TLR2和TLR4在单肺通气麻醉中的表达

目的:研究Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)在单肺通气麻醉过程中的表达变化并探讨其临床意义。方法:选择胸科肺癌行肺叶切除手术30例,随机分为两组,A组(n=11,双肺通气),B组(n=19,单肺通气组),收集开胸后/单肺通气后15(T1),30(T2),45(T3),90(T4)min血清,采用ELISA法检测两组血清中IL-8,TNF-α的表达;收集切除标本后的肺组织,电子显微镜观察细胞形态病理变化,采用RT-PCR检测TLR2mRNA和TLR4mRNA,免疫组化检测肺组织TLR2和TLR4蛋白的表达。结果:电镜检测表明:两组均发生肺细胞炎症反应,其中B组发生炎性反应明显比A组显著;两组TLR2mRNA和TLR4mRNA表达比较,B组的TLR2mRNA和TLR4mRNA表达明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.05);A、B两组中的IL-8,TNF-α浓度在各时点均有不同程度的升高,其中组内比较T4时点的IL-8,TNF-α浓度明显高于T1时点,差异有统计学意义(P<0.05);A、B两组间比较,在T4时点IL-8,TNF-α浓度B组明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.05),其余时点表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。A、B两组免疫组化比较,B组的TLR2和TLR4阳性率明显高于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:单肺通气期间,随着时间的延长,炎症反应更为显著,TLR2、TLR4表达上调并参与炎症反应。     

巨噬细胞中oxLDL对TLR4-Src信号通路激活的调控

目的探讨氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,oxL DL)对于巨噬细胞中Toll样受体4(toll like receptor 4,TLR4)-Src信号通路激活的调控作用.方法 oxL DL(50 ug/mL)按不同时间(0、15、30和60 min)刺激巨噬细胞,同时采用特异性siR NA抑制巨噬细胞内TLR4表达后,Western blot检测Src-Y418位点磷酸化水平;并利用免疫共沉淀法及细胞免疫荧光法检测TLR4与Src及其家族相似蛋白Fyn和Lyn的体外结合情况.结果oxL DL诱导巨噬细胞内Src-Y418磷酸化水平显著性升高,且呈时间相关性.而抑制TLR4表达则可显著性削弱oxLDL对于Src的激活作用(P<0.01).此外,oxLDL诱导细胞内TLR4与磷酸化Src(p-Src)相互结合并共定位于细胞膜表面,而不与Src其他家族成员Fyn及Lyn结合.结论oxLDL通过诱导TLR4与Src相互结合,从而激活Src磷酸化水平,进而诱发动脉粥样硬化过程中脂质累积及炎症反应.     

TLR2和TLR4在大鼠光滑念珠菌肺部感染中的表达及意义

目的：研究Toll样受体2（TLR2）和TLR4在光滑念珠菌肺部感染大鼠中的作用。方法将36只大鼠分为3组,每组12只：对照组（A组）、未免疫抑制肺部光滑念珠菌感染组（B组）及免疫抑制肺部光滑念珠菌感染组（C组）。每组分别在造模成功后第1、3天各处死大鼠6只,观察肺组织病理变化,用逆转录PCR（RT-PCR）法检测肺组织 TLR2、TLR4 mRNA的表达、酶联免疫吸附实验（ELISA）法测定TNF-α蛋白水平。结果 A组肺组织正常;B组部分肺泡塌陷、炎症细胞浸润,未见孢子或菌丝;C组大部分肺泡塌陷,部分扩张,大量炎症细胞浸润、并有孢子菌丝聚积。第1、3天 TLR2 mRNA和 TNF-α蛋白表达水平C组明显高于其他两组（P＜0．01）,B组高于A组（P＜0．05）;C组第3天 TLR2、TLR4 mRNA ,TNF-α表达水平高于第1天（P＜0．05,P＜0．01）,且TLR4表达高于A组（P＜0．05）。结论 TLR2和 TNF-α可能参与光滑念珠菌肺部感染的发生发展,TLR4可能起协同作用。     

TLR2与TLR4在大肠癌组织中的表达特点

目的 观察Toll样受体2(TLR2)和Toll样受体4(TLR4)在大肠癌组织和大肠癌细胞株上的表达特点.方法 采用SP免疫组化法检测70例大肠癌组织和配对癌旁相对正常组织TLR2,TL4的表达,采用免疫荧光流式细胞术检测TLR2,TLR4在大肠癌细胞株Lovo和SW480细胞上表达的平均荧光强度及阳性细胞率.结果 TLR2在大肠癌组织上的表达明显强于癌旁组织(X2=13.629,P=0.003),而TLR4的表达在大肠癌组织与癌旁组织差异元显著性(P＞0.05).根据平均荧光强度及阳性细胞率,TLR2,TLR4在大肠癌细胞株Lovo和SW480上基本无表达.结论 TLR2可能与大肠癌的疾病过程密切相关.     

大鼠肺巨噬细胞内毒素耐受性与TLR4 mRNA表达的变化

Ｇ- 菌感染致急性肺损伤 ,主要是由于内毒素 (Ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃ ｃｈａｒｉｄｅ ,ＬＰＳ)活化炎性细胞释放大量炎症因子。不同个体感染Ｇ- 菌后临床表现轻重不一 ,说明个体对ＬＰＳ的反应性有相差 ,即对ＬＰＳ耐受性 (Ｔｏｌｅｒａｎｃｅ)存在差异。研究表明ＬＰＳ耐受性与其靶细胞信号转导的跨膜受体ＴＬＲ4(Ｔｏｌｌ ｌｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒ 4)的结构与功能及表达量有关[1 ,2 ] ,但尚存争议[3] 。我们通过观察大鼠肺巨噬细胞ＬＰＳ耐受性及ＴＬＲ4ｍＲＮＡ表达的变化 ,以说明ＬＰＳ耐受性与ＴＬＲ4表达量相关的可能性。1　材料与…     

平喘颗粒对哮喘小鼠肺组织TLR2和TLR4表达的影响

目的:观察平喘颗粒对哮喘小鼠肺组织Toll样受体2(toll-like receptor2,TLR2)和TLR4表达的影响.方法:将30只BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、平喘颗粒(31.2 g·kg-1)组,每组10只.除对照组外,采用腹腔注射加雾化卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏液[100μgOVA...     

乙型肝炎患者血清中TLR2和TLR4的表达及其意义

目的 检测乙肝患者血清标本中TLR2和TLR4的含量,关注其表达特征,探讨其表达的意义.方法 本实验以130例乙肝患者的血清标本作为观察组,60例正常体检成人的血清标本作为对照组,应用酶联免疫吸附实验检测二组中TLR2和TLR4的表达,分析其在不同临床病理特征之间意义及相互关系.结果 乙肝患者血清中TLR2和TLR4的表达明显高于对照组[(85.46±15.46) ng/L vs (28.75±2.35) ng/L;(100.23±23.25) ng/L vs (64.34±4.32) ng/L],血清中TLR2和TLR4的含量与乙肝患者病情的严重程度有关,乙型肝炎患者血清中TLR2和TLR4的表达呈正相关(P=0.021 4,r=0.39).结论 乙型肝炎患者血清中TLR2和TLR4高表达,二者可能具有协同作用.联合检测血清中TLR2和TLR4的含量可能与判断病情的严重程度有关.     

TLR2和TLR4在原因不明复发性流产绒毛和蜕膜中的表达及其意义

目的本实验通过检测原因不明复发性流产(URSA)患者和健康早孕者TLR2和TLR4在子宫绒毛和蜕膜中的表达,及外周血清中TNF-α及IL-10的水平,初步探讨TLR2和TLR4与URSA存在相关性,以及在URSA发生发展中的可能途径。方法前瞻性研究2008~2009年在浙江大学医学院附属妇产科医院和杭州市第一人民医院门诊患者。年龄在25~35周岁,孕龄<12周。将有≥3次自然流产的URSA患者作为研究组;将曾有正常生育史,本次要求行人工流产终止妊娠的早孕健康妇女作为对照组,分别选择20例。免疫组化检测TLR2和TLR4在两组绒毛和蜕膜中的表达;用ELISA法检测血清TNF-α及IL-10的水平,比较是否存在差异性。结果①TLR2在两组绒毛、蜕膜中表达差异无统计学意义(P>0.05);②TLR4在研究组绒毛、蜕膜表达明显增强,有显著统计学意义(P<0.05);③TNF-α在研究组中的水平明显增高,有显著统计学意义(P<0.05);IL-10在两组中的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TLR4可能是通过释放过量的Th1型细胞因子,导致Th1/Th2失衡,从而极可能参与URSA的发病。     

LPS急性肺损伤老年大鼠肺巨噬细胞TLR4与IL-18 mRNA表达变化的对比研究

目的　观察脂多糖 (LPS)致急性肺损伤 (ALI)老年大鼠肺巨噬细胞Toll样受体 4(TLR4)及IL -18mRNA表达的变化 ,探讨TLR4与IL -18在ALI时老年鼠与青年鼠的作用差别。方法　运用RT -PCR与ELISA检测TLR4和IL-18mRNA的表达及肺巨噬细胞培养液上清TNF -α浓度。结果　老年鼠LPS急性肺损伤组TLR4与IL -18mRNA表达显著高于青年鼠组 ( 0 63± 0 0 7vs 0 2 5± 0 0 3 ,0 5 8± 0 0 2vs 0 2 6± 0 0 3 ) ,TNF -α分泌显著多于青壮年鼠组 ( 0 67±0 0 6vs 0 45± 0 0 2 )ng/ml。结论　LPS急性肺损伤时老年鼠肺巨噬细胞TLR4功能及其介导的信号转导作用加强 ,IL -18分泌增加 ,表明两者在急性肺损伤中起重要作用 ,也可能是老年患者肺部感染时症状相对严重和难治的原因之一。     

运动量对糖尿病动脉粥样硬化大鼠TLR2、TLR4的影响

目的:探讨不同强度的运动对糖尿病动脉粥样硬化大鼠主动脉组织Toll样受体2(TLR-2)、Toll样受体4(TLR-4)的影响.方法:选取健康SD大鼠100只,随机分成对照组20只及糖尿病动脉粥样硬化组80只,糖尿病动脉粥样硬化模型采用高糖高脂饮食加链脲佐菌素(STZ)(30 mg/kg)注射建立.其中糖尿病动脉粥样硬化组又分成模型组、小运动量组、中等运动量组和大运动量组(每组20只).经过估计力竭运动时间及游泳训练后,小运动量组(12 min/次),中等运动量组(21 min/次),大运动量组(30 min/次),进行6周的运动干预,1次/d,一周6次.用PCR法测定各组大鼠主动脉组织的TLR2、TLR4mRNA的表达.结果:模型组较对照组血管组织中TLR2、TLR4水平升高;运动干预后,各运动组TLR2、TLR4水平较模型组降低,以中等运动量、大运动量组下降明显.结论:糖尿病动脉粥样硬化大鼠主动脉组织中TLR2、TLR4水平升高,TLR2、TLR4水平的升高可能是糖尿病动脉粥样硬化的发病机制之一,运动能够降低TLR2、TLR4的表达.     

连翘对LPS作用的巨噬细胞TLR4蛋白表达的影响

目的观察连翘对LPS诱导巨噬细胞（RAW264．7）16h后TLR4蛋白表达的影响,探讨连翘对抗内毒素作用及其可能机制。方法体外实验共分6组,分别为control组,LPS组,连翘高、中、低剂量组及多黏菌素B组;连翘高、中、低剂量组及多黏菌素B组分别加入连翘水煎液50mg／ml、25mg／ml、12．5mg／ml及多黏菌素B10ug／ml培养0．5h后,再加入10ng／ml LPS,培养16h;Western blot法测各组细胞TLR4蛋白表达变化。结果control组RAW264．7细胞只表达少量TLR4,给予LPS刺激16h,TLR4表达明显升高（P〈0．01）,连翘高、中、低剂量组预处理均可明显降低TLR4的表达（P〈0．01）,并呈剂量依赖关系;连翘高剂量组与多黏菌素B组比较无显著性差异（P〉0．05）。结论连翘预处理能抑制LPS诱导的巨噬细胞TLR4的表达可能是其抗内毒素作用的重要机制。     

TLR4受体在肝癌细胞株HepG-2的表达

目的：探讨TLR4受体在肝癌细胞株HepG-2和肝癌组织中的表达。方法：用RT-PCR和Western-blot方法检测肝癌细胞株HepG-2中TLR4基因的转录和蛋白的表达的情况,同时用免疫组化的方法检测肝癌组织中TLR4的表达的情况。结果：肝癌细胞株HepG-2中存在TLR4基因的转录和蛋白的表达。TLR4受体主要表达位于肝癌组织细胞的细胞膜上,其阳性率约为76.7%。结论：肝癌细胞株HepG-2和肝癌组织中均有TLR4的表达。     

TLR2 mAb和TLR4 mAb对急性期溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜炎症因子IFN-γ、IL-4及 IL-17表达的影响

 目的 探讨TLR2单克隆抗体（toll-like receptor 2 monoclonal antibodies,TLR2 mAb）和TLR4单克隆抗体（toll-like receptor 4 monoclonal antibodies,TLR4 mAb）对葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium,DSS）诱导的急性期溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）小鼠结肠黏膜的炎症因子IFN-γ、IL-4及IL-17表达的影响。方法 50只雄性BALB/c小鼠分为5组（每组10只）：对照组（A）、模型组（B）及TLR2 mAb干预组（C）、TLR4 mAb干预组（D）、TLR2 mAb和TLR4 mAb联合干预组（E）。A组小鼠饮用蒸馏水7 d;B-E组小鼠仅饮用5% DSS水溶液7 d以产生急性期溃疡性结肠炎模型。造模开始的同时,每隔48 h分别给予C、D、E干预组小鼠以TLR2 mAb（10 μg）、TLR4 mAb（10 μg）、TLR2 mAb（10 μg）+TLR4 mAb（10 μg）腹腔内注射,A、B组给予腹腔内注射生理盐水,以观察TLR2 mAb和TLR4 mAb的干预作用。观察指标包括疾病活动指数（disease activity index,DAI）、结肠组织病理学评分（histopathological score,HS）。造模及干预7 d后处死小鼠,Real-time PCR法检测各组结肠黏膜TLR2、TLR4、IFN-γ、IL-4及IL-17的mRNA表达。结果 (1)与A组相比,B组小鼠肠道DAI及HS明显增高（P<0.01）。与B组相比,E组小鼠肠道DAI（P<0.05）和HS（P<0.01）均明显降低。与D组相比,E组小鼠肠道HS明显降低（P<0.05）。(2)与A组相比,B组小鼠结肠黏膜TLR2、TLR4表达明显增高（P<0.01,P<0.05）。与B组相比,C、D、E组小鼠结肠黏膜TLR2、TLR4表达均有不同程度的降低。(3)与A组相比,B组小鼠结肠黏膜IFN-γ、IL-4及IL-17的mRNA表达明显增高（P<0.01,P<0.05,P<0.01）。与B组相比,C、D、E组小鼠结肠黏膜IFN-γ、IL-4及IL-17的mRNA表达均有不同程度的降低。结论 TLR2 mAb和TLR4 mAb可能通过下调小鼠结肠黏膜的炎症因子IFN-γ、IL-4、IL-17的mRNA表达而发挥其干预作用。     

Hp感染性胃癌组织中TLR2、TLR4的表达及其临床意义

【摘要】目的：探讨Hp感染性胃癌组织中TLR2、TLR4的表达及其临床意义。方法：选取2013年9月至2015年3月我院收治的胃癌患者128例[取病灶组织128例（病灶组）和癌旁正常组织90例（癌旁组）]和胃黏膜增生患者（增生组,68例）。测定胃癌患者病灶组织中Hp感染情况,并按检查结果分为Hp阳性组（68例）和Hp阴性组（60例）;并采用SP法检测两组患者病理组织中TLR2、TLR4的表达情况。并分析TLR2、TLR4的表达与胃癌患者临床病理特征的关系;采用Cox回归模型分析Hp感染性胃癌患者预后影响因素;采用ROC曲线分析预测Hp感染性胃癌患者的价值;采用Kaplan-Merier进行生存分析。结果：胃癌组TLR2、TLR4的阳性率均显著高于癌旁组和增生组（P<0.05）;Hp阳性组TLR2、TLR4的阳性率均显著高于Hp阴性组（P<0.05）;Spearman相关性分析结果显示,Hp感染水平与TLR2（r=0.697,P=0.00）和TLR4（r=0.684,P=0.00）均呈显著正相关（P<0.05）;TNM分期越高、分化程度越高和伴淋巴结转移者其Hp阳性率TLR2和TLR4的阳性率明显更高（P<0.05）;多因素Cox回归结果显示,TNM分期、分化程度、淋巴结转移、TLR2阳性、TLR4阳性均为影响GC患者死亡的独立危险因素（P<0.05）;ROC结果显示,拟合TLR2、TLR4预测GC患者预后的灵敏度和特异性高达92.31%和91.67%;TLR2阳性患者中位生存期21个月,TLR2阴性患者中位生存期36个月;TLR4阳性患者中位生存期23个月,TLR2阴性患者中位生存期37个月（P<0.05）。结论：Hp感染是胃癌发生的高风险因素,Hp感染性胃癌中TLR2、TLR4的表达上调,且TLR2和TLR4可作为Hp感染性胃癌早期诊断和预后评估的可靠血清标志物。     

地塞米松对肺损伤小鼠肺巨噬细胞TLR4原位表达的影响

目的:探讨地塞米松(DEX)对失血性休克诱导的急性肺损伤小鼠肺巨噬细胞TLR4原位表达的影响.方法:C57BL/6雄性小鼠45只,复制失血性休克诱导的急性肺损伤模型前经鼻分别滴入PBS、PBS+20ug DEX,阴性空白对照组经鼻滴入PBS后仅与予心脏穿刺,分别于0h、1h、2h、4h和6h时取出小鼠的肺组织.通过HE染色法检测肺组织病理,免疫荧光双染检测肺巨噬细胞TLR4表达.结果:失血性休克后6h内肺巨噬细胞TLR4的表达呈上升趋势并于6h时达到峰值,DEX干预组可见显著抑制肺巨噬细胞TLR4表达.结论:地塞米松能显著抑制失血性休克诱导的急性肺损伤小鼠肺巨噬细胞TLR4原位表达,改善肺部病理改变.     

早期脓毒症大鼠肝TLR4和MD-2基因的表达及丙泊酚对其的影响

目的 观察早期脓毒症大鼠肝Toll 样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白-2(MD-2)基因的表达,并以丙泊酚进行干预,比较肝TLR4、MD-2基因表达的差异.方法 采用大鼠尾静脉注射脂多糖复制脓毒症模型.按完全随机化原则分为正常对照组(N组)、脂多糖组(L组)、脂多糖+丙泊酚组(LP组),每组20只.每组再依照注药后1...     

miR-519d-3p调控TLR4抑制脂多糖所致THP-1源性巨噬细胞炎症的机制研究

目的 探究miR-519d-3p在脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞炎症中的作用和分子机制.方法 用PMA诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞,LPS刺激细胞产生炎症反应作为后续实验的细胞模型,应用荧光定量PCR检测miR-519d-3p表达;利用antago-miR-519d-3p及antago-NC或者miR-519d-3...     

溃疡性结肠炎小鼠结肠中TLR2、TLR3、TLR5和TLR9的表达

目的 通过研究溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠结肠组织中TLR2、TLR3、TLR5和TLR9的表达随时间变化的关系,探讨Toll样受体家族在UC致病机制中的作用.方法 60只BALB/c小鼠随机分为3组,第1组不予处理,第2组予5％葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液自由饮用7d造模,第3组予5％ DSS溶液自由饮用14 d造模.取各组小鼠的结肠标本,用RT-PCR和Western blotting的方法半定量检测TLR2、TLR3、TLR5、TLR9的表达.结果 ①正常小鼠结肠中无TLR2、TLR3、TLR5和TLR9表达;②造模7d小鼠结肠中无TLR3和TLR5表达,而TLR2和TLR9出现明显表达;③造模14d小鼠结肠中仍然无TLR3和TLR5表达,而TLR2和TLR9的表达则继续增加.结论 TLR2和TLR9可能参与了溃疡性结肠炎的致病机制,而TLR3和TLR5可能未参与UC的致病机制.     

阿托伐他汀对2型糖尿病患者外周血单核细胞TLR4表达的影响

目的探讨阿托伐他汀对2型糖尿病的抗炎作用机制是否与抑制toll样受体4（TLR4）有关。方法将40例2型糖尿病患者随机分为常规治疗组和阿托伐他汀治疗组。阿托伐他汀治疗组患者在常规治疗基础上给予阿托伐他汀20 mg,1次/d,晚间口服。治疗前及治疗1月后采血,应用流式细胞仪检测外周血单核细胞TLR4蛋白表达;应用酶联免疫（ELISA）法检测血浆肿瘤坏死因子-α（TNF-α）浓度。结果单核细胞TLR4蛋白与血糖,糖化血红蛋白及血浆TNF-α呈正相关。治疗1月后,阿托伐他汀治疗组和常规治疗组血糖、外周血单核细胞TLR4蛋白及血浆TNF-α浓度均较治疗前降低（P〈0.05）;阿托伐他汀治疗组单核细胞TLR4蛋白和血浆TNF-α均低于常规治疗组（P〈0.05）。结论阿托伐他汀能下调2型糖尿病患者的单核细胞TLR4表达,降低血浆炎症因子水平。其抗炎作用可能与抑制单核细胞TLR4通路有关。