无佐剂免疫的抗曼氏血吸虫保护性抗原的分离和定性

用曼氏血吸虫波多黎各株制备可溶性成虫抗原(SWAP)、可溶性虫卵抗原(SEA)及童虫表面抗原提取物。曼氏血吸虫童虫加福氏佐剂免疫BALB/c小鼠后取脾分离脾细胞,与鼠骨髓瘤细胞P3NS-1融合。ELISA     

日本血吸虫童虫保护性单克隆抗体的建株和鉴定

本研究获8株抗日本血吸虫(中国大陆株)童虫的单克隆抗体,从中确定一株具有体内保护性功能的单克隆抗体(编号为N15D9),其保护率范围为14-39％。经间接免疫荧光法和ELISA试验检测,N15D9能与尾蚴、3h龄机械转化童虫和5d龄肺童虫的表膜抗原反应。经3h龄机械童虫可溶性抗原的免疫印迹法分析,N15D9能识别132、96和10kDa抗原分子。     

可溶性曼氏血吸虫抗原和照射减弱疫苗对小鼠血吸虫病的免疫作用

本文比较了接种单剂肝片吸虫或曼氏血吸虫成虫可溶性提取物与照射减弱曼氏血吸虫尾蚴或童虫对小鼠曼氏血吸虫病的保护作用。并对吸虫抗原提取物与减弱尾蚴疫苗结合应用的免疫效果进行了评价。肝片吸虫成虫(Fhww)或曼氏血吸虫成虫(Smww)可溶性抗原提取物:肝片吸虫、曼氏血吸虫分别经生理盐水反复洗涤后制成匀浆,悬于Hank’s平衡盐溶液中。经超声处理后,在4℃、3000g离心30′,最后收集其可溶性部分。免疫时抗原提取物的蛋白浓度为     

曼氏血吸虫成虫抗原的免疫接种

本文报告了有关免疫接种、提纯和保护性磷酸缓冲液生化分析方面不同指标的资料。收集的曼氏血吸虫成虫迅速用pH6.8、0.15M PBS漂洗2次,取1g虫冰冻贮存于10ml PBS中至少10天制备成虫浸出液,经冻融、过滤、4℃下10000g离心60分钟,将悬液(盐水浸出液,SE)再通过0.22μ微孔膜过滤,其蛋白浓度用Lowry's法测定。取SE样本用交联葡聚糖G-100柱层析获得纯化的成虫部分(FI)。将SE-CFA(福氏完全佐剂)、FI-CFA CE-C.parvum(短小棒状杆菌)或单纯SE、FI抗原分别接种雄性新     

筛选日本血吸虫童虫早期诊断抗原的研究

目的筛选日本血吸虫童虫早期诊断抗原及其表位.方法制备日本血吸虫可溶性童虫抗原(SSA),经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western blot后分别与日本血吸虫感染后10、21、42天兔血清进行酶联免疫印迹试验(EITB),筛选出能被早期感染血清所识别的抗原组分.用日本血吸虫感染后21天血清从噬菌体12随机肽库中筛选、富集、纯化、扩增与早期感染兔血清有高亲和力的噬菌体克隆,经动物实验初步评估其对日本血吸虫感染的早期诊断效果.结果SDS-PAGE显示SSA的总条带数多于可溶性成虫抗原(SAWA),但大多为共同抗原.EITB结果显示SSA共出现12条早期反应抗原带,其中97 kDa和47 kDa抗原分子只能被感染后10天兔血清特异性识别;SAWA仅出现7条反应带,未显示只能被感染后10天兔血清识别的期特异性抗原分子.挑选出3个与感染后21天兔血清具有高亲和力的单克隆噬菌体,混合后分别用于检测感染日本血吸虫10、21 d鼠血清中IgG特异性抗体,阳性检出率分别为48.8%和64.4%.结论SSA中的97 kDa和44 kDa抗原分子及3个噬菌体随机12肽抗原模拟表位可能具有日本血吸虫感染早期诊断价值.     

小鼠接种照射减毒的血吸虫尾蚴后巨噬细胞的活化作用

本文首次证明经照射减毒的尾蚴接种的鼠体内,具有免疫效应机制。实验用6～8周龄雌鼠C57BL/6J和C3H/HeN。曼氏血吸虫尾蚴NMRI株,按Gazzinelli等(1933)的方法制备血吸虫童虫,James等(1981)方法制备可溶性血吸虫成虫抗原(SWAP)。免疫小鼠系按Minard等(1978)的方法,用经~(60COr-射线50Krad     

日本血吸虫肝期童虫抗原免疫效果的观察

本文用日本血吸虫９ｄ龄肝期童虫抗原免疫小鼠观察了对同种血吸虫攻击感染的效果。材料和方法１实验动物Ｃ５７ＢＬ／６雌性小鼠７周龄，标准饲料喂养。２日本血吸虫尾蚴自湖南省寄生虫病研究所采购阳性钉螺，逸出尾蚴。３肝期童虫抗原的制备３．１冻融冷浸及超声粉碎处理...     

单克隆抗体在曼氏血吸虫尾蚴钻穿小鼠皮肤中的作用

本文报道了作者应用单一的单克隆抗体或3～4个混合的单克隆抗体处理尾蚴后,减少或影响其感染和发育的情况。单克隆抗体选用曼氏血吸虫免疫的C_(57)BL/65小鼠脾细胞与小鼠不分泌SP2型骨髓瘤细胞融合的杂交瘤制备。用酶联免疫吸附试验测定虫卵可溶性抗原及4MKCl提取的尾蚴抗原和用间接免疫荧光测定童虫表面抗原与单克隆抗体发生反应的克隆化融合细胞,注射到经“朴日斯烷”(Pristan)处理后的小鼠腹腔内,使其产生腹水。     

不同生活期曼氏血吸虫在CBA/N小鼠诱导的同型抗体对童虫的应答

用曼氏血吸虫波多黎各株的虫卵、童虫和成虫为材料,制备可溶性虫卵抗原(SEA)、童虫膜抗原(SSA)和可溶性成虫抗原(SWA)。以(CBA/N×BALB/c)F_1雄性和雌性小鼠为实验动物,此雄性鼠具X染色体免疫缺陷,即胸腺不依赖2型(TI-2)免疫缺陷,而雌性鼠无此缺陷,作为正常对照。TI-2型免疫抗体主要为IgM,IgG_(?),TI-1型免疫抗体主要为IgM,IgG_(2a),IgG_(2b),IgG_(?),胸腺依赖型(TD)主要为IgG_1。应用ELISA检     

抗日本血吸虫小鼠IgE单克隆抗体的产生与性质

本文描述一种对Sj的小鼠IgE单克隆抗体,在感染早期被动转移该抗体对小鼠有部分的而明显的保护作用。材料与方法:用机械方法制备童虫,然后在5％CO_2、37℃下孵育3小时。按Chaffee法略加改良制备Sj、Sm及肝片形吸虫,卫氏并殖吸虫,旋毛虫抗原。在制备Sj成虫抗原时,单性雄虫与配对的成虫分开制备。转化的Sj童虫抗原亦分别制备。慢性感染血清为感染20～30条Sj尾蚴8～12周后的小鼠血清。McAb的制备:经Sj成虫抗原免疫对Sj产生高水平IgE抗体的C3H/He小鼠的脾细胞与NS-1骨髓瘤细胞融合,以被动皮肤过敏反应(PCA)筛选阳性杂交瘤,经克隆化获得IgE单克隆抗体。     

旋毛虫成虫可溶性粗抗原对小鼠的免疫保护作用

本文应用人工感染的方法从大白鼠获得大量成虫。经冻融、超声粉碎、高速离心制备出成虫可溶性粗抗原。将不同剂量的抗原与等体积弗氏完全佐剂乳化后间隔1周共免疫小白鼠3次。最后一次免疫后间隔1周每鼠攻击感染130条感染性肌幼虫,攻击感染后1周剖检成虫、新生幼虫,攻击感染后35天剖检肌幼虫。试验结果表明,以每只小白鼠免疫200μg成虫可溶性粗抗原所诱导的免疫力最好,诱导成虫减虫率达94.65％,肌幼虫减虫率达95.60％。初步研究表明,旋毛虫成虫可溶性抗原是很好的免疫原。     

Calpain抗体介导的对日本血吸虫童虫的细胞毒作用

目的　探讨日本血吸虫疫苗候选分子———钙离子激活的中性蛋白激酶 (Calpain)的保护性免疫力和免疫保护性机制。方法　用重组纯化的Calpain抗原免疫小鼠 ,制备抗Calpain血清 ,将机械转化的日本血吸虫童虫和同种鼠激活的嗜酸性粒细胞共同培养 ,观察细胞对血吸虫童虫的黏附及对童虫的杀伤效果。结果　重组Calpain抗原免疫小鼠后 ,产生了极高的抗Calpain特异性抗体 ,并介导了同种鼠的嗜酸性粒细胞对日本血吸虫童虫的黏附。在 3 7°C ,5 %CO2 培养 48h后 ,3 3 .8%的日本血吸虫童虫被杀死 ,与对照组 14 .5 %的自然死亡率相比显著增高 (P <0 .0 1)。结论　Calpain特异性抗体介导了对日本血吸虫童虫的细胞毒作用 ,提示Calpain可能是日本血吸虫的一个疫苗候选分子 ,该分子的重组抗原有可能应用于血吸虫病诊断     

用具有生物学活性的单克隆抗体鉴定曼氏血吸虫抗原

作者用曼氏血吸虫Puerto-Rican株尾蚴和童虫,经超声粉碎提取抗原,按Bolton 等法和氯胺T法进行~(125)I标记后,用1%Nonidet P-40处理,经超速离心,取上清用2种标记法获得的上清液按1:1比例混合,再用单克隆抗体进行分离抗原免疫活性的鉴定。免疫沉淀按Kessler法进行,~(125)I标记可溶性浸出液,先用完整葡萄球菌A吸收,然后用各种单克隆抗体反应,再用固定的葡萄球菌A沉淀免疫复合物,并进行SDS-PAGE。免疫印渍试验将尾蚴可溶性抗原先进行SDS-     

SD大鼠抗日本血吸虫感染机理的初步研究

目的　对SD大鼠天然抗日本血吸虫感染机理进行初步研究。　方法　用免疫印迹技术分析正常SD大鼠血清(NRS)、感染SD大鼠血清 (IRS)对日本血吸虫成虫可溶性抗原 (AWA)的识别 ;并用间接ELISA方法检测NRS抗AWA、日本血吸虫可溶性虫卵抗原 (SEA)、日本血吸虫可溶性肺期童虫抗原 (SSA)的IgG抗体及亚类 ;并观察了NRS、去补体血清对体外培养的童虫的杀伤作用。　结果　NRS可识别AWA中的 75、47、3 4.5和 2 3ku的抗原分子 ,IRS则主要识别分子质量为 62～ 86、5 4.7、47、3 4.5、3 0 .3和 2 3ku的特异性条带 ;NRS抗AWA、SEA、SSA特异性IgG1 抗体水平明显高于正常昆明鼠血清中相应的抗体水平 ,而IgG2b则无明显增高 ;SD大鼠去补体血清在体外对童虫的杀伤作用低于正常血清 ,培养 48h童虫的死亡率分别为 41.0 %和 76.2 %。　结论　SD大鼠血清中存在天然抗日本血吸虫感染的抗体 ,此抗体在SD大鼠血清的杀伤机制中起重要作用。     

抗-MSA_1单克隆抗体与血吸虫和非血吸虫抗原提取物的反应

所用抗原除MSA_1外,(?)有下列(?)融的可溶性抗原:曼氏血吸虫各期包括尾蚴、童虫、成虫和虫卵抗原,亚氏双脐螺(SBaHA)和光滑双脐螺(SBgHA)血淋巴抗原以及肝吸虫成虫抗原。并用磷酸缓冲液作为抗原对照。抗牛血清白蛋白单克隆抗体作为抗MSA_1单克隆抗体对照。应用免疫扩散及酶联免疫吸附试验的观察结果表明:抗MSA_1单克隆抗体与所有上述抗原制剂均产生不同程度的反应。免疫扩散试验可见抗MSA_1单克隆抗体与MSA_1出现清晰单一的沉淀线。与童虫抗原和SBgHA     

用纯化的曼氏血吸虫成虫表膜抗原免疫小鼠诱导的保护性免疫

作者研究了曼氏血吸虫全虫匀浆(WWH)和成虫表膜抗原(mb-S)在小鼠引起的免疫应答,佐剂和皂素介导的保护性免疫及免疫接种后某些抗体应答与所获得保护性的关系。曼氏血吸虫成虫于聚四氟乙烯组织研磨器中制备成悬液,经10000g离心2分钟,吸取上清,即为WWH。取WWH于4℃100000g离心1小时,收集上清。其沉淀重新悬浮于PBS。根据Simpon等(1981)的方法制备mb-S,仓鼠感染6周后收集成虫,     

金诺芬抗日本血吸虫活性机制及其细胞毒性的探讨

目的探讨金诺芬对日本血吸虫(Schistosoma japonicum)童虫和成虫作用效果的差异及其作用靶点,测定金诺芬对宿主细胞的毒性。方法用二硫苏糖醇(DTT)/胰岛素还原法体外测定金诺芬对重组SjTrx-1酶活性的影响。用日本血吸虫尾蚴感染4~6周龄雌性昆明鼠(童虫组10只小鼠,600~800条/只;成虫组10只小鼠,80~100条/只),灌注法收集童虫(15 d)和成虫(35 d)。虫体经无菌生理盐水充分洗涤后,转移至预先添加培养基的12孔板中,分别加入金诺芬和吡喹酮至其终浓度为1、5和10μg/ml,显微镜下观察化合物处理2、24、48和72 h后虫体的形态改变和死亡情况。CCK-8试剂盒测定金诺芬(5和10μg/ml)对3种人源宿主细胞(Hep G2、293T和Hela)的毒性。结果10μg/ml金诺芬作用下,40 min内重组SjTrx-1还原胰岛素的总量减少54.5%。5μg/ml金诺芬体外作用24 h后,成虫死亡率达75%,而童虫未见死亡;10μg/ml金诺芬作用72 h后,童虫和成虫均全部死亡,但童虫死亡时间较成虫延迟。金诺芬和吡喹酮作用后,光镜下观察,虫体均出现颜色变灰暗、挛缩和卷曲等现象;电镜下可见虫体表被膜结构严重破坏。细胞毒性测试结果显示,5μg/ml金诺芬可使细胞相对活力降低85%以上,而10μg/ml时细胞几乎全部死亡。结论SjTrx-1是金诺芬作用靶点之一。金诺芬具有较强的细胞毒性作用,对日本血吸虫成虫和童虫的作用效果存在差异,对成虫的作用效果更显著。     

曼氏血吸虫自尾蚴到童虫形态学变化的生化

本文叙述了在体外用物理方法刺激大量尾蚴产生头腺分泌、发育到童虫以及变化中的生化差异。分析步骤:制备每毫升1,000条尾蚴的混悬液,在室温和一定的pH条件下,通过6,000～8,000g离心,获得压积的尾蚴和含有类童虫的幼虫的块状物,再经超声处理获得尾蚴与童虫抽提物,按Stirewalt描述的     

SD大鼠抗日本血吸虫感染机理的初步研究

目的对SD大鼠天然抗日本血吸虫感染机理进行初步研究。方法用免疫印迹技术分析正常SD大鼠血清(NRS)、感染SD大鼠血清(IRS)对日本血吸虫成虫可溶性抗原(AWA)的识别；并用间接ELISA方法检测NRS抗AWA、日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)、日本血吸虫可溶性肺期童虫抗原(SSA)的IgG抗体及亚类；并观察了NRS、去补体血清对体外培养的童虫的杀伤作用。结果NRS可识别AWA中的75、47、34．5和23ku的抗原分子．IRS则主要识别分子质量为62～86、54．7、47、34．5、30．3和23ku的特异性条带；NRS抗AWA、SEA、SSA特异性IgG1抗体水平明显高于正常昆明鼠血清中相应的抗体水平，而IgG2b则无明显增高；SD大鼠去补体血清在体外对童虫的杀伤作用低于正常血清，培养48h童虫的死亡率分别为41．0%和76．2％。结论SD大鼠血清中存在天然抗日本血吸虫感染的抗体，此抗体在SD大鼠血清的杀伤机制中起重要作用。     

血吸虫保护性免疫的研究现状

近年来,血吸虫保护性免疫研究的主要进展有:1) 发现肺是入侵童虫的主要免疫性清除部位;2) 确立了 T 细胞介导的巨噬细胞杀伤机制是宿主保护性免疫的重要效应机制;3) 观察到 T 辅助细胞和 T 抑制细胞相互作用调节着宿主的免疫反应水平及阻断抗体在体外对抗体依赖性细胞介导的杀伤童虫机制的阻断作用;4) 肉芽肿形成是 T 细胞依赖性的,并受到多种淋巴因子的调节,日本血吸虫和曼氏血吸虫引起的肉芽肿有所差异;5) 照射减弱活虫疫苗的制备和应用得到广泛深入的研究,利用单克隆抗体筛选的保护性抗原作为疫苗的研究及可溶性抗原联合佐剂免疫宿主,提高抗感染免疫水平的研究取得进展。本文对上述进展作一综述。