食管癌中环氧化酶-2和人端粒酶逆转录酶mRNA的表达

目的 研究环氧化酶-2(COX-2)和人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA在食管癌组织中的表达及意义.方法 采用RT-PCR检测46例食管癌组织及其对应的癌旁食管组织(距离肿瘤至少5 cm)和65例正常食管黏膜组织中COX-2和hTERT mRNA的表达.结果 COX-2和hTERT mRNA在食管癌组织和癌旁组织中表达的阳性率明显高于正常食管黏膜组织(P<0.05),而在食管癌组织中表达的阳性率与癌旁组织差异无统计学意义(P>0.05);COX-2和hTERT mRNA在食管癌组织中的表达与患者年龄、分化程度、浸润程度、淋巴转移和临床分期无关(P>0.05),而两者表达具有关联性(P=0.015).结论 COX-2和hTERT mRNA在食管癌组织中的表达可能均是早期事件,联合检测这两个基因可能对食管癌的早期诊断及相关治疗具有重要的意义.     

COX-2mRNA在尖锐湿疣组织中的表达及其意义

目的研究尖锐湿疣组织中环氧化酶-2（Cyclooxygenase-2,COX-2）的表达及探讨其临床意义。方法采用荧光定量聚合酶链反应法测定25例尖锐湿疣患者组织和25例正常对照者皮肤COX-2mRNA的定量表达。结果尖锐湿疣患者组织和正常对照皮肤中均有COX-2mRNA的表达,但尖锐湿疣患者组织中COX-2mRNA的表达显著高于正常对照者皮肤内的表达水平（P〈0．01）。结论COX-2可能参与了尖锐湿疣的发病过程。     

COX-2在骨肉瘤中的表达及其临床意义

目的:检测37例骨肉瘤组织中COX-2的表达,分析其对骨肉瘤的临床诊断及预后的意义。方法:应用免疫组化方法对37例骨肉瘤组织中COX-2进行检测。结果:37例骨肉瘤组织中有32例COX-2表达阳性,其表达与骨肉瘤分期和有无转移相关(P<0.05),与肿瘤组织学类型无相关性。结论:COX-2与骨肉瘤的发生及预后存在一定的相关性,可为骨肉瘤的临床诊断和预后判断提供帮助。     

COX-2在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨环氧化酶2(COX2)的表达水平与胰腺癌生物学行为的关系及其对预后的意义。方法采用免疫组织化学方法(SP法)检测52例胰腺癌组织中COX2的表达,并对其与胰腺癌的临床病理特征的关系进行统计分析。结果在52例胰腺癌中,COX2的阳性表达率为76.9%;有淋巴结转移和Ⅲ～Ⅳ期患者的COX2的阳性表达率明显高于无淋巴结转移和Ⅰ～Ⅱ期患者;COX2高表达患者术后生存时间明显短于COX2低表达患者(P<0.01)。结论COX2的阳性表达与胰腺癌的发展和预后密切相关,可作为一种胰腺癌转移和预后分析的指标之一。     

COX-2在16例肺癌中的表达及其临床意义

目的:近期发现环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)在肺癌组织中有高表达,临床发现对该疾病的预后有重要影响。探讨环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2)在肺癌中的表达及其临床意义。方法:对标本中COX-2的表达进行检测,应用免疫组织化学方法和West-ern blot方法对16例肺癌组织标本中Cox-2的表达进行检测。结果:环氧化酶-2(COX-2)在肺癌中的阳性表达与癌症部分生物学特性有相关性(P<0.05)。研究表明Cox-2在肺癌组织中阳性表达率为47.9%(8/16),显著表达率为42%(7/16);Cox-2在肺腺癌组织中的显著表达率为72%(11/16),在肺鳞癌组织中的显著表达率为25%(4/16)。结论:Cox-2在肺癌组织中表达显著增高可能与肺癌的发生、发展有关。     

马钱子碱经皮给药对乳腺癌种植瘤中VEGF mRNA和COX-2mRNA表达的影响

目的探讨马钱子碱经皮给药对乳腺癌种植瘤的影响及可能机制,为乳腺癌的治疗提供新的途径。方法培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,取对数生长期细胞制成单细胞悬液。20只雌性Balb/c-nu/nu裸鼠麻醉后,无菌条件下,局部肌肉注射乳腺癌单细胞悬液0.2 ml,制备乳腺癌肿瘤模型。20只荷瘤裸鼠随机均分为4组:马钱子碱高剂量组(A组)、中剂量组(B组)、低剂量组(C组)和模型组(D组),分别经皮给予20%(0.2 mg/g)、10%(0.1 mg/g)、5%(0.05mg/g)浓度的马钱子碱膏和凡士林膏,涂抹裸鼠的整个腹部和造模的部位,每次1 g,每日4次(每次间隔3 h),连续15d。另设一个不做任何处理的正常组(E组)。观察各组裸鼠生存状态和肿瘤生长情况,评价相对肿瘤增殖率;检测肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和环氧化酶(COX-2)mRNA的表达。结果①肿瘤大小和相对肿瘤增殖率:A、B组裸鼠生存状态良好,肿瘤引起的活动障碍较轻,肿瘤生长均受到不同程度的抑制,肿瘤生长较C、D组迟缓,各组的相对肿瘤增殖率分别为A组38%(P<0.05)、B组52%、C组75%;而C、D组裸鼠出现活动障碍、瘫痪、消瘦和精神萎靡,肿瘤体积较大。②PCR检测VEGF和COX-2结果:A组分别为24.30±0.91和20.63±0.71,B组分别为23.10±0.72和20.39±0.76,C组分别为24.27±0.73和21.01±0.62,D组分别为23.09±0.76和21.04±0.65,E组分别为24.38±1.14和20.52±0.75。VEGF mRNA和COX-2 mRNA在肿瘤组织中的表达水平,A组与D组比较差异有统计学意义(P<0.05),B、C组与D组比较均有差别,但差异无统计学意义。结论马钱子碱经皮给药能抑制乳腺癌种植瘤中VEGF mRNA和COX-2 mRNA的表达。     

COX-2在卵巢上皮性癌中的表达及临床意义

目的 研究卵巢上皮性癌中环氧化酶-2（COX-2）的表达情况。方法采用免疫组化法用COX-2特异性抗体检测57例卵巢上皮性癌、20例卵巢良性上皮性肿瘤和10例正常卵巢组织中COX-2的表达。结果卵巢上皮性癌和卵巢良性上皮性肿瘤组织中有COX-2的免疫着色，而正常卵巢组织中未见一例着色。卵巢上皮性癌中COX-2（61.40％）的阳性表达率明显高于卵巢良性上皮性肿瘤和（25．0％）正常卵巢组织（P〈0．05），COX-2的表达与卵巢上皮性癌的临床分期、病理分级及腹水的多少无关（P〉0．05）。结论COX-2表达上调可能与卵巢上皮性癌的发生有关，COX-2蛋白能为卵巢癌的早期诊断提供依据。     

环氧化酶COX-2与肝癌关系的研究进展

环氧化酶（cyclooxygenase，COX-2）是花生四烯酸合成前列腺素（PG）的限速酶。哺乳动物中COX至少有两种同工酶。即COX-1和COX-2。COX-1在许多正常组织持续表达并维持正常生理功能，而ODX-2在大多数组织中不表达或低表达，可被生长因子、内毒素及肿瘤促进因子诱导产生。目前已证实，COX-2在肝癌、肺癌、胃癌、食管癌以及直肠癌等多种肿瘤组织的原发灶和转移灶中过表达，通过多种机理参与肿瘤的发生、发展和转移。     

阿司匹林对糖尿病大鼠肾脏COX-2表达的影响

目的探讨阿司匹林对糖尿病大鼠肾脏COX-2表达和病理的影响及其可能的作用机制。方法将24只SD大鼠随机分成3组,分别为正常对照(C)组、糖尿病(D)组[腹腔注射链酶佐菌素(STZ)60mg/kg]和糖尿病阿司匹林治疗(DT)组(先腹腔注射STZ 60mg/kg,第4天起给予0.9%氯化钠溶液溶解的阿司匹林1mg/kg.d灌胃)。8周后,观察3组肾脏组织在光镜、电镜下的病理表现,用免疫组化法和逆转录-聚合酶链式反应法观察COX-2的蛋白表达和COX-2mRNA的表达。结果 C组大鼠肾脏无明显病理变化;D组大鼠肾脏在光镜下可见细胞外基质增多,基底膜增厚,间质区可见炎性细胞浸润;DT组基质轻度增生,有少量炎性细胞浸润。在电镜下D组显示肾小球细胞基底膜不均匀,结构模糊,相邻足突大部分融合或缺失;DT组病理改变较D组减轻。D组大鼠COX-2蛋白表达较C组显著上调;DT组较D组显著下调。D组大鼠COX-2mRNA在肾脏的表达较C组显著上调(P<0.01),DT组较D组显著下调(P<0.01)。结论阿司匹林可以改善糖尿病大鼠肾脏的病理改变,其机制可能是通过抑制COX-2表达,改善由COX-2介导的病理改变。     

原位RT-PCR检测血管瘤组织Ang2 mRNA及其受体Tie2 mRNA的表达

目的:探讨Ang2及其受体Tie2与血管瘤发生、发展的关系.方法:采用原位RT-PCR方法,对临床收集的62例手术切除的先天性皮肤血管标本(其中增生期血管瘤26例,消退期血管瘤24例,静脉型血管畸形12例)进行Ang2 mRNA,Tie2 mRNA表达水平的检测.结果:增生期、消退期血管瘤及静脉型血管畸形均有Ang2 mRNA,Tie2 mRNA的阳性信号,但是三者阳性信号强弱有显著性差异(P﹤0.01),即静脉型血管畸形Ang2 mRNA,Tie2 mRNA的表达较不同生长时期血管瘤低,增生期血管瘤二者的表达高于消退期.结论:Ang2及其受体Tie2可能与血管瘤及静脉型血管畸形的发生、发展有关.     

RT-PCR检测外周血中CK19mRNA方法的优化

目的:探讨应用RT-PCR技术检测CK19 mRNA的优化方法.方法:采用RT PCR方法分别检测经病理确诊的胃癌组织及有明确肿瘤病灶的胃癌患者和健康对照者外周血中CK19 mRNA的表达.结果:通过设计多对引物进行对比及设立未经逆转录的RNA为模板的对照可观察到CK19假基因及基因组DNA的干扰现象.在合理设计错配引物的基础上选择合适的退火温度可消除干扰.结论:在运用RT-PCR法检测外周血中CK19 mRNA表达时常存在基因组及假基因等因素的干扰,通过本方法可有效地克服这种干扰作用.     

逆转录聚合酶链反应检测鼻息肉环氧合酶-2 mRNA表达

目的检测研究环氧合酶-2(cyclooxygenase-,COX-2)mRNA在鼻息肉组织中的表达水平,深入认识鼻息肉炎性发病机制.方法利用逆转录-聚合链反应(RT-PCR反应)检测35例鼻息肉组织及23例下鼻甲标本的环氧合酶-2的表达.结果鼻息肉组织中COX-2mRNA表达明显高于下鼻甲正常黏膜.结论 鼻息肉组织中COX-2表达明显增高,鼻息肉发病过程中有前列腺素参与.     

胸腔积液脱落细胞端粒酶逆转录酶mRNA检测及其意义

目的:通过检测良、恶性胸腔积液脱落细胞端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的表达情况,探讨其在良、恶性胸腔积液中的诊断价值。方法:采用逆转录-多聚酶链反应法检测39例恶性胸腔积液、16例良性胸腔积液中hTERT基因的表达情况。结果:恶性胸腔积液中hTERT基因的表达率明显高于良性胸腔积液(P<0.05)。检测hTERT基因表达对恶性胸腔积液的敏感性、特异性和诊断符合率分别为87.18%,81.25%和85.45%。结论:hTERT基因参与了恶性胸腔积液的发生、发展过程。采用RT-PCR法检测胸腔积液中hTERT基因表达有助于临床上良、恶性胸腔积液的鉴别诊断。     

大鼠前庭内侧核γ-氨基丁酸受体mRNA的表达

γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid, GABA)是前庭传入神经系统的抑制性神经递质,GABA的A受体或B受体的拮抗剂都能改变前庭神经元的放电[1],提示前庭神经核内存在着GABA的两种受体.然而,前庭中枢究竟存在着哪些GABA受体的亚基/亚型,目前少见报道.本研究旨在探明前庭核内GABA的受体亚基/亚型,以进一步明确其神经化学基础.     

人乳腺珠蛋白信使RNA聚合酶联反应检测乳腺癌前哨淋巴结微转移

目的应用RT-PCR法检测乳腺癌前哨淋巴结(sentinel lymph node,SLN)中乳腺珠蛋白基因(human mammaglobin,hMAM)mRNA的表达情况。探讨乳腺癌SLN定位及其微转移检测的临床意义。方法对51例乳腺癌患者采用术中肿瘤周围和乳晕下注射专利蓝的方法定位SLN,检测SLN中hMAM mR-NA的表达情况。结果SLN定位成功率为76.47%(39/51);RT-PCR检测hMAM mRNA与常规病理检查方法相比,检测SLN转移的阳性率提高了20.51%,二者差异具有显著性(P<0.05)。结论hMAM mR-NA可作为标志物来检测乳腺癌SLN中的微转移情况,通过SLN定位和RT-PCR的联合应用,可明显提高乳腺癌SLN微转移的检出率,对预测腋窝淋巴结(axillary lymph node,ALN)的状态有着重要的临床价值。     

实时荧光PCR和普通PCR方法检测病原微生物的灵敏度比较

目的通过比较两种PCR检测的灵敏度,选择不同条件下经济准确的方法检测病原微生物。方法制备标准样品用以两种PCR扩增条件的确定,通过目的基因片段设计引物,扩增菌体裂解液上清。PCR产物分别通过扩增曲线和琼脂糖电泳检测目的条带的存在,以最低检测的条带浓度作为两种不同PCR检测的最高灵敏度,通过比较,选择在不同的限制条件下较为方便经济的方法检测病原微生物。结果实时PCR中裂解菌液上清经过10-8倍稀释后仍能观测到扩增曲线的存在。而普通PCR产物经过琼脂糖电泳染色后观测只能观测到10-5浓度的条带,灵敏度远不及RT-PCR。结论荧光PCR检测灵敏度较高,普通PCR琼脂糖电泳方法只能达到RT-PCR检测灵敏度的一半但比较经济。     

TaqMan real-time fluorescent quantitative RT-PCR in detection of macrophage in-flammatory protein-2γ mRNA in myocarditis murine

Objective: To study the role of macrophage inflammatory protein (MIP)-2γ in myocarditis pathogenesis in BALB/c mice. Methods: The relationship, between the progression of Coxsarckie virus B3 ( CVB3 ) viral myocarditis and experimental autoimmune myocarditis and MIP-2γ mRNA expression in mouse was studied by TaqMan real-timefluorescent quantitative RT-PCR. Results: MIP-2γ mRNA expression rose on 3 to 5 d after CVB3 infection, reachedpeak on 7 d, and returned to normal level until 14 d, which corresponded well with the disease course. The MIP-2γ/mRNA expression level rose significantly on the day 18 d after immunization with porcine cardiac myosin, which wasconsistent with pathological examination. Conclusion: MIP-2γ/may be involved in the pathogenesis of myocarditis.     

短片段一步法RT-PCR方法的建立

0　引言　传统 RT- PCR方法需要用反转录酶将 RNA先反转录成 c DNA,然后用 Taq酶对 c DNA进行 PCR扩增 ,而且往往需要巢式 PCR扩增才能提高结果的特异性和灵敏度 ,操作比较麻烦 .有人发现 Taq DNA聚合酶有一定的反转录活性 [1 ] ,可以实现只用 Taq DNA聚合酶进行反转录的单反应管一步法 RT- PCR扩增 .但是我们在实验过程中发现 ,利用Taq DNA聚合酶进行一步法 RT- PCR反应成功率往往不高 ,这可能是因为 Taq DNA聚合酶的反转录活性不高的原因造成的 .为此 ,我们重新设计了实验方法 ,以提高用 Taq DNA聚合酶进行 RT- PC…     

集合HIV-1 RNA RT-PCR方法在男男性行为人群艾滋病窗口期检测中的应用

目的:检出男男性行为人群中的艾滋病病毒(HIV)窗口期感染者并初步估计发病率?方法:采用20∶1?5∶1?1∶1三级集合HIV-1 RNA RT-PCR方法进行试验?结果:检测948份男男性行为人群HIV抗体阴性血浆,发现HIV-1 RNA阳性4例,追踪随访,HIV-1抗体阳转;初步估计HIV-1年发病率约为5.55%(95%CI,3.50%~7.59%)?结论:集合HIV-1 RNA RT-PCR方法具有良好的实验效果,可以用于HIV高危人群窗口期感染者的检测?