体外LAK细胞杀伤人直肠腺癌细胞时微管蛋白变化的免疫荧光研究

应用免疫荧光细胞化学方法观察了体外LAK细胞杀伤人直肠腺癌细胞(HR8348)时效靶细胞内微管蛋白的变化。结果表明,LAK细胞与靶细胞相互接触形成效靶复合体后,两种细胞胞浆内微管蛋白出现重排现象。LAK细胞内的微管蛋白全部集中在两类细胞质膜接触处,呈月芽状分布。靶细胞内的微管蛋白在效靶复合体质膜接触处浓集成斑块状并与LAK细胞的月芽状结构融合,靶细胞逐渐变性坏死。这提示,靶细胞的溶解可能与效靶细胞的微管重排有关。     

LAK细胞杀伤直肠腺癌细胞时酶细胞化学定量观察

采用酶细胞化学技术及MIAS—300型图象分析仪观察了LAK细胞杀伤HR8348细胞不同时间的效靶细胞内SDH和AcPase的变化。结果显示:①效靶细胞共育不同时间的HR8348细胞内AcPase均明显高于对照组,并随时间延长,AcPase含量增加。靶细胞内SDH含量在共育30、60min时明显增加,90min后逐渐下降。②LAK细胞内AcPaSe在60、90、120min时酶含量较高,与对照组相比有非常显著的统计学差异(P<0.01)。SDH在效靶共育60,90,120,180、240min时含量明显增高,与对照组相比差异非常显著(P<0.01)。效靶细胞内AcPase、SDH含量变化说明两种细胞功能非常活跃。效靶细胞接触早期靶细胞内SDH变化可能与靶细胞抵御损伤而表现出细胞功能活跃有关。靶细胞内AcPase含量增加,是靶细胞内溶酶体活化的表现,是靶细胞自溶的物质基础。     

LAK细胞杀伤直肠腺癌细胞时酶细胞化学定量观察

采用酶细胞化学技术对LAK细胞杀伤HR8348细胞不同时间的效靶细胞内SDH和ACP酶进行动态定量观察。使用MIAS-300型图像分析仪分别检测SDH阳性粒子数及ACP酶灰度值变化。结果显示:1、效靶共育不同时间的HR8348细胞内ACP酶均明显高于对照组,ACP酶随效靶共育时间延长,ACP酶含量增加。靶细胞内SDH含量在共育30分钟时明显增加,60分钟后逐渐下降。2、LAK细胞内ACP酶在60、90、120分钟时酶含量较高,与对照组相比差异非常显著(P<0.01)。SDH在效靶共育60、90、120、240分钟与对照组相比差异非常显著(P<0.01)。效靶细胞内ACP、SDH含量变化说明两种细胞功能非常活跃。效靶接触早期细胞内SDH变化可能与靶细胞抵御损伤而表现出细胞功能活跃有关。靶细胞内ACP酶含量增加,是靶细胞内溶酶体活化的表现,是靶细胞自溶的物质基础。     

LAK细胞体外杀伤直肠腺癌细胞的扫描电镜观察

应用扫描电镜观察体外LAK细胞与直肠腺癌细胞相互作用时的形态学变化。结果表明:LAK细胞与HR8348细胞均具有主动互相趋向运动,效靶细胞借其细胞突起及微绒毛相互接触。LAK细胞及肿瘤细胞的细胞突起及微绒毛由早期的平面接触逐渐发展为犬牙交错状结合。效靶细胞紧密结合后,靶细胞鼓泡,细胞膜出现环形穿孔。互相接触,结合的微绒毛及细胞突起在靶细胞的溶解过程中起到一个物理微桥的作用。LAK细胞分泌的杀伤物质通过微桥介导靶细胞的溶解。效靶细胞互相结合的微绒毛间形成关闭小室,它可能与维持局部杀伤物质浓度有关。     

LAK细胞体外杀伤直肠腺癌细胞的透射电镜观察

应用透射电镜观察LAK细胞与HR8348细胞相互作用时超微结构变化。结果显示:(1)效靶细胞接触、结合后,两种细胞质膜接触部位均有不同程度的增厚,电子密度增加,界限不清,形成粘着斑或连结状结构,这种结构是效靶细胞稳定结合的形态学基础。(2)部分LAK细胞突起插入靶细胞深部,少数LAK细胞胞体钻入靶细胞,表明LAK细胞具有与NK、CTL细胞相同的“钻瘤”功能。(3)效靶细胞接触后,两种细胞细胞器及其它细胞颗粒均向效靶接触侧集中,效靶接触部位含有丰富的微丝、微管、微管集中处溶酶体颗粒较多;推测微丝、微管及溶酶体在靶细胞溶解中起一定作用。(4)效靶细胞结合后,靶细胞出现鼓泡和环形穿孔,靶细胞呈凋落状或溶解性坏死。凋落状坏死可能是LAK细胞释放的非穿孔素性物质通过靶细胞膜上的受体,启动靶细胞内源性核酸酶,导致DNA裂解所致。后者可能与穿孔素作用,Ca~H、Mg~H离子内流,细胞水肿及溶酶体导致细胞自溶有关。     

~(51)Cr释放方法测定LAK细胞活性若干实验条件的选择

本文探讨了(51)~Cr释放试验测定LAK细胞活性的若干实验条件。应用200μCi国产铬酸钠(Na_2~(51)CrO_4),在细胞浓度2×10~8/ml、容积0.5ml、2小时的标记条件下,1×10~4k_(562)细胞的同位素掺入量大于1800cpm,自然释放率为17～20％。以IN HCI与等容量k_(562)靶细胞共育为最大释放,其最大释放率为70.08％。效/靶比例为50∶1、共育6小时的基本条件下,(51)~Cr释放方法测定的LAK细胞杀伤K_(562)细胞活性为65.33±7.4％。     

LAK细胞可溶性因子介导K_(562)细胞的损伤

采用~(51)Cr释放方法探讨LAK细胞可溶性因子介导的K_(562)细胞的损伤。15例中有12例LAK细胞培养上清介导的K_(562)细胞的损伤为10.96±5.15％。将LAK细胞洗去培养上清后与K_(562)细胞共育6小时,5例此种效靶细胞共育后的上清介导的Ks6z细胞的损伤为12.41±6.54％。结果表明,LAK细胞杀伤K_(562)细胞的作用至少一部分是由LAK细胞分泌的可溶性因子完成的。     

PD-1/PD-L1通过抑制穿孔素和颗粒酶的极化抑制Vδ2T细胞对结直肠癌细胞的杀伤作用

目的 探索PD-1/PD-L1抑制Vδ2T细胞杀伤结直肠癌细胞作用的相关机制.方法 将HR8348和SW480细胞分别分为3组,按照Vδ2T细胞和HR8348/SW480细胞效靶比为10:1、20:1和40:1的比例进行共培养,通过乳酸脱氢酶(LDH)杀伤实验,检测Vδ2T细胞对结直肠癌细胞的杀伤功能.流式细胞术检测V...     

探讨胎脾LAK细胞对不同的T淋巴白血病细胞的杀伤作用

目的探讨胎脾LAK细胞对不同的T淋巴白血病细胞的杀伤作用.方法采用低浓度的重组人白介素-2(rhIL-2)诱导的胎脾LAK细胞杀伤两种不同的T淋巴白血病细胞系MOLT-4和HPB-ALL的51Cr释放实验.结果发现不同的LAK效应细胞和靶细胞比(ET)条件下,胎脾LAK细胞对两种不同的T淋巴白血病细胞杀伤能力随ET的增大而增强(P<0.01).相同ET比时,对MOLT-4的杀伤显著强于对HPB-ALL的杀伤(P<0.001).各ET比的平均杀伤率MOLT-4为(58.24±12.93)%,HPB-ALL为(34.33±13.20)%(P<0.001).结论胎脾LAK细胞对不同的T淋巴白血病细胞的杀伤能力存在着差异,其可能与T淋巴白血病细胞的分化程度相关.ET比越大,杀伤能力越强.     

丁酸钠抑制淋巴因子激活杀伤细胞杀瘤活性的研究

目的：探讨低浓度丁酸钠(sodium butyrate)对人结肠腺癌细胞SW1116表面细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和癌胚抗原(CEA)表达的影响及其对淋巴因子激活杀伤(LAK)细胞杀伤活性的改变。方法：噻唑蓝(MTT)比色法检测经不同浓度丁酸钠处理4天后SW1116在不同效／靶比下对LAK细胞杀伤敏感性的改变，流式细胞术和免疫荧光法定量和定性检测丁酸钠对ICAM-1和CEA表达的影响。结果：MTT显示，经0．5、1和2mmol／L丁酸钠处理后，细胞对LAK细胞杀伤敏感性从74．6％下降至15．9％(效／靶为20)，且在一定程度上有浓度依赖性，当效／靶为10时亦呈类似变化，与之对应的ICAM-1阳性细胞数从92．2％下降至7．6％，而CEA阳性细胞数从1．2％上升至16．6％，荧光显微镜下与流式细胞术的改变相一致。结论：丁酸钠减弱LAK细胞对人结肠癌细胞SW1116的杀伤，这种作用可能与其降低ICAM-1同时增加CEA的表达，从而改变效／靶细胞的结合有关。     

肝星状细胞对肝癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭的影响及作用机制研究

目的观察人肝星状细胞LX-2对人肝癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法人肝星状细胞LX-2条件培养基（HSC-CM）与肝癌SMMC-7721细胞共培养,设为HSC-CM组;人正常肝细胞LO2条件培养基(LO2-CM)与肝癌SMMC-7721细胞共培养,设为LO2-CM组（阴性对照）;1%FBS培养基与肝癌SMMC-7721细胞共培养,设为1%FBS组（空白对照）。采用CCK-8法检测3组肝癌SMMC-7721细胞增殖能力;Transwell侵袭实验检测培养48h后细胞侵袭能力;Westernblot检测增殖细胞核抗原（PCNA）、血管内皮生长因子（VEGF）、核因子资B（NF-资B）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）蛋白表达水平。结果HSC-CM组、LO2-CM组、1%FBS组肝癌SMMC-7721细胞增殖能力、侵袭能力、PCNA、VEGF、NF-资B、基质金属蛋白酶２（MMP-2）蛋白表达水平比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）;与LO2-CM组、1%FBS组比较,HSC-CM组肝癌SMMC-7721细胞增殖能力、侵袭能力均增强（均P＜0.05）;PCNA、VEGF、NF-资B、MMP-2蛋白表达水平均上调（均P＜0.05）。结论肝星状细胞可促进肝癌SMMC-7721细胞增殖、侵袭等生物学行为,其作用机制可能与上调PCNA、VEGF、NF-资B、MMP-2表达水平有关。     

苦参碱对人宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用研究

目的探讨苦参碱对人宫颈癌细胞株Hela细胞体外增殖的抑制作用。方法选用人宫颈癌Hela细胞进行体外培养,以0.25～4.0mg/ml的苦参碱分别处理Hela细胞24～72h后,用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,倒置显微镜和透射电镜进行形态学观察。结果苦参碱对Hela细胞有抑制作用,并呈剂量和时间依赖性;流式细胞仪检测到细胞在苦参碱作用后,细胞凋亡率增加;透射电镜观察发现部分细胞发生凋亡早期改变。结论苦参碱对人宫颈癌Hela细胞具有明显抑制作用,诱导细胞凋亡可能是其机制之一。     

尼妥珠单抗对鼻咽癌CNE-2细胞放射敏感性的影响

目的 初步探讨尼妥珠单抗对鼻咽癌CNE-2细胞的放射增敏作用.方法 MTT法检测尼妥珠单抗对CEN-2细胞的半数抑制浓度（IC50）,集落形成实验计算细胞存活率,多靶单击模型拟合细胞存活曲线并计算放射增敏比,流式细胞仪检测尼妥珠单抗联合放疗的凋亡率及细胞周期分布.结果 尼妥珠单抗对CNE-2细胞有增殖抑制作用,24h IC50为945μg/ml,0.2×IC50及0.3×IC50剂量下的放射增敏比分别为1.26和1.38,尼妥珠单抗联合放疗组凋亡率、G0/G1期细胞比例较对照组增多（P＜0.05）.结论 尼妥珠单抗联合照射可提高鼻咽癌CNE-2细胞的放射敏感性并阻碍细胞增殖、促进凋亡和干扰细胞周期分布.     

吉西他滨联合树突状细胞对HepG2细胞增殖的抑制作用

目的:观察肿瘤细胞裂解物致敏的树突状细胞(DC)联合吉西他滨(GEM)体外抑制肝癌HepG2 细胞系增殖的作用,为临床探索有效的肝癌综合治疗方案提供实验依据.方法:采用反复冻融法裂解HepG2 细胞,提取肿瘤细胞抗原后致敏DC,并以DC刺激自身T 细胞的增殖和活化.按不同处理因素分组:①空白对照组,只含空白培养液;②阴...     

来曲唑对人子宫内膜癌细胞作用的研究

目的：探讨第3代芳香化酶抑制剂来曲唑（letrazole）对子宫内膜癌细胞生长的抑制作用。方法：体外培养人子宫内膜癌细胞株RL-952，培养液中加入来曲唑和（或）丙酸睾酮、醋酸甲地孕酮（MA），用计数法分析细胞的生长，用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡细胞，并对药物处理过的细胞进行苏木精．伊红（H-E）染色、光镜下观察细胞形态和凋亡细胞。结果：来曲唑联合丙酸睾酮、MA对RL-952子宫内膜癌细胞周期有影响，使G0／G1期的细胞增加，S期、G2／M期细胞减少；单用丙酸睾酮或来曲唑对RL-952子宫内膜癌细胞周期均无明显影响。结论：芳香化酶抑制剂来曲唑可抑制丙酸睾酮所致RL-952子宫内膜癌细胞株的增殖。     

高强度聚焦超声不完全消融对体外培养肝癌细胞的影响

目的通过高强度聚焦超声不完全消融筛选残留肝癌细胞,探讨其生物学行为改变及对血管形成的影响。方法在声功率5 W下,获得高强度聚焦超声辐照肝癌细胞的温度-时间关系,在某一温度下筛选出高强度聚焦超声不完全消融最佳肝癌细胞亚系并继续培养获得稳定子代。细胞活性实验检测细胞增殖率及热耐受性;划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测迁移和侵袭能力;观察内皮细胞管腔形成的变化。结果随着高强度聚焦超声照射时间增加,温度增加,细胞死亡率增加,在48℃及以上温度肝癌SMMC7721细胞基本全部死亡,而47℃筛选出的SMMC7721肝癌细胞亚系增殖率、热耐受性较正常肝癌细胞增强(P<0.05),运动能力、侵袭能力无明显变化(P>0.05);并能促进内皮细胞增殖、迁移和管腔形成(P<0.05)。结论高强度聚焦超声能够杀灭肿瘤细胞,然而高强度聚焦超声不完全消融会促使肝癌细胞生物学行为转变并能促进血管形成。     

反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对喉癌细胞癌细胞表达的影响

目的 探讨针对端粒酶的反义寡核苷酸对喉癌细胞端粒酶活性的抑制及对P53和PCNA基因表达的影响。方法 用PCR－ELISA法检测喉癌细胞株Hep-2细胞内端粒酶的活性，用免疫组化的方法检测喉癌细胞P53和PCNA基因的表达。结果 该反义寡核苷酸可抑制喉癌细胞端粒酶活性，此作用有序列特性性和浓度依赖性。40μM反义核苷酸抑制了喉癌细胞PC－NA的表达，而对P53表达无明显影响。结论 靶向于端粒酶的反义寡核苷酸能抑制喉癌细胞Hep-2PCNA基因的表达。     

腺样囊性癌SACC-83细胞对雪旺氏细胞的促生长作用

目的:观察在体外共培养中腺样囊性癌细胞对由坐骨神经生长出的雪旺氏细胞的影响。方法:将腺样囊性癌细胞、舌癌细胞及成纤维细胞分别与小鼠坐骨神经共培养,制备细胞玻片并行S100免疫组化染色实验。结果:腺样囊性癌细胞可促进由坐骨神经长出的雪旺氏细胞增生;经S100免疫组化染色,阳性为雪旺细胞;阴性为成纤维细胞。结论:坐骨神经与腺样囊性癌细胞共培养可促进雪旺氏细胞增生。     

黄连素抑制人喉癌 Hep-2细胞增殖及机制研究

目的：探讨黄连素对人喉癌 Hep-2细胞增殖的抑制作用及其可能机制。方法体外培养 Hep-2细胞,使用不同浓度黄连素诱导不同时间,应用 MTT 法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术测定细胞周期及凋亡;实时荧光定量 PCR 和蛋白质免疫印迹（Western blot）法分别检测细胞周期蛋白 D（CyclinD）、B 细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关 X 蛋白（Bax）基因和蛋白表达水平。结果与0μmol/ L 黄连素对照组比较,2.5、5.0、10.0、20.0μmol/ L 黄连素作用 Hep-2细胞24、48 h,可明显抑制细胞增殖,且呈浓度时间依赖性（P ＜0.05）;2.5、5.0、10.0μmol/ L 黄连素作用 Hep-2细胞48 h,细胞早期凋亡率明显升高,呈浓度依赖性（P ＜0.05）;G0/ G1期细胞增多（P ＜0.05）,诱导细胞阻滞于 G0/ G1期;10μmol/ L 黄连素作用 Hep-2细胞48 h,Bax 基因和蛋白表达水平明显升高（P ＜0.05）,CyclinD、Bcl-2基因和蛋白表达水平明显下降（P ＜0.05）。结论黄连素能抑制喉癌细胞增殖,引起 G0/ G1期阻滞,并诱导其凋亡,其作用机制可能与 Bax 基因表达上调及 CyclinD、Bcl-2基因表达下调有关。     

红景天对肝癌细胞增殖的抑制作用

目的:研究红景天(Rhodiola)对体外培养肝癌QGY-7703的直接抑制作用及可能机制。方法:通过液体培养法、克隆形成法、3H-TdR掺入法与MTT比色法分别检测给药后肿瘤细胞的增殖情况、克隆形成率、DNA合成抑制率及生存率来探讨红景天的抑瘤效应。结果:与红景天共育24h的细胞伸展不良,胞体回缩,贴附型细胞不贴壁,胞质粗糙,有大量颗粒状物堆积,而且药物浓度越大,形态学改变越明显。给药组肿瘤细胞增殖缓慢甚至停滞,出现细胞脱落、胞浆内颗粒状物堆积等形态学改变,克隆形成数明显少于对照组,cpm和A值明显降低即3H-TdR掺入率减少,生存率下降。结论:红景天对体外培养肝癌细胞均具有直接杀伤作用。