腺苷酸活化蛋白激酶与LKB1在肥胖大鼠脂肪组织中的表达及其对糖脂代谢的影响

目的:探讨腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)与LKB1在肥胖大鼠脂肪组织的表达及其对糖脂代谢的影响。方法:将30只6周龄雄性S-D大鼠随机分为普通饮食组(NC组)和高脂饮食组(HF组),各15只,分别予普通饲料喂养和高脂饲料喂养。喂养16周后,HF组大鼠体重高于NC组20%者为成功建立模型。所有大鼠过夜禁食后,麻醉状态下测量体重(BW),取静脉血测定血清游离脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCH)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)。处死大鼠后,采用Western blot法测定各组大鼠骨骼肌组织中AMPKα、磷酸化AMPK(P-AMPKα)和磷酸化LKB1蛋白(P-LKB1)的表达。计算AMPK活性。结果:与NC组比较,HF组大鼠BW、FFA、TG、FPG、FINS均升高(P<0.05~P<0.01),脂联素水平降低(P<0.05),骨骼肌组织中P-AMPKα和P-LKB1蛋白表达降低,AMPK活性降低(P<0.05)。结论:高脂饮食诱导大鼠营养性肥胖,降低LKB1和AMPK的活性,从而导致TG和TCH的合成增加,血糖升高,形成胰岛素抵抗。     

高脂饮食对大鼠肝脏组织AMPK表达及其活性的影响

目的 研究不同饮食模式对大鼠肝脏组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)表达及其活性的影响.方法 28只雄性sD大鼠适应性喂养1周后随机分为2组:普通对照组(NC组,n=15),高脂饮食组(HF组,n=13).NC组给予普通饲料,HF组给予高脂饲料.16周后分别测定体重(BW)、血清游离脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCH)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)等指标.采用Westernblot方法检测两组大鼠肝脏组织中AMPKa和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶α亚基(p-AMPKa)蛋白的水平.结果与NC组相比.HF组大鼠的体重、FFA、TG、FPG、FINS增高(均P<0.05).两组肝脏组织中AMPKα的蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05),但HF组肝脏组织中P-AMPKα的蛋白表达水平及AMPK活性降低(均P<0.05).结论 长期高脂饮食减少肝脏组织AMPKα蛋白的磷酸化和AMPK的活性.     

吡格列酮和非诺贝特对高脂饲养大鼠脂联素与胰岛素抵抗的影响

目的探讨吡格列酮、非诺贝特及两者联合应用对高脂饲养大鼠脂联素表达与胰岛素抵抗(IR)的影响。方法将75只SD大鼠随机分为普通饮食组(NC组)15只,高脂饮食组(高脂组)60只。高脂组随机分为非诺贝特组(FF组)、吡格列酮组(PIO组)、联合组(FF-PIO组)和高脂对照组(HF组),各15只。分别测定体重(BW)、血清游离脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCH)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)等指标。采用Westernblot方法对各组大鼠腹部皮下脂肪中脂联素蛋白水平进行检测。结果HF组的体重、FFA、TG、FPG、FINS显著高于NC组,皮下脂肪中脂联素蛋白表达明显低于NC组(P<0.01)。与HF组比较,FF组的体重减轻、FFA、TG、TCH、FPG、FINS降低(P<0.01),皮下脂肪中脂联素增加,但差异无显著性(P>0.05);PIO组FFA、FPG、FINS降低(P<0.01),皮下脂肪中脂联素增加(P<0.05);FF-PIO组的体重、FFA、TG、TCH、FPG、FINS降低(P<0.05或P<0.01),皮下脂肪中脂联素增加(P<0.01)。结论吡格列酮、非诺贝特及联合应用可以一定程度地减轻肥胖对大鼠皮下脂肪中脂联素蛋白表达的抑制作用,改善肥胖引起的IR。     

非诺贝特对高脂诱导肥胖SD大鼠Visfatin蛋白表达的影响

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PARα)激动剂非诺贝特对SD大鼠visfatin蛋白表达的影响.方法 45只雄性SD大鼠适应性喂养1周后随机分为3组:普食组(NC组)、高脂组(HF组)、非诺贝特组(FF组).NC组喂以普通饲料,其余两组给予高脂饮食.喂养12周后,FF组以非诺贝特30 mg/(kg·d)灌胃治疗4周,空腹取血进行相关代谢指标测定,并检测腹部皮下脂肪、附睾脂肪和骨骼肌组织中visfatin蛋白表达.结果HF组大鼠体重(BW)、血清visfatin、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、游离脂肪酸(FFA)和甘油三脂(TG)明显高于NC组(P<0.05),非诺贝特能减少BW、下调血清visfatin表达(P<0.05),改善高脂血症和高胰岛素血症.Visfatin在附睾脂肪组织中表达显著高于皮下脂肪组织和肌肉组织,非诺贝特下调附睾脂肪组织visfatin表达.相关分析显示血清visfatin与FFA、TG、FBG呈正相关(P<0.05).结论 PPAR-α激动剂非诺贝特具有改善高脂饮食诱导的脂质异常、改善胰岛素抵抗以及下调visfatin作用.     

游泳运动对高脂诱导肥胖SD大鼠Ghrelin表达的影响

目的:观察游泳运动干预后肥胖大鼠血清及下丘脑Ghrelin水平的变化,探讨其在肥胖及代谢紊乱中的作用。方法:SD大鼠50只随机分为普食(NC,n=10)组和高脂(HD,n=40)组。筛选出成功建立肥胖模型20只随机分为肥胖对照(OB)组、游泳(SWI)组,各10只。SWI组予以每天1 h,每周5 d,共行6周游泳训练;OB组及NC组予等剂量蒸馏水灌胃。分别测定干预6周前后各组体重(BW)、空腹血糖(FPG)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TCH)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及血清Ghrelin。免疫组织化学法检测各组大鼠下丘脑Ghrelin表达水平。结果:干预前,OB组、SWI组均较NC组BW、FPG、TG、TCH、FINS、HOMA-IR显著升高,Ghrelin明显降低(P0.01);干预后,SWI组均较OB组BW、TG、TCH、FPG、FINS、HOMA-IR明显降低,Ghrelin水平升高(P0.01)。免疫组织化学显示OB组下丘脑Ghrelin表达较NC组降低(P0.01),SWI组较OB组升高(P0.05)。结论:游泳运动可改善胰岛素敏感性并减轻体重,降低肥胖大鼠Ghrelin水平。     

二甲双胍对骨骼肌异位脂肪沉积的作用机制研究

目的 探讨二甲双胍是否通过调控围脂滴蛋白(PLIN)信号通路改善高脂诱导的骨骼肌异位脂肪沉积.方法 C57BL/6J小鼠24只分为对照组(ND组)、高脂组(HF组)、高脂+二甲双胍组(HF+Met组),每组8只.检测各组血清中糖、脂代谢相关指标[空腹血糖(FBG)、空腹血胰岛素(FINS)、胰岛素(INS)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和游离脂肪酸(FFA)],骨骼肌中脂滴(LD)、TG水平、PLINs mRNA表达及过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、PLIN2和PLIN5蛋白表达.结果 与ND组比较,HF组中小鼠体重、血清中糖代谢相关生化指标(FBG、FINS)及脂代谢相关生化指标(TG、TC、LDL-C和FFA)水平升高,骨骼肌中脂滴(LD)的数量增多,TG水平升高,PLIN2、PLIN5 mRNA和蛋白表达明显升高,p-AMPK、PPARδ蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);二甲双胍干预后,体重、血清中FBG、FINS、TG、TC和FFA等指标较HF组明显降低,骨骼肌中LD和TG水平明显降低,PLIN2 mRNA和蛋白表达明显降低,p-AMPK和PPARδ蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 二甲双胍可能通过AMPK-PPARδ-PLINs通路改善高脂诱导的骨骼肌异位脂肪沉积.     

Effects of metformin on ghrelin levels in serum and hypothalamus of high-diet fed obesity rats

目的 观察肥胖大鼠血清及下丘脑中胃促生长素水平在二甲双胍干预前后的变化,探讨其在肥胖及代谢紊乱中的作用.方法 SD大鼠50只随机分为普通饮食(NC,n=10)组和高脂( n=40)组,16周高脂组成功建立肥胖模型后(n=20) 随机分为:肥胖对照(OB)组,二甲双胍(MET)组,各10只.MET组灌胃MET 200 mg/(kg·d),OB组及NC组灌胃等剂量蒸馏水.分别测定干预前及干预6周后各组体重(BW)、空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCH)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指(HOMA-IR)及胃促生长素.免疫组化法检测各组大鼠下丘脑中胃促生长素表达水平.结果 ①干预前,OB组、MET组较NC组BW、FPG、TG、TCH、FINS、HOMA-IR升高,胃促生长素降低(P<0.05,P<0.01),OB组、MET组间各指标比较差异无统计学意义.MET干预后,MET组较OB组BW、TG、TCH、FPG、FINS、HOMA-IR降低,胃促生长素水平升高(P<0.05,P<0.01).②免疫组化显示:OB组下丘脑中胃促生长素表达较NC组降低,MET组较OB组升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).③研究总体中 FINS与胃促生长素呈负相关(r=-0.817,P<0.05).结论 肥胖大鼠血清及下丘脑胃促生长素水平降低,MET可改善胰岛素敏感性、降低BW,可能与血清及下丘脑胃促生长素水平增高有关.     

二甲双胍对肥胖大鼠血清及下丘脑中胃促生长素表达的影响

目的观察肥胖大鼠血清及下丘脑中胃促生长素水平在二甲双胍干预前后的变化,探讨其在肥胖及代谢紊乱中的作用。方法 SD大鼠50只随机分为普通饮食(NC,n=10)组和高脂(n=40)组,16周高脂组成功建立肥胖模型后(n=20)随机分为:肥胖对照(OB)组,二甲双胍(MET)组,各10只。MET组灌胃MET 200 mg/(kg.d),OB组及NC组灌胃等剂量蒸馏水。分别测定干预前及干预6周后各组体重(BW)、空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCH)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指(HOMA-IR)及胃促生长素。免疫组化法检测各组大鼠下丘脑中胃促生长素表达水平。结果①干预前,OB组、MET组较NC组BW、FPG、TG、TCH、FINS、HOMA-IR升高,胃促生长素降低(P<0.05,P<0.01),OB组、MET组间各指标比较差异无统计学意义。MET干预后,MET组较OB组BW、TG、TCH、FPG、FINS、HOMA-IR降低,胃促生长素水平升高(P<0.05,P<0.01)。②免疫组化显示:OB组下丘脑中胃促生长素表达较NC组降低,MET组较OB组升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。③研究总体中FINS与胃促生长素呈负相关(r=-0.817,P<0.05)。结论肥胖大鼠血清及下丘脑胃促生长素水平降低,MET可改善胰岛素敏感性、降低BW,可能与血清及下丘脑胃促生长素水平增高有关。     

糖尿病大鼠骨骼肌内脂素和磷脂酰肌醇3激酶的表达

目的 观察糖尿病大鼠骨骼肌中内脂素(visfatin)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)的表达,探讨visfatin在糖尿病中的作用及可能机制.方法 8周龄雄性SD大鼠55只(造模成功39只),采用随机数字表法分为4组:正常对照组(A组)10只,饮食诱导肥胖组(B组)10只,血糖未控制糖尿病组(C组)10只,血糖控制糖尿病组(D组)9只.喂养至12周末,测定空腹血糖(FBG)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、游离脂肪酸(FFA)、空腹胰岛素(FINS),计算稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及胰岛素敏感指数(ISI);RT-PCR测定骨骼肌组织visfatin、PI3K mRNA表达;Western blot测定骨骼肌组织visfatin、PI3K蛋白表达.结果 C组FBG较A、B组明显增高(P＜0.01);D组FBG较C组明显降低(P＜0.01).B组TG较A组明显增高(P＜0.05);C组TG、TC、LDL-C、FFA较A、B组明显增高(P＜0.01);D组TG、TC、FFA较A组明显增高(P＜0.05);D组TG较A、B组明显增高(P＜0.05);D组TG、TC、LDL-C、FFA较C组明显降低(P＜0.01).B、C组较A组FINS、HOMA-IR明显增高,ISI明显降低(P＜0.01),C组较B组FINS、HOMA-IR明显增高,ISI明显降低(P＜0.01).C、D组visfatin mRNA和蛋白表达较A组均明显增高(P＜0.05),C组visfatin蛋白较B组明显增高(P＜0.01).C组PI3K mRNA和蛋白表达较A、B组均明显降低(P＜0.01),D组PI3K mRNA和蛋白表达较A组均明显降低(P＜0.05).结论 visfatin在骨骼肌中的表达水平与骨骼肌糖脂代谢状态有关,可能通过PI3K参与骨骼肌糖脂代谢的调节.     

2型糖尿病患者骨骼肌乙酰CoA羧化酶的表达及活性研究

目的 观察2型糖尿病患者骨骼肌乙酰CoA羧化酶(ACC)的表达和活性的变化,探讨其在骨骼肌脂质堆积和胰岛素抵抗中的作用.方法 于2012年6月至2013年6月在石家庄市第二医院骨科住院择期行髋关节及下肢手术患者中,选取2型糖尿病痛程5年之内的患者10例为糖尿病组(DM组),另选取10例非糖尿痛者为对照组(NC组).采集静脉血检测空腹血糖(FBG)、血脂、游离脂肪酸(FFA)等,计算胰岛素敏感性指数(ISI).骨科手术中留取骨骼肌标本,测定骨骼肌三酰甘油(TG)、总的长链脂酰辅酶A(LCACoA)水平.骨骼肌ACC、磷酸化乙酰辅酶A羧化酶(P-ACC)蛋白表达用蛋白质印迹法(Western blotting)测定.结果 DM组FBG、空腹胰岛素(FINS)、FFA及血清TG水平高于NC组(P＜0.05),而ISI低于NC组(P＜0.01).DM组骨骼肌TG及LCACoA水平高于NC组(P＜0.05).两组骨骼肌ACC蛋白表达比较差异无统计学意义(P＞0.05),DM组骨骼肌P-ACC蛋白水平低于NC组(P＜0.05).结论 ACC活性的改变可能在2型糖尿病患者骨骼肌脂质堆积和胰岛素抵抗发生中起了一定作用.     

AMPK对Rab-GAP的调节作用研究

目的:检测激活型AMPK对Rab-GAP的调节作用,明确它们之间的上下游关系。方法:激活型AMPK腺病毒（Ad-AMPK-CA）感染C2C12小鼠骨骼肌细胞,通过细胞成像系统测定细胞中的荧光强度,明确AMPK-CA在C2C12细胞中表达。MTS试验确定没有细胞毒性的腺病毒浓度,Western blot检测AMPK底物ACC和两个Rab-GAP（TCB1D1和TCB1D4）的磷酸化。结果:AMPK-CA 显著升高ACC的磷酸化,并磷酸化TBC1D1 Thr590和TBC1D4 Ser318。结论:AMPK直接磷酸化TCB1D1和TCB1D4。     

Research on the New Mechanism of Evodiamine Activating AMPK

目的 检测吴茱萸碱在293T细胞中是否激活AMP蛋白激酶(AMPK),并探索吴茱萸碱激活AMPK的可能机制.方法 采用10％ SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及蛋白质免疫印迹检测磷酸化的AMPK和AMPK总量.将已知的AMPK激活剂(小檗碱、AICAR和A-769662)与吴茱萸碱同时处理293T细胞,通过检测吴茱萸碱与其共同处理的激活剂是否有协同效应来初步鉴定其激活AMPK的机制.结果 本研究发现传统中药吴茱萸中的喹唑啉咔生物碱吴茱萸碱在293T中能激活AMPK,吴茱萸碱激活AMPK的机制不同于该研究中用到的AMPK激活剂(P＜0.05,P＜0.01).结论 吴茱萸碱是一种新AMPK激活剂,它通过不同于小檗碱、AICAR和A-769662的机制激活AMPK.     

AMPK腺病毒载体在小鼠骨骼肌中的表达和作用

目的:探讨注射AMPK腺病毒在小鼠骨骼肌中的表达和作用。方法:C57BL/6小鼠随机分为4组:（1）无任何处理的空白对照组。（2）肌肉注射腺病毒空载体（Ad-GFP）组。（3）肌肉注射Ad-GFP,48 h后腹腔注射AMPK激活剂AICAR组。(4)肌肉注射GFP标记的激活型AMPK腺病毒（Ad-AMPK-CA）组。注射腺病毒72 h后,处死小鼠,通过小动物成像系统测定骨骼肌中的荧光强度,检测腺病毒的表达,用Western Blot方法检测ACC的磷酸化。结果:与空白对照组比较,注射腺病毒组的平均荧光强度显著增高。与病毒空载体组比较,注射AICAR组和Ad-AMPK-CA组的ACC磷酸化水平显著升高。结论:AMPK腺病毒能在小鼠骨骼肌中表达目的蛋白,调节AMPK的作用。     

AMPK／mTOR 通路参与脓毒症亮氨酸抵抗的研究进展

脓毒症可导致机体蛋白质合成显著抑制,产生亮氨酸抵抗。蛋白质合成由mTOR磷酸化核糖体蛋白p70S6激酶1（p70S6K1）和真核细胞翻译抑制因子4E结合蛋白1（eIF4E-BP1）进行调控,AMPK作为负向调节mTOR的重要信号分子,在脓毒症状态下存在活性异常。文中就AMPK／mTOR通路与脓毒症亮氨酸抵抗的相关研究进展进行综述。     

AMP激活蛋白激酶对慢性心力衰竭进展影响的实验研究

目的:探讨AMP激活蛋白激酶(AMPK)对慢性心力衰竭进展的影响及可能作用机制.方法:选择8～10周龄雄性C57BL/6J小鼠共40只,随机分为四组,其中A组为生理盐水(NS)注射+假手术(sham),B组为AICAR注射+假手术(sham),C组为NS注射+行主动脉缩窄手术,D组为AICAR注射+行主动脉缩窄手术;比...     

AMPK在保护血管功能中研究进展

腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,它是细胞内能量感受器并且参与了细胞和全身器官的能量代谢调节。AMPK的激活有许多潜在的抗动脉粥样硬化的效果,包括减少炎症细胞黏附在内皮上,减少脂质氧化引起的脂质累计和炎症细胞的增殖,刺激细胞抗氧化保护的基因表达和一氧化氮形成的酶。除了用于心血管和代谢性疾病的药物如他汀类,二甲双胍和噻唑烷二酮类之外,中医药宝库中也有许多涉及了AMPK的激活。总的来说,AMPK的激活与维护血管健康有密不可分的关系。综述了AMPK在保护血管功能中作用及机制的研究进展。     

冠状动脉粥样硬化与AMPK、SIRT1基因表达的关系初步研究

目的:通过检测冠状动脉粥样硬化患者外周血单个核细胞(PBMC)中单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)以及沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ(SIRT1)的基因表达情况,初步探讨AMPK和SIRT1基因表达与冠状动脉粥样硬化形成以及调控血浆中一氧化氮(NO)水平、血脂、血糖代谢的可能机制.方法:利用普通PCR、琼脂糖凝胶电泳、实时荧光定量PCR及SPSS分析软件检测冠心病者和正常对照组外周血单个核细胞(PBMC)中AMPK和SIRT1的基因表达区别,以及它们与血脂(TC、TG、LDL-c、HDL-c)、空腹血糖(FBG)、一氧化氮(NO)含量的相关性.结果:冠心病组PBMC中AMPK和SIRT1基因表达以及血浆中NO含量均明显低于对照组,差异具有统计学意义(P均＜0.05).AMPK和SIRT1表达均与TC、TG、LDL-c、FBG呈负相关,与NO含量及HDL-c呈正相关(P均＜0.05).结论:冠心病患者PBMC中AMPK和SIRT1基因表达下降可能与冠心病的发病存在相关性,对调控血脂、血糖及NO生成释放中可能起到一定作用.     

降钙素基因相关肽对血管平滑肌细胞脂质代谢及AMPK的影响

目的观察降钙素基因相关肽（CGRP）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导血管平滑肌细胞（VSMC）增殖过程中细胞脂代谢的影响,探索影响脂代谢的腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信号蛋白在该作用中的变化。方法贴块法体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞（VSMC）,取第3-10代用于实验。分别用CGRP或／和AngⅡ处理细胞。细胞计数法观察CGRP对AngⅡ诱导大鼠VSMC增殖的影响;油红O染色检测细胞内脂质含量;Western blot检测细胞p-AMPK、p-ERK1／2的表达。结果CGRP预处理能减少AngⅡ诱导的大鼠VSMC数目（P〈0．05）和细胞内脂质聚集的作用,在此过程中伴随细胞内p-AMPK、p-ERK1／2表达下调（P〈0．05）;CGRP8—37（CGRP受体拮抗剂）能拮抗CGRP对AngⅡ促增殖和脂代谢作用（P〈0．05）;PD98059（ERK1／2抑制剂）能部分拮抗CGRP对p—AMPK的抑制作用（P〈0．05）。结论CGRP能显著降低AngⅡ诱导大鼠VSMC增殖过程中的脂质代谢,其细胞内信号通路可能涉及到p—ERK1／2和p—AMPK信号蛋白。     

AMPK作为治疗肥胖靶点的研究进展

肥胖发生的主要原因是能量代谢平衡失调,腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)在调节机体能量代谢平衡方面起总开关作用,其激活后磷酸化下游信号分子,关闭消耗ATP的合成代谢途径,开启产生ATP的分解代谢途径。AMPK还可通过介导某些激素和细胞因子的释放和表达,作用下丘脑摄食中枢,调节食物摄入,与肥胖的发生密切相关。因此,AMPK信号通路有望成为治疗肥胖的药理学靶点。