无机砷对人皮肤成纤维细胞增殖毒性的实验观察

目的观察亚砷酸钠诱导体外培养的人皮肤成纤维细胞的作用，探讨砷性皮肤损伤的分子机制。方法通过直接细胞计数法和噻唑蓝（MTT）还原法检测亚砷酸钠对皮肤成纤维细胞生长的影响。结果与对照组比较，皮肤成纤维细胞经不同剂量的亚砷酸钠诱导后，吸光度值均有改变，存在剂量效应关系（P〈0.01）。0．5～5．0μmol／L浓度的亚砷酸钠对皮肤成纤维细胞有明显的增殖作用，而10μmol／L浓度的亚砷酸钠产生明显的毒性作用。结论低浓度NaAsO2、NaAsO2刺激人皮肤成纤维细胞增殖，高浓度具有细胞毒性。     

芥子气诱导人皮肤成纤维细胞氧化应激的研究

目的研究芥子气对人皮肤真皮成纤维细胞的毒性作用,探讨氧化损伤在芥子气所致细胞毒性中的作用。方法采用胰酶消化法分离人皮肤真皮层成纤维细胞;采用CCK-8法检测芥子气对成纤维细胞增殖抑制的影响;采用DCFH-DA荧光染色法检测芥子气对细胞内ROS的影响;采用Annexin-PI双染法检测细胞凋亡。结果不同浓度芥子气作用于成纤维细胞24 h,对细胞的增殖具有明显抑制作用(P0.05),并呈明显的剂量依赖性,其半数抑制浓度(IC50)为315μmol/L;随着芥子气染毒剂量的增加,细胞内ROS呈剂量依赖性增加;芥子气导致成纤维细胞发生凋亡,并呈明显剂量依赖性;细胞在芥子气和ROS清除剂的双重作用下存活率显著高于芥子气组。结论芥子气对皮肤成纤维细胞具有明显的细胞毒性作用,可导致ROS的产生,活性氧清除剂NAC可在一定程度上减轻芥子气对细胞的毒性作用。     

芦荟大黄素对神经细胞PC12缺氧损伤模型保护作用的研究

目的探讨中药芦荟大黄素的细胞保护作用。方法通过建立PC12细胞缺氧缺血模型,对芦荟大黄素的保护作用进行研究。结果芦荟大黄素200μg·m L~(-1)及50μg·m L~(-1)浓度组的细胞重排率显著低于各模型组,芦荟大黄素组(浓度为200μg·m L~(-1)、50μg·m L~(-1)及10μg·m L~(-1))胞内钙离子浓度显著低于各模型组。结论芦荟大黄素对缺氧缺血造成的PC12细胞具有保护作用。     

碘对成纤维细胞细胞周期及凋亡的影响

目的研究不同浓度碘对成纤维细胞(HSF)增殖及凋亡的影响。方法使用碘离子(终浓度为0～10000μg/L)染毒1×104个/ml的成纤维细胞悬液。于4、12、24、48h后测定细胞增殖活性;于24、48h后测定细胞周期及凋亡,计算细胞增殖指数和细胞凋亡率。结果染毒24h,碘离子浓度≤7000μg/L时具有促进成纤维细胞增殖和抑制细胞凋亡的作用;碘离子浓度7000μg/L时可抑制成纤维细胞的增殖活性和促进成纤维细胞凋亡。染毒48h,碘离子浓度≤3000μg/L具有促进成纤维细胞增殖和抑制细胞凋亡的作用;碘离子浓度≥7000μg/L可抑制成纤维细胞的增殖活性和促进成纤维细胞凋亡。结论碘对成纤维细胞的细胞增殖和凋亡具有双向效应。     

尼古丁对PDLFs细胞NF-κB和p53表达的影响

目的 探讨尼古丁诱导人牙周膜成纤维细胞(PDLFs)凋亡的信号转导机制.方法 用不同浓度的尼古丁作用PDLFs细胞24 h后,测定NF-κB、p53、I-κB和Caspase3的基因表达水平.结果 尼古丁作用于PDLFs细胞24 h后,p53表达水平明显上调,而NF-κB表达水平明显下调,I-κB和Caspase3蛋白...     

类花生酸类物质在系统性硬皮病发病机制中的作用

系统性硬皮病（systemic scleroderma,SSc）是以弥漫性皮肤及内脏器官结缔组织纤维化或硬化,最后发生萎缩为特点的结缔组织疾病。本病呈进行性发展,可严重影响患者的身体健康和生活质量,如重要脏器受累则可导致患者死亡。其主要病理改变为成纤维细胞异常活化,     

无机砷对人皮肤成纤维细胞DNA的损伤特征

目的：探讨无机砷对人皮肤成纤维细胞DNA的损伤特征。方法：使用原代培养人皮肤成纤维细胞,应用单细胞凝胶电泳法（Single cell gel electrophoresis assay,SCGE)观察砷酸钠和亚砷酸钠对人皮肤成纤维细胞DNA的损伤特征。结果：1－10μmol/L的砷酸钠染毒24h可诱发人皮肤成纤维细胞的DNA损伤,且具有剂量－效应关系。低浓度时以I级DNA链断裂为主。当浓度增加到10μmol/L时,Ⅱ级DNA链断裂比例达50％,但未出现Ⅲ级DNA链断裂。1μmol/L的亚砷酸钠染毒24h对人皮肤成纤维细胞DNA的损伤不明显。10μmol/L的亚砷酸钠可引起人皮肤成纤维细胞DNA的损伤,I,Ⅱ,Ⅲ级DNA链断裂均有出现,且有较多的凋亡型DNA链断裂。结论：砷酸钠主要引起一般型DNA损伤,而亚砷酸钠除引起一般型DNA链断裂外,还可引起凋亡型DNA链断裂。砷酸钠和亚砷酸钠对DNA损伤的不同特征可能是由于它们与DNA作用的方式不同所致。     

异搏定对增殖瘢痕成纤维细胞凋亡及细胞信号传导作用

目的 目的 探讨异搏定对瘢痕疙瘩和增生性瘢痕成纤维细胞凋亡及相关的细胞信号传导通路的影响,并与类同醇的作用进行比较.方法 对6例瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及6例皮肤标本进行细胞培养,对不同成纤维细胞在不同异搏定浓度的培养基中的生长情况进行观察.采用免疫组织化学、凝胶电泳及FACE ELISA方法,通过检测Bax和Bcl-2蛋...     

四种中药单体对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体外抗菌作用研究

目的研究4种中药单体对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的抗菌作用。方法采用微量肉汤稀释法测定苯唑西林对MRSA的最低抑菌浓度(MIC),应用PBP2'胶乳凝集试剂盒对MRSA所产的PBP2'蛋白进行鉴定。采用微量肉汤稀释法测定4种中药单体(包括芦荟大黄素、大黄酚、黄芩素、大黄酸)对MRSA的MIC。结果经鉴定,16株实验菌株均为MRSA。其中芦荟大黄素的抗MRSA作用最强,MIC值在2～8μg/ml,其次为大黄酸,而黄芩素和大黄酸抗MRSA的作用较弱。结论芦荟大黄素对MRSA的抗菌作用最强,且其在体内的口服生物利用度较高,因此有望成为抗MRSA的候选药物。     

香烟烟气提取物对原代皮肤成纤维细胞生长与凋亡的影响

[目的 ]探讨香烟烟气提取物 (Cigarettesmokeextract ,CSE)对原代皮肤成纤维细胞生长周期动力学和凋亡的影响。 [方法 ]采用噻唑盐 (MTT)吞噬试验、乳酸脱氢酶 (LDH)释放及流式细胞仪等技术研究 0 2 %～ 10 %的CSE对成纤维细胞生长、毒性及细胞周期动力学和凋亡发生率的影响。 [结果 ]CSE抑制细胞生长 ,LDH释放增加 ,并具有剂量反应关系。细胞周期动力学 ,表现为G2 /M期细胞数增加 (近 4倍 ) ;S期细胞数从 15 7%减少到 8 5 %。同时凋亡发生率由2 1%增至 2 3 0 %。 [结论 ]CSE抑制皮肤成纤维细胞生长 ,促进凋亡发生 ,G2 /M期生长阻滞可能是CSE作用皮肤细胞的主要环节。     

脂多糖对人正常皮肤成纤维细胞增殖周期及Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达的影响

目的观察大肠杆菌脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）刺激后,皮肤成纤维细胞增殖周期和Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达变化规律。方法体外培养正常人皮肤成纤维细胞,加入不同浓度（0．005～1．0μg／m1）的大肠杆菌LPS（Ecoli055：B5）,于LPS加入后第7天细胞处于对数生长期时,采用流式细胞术观察细胞增殖周期;用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法测定成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA及胶原酶mRNA的表达。结果LPS刺激浓度在0．005～0．1μg／ml时,S期细胞比例随着刺激浓度增加而增高,且呈浓度依赖性;当LPS浓度为0．5μg／ml时,上述作用开始降低,但仍高于空白对照;当浓度达到1．0μg／ml时,s期细胞比例均低于空白对照;LPS刺激浓度在0．005～0．1μg／ml时,促进正常皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达,抑制胶原酶mRNA表达,且呈一定的剂量依赖性;当LPS刺激浓度为0．5μg／ml,上述作用下降;而当LPS刺激浓度到达1．0μg/ml时,抑制正常皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达,促进胶原酶mRNA表达。结论在一定浓度范围内LPS促进皮肤成纤维细胞增殖和胶原合成,而过高浓度LPS则呈现抑制效应。     

脂多糖对人皮肤成纤维细胞胶原代谢的影响

目的探讨脂多糖（1ipopolysaccharide,LPS）对人皮肤成纤维细胞胶原代谢的影响,以了解LPS在增生性瘢痕形成中的生物学作用。方法取正常皮肤行成纤维细胞培养后,分为1个对照组及6个实验组。实验组分别与终浓度为0．005、0．010、0．050、0．100、0．500和1．000μg／ml大肠杆菌LPS（Ecoli055：B5）培养,对照组DMEM培养。用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法测定成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA及胶原酶mRNA的表达,并以同一个体相同代数的瘢痕组织成纤维细胞做对照。结果与对照组比较,LPS刺激浓度在0．005-0．1μg／ml时,促进正常皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达（0．323±0．041,0．303±0．063,0．391±0．071,0．344±0．086,0．488±0．059,0．401±0．087,0．616±0．107,0．434±0．084,0．823±0．092,0．542±0．082）,抑制胶原酶mR-NA表达（0．598±0．068,0．556±0．049,0．441±0．043,0．372±0．083,0．260±0．027）,且呈一定的剂量依赖性;当LPS刺激浓度为0．5μ／ml,上述作用下降（0．451±0．063,0．374±0．072,0．360±0．062）;而当LPS刺激浓度到达1．0μg/ml时,抑制正常皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达（0．162±0．025,0．171±0．061）,促进胶原酶mRNA表达（0．444±0．114）。LPS刺激浓度在0．1μg／ml时,成纤维细胞（0．823±0．092,0．542±0．082,0．260±0．027）Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原酶mRNA表达与同一个体增生性瘢痕组织成纤维细胞（0．829±0．049,0．569±0．038,0．277±0．059）近似。结论LPS对人皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA和胶原酶mRNA的表达,其直接调节可能是参与增生性瘢痕形成的重要机制。     

17-β雌二醇对受力后盆底功能障碍性疾病患者阴道壁成纤维细胞的生物学影响

目的研究雌激素对体外培养的盆底功能障碍性疾病（pelvicfloordysfunction,PFD）患者阴道壁成纤维细胞受力后胶原蛋白I（ColI）、类赖氨酰氧化酶1（LOXLl）和纤维粘连蛋白（FN）表达的影响,探讨其在PFD发病中的作用。方法选取2009年10月至2010年9月河北医科大学第二医院接受手术治疗的女性PFD患者的阴道壁组织12例。采用组织块法和酶消化法进行阴道壁成纤维细胞的原代培养,传代后进行细胞受力,加药,提取细胞mRNA,测定ColI、LOXLl及FN的表达水平。结果受力前、后ColI（1．1872±0．0733VS1．5035±0．0733,t=-4．815,P〈0．01）、LOXLl（0．7724±0．1873VS1．0855-I-0．0805,t=-5．111,P〈0．01）表达上升,其2,!异有统计学意义。FN（0．4290±0．1168VS0．4215±0．0830）的表达比较差异无统计学意义（P〉0．05）。高浓度的17-β雌二醇作用下,ColI（3．0809±0．1862）、LOXL1（1．5863±0．3241）、FN（1．1418±1．0030）的表达均上升,与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论17-B雌二醇使受力后的PFD患者阴道壁成纤维细胞合成细胞外基质（Extracellularmatrix,ECM）成分增加。力和雌激素在PFD的发病机制中可能起了比较重要的作用。     

机械力对骶韧带成纤维细胞细胞外基质mRNA表达的调节

目的观察机械力在盆底功能障碍性疾病中的作用,探讨机械力对子宫骶韧带成纤维细胞形态及细胞外基质mRNA表达的调节。方法选择本院因非POP行子宫切除手术患者的骶韧带,进行成纤维细胞的原代培养,并进行鉴定。选取13例3—4代的骶韧带成纤维细胞加载、加力,采用荧光实时定量PCR测量机械力对I、III型胶原、基质金属蛋白酶-1（matrixmetalloproteinase-1,MMP-1）、基质金属蛋白酶抑制剂（tissueinhibitorofmetalloproteinase-1,TIMP-1）mRNA表达量的调节。结果以静态不加力组（Oh）为对照组,应力刺激下,细胞的形态和伸展方向发生改变;加载力4、15hI型胶原mRNA表达量（0．7774-0．251,0．730±0．248）较0h（1．000±0．284）下降（q=4．5786,4．6458,P〈0．05）,24hmRNA表达量（1．102±0．308）回升,与0h差异无统计学意义（P〉0．05）。IⅡ型胶原mRNA4、15、24h表达量（4．771±0．879,6．146±1．109,5．022±0．907）较0h（1．001±0．284）升高（q=15．9481,21．7647,17．0099,P〈0．01）。MMP-1mRNA4h、15h、24h表达量（6．420±2．143,23．695±2．221,20．169±2．794）较0h（1．000±0．414）升高（q=9．3421,39．1178,33．0403,P〈0．01）。TIMP-14、15hmRNA表达量（0．455±0．370,0．481±0．386）较0h（1．000±0．425）下降（q=6．5265,6．3106,P〈0．05）,24hmRNA表达量（0．883±0．536）回升,与0h差异无统计学意义（P〉0．05）。结论子宫骶韧带成纤维细胞的形态、伸展方向及合成功能受机械力的调节,盆底基质重塑可能是对机械力的适应性改变。     

AcSDKP经由PDGF介导的细胞外信号调节激酶1/2的调节通路在大鼠矽肺纤维化形成中的作用

探讨抗纤维化短肽N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)经由血小板源性生长因子(PDGF)介导的细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的调节通路在矽肺纤维化形成中的作用。采用一次性支气管内灌注二氧化硅(SiO2)粉尘制作矽肺大鼠模型,将其分为对照组(4周组和8周组)、矽肺模型组(4周和8周组)、AcSDKP治疗组(抗纤维化治疗组和预防治疗组)。采用贴块法进行肺成纤维细胞的原代和传代培养。HE染色观察肺组织形态学变化,Western blot法检测肺组织、肺成纤维组织Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白和ERK1/2及磷酸化-ERK1/2蛋白的表达以及肺组织PDGF及其受体蛋白的表达。与对照比较,矽肺大鼠肺内PDGF及其受体蛋白、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白以及磷酸化-ERK1/2蛋白表达均增强,而AcSDKP治疗组则见上述蛋白表达减弱;在培养的肺成纤维细胞,PDGF能够刺激其Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达增加,同时上调磷酸化-ERK1/2蛋白的表达,而AcSDKP则显示出与PD98059(细胞外信号调节激酶通路特异性抑制剂)相同的作用,即能够抑制PDGF刺激成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达和上调磷酸化-ERK1/2蛋白表达...     

缬沙坦对博莱霉素所致大鼠肺纤维化的干预研究

目的观察AT1受体拮抗剂缬沙坦对博莱霉素A5（BLMA5）所致大鼠肺纤维化模型形成过程的影响。方法54只SD雄性大鼠随机分为正常对照组（C组）、模型对照组（B组）和缬沙坦治疗组（T组）3组，18只／组。T组于大鼠气管内滴注0．5％BLMA5生理盐水溶液（5mg／kg）以复制肺纤维化动物模型，并于造模当天每日给予缬沙坦（20mg／kg）灌胃；B组以生理盐水代替缬沙坦灌胃；C组则均用生理盐水代替BLMA5和缬沙坦。各组动物均于制模开始后的第7、第14、第28天分别随机处死6只动物，分取肺组织行病理切片HE染色和Masson染色于光镜下观察大鼠早期肺泡炎程度以及晚期肺纤维化程度、碱水解法检测肺组织羟脯氨酸（Hyp）浓度、免疫组化技术检测肺组织平滑肌肌动蛋白（α—SMA）和转化生长因子TGF—β1水平。结果（1）肺组织Hyp含量：制模第7天3组动物间比较差异均无统计学意义（P〉0．05）；第14天和第28天，B组肺组织Hyp含量较C组明显升高（P〈0．01），T组较B组Hyp含量明显下降（P〈0．01）。（2）早期肺泡炎程度：HE染色可见B组在第7天时急性肺损伤、肺泡炎程度最为明显，可见肺泡间隔和肺泡腔内有大量炎性细胞浸润，肺泡隔增宽，其后炎症渐有减轻，但第14天和第28天时炎症仍较C组明显（P〈0．01）；T组在第7、第14天和第28天肺泡炎程度均较B组明显减轻（P〈0．05）。（3）晚期肺纤维化程度：Masson染色在第7天3组动物间肺纤维化程度差异无统计学意义，第14、第28天时B组可见胸膜下、大气道及血管壁周围的基质胶原明显及纤维组织增多，较C组差异有统计学意义（P〈0．01），T组较B组肺纤维化程度明显减轻（P〈0.05）。（4）肺组织TGF—β1蛋白表达水平：B组第7天时肺组织内TGF-β1表达水平最强，以后逐渐减低，但与C组比较仍显著升高（P〈0．01）；T组TGF—     

长波紫外线对人皮肤成纤维细胞生长的影响

[目的 ]　观察长波紫外线 (UVA)对人皮肤成纤维细胞生长的影响 ,探讨皮肤光老化机制。　 [方法 ]　将原代培养的人皮肤成纤维细胞经UVA照射后 ,采用细胞成像、四唑盐比色实验 (MTT)、乳酸脱氢酶 (LDH)检测UVA对皮肤细胞的损伤。　 [结果 ]　随UVA照射剂量增加 ,成纤维细胞由正常细长梭状逐渐变圆、皱缩 ;UVA照射剂量为 9J/cm2 时 ,LDH从 ( 5 6.82± 4.78)U /dl上升至 ( 12 0 .40± 7.16U ) /dl;UVA照射剂量为 45J/cm2 时 ,成纤维细胞抑制率达到67.12 %。　 [结论 ]　UVA可损伤原代培养的人皮肤成纤维细胞     

Some properties of fibroblasts from a patient with debrancher deficiency

Glycogenosis Type III is characterized by a deficiency of debranching enzyme (amylo-1,6-glucosidase, E.C. 3. 2. 1. 33) in most tissues. Low activity of liberating glucose from limited dextrin in the biopsied muscle can be demonstrated in a patient with this disease. We cultured fibroblasts from a skin biopsy from a patient with debrancher deficiency and examined the metabolism of glycogen in these cultured fibroblasts. Debrancher activity in the post-mitochondrial supernatant obtained from these fibroblasts showed a good concentration dependent manner but had approximately half of that from normal human fibroblasts (YH-1). Although the enzymatic activity of debrancher in the cultured fibroblasts from the skin was reduced essentially to the same levels as observed in muscle biopsy, little glycogen granules were accumulated in the cytoplasm of these fibroblasts as revealed by either light- or electron-microscopic observation. The fibroblasts obtained in the present study may be useful for the analysis of molecular mechanism of the debrancher deficiency disease, glycogenosis Type III.     

尼古丁对牙周膜成纤维细胞线粒体信号通路的影响

目的探讨尼古丁诱导的牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts,PDLFs)凋亡的信号转导机制。方法本研究用0.001、0.01和0.1 g/L不同浓度的尼古丁干预PDLFs细胞24 h后,采用激光扫描共聚焦显微镜检测尼古丁实验组干预PDLFs细胞后Ca2+水平的变化,运用RT-PCR方法检测Bcl-2、BAX和Caspase3转录水平的表达变化,用Western blot检测Caspase3翻译水平的表达变化。结果尼古丁作用于PDLFs细胞24 h后,细胞内Ca2+水平随着尼古丁剂量而逐渐增加;Bcl-2表达下调,而BAX表达上调;Caspase3转录和翻译增加。结论尼古丁与PDLFs细胞结合后,启动了促凋亡程序,发生细胞凋亡事件,这可能是吸烟人群牙周病高发的分子机制之一。