋亡率较对照组高(P<0.05),凋亡蛋白caspase-3表达也增强。结论:Cur与TRAIL联用可明显增强PC-3细胞抑制效果和诱导凋亡作用,其凋亡作用机制可能与其上调caspase-3表达有关。     

藤黄酸抑制前列腺癌PC-3细胞增殖并诱导其细胞凋亡

目的:研究中药藤黄的有效成分藤黄酸(gambogic acid,GA)对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用不同浓度的GA作用前列腺癌PC-3细胞后,在体外通过CCK-8比色法分析细胞的增殖情况,吖啶橙/溴化乙啶(acridine orange/ethidium bromide,AO/EB)双重染色法和FCM法分析细胞的凋亡情况;蛋白质印迹法检测细胞中凋亡相关蛋白P53、Bax和Bcl-2的表达变化。结果:GA不仅能抑制PC-3细胞的增殖,而且能有效诱导其细胞凋亡,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),并且其抑制增殖和促凋亡作用呈浓度依赖性。CCK-8法检测结果表明,GA浓度>1μmol/L时,细胞的增殖能力受到明显抑制。AO/EB染色法显示,GA处理后的前列腺癌PC-3细胞核呈致密浓染橘红色,并伴有核浓缩和偏向。FCM法检测结果显示,GA处理后的前列腺癌PC-3细胞凋亡峰明显。蛋白质印迹法进一步表明,GA能够上调PC-3细胞中Bax和P53的表达水平,下调Bcl-2表达水平。结论:GA对前列腺癌PC-3细胞具有明显的抑制增殖和诱导凋亡作用。     

长春瑞滨联合依维莫司对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制

目的 探讨长春瑞滨联合依维莫司对乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 以乳腺癌细胞MCF-7为研究对象,采用长春瑞滨、依维莫司干预细胞,检测长春瑞滨、依维莫司作用细胞48 h的半数抑制浓度(IC50),根据IC50设置长春瑞滨组、依维莫司组及联合组的用药浓度,以不加药物处理的细胞为对照组.MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、磷酸化AKT1(p-AKT1)蛋白的表达情况.建立乳腺癌裸鼠转移瘤模型,腹腔注射长春瑞滨(2 mg/kg,qd)或依维莫司(2 mg/kg,q3d),联合组注射长春瑞滨(2 mg/kg,qd)+依维莫司(2 mg/kg,q3d),计算肿瘤体积和重量.结果 随着长春瑞滨或依维莫司药物作用浓度的增加,细胞的存活率逐渐下降,且呈一定的浓度依赖性.联合组的细胞存活率低于长春瑞滨组和依维莫司组(P﹤0.05).长春瑞滨组、依维莫司组的细胞凋亡率均高于对照组,联合组的细胞凋亡率高于长春瑞滨组和依维莫司组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).长春瑞滨组、依维莫司组、联合组的肿瘤体积和重量均低于对照组,联合组的肿瘤体积和重量均低于长春瑞滨组和依维莫司组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).长春瑞滨组和联合组细胞的p-PI3K、p-AKT1蛋白表达水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05);长春瑞滨组细胞的p-PI3K、p-AKT1蛋白表达水平均低于依维莫司组,高于联合组,差异均有统计学意义(P﹤0.05).结论 长春瑞滨和依维莫司在抑制细胞增殖、促进细胞凋亡、抑制肿瘤生长时具有协同作用,主要是通过抑制PI3K/AKT1信号通路的激活发挥作用.     

程序性细胞死亡蛋白5在米非司酮诱导前列腺癌细胞凋亡中的协同作用

目的:观察程序性细胞死亡蛋白5(programmed cell death 5,PDCD5)在米非司酮(mifepristone,MIF)诱导的前列腺癌细胞凋亡中的作用,并探讨其机制.方法:MTT法检测不同浓度(5、10、20、50、100 μmol/L)的MIF作用前列腺癌PC-3M细胞24～96 h后的吸光度(D)值,找到最佳作用时间及浓度.将真核表达载体PCI-neo-PDCD5用脂质体介导的方法转染入PC-3M细胞后,采用细胞免疫荧光法检测PDCD5蛋白的表达水平.在转染PDCD5基因的细胞中加入最佳作用浓度的MIF,继续培养24、48 h后,采用TUNEL和吖啶橙(acrine orange,AO)/溴化乙锭(ethidium bromide,EB)法检测细胞凋亡情况,Western印迹法检测凋亡相关蛋白caspase-3的表达变化.结果:MTT检测结果显示,与对照组相比,5、10 μmol/L MIF组的D值没有显著变化(P>0.05),20、50和100 μmol/L MIF组的D值显著降低(P<0.05),说明MIF对前列腺癌PC-3M细胞的抑制作用呈时间和剂量依赖性.PDCD5基因真核表达载体成功转染入PC-3M细胞,并得到高表达.TUNEL和AO/EB检测结果显示,与对照组及单独应用MIF组相比,转染PDCD5基因并加入MIF后的细胞凋亡率显著增加(P<0.01);Western印迹结果显示,caspase-3蛋白在PDCD5与MIF联合作用时的表达明显增加(P<0.01).结论:外源性PDCD5在MIF诱导的前列腺癌细胞凋亡中有明显的正协同作用,推测其有望成为前列腺癌临床治疗的一个辅助药物.     

RNA干扰ATG16L1抑制人胃癌细胞BGC823自噬并促进顺铂诱导的细胞凋亡

摘 要：［目的］ 检测RNA干扰自噬相关基因16L1(autophagy-related gene 16L1,ATG16L1)表达后胃癌细胞的自噬活性,观察在ATG16L1敲减下顺铂（DDP）对胃癌细胞凋亡的影响。［方法］ 用ATG16L1 siRNA 技术构建ATG16L1 低表达的人胃癌BGC823 细胞株作为干扰组,转染阴性干扰的BGC823 细胞作为阴性转染组,未转染的BGC823 细胞作为对照组;Western blot 检测各组细胞中ATG16L1 的表达和自噬标志物微管相关轻链蛋白3(microtubule-associated protein 1A/1B-light chain 3,LC3) 及死骨片蛋白1(sequestosome 1,P62)的表达;免疫荧光观察LC3II情况。CCK-8实验检测DDP处理后各组细胞增殖能力,计算IC50值。经DDP刺激后,流式细胞术检测细胞凋亡,再用Western blot 检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9蛋白表达。最后应用公共数据库Kaplan-Meier对多组胃癌患者mRNA 表达谱进行分析,预测ATG16L1 的表达水平对患者预后的影响。［结果］ ATG16L1 siRNA干扰组较对照组蛋白表达水平明显降低(P<0.001) ;LC3II水平下降(P<0.01),P62 水平上升(P<0.01),并且LC3荧光强度下降(P<0.05) 。经DDP诱导后,干扰组细胞增殖明显受抑（P<0.001）,细胞凋亡率明显增加(P<0.01) ;ATG16L1 干扰组中促凋亡分子cleaved caspase-3、cleaved caspase-9表达比对照组明显增加(P<0.001,P<0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2 表达减少(P<0.001) 。公共数据库Kaplan-Meier表达谱芯片分析结果显示高表达ATG16L1组较低表达组预后差,差异有统计学意义 (P=0.001)。 ［结论］ RNA干扰ATG16L1抑制胃癌细胞自噬,并能够明显增强顺铂诱导人胃癌细胞的凋亡,提示靶向干扰ATG16L1抑制细胞自噬后可能通过调控细胞凋亡提高胃癌细胞对化疗药物的敏感性。     

葫芦素B对卵巢癌细胞SKOV3的生长抑制作用

摘 要：［目的］ 研究葫芦素B对卵巢癌细胞SKOV3的生长抑制作用。［方法］ 利用MTT法检测不同浓度葫芦素B对卵巢癌细胞的增殖抑制作用;流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况;荧光定量PCR法测定STAT3 mRNA表达水平。［结果］ 葫芦素B对SKOV3细胞的增殖具有抑制作用,并呈现时间和剂量依赖性(P<0.05);随葫芦素浓度的增加,出现明显的G2/M期细胞阻滞,细胞凋亡率也随之增加(P<0.05);STAT3 mRNA表达量明显下降(P<0.05)。［结论］ 葫芦素B抑制STAT3的表达,引起细胞周期阻滞和诱导细胞凋亡,抑制卵巢癌细胞的生长。     

土槿乙酸诱导HL60细胞凋亡及其与半胱氨酸蛋白酶-3活化的关系

目的 探讨土槿乙酸(PLAB)的抗癌活性及其机制。方法 对用不同浓度PLAB处理的HL60细胞，或半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)抑制剂DEVD-fmk预处理的HL60细胞。采用MTT法检测HL60细胞抑制增殖作用，采用Hoechst33342/PI双荧光活细胞染色和原位末端标记(TUNEL)方法检测细胞凋亡，CPP32 colorimetric kit检测caspase-3酶活性。结果 PLAB以剂量依赖的方式抑制HL60细胞的生长，其IC50值为1μmol/L。PLAB诱导HL60细胞死亡的形式以细胞凋亡为主，且该凋亡可被caspase-3抑制剂所遏制。PLAB诱导的caspase-3酶的活化与剂量和作用时间呈依赖关系。结论 PLAB能有效诱导HL60细胞凋亡，该凋亡过程伴有caspase-3的活化。     

m-TOR抑制剂依维莫司联合紫杉醇对耐阿霉素乳腺癌细胞株的抑制作用及机制

目的探讨m TOR抑制剂依维莫司与紫杉醇共同抑制耐阿霉素乳腺癌(MCF-7/ADR)细胞株生长的机制。方法在培养耐阿霉素乳腺癌细胞株(MCF-7/ADR)中加入一定量的依维莫司和紫杉醇,采用MTT法对加入依维莫司和紫杉醇的细胞IC50含量进行检测,然后根据检测结果来进行依维莫司与紫杉醇浓度的设置,并计算联合用药的效果。采用流式细胞术对MCF-7/ADR细胞在不同药组作用下48h后的凋亡率进行检测。采用Western blot方法对各组细胞内的m TOR、p-m TOR、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、4EBP1和p-4EBP1蛋白表达情况进行检测。结果依维莫司和紫杉醇抑制MCF-7/ADR细胞增殖的半数抑制浓度(IC50)分别为32.58μg/ml和9.59μg/ml,两者合用抗增殖作用大于紫杉醇或依维莫司单用,组合指数均小于0.9。与只用紫杉醇对MCF-7/ADR细胞进行处理相比,联合使用依维莫司和紫杉醇能更好地诱导MCF-7/ADR细胞凋亡。Western blot结果显示,紫杉醇和依维莫司合用可明显加强对m TOR、p-m TOR、PI3K、p-PI3K、p-AKT、4EBP1和p-4EBP1表达的抑制作用。结论依维莫司合用紫杉醇,可增强对MCF-7/ADR细胞增殖抑制和凋亡的诱导作用,其机制可能是下调m TOR信号通路及上、下游信号蛋白表达和磷酸化。     

双氢睾酮耦联Ki67多肽核酸对激素非依赖性前列腺癌细胞的抑制作用

目的:探讨双氢睾酮(dihydrotestosterone,DHT)耦联Ki67多肽核酸(peptide nucleic acids,PNAs)对激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞Ki67表达、细胞生长及凋亡的影响方法:人工合成针对Ki67基因的多肽核酸并与DHT耦联(DHTPNAs)后转染PC-3细胞,采用RT-PCR、免疫细胞化学、Western blotting检测PC-3细胞Ki67抗原的表达,CCK8法检测PC-3细胞增殖,原位末端标记法(TUNEL)检测PC-3细胞凋亡,以上实验均以以PNAs组、DHT组为对照组.结果:DHT-PNAs、PNAs均能抑制非激素依赖性前列腺癌细胞系PC-3的Ki67表达,诱导PC-3细胞凋亡,使细胞生长受抑,并且均具有浓度依赖性.DHT-PNAs作用强度明显强于相同剂量的PNAs,3μmol/L DHT-PNAs即可达到9 μmoL/L PNAs的作用强度.结论:DHTPNAs能有效增强PNAs阻抑PC-3细胞Ki67表达、诱导细胞凋亡及抑制细胞生长的作用.     

左旋棉酚对裸鼠人前列腺癌PC-3细胞皮下移植瘤的生长抑制作用

目的:探讨左旋棉酚对裸鼠人前列腺癌PC-3细胞皮下移植瘤的生长抑制作用及其机制.方法:建立裸鼠人前列腺癌PC-3细胞皮下移植瘤模型,将移植瘤裸鼠80只随机分成4组,每组20只,分别为10.0mg/kg、5.0mg/kg、2.5ng/kg左旋棉酚治疗组和对照组,进行疗效分析与组织病理形态学观察,同时检测肿瘤组织内PCNA、bcl-2、caspase-3和caspase-8的表达.结果:左旋棉酚可使人前列腺癌PC-3细胞荷瘤裸鼠存活率提高,肿瘤体积缩小,肿瘤组织坏死明显,PCNA与bcl-2表达减少,caspase-3和caspase-8表达增加,但高剂量左旋棉酚对PC-3荷瘤裸鼠肝脏和肠道有一定毒性.结论:当治疗剂量大于5.0mg/kg时,左旋棉酚可通过增殖抑制和诱导凋亡,明显抑制裸鼠人前列腺癌PC-3细胞皮下移植瘤的生长.