HCG特异的10株单克隆抗体的研制

用杂交瘤技术获得１０株ＨＣＧ特异的单克隆抗体（简称单抗）。其中，２６ＡＧ只与全ＨＣＧ反应而不与ＨＣＧ－α或ＨＣＧ－β反应，其余９株与全ＨＣＧ和ＨＣＧ－β反应而不与ＨＣＧ－α反应。放射免疫试验（ＲＩＡ）表明这１０株单抗与ＬＨ及ＦＳＨ无显的交叉反应。３０ＡＧ及３４ＡＧ与＾１２５Ｉ－ＨＣＧ的结合可被标准ＨＣＧ抑制，这两株单抗与ＨＣＧ的亲和力均约２×１０＾９Ｌ／Ｍ。１０株单抗均而反复６次冻融，除３３ＡＧ     

抗HCG单克隆抗体细胞系的建立及应用

以注射用HCG免疫BALb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经4次克隆化筛选,建立分泌抗HCG单克隆抗体的杂交瘤株,命名为IC_(12),经鉴定,单克隆抗体(mcAb)属于鼠IgG_1亚类。效价为ELISA法1:64000,胶乳凝集法1:512。化学交联HCG、MCAb聚苯乙烯胶乳,直接凝集试验(抗原对抗体),检测100例早孕尿液,阳性率100％,与市售常规妊娠胶乳试验相比已显示出非凡的特异性。     

抗肺癌单克隆抗体的研制

采用新鲜肺癌组织制成的细胞悬液及肺腺癌细胞株做为免疫原,免疫Balb/c小鼠。取脾细胞与经活体增殖的无支原体污染的高活力SP2/O骨髓瘤细胞融合,联合应用酶联免疫吸附和多组织切片免疫组化染色法进行筛选,得到两株分泌对肺癌具高特异性的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。抗体与被检测的大多数人体正常组织无交叉反应,可初步用于肺癌病理鉴别诊断。     

鼠痘病毒单克隆抗体杂交瘤细胞的建株及初步鉴定

目的：制备1株分泌高效价抗新分离的鼠疫病毒单克隆抗体的杂交细胞，提高早期检测病毒的敏感性。方法：从可疑病鼠分离出的1株鼠痘病毒，并以此株制备抗鼠痘病毒为抗原，免疫BALB／C小鼠，取脾细胞与SP2／0骨瘤细胞融合，获1株稳定分泌抗鼠痘病毒（EV）单克隆抗体的杂交瘤细胞株（NB－4）。结果：经初步鉴定证明，NB－4免疫球蛋白为IgG，针对的靶抗原分子质量为67ku，并对184份小鼠血清鼠痘病毒抗原进行检测，结论：NB－4有可能成为检测鼠痘病毒抗原较敏感的工具。     

流行性出血热病毒单克隆抗体的研制

采用流行性出血热病毒（ＥＨＦＶ）免疫Ｂａｌｅ／Ｃ小鼠得到的脾细胞与ｓｐ２／０骨髓瘤细胞融合，获得分泌抗ＥＨＦＶ的单克隆抗体的杂交瘤细胞，其ＭｃＡｂ亚型为ＩｇＧ２ｂ杂交瘤细胞产生腹水效价为１：６４００，经６个用连续传代培养及液氮冻存６个月后复苏，产生抗体均稳定。     

抗破伤风类毒素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其中和效…

采用破伤风类毒素(TT)免疫BALB／C小鼠脾细胞与SP2／O小鼠骨髓瘤细胞在聚乙二醇(PEG)WM4000作用下进行配合，克隆化，通过ELISA法及毒素中和新价的检测获得两株(5G8，6D9)及多株亚抹(5G8A10，5G8B9C11，5G8B9E1等)有保护作用的细胞株，其中一株经过液氮冻存．复苏仍能正常分泌抗体。     

抗—BudR单克隆抗体制备及特性鉴定

用碘化还原法将溴脱氧尿嘧啶(BudR)与牛r—球蛋白(BGG)偶联作为抗原(BudR—BGG)免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(653)进行融合,经放射免疫分析法(RIA)筛选和克隆化后,获得四株阳性杂交瘤Ⅱ_1B_7、Ⅱ_4B_4、Ⅰ_3F_(11)和Ⅱ_1H_7。杂交瘤细胞分别腹腔注射BALB/c小鼠,其中三株(Ⅱ_1B_7、Ⅱ_4B_4和Ⅱ_1H_7)获得腹水,纯化抗体并对其特性进行鉴定,三株单抗均可与BudR、IudR反应,而不与CdR、TdR及FudR反应,具有较高的特异性。     

抗人A型红细胞单克隆抗体的研究及其初步应用

在用人A型红细胞悬液免疫的Balb/c小鼠脾细胞与同系小鼠的骨髓瘤细胞进行融合屡遭失败的情况下,改用实体瘤分离出的骨髓瘤细胞进行融合,终获成功。融合后筛选出分泌盐水凝集抗体的杂交瘤细胞株,即为:3B_2、3H_2、8C_3细胞株。3株抗人A型红细胞单克隆抗体3B_2、3H_2、8C_3血清学检验和应用结果表明:3株单抗均可作为血型诊断试剂,可用以取代人源标准血清。     

抗黑色素瘤单克隆抗体的制备

本文用鼠骨髓细胞系NS_1与用黑色素瘤细胞系Cal_1,Cal_(32),Cal_(52),免疫的鼠脾细胞融合制备抗黑色素瘤单克隆抗体。通过使用淋巴细胞分离液MSL和在脾被膜上扎孔,用注射器注入GKN溶液使脾细胞冲出的方法制取脾细胞,使杂交瘤细胞融合率明显提高,并获两株分泌抗黑色素瘤单克隆抗体IgG_1的SM_(167)和SM_(230)细胞株。     

抗人IgG单克隆抗体制备和鉴定

以人ＩｇＧ为抗原，采用杂交瘤技术获得６株不同性质的抗人ＩｇＧ单克隆抗体（ＭｃＡｂ）（ＡＩ２、ＡＩ３、ＡＩ４、ＡＩ５、ＡＩ６、和ＡＩ）。ＡＩ２ＭｃＡｂ具有抗ＩｇＧ１亚类的特异性，可识别ＩｇＧγ链和Ｆ（ａｂ＇）２片段，作用位点可能在人ＩｇＧ１铰链区。ＡＩ３ＡＩ、ＭｃＡｂ分别为ＩｇＧ３、ＩｇＧ４亚类限制性ＭｃＡｂ，可能作用于ＩｇＧＣＨ１区。ＡＩ４ＭｃＡｂ可识别χ和λ型ＩｇＧ四个亚类以及Ｆ（ａｂ＇）２片段，不识别游离χ、λ链。ＡＩ５ＭｃＡｂ特异地抗ＩｇＧ１结合型χ，作用于ＩｇＧ独特型位点。ＡＩ６ＭｃＡｂ只抗λ型ＩｇＧ，可能作用于ＩｇＧＣＬ区。６种抗人ＩｇＧＭｃＡｂ除了ＡＩ５外，均能用于人血清中ＩｇＧ的检测。     

抗人Hb单克隆抗体的制备与鉴定

用超声波快速乳化人Ｈｂ，作为抗原免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞经离心ＰＥＧ法融合，微波ＥＬＩＳＡ筛选阳性克隆，获得三株分泌针对人Ｈｂ不同抗原位点的单克隆抗体杂交瘤细胞系。分别命名为Ｈｂ２６４、Ｈｂ２１０和Ｈｂ２３８。其中Ｈｂ２６４能特异识别人Ｈｂ的β链而不与动物Ｈｂ交叉反应；解离常数Ｋｂ为１．６×１０￣（－８）ｍｏｌ／Ｌ，ＩｇＧ＿（２ａ）。Ｈｂ２１０能结合人Ｈｂ的α链，可被猪Ｈｂ抑制，但亲合力低１００倍；Ｋｄ（人Ｈｂ）为２．８×１０￣（－８）ｍｏｌ／Ｌ；Ｋｄ（猪Ｈｂ）为３．０×１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ；ＩｇＧ＿（２ｂ）。Ｈｂ２３８是两个脾细胞与一个Ｓｐ２／０细胞融合而成的三体瘤（ｔｒｉｏｍａ）；染色体１３２条；Ｈｂ２３８单克隆抗体可同人Ｈｂ的α和β链结合，Ｋｄ（人Ｈｂ）为８．９×１０￣（－５）ｍｏｌ／Ｌ；ＩｇＧ＿（２ａ）；经分析鉴定，Ｈｂ２３８是针对人Ｈｂα和β链的双特异性抗体。本方法对免疫学隐血检测、法医学鉴定和双特异抗体的研制有一定意义。     

抗人心肌肌凝蛋白轻链Ⅰ单克隆抗体的制备和鉴定

以人心肌肌凝蛋白轻链I免疫Balb/c小鼠,取其脾淋巴细胞与NS-1细胞融合,经过筛选、克隆化和再克隆已获得3-D_3、2-D_9、1-E_(10)和2-E_(10)等4个分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经免疫酶标和放免方法测定抗体工作滴度为1:1万。流动式荧光密度计检测NS-1、小鼠脾和杂交瘤细胞DNA的含量,结果表明杂交瘤细胞的DNA含量相当于NS-1和小鼠脾细胞DNA含量之和。杂文瘤细胞传代半年以上稳定地分泌特异性的单克隆抗体。用两个单抗进行了抗原双决定簇的放免測定,并制备了高效价的小鼠腹水。     

抗间日疟原虫红内期单克隆抗体的研制和鉴定

用Ｐｅｒｃｏｌｌ密度梯度离心法从志愿者血液中分离出感染间日疟原虫的红细胞。以此作为免疫原，免疫Ｂａｌｂ／ｄ小鼠，获得５株杂交瘤细胞系。融合率平均为４５％，抗体阳性率为０．６６％。用ＩＦＡｆｏＩＰＡ染色进行免疫组化分析，４Ｂ２和８Ｅ３分泌的单克隆抗体呈较强的阳性反应，与约氏疟原虫红内期无交叉反应。     

抗破伤风类毒素单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其中和效应的研究

采用破伤风类毒素（ＴＴ）免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞与ＳＰ２／Ｏ小鼠骨髓瘤细胞在聚乙二醇（ＰＥＧ）ＷＭ４０００作用下进行配合，克隆化，通过ＥＬＩＳＡ法及毒素中和新价的检测获得两株（５Ｇ８，６Ｄ９）及多株亚株（５Ｇ８Ａ１０，５Ｇ８Ｂ９Ｃ１１，５Ｇ８Ｂ９Ｅ１等）有保护作用的细胞株，其中一株经过液氯冻存，复苏仍能正常分泌抗体。     

抗人精子单克隆抗体的制备及特性研究

用杂交瘤技术制备了两株分泌抗人精子单克隆抗体的细胞株，经酶联免疫吸附试验证明两株细胞株所分泌的单克隆抗体均能与人精子产生特异反应，并有明显的精子凝集和制动作用     

抗HIV-2 gp36基因工程抗原单克隆抗体的制备和鉴定

目的 制备稳定产抗人类免疫缺陷病毒-2gp36基因工程抗原单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb,单抗)的杂交瘤细胞株及相应单抗,鉴定细胞株的生物学特性和单抗的免疫学特性及理化特性;初步探索用所制单抗构建检测gp36酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)的适用性.方法 分别用杂交瘤技术和常规免疫制备抗gp36的单抗和多抗(polyclonal antibody,PcAb,多抗).纯化单抗和多抗,并标记辣根过氧化物酶.分别用纯化的单个单抗-单个单抗或单个单抗-多抗建立夹心ELISA.结果 获得9株稳定分泌抗gp36单抗的杂交瘤细胞株.用纯化的8E5单抗和辣根过氧化物酶标记的多抗建立的夹心ELISA可以检测到低至50 μg/L的gp36.结论 为人类免疫缺陷病毒-2感染的检测和研究初步提供了可资应用的单抗.