双黄连吸入溶液UPLC指纹图谱及含量测定研究

目的 建立双黄连吸入溶液UPLC指纹图谱,并同时测定新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、3,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、4,5-二-O-咖啡酰奎宁酸、连翘苷7种活性成分的含量.方法 采用Agilent 1290超高效液相色谱仪,以黄芩苷为参照物在210 nm波长下建立双黄连吸入溶液指纹图谱;在324 nm波长下对新绿...     

基于一测多评法测定银黄制剂中6种咖啡酰奎宁酸类成分的含量

[目的]建立测定银黄制剂中6种咖啡酰奎宁酸类成分(绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B和异绿原酸C)含量的一测多评(QAMS)方法.[方法]采用Diamonsil C₁₈(4.6 mm×250.0 mm,5.0μm)色谱柱，以0.4%(体积分数)磷酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱(流动速度为1.0 m L·min^-1，进样量10μL，检测波长327 nm，柱温30℃).以绿原酸(5-O-咖啡酰奎宁酸)为内参物，计算其他5种咖啡酰奎宁酸类成分的相对校正因子并计算该5种成分的含量，实现QAMS.同时采用外标法测定6种咖啡酰奎宁酸类成分的含量，并对两种方法测定的结果进行比较，验证QAMS法的可行性和准确性.[结果]在一定线性范围内，以绿原酸为内参，新绿原酸(3-O-咖啡酰奎宁酸)、隐绿原酸(4-O-咖啡酰奎宁酸)、异绿原酸C(4,5-O-二咖啡酰奎宁酸)、异绿原酸A (3,5-O-二咖啡酰奎宁酸)和异绿原酸B (3,4-O-二咖啡酰奎宁酸)5种成分的平均校正因子分别为1.224 3、0.956 9、0.814 1、0.8...     

苍耳草水溶性成分指纹图谱LC-MS/MS研究

目的 研究苍耳草水溶性化学成分。方法 建立苍耳草水溶性成分的指纹图谱,通过LC-MS/MS技术鉴定其化学成分。结果 对苍耳草药材中的5种酚酸类成分的化学归属进行了指认,推测其结构为咖啡酰奎宁酸和二咖啡酰奎宁酸。结论 苍耳草中特征化学成分的识别可以显著增强其质量控制的准确性和专属性。化学成分的定性与定量相结合,可有效控制苍耳草药材及其相关产品的质量。     

白芍标准煎液指纹图谱及化学成分指认

目的 建立白芍饮片标准煎液的指纹图谱,对白芍有效成分进行指认,以期为白芍饮片的质量控制及临床应用提供理论依据。方法 收集10批白芍饮片,分别制备白芍标准煎液;采用超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography, UPLC)法建立白芍标准煎液的指纹图谱,以2012版《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》进行指纹图谱相似度分析;通过与对照品比对、与文献核对质谱数据,对共有峰进行指认。结果 经检测,10批白芍标准煎液指纹图谱共标定了22个共有峰,各峰分离度较好,各样品间相似度均>0.9;共指认出5个共有峰：儿茶素,芍药内酯苷,芍药苷,除虫菊素Ⅱ,苯甲酰芍药苷。结论 该研究建立的指纹图谱方法精密度、重复性、稳定性良好,可为白芍饮片的质量评价提供理论参考。     

蟾酥指纹图谱及其治疗COVID-19活性成分和作用机制初探

目的 ：研究蟾酥中的化学成分,建立蟾酥HPLC指纹图谱,并探究其治疗新型冠状病毒肺炎（COVID-19）的活性成分和作用机制。方法 ：采用HPLC-Q-TOF/MS技术对蟾酥进行成分鉴定,建立HPLC指纹图谱,同时运用网络药理学方法进行靶点和通路分析。结果 ：通过质谱鉴别出87个化学成分,包含生物碱类、蟾蜍甾二烯类、氨基酸及其酰化物等;建立10批蟾酥HPLC指纹图谱,共标定17个共有峰,相似度均≥0.950,通过对照品指认出五羟色胺盐酸盐、蟾蜍色胺、蟾毒它灵、日蟾毒它灵、沙蟾毒精、蟾毒灵、华蟾酥毒基、酯蟾毒配基8个化学成分;其中华蟾酥它灵、19-氧代华蟾酥它灵及指纹图谱指认的8个成分为蟾酥发挥治疗COVID-19的关键成分,得到包括PIK3CA、AKT1、MAPK1等10个核心靶点,涉及冠状病毒-新冠肺炎通路、PI3K-Akt信号通路、免疫调节通路等。推测蟾酥可能通过直接抑制病毒、改善免疫功能和减少炎症反应来发挥作用。结论 ：建立的指纹图谱可较为全面的表征蟾酥药材,其主要色谱峰对应的成分与蟾酥治疗COVID-19密切相关,联合网络药理学为蟾酥治疗COVID-19活性成分及作用机制的研究...     

单一内标多控法同步测定杏香兔耳风中绿原酸和3,5-二咖啡酰基奎宁酸的含量

目的建立杏香兔耳风中绿原酸和3,5-二咖啡酰基奎宁酸的一标多控含量测定方法。方法采用HPLC单一内标多控法进行测定,以绿原酸为3,5-二咖啡酰基奎宁酸的参照内标,在328nm处测定3,5-二咖啡酰基奎宁酸相对于绿原酸校正因子,利用校正因子和绿原酸同时测定绿原酸和3,5-二咖啡酰基奎宁酸的含量。结果绿原酸和3,5-二咖啡酰基奎宁酸分别在0.20～2.00μg和0.08～0.80μg范围内与峰面积线性关系良好,平均加样回收率绿原酸为99.07%（RSD=0.77%）,3,5-二咖啡酰基奎宁酸为99.26%（RSD=0.98%）。结论该方法准确、操作简单、专属性和重现性良好,可实现只用绿原酸一种对照品同时测绿原酸和3,5-二咖啡酰基奎宁酸的含量。     

一测多评法同步测定银黄片中6种咖啡酰奎宁酸

目的 建立银黄片中6种咖啡酰奎宁酸的一测多评定量测定方法。方法 以绿原酸（5-O-咖啡酰奎宁酸）为指标,建立该成分与3-O-咖啡酰奎宁酸、4-O-咖啡酰奎宁酸、4, 5-O-二咖啡酰奎宁酸、3, 5-O-二咖啡酰奎宁酸和3, 4-O-二咖啡酰奎宁酸的相对校正因子,采用相对校正因子计算各成分的量,同时对13批银黄片一测多评的计算结果与外标法实测值进行比较,并对不同品牌仪器和不同厂家色谱柱进行考察,评价一测多评法在银黄片中应用的准确性和科学性。结果 建立了银黄片的定量控制方法;方法准确性评价结果表明,利用一测多评法在不同色谱柱的计算值与外标实测值之间没有显著性差异。结论 本法可只采用绿原酸对照品同时控制6种成分的量,为中药的多指标成分质量评价模式提供参考。     

绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸与人白蛋白的分子对接研究

目的：比较可疑致敏原绿原酸、异绿原酸与人血清白蛋白（human serum albumin,HSA）的分子结合模式和结合能力。方法：采用Molegro Virtual Docker（MVD）软件,以华法令、地西泮和HSA共结晶复合物作为受体模板,比较绿原酸和异绿原酸（3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸）在HSA载药位点Ⅰ和Ⅱ的分子对接情况,以对接评分、关键氨基酸基团和氢键作用确定分子的结合模式。结果：绿原酸、3,4-二咖啡酰奎宁酸和3,5-二咖啡酰奎宁酸在HSA位点Ⅰ的分子对接分值为-112.3、-155.3和-153.1,在HSA位点Ⅱ的对接分值为-101.7、-138.5和-133.4。在位点Ⅰ,两个异绿原酸分子与关键脂溶性基团Ala291和Leu238的疏水力明显大于绿原酸;异绿原酸、绿原酸与该位点入口和内部不同的极性氨基酸基团形成氢键;与绿原酸分子相比,异绿原酸的第2个咖啡酰基占居该位点右侧亲脂区。在位点Ⅱ,异绿原酸的第2个咖啡酰基增加了其与极性氨基酸的作用。结论：异绿原酸与绿原酸相比,有更高的HSA分子对接评分,其多出的一个咖啡酰基增加了与HSA载药位点的结合能力。     

金银花和山银花UPLC特征图谱-化学成分模式识别方法研究

目的 建立超高效液相色谱（UPLC）特征图谱-化学模式识别金银花和山银花的差异性,为金银花和山银花的鉴定提供新的鉴别手段。方法 以70%甲醇超声提取金银花和山银花,特征图谱及含量测定利用同一液相色谱条件：乙腈-0.1%磷酸水为流动相,梯度洗脱,同时对新绿原酸、隐绿原酸、绿原酸、木犀草苷、芦丁、金丝桃苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C等9种化学成分的色谱峰进行指认和含量测定,并采用SMICA14.1软件进行数据处理、聚类分析和主成分分析。结果 建立的金银花UPLC特征图谱中指认了金银花16个共有峰,山银花15个共有峰,聚类分析和主成分分析均可将二者区分开来。二者差异性成分为金丝桃苷、木犀草苷和新绿原酸。结论 UPLC特征图谱-化学成分模式识别方法能够全面、有效、直观地反映出金银花和山银花的差异,为金银花及其伪品的鉴别提供新的途径。     

苍耳子中酚酸类化合物及不同品种和居群苍耳子中总酚酸含量的测定

目的:研究中药苍耳子(FructusXanthii)中的化学成分;测定不同居群和不同品种苍耳属植物果实中的总酚酸含量以评价其品质。方法:运用各种层析方法分离纯化化合物,以绿原酸作对照,用紫外分光光度法测定总酚酸的含量。结果:(1)从苍耳子中分离到6个咖啡酰奎宁酸类化合物,以及咖啡酸和阿魏酸;(2)从中国29个居群采集到的样品,总酚酸含量为0.31%～1.44%。在采集到2个品种及1个变种的苍耳属植物中,近无刺苍耳X.sibiricumvar.subinerme样品的总酚酸含量较其他两种都偏低。苍耳X.sibiricum样品中,从上海采集的3号苍耳子样品总酚酸含量最高,达1.44%,而从江西新建采集的12号样品含量最低,仅0.38%。结论:5O咖啡酰奎宁酸,1,4-二O咖啡酰奎宁酸和4,5二O咖啡酰奎宁酸是从苍耳属植物中首次分离获得。不同品种和不同居群苍耳子药材中,总酚酸含量的差异较为显著。若以总酚酸含量作为指标评价苍耳子药材的品质,则认为上海和福建三明产苍耳子为优质种群。     

金茵利胆胶囊的体外抗炎活性评价及其谱效关系研究

目的 评价金茵利胆胶囊的体外抗炎活性,并研究其抗炎谱效关系。方法 建立LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型,通过检测细胞上清中NO、TNF-α和IL-6等指标的含量来评价金茵利胆胶囊的抗炎活性。在此基础上,采用均匀设计法制备金茵利胆胶囊组成饮片的不同配伍样本,采用高效液相法建立均匀设计样品的指纹图谱,对均匀设计样品进行抗炎活性测定;以细胞上清液中NO、TNF-α和IL-6的抑制率为药效指标,与共有峰峰面积经灰色关联分析构建抗炎谱效关系。结果 金茵利胆胶囊提取物（0.25~1.00 mg/mL）能显著降低LPS诱导的RAW264.7细胞分泌NO、TNF-α和IL-6。经对照品比对指认出其中7个色谱峰,分别为新绿原酸（9号峰）、绿原酸（13号峰）、隐绿原酸（14号峰）、1, 3-二咖啡酰奎宁酸（16号峰）、对羟基苯乙酮（17 号峰）、柚皮苷（21 号峰）、新橙皮苷（23 号峰）。抗炎谱效关系结果表明,共有峰均具有一定的抗炎贡献度,其中共有峰峰21（柚皮苷）、峰23（新橙皮苷）与3个细胞炎症指标的关联度均大于0.74。结论：金茵利胆胶囊发挥抗炎作用是多种成分共同作用的结果,为金茵利胆胶囊抗炎药效物质基础及其质量控制提升提供参考。     

金银花中酚酸类和黄酮类成分的黄嘌呤氧化酶抑制活性

建立基于紫外分光光度原理的微孔板筛选方法,用于金银花药材中黄嘌呤氧化酶抑制剂的筛选,并进行抑制活性测定。通过对筛选条件优化,建立了可靠的筛选模型,并对从金银花中分离得到的20个单体化合物进行了筛选,发现8个酚酸类成分和4个黄酮类成分具有黄嘌呤氧化酶抑制活性,其中3,4-二咖啡酰奎宁酸甲酯、槲皮素和木犀草素有很好的活性,其IC₅₀分别为8.36,6.46和2.08 μmol/L。筛选结果表明,金银花中黄酮苷元的活性优于黄酮苷,双咖啡酰奎宁酸的活性明显优于单咖啡酰奎宁酸类成分,双咖啡酰奎宁酸甲酯的活性明显优于双咖啡酰奎宁酸,且双咖啡酰奎宁酸的5位取代对化合物的活性贡献最大。     

基于指纹图谱对五味子不同炮制品差异性研究

目的 分析五味子及不同炮制品炮制后化学成分差异,为五味子不同炮制品的整体质量控制提供依据。方法 建立生五味子、醋五味子、酒五味子指纹图谱,进行相似度评价,同时进行主成分分析（PCA分析）及正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA分析）,结合网络药理学分析探讨差异成分对应的靶点和通路。结果 建立的指纹图谱中成功指认出21个共有峰,其中4个峰分别被指认为五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素;相似度结果显示,五味子不同炮制品指纹图谱与各自对照图谱的相似度在0.907～0.999。PCA和OPLS-DA结果表明,五味子不同炮制方法对五味子活性成分的含量变化有一定的影响。网络药理学分析表明,指认出的色谱峰与五味子的主要药理作用密切相关。结论 所建立的指纹图谱方法精密度、重复性、稳定性良好,结合多元统计方法和网络药理学分析,为五味子及其炮制品质量标准评价提供了科学依据。     

基于UPLC指纹图谱与多成分定量评价不同产地桑叶药材质量

[目的] 建立桑叶超高效液相色谱（UPLC）指纹图谱,结合化学计量学与多成分含量测定综合评价不同产地桑叶药材质量。[方法] 采用CORTECS UPLC C₁₈色谱柱（2.1 mm×100 mm,1.6 μm）,以0.1%甲酸水-乙腈为流动相在350 nm波长下进行梯度洗脱;建立16批桑叶药材UPLC指纹图谱,并对指标成分进行含量测定;对指纹图谱进行相似度评价及主成分分析,利用偏最小二乘法-判别分析寻找不同产地桑叶药材的差异性成分。[结果] 桑叶药材指纹图谱共标定出14个共有峰,通过比对标准对照品,指认出其中8个,分别为新绿原酸、绿原酸、咖啡酸、隐绿原酸、芦丁、异槲皮苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷和紫云英苷;16批药材相似度均大于0.962,主成分分析将16批桑叶药材分为三类,偏最小二乘法-判别分析筛选出5个差异性标志物,差异显著性排序为1号峰（新绿原酸）＞4号峰（隐绿原酸）＞3号峰（咖啡酸）＞14号峰＞11号峰。[结论] 建立的综合评价方法稳定、可靠,可为桑叶药材的质量评价研究提供理论依据。     

亚贡叶不同提取条件的HPLC指纹图谱研究

目的：建立亚贡叶不同提取条件的HPLC指纹图谱。方法：采用变换波长检测法建立亚贡叶不同提取条件的HPLC指纹图谱,标定其共有峰并对两种指标性成分进行定量检测。结果：对亚贡叶6种不同提取条件的指纹图谱进行评价,标定19个共有峰,指认了第2号峰为绿原酸,第3号峰为咖啡酸,第14号峰为亚贡二萜酸A。结论：该方法操作简便,准确,重现性好,适用于亚贡叶不同提取方法的质量控制。     

不同加工方法对菊花饮片质量影响的综合评价

目的 考察不同加工方法对菊花饮片质量的影响.方法 采用TLC、HPLC色谱法对菊花饮片中绿原酸、木犀草苷、3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸进行定性和定量研究,同时对其水分、浸出物等进行测定.结果 不同炮制加工方法对菊花饮片的外观、水分以及绿原酸、木犀草苷、3,5-O-双咖啡酰基奎宁酸的含量影响不同,烘干的菊花饮片的有效成分的含量最高,硫熏的菊花饮片最低,硫磺熏蒸菊花饮片含水量明显升高.结论 不同炮制方法对菊花饮片质量影响不同,烘干法炮制加工的菊花饮片的质量较好,硫熏后质量下降.     

薏苡附子败酱散水煎液高效液相指纹图谱的建立及8种成分含量测定

目的采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)建立薏苡附子败酱散水煎液的指纹图谱,并对绿原酸、咖啡酸、芦丁、异绿原酸B、异绿原酸A、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、槲皮素8种成分进行含量测定。方法使用Agilent ZORBOX Extend-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.05%磷酸水溶液(p H2.5)为流动相进行梯度洗脱;流速1.0 m L/min;检测波长230 nm;柱温30℃;进样量10μL。结果 10批样品指纹图谱的相似度在0.996以上。共标定了51个共有色谱峰,并指认其中8个峰,分别为绿原酸、咖啡酸、芦丁、异绿原酸B、异绿原酸A、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、槲皮素。上述8种成分在线性范围内呈良好的线性关系,相关系数均≥0.999 3;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均5.0%;加样回收率为97.27%～102.81%,RSD≤3.93%。结论应用HPLC建立的指纹图谱反应了薏苡附子败酱散水煎液中的成分,可作为薏苡附子败酱散水煎液的质量控制方法。     

苍耳子辛夷合煎液指纹图谱变化分析

目的 建立苍耳子辛夷合煎液的HPLC指纹图谱分析方法,为研究临床苍耳子与辛夷配伍的药效物质基础成分变化提供可行手段.方法 采用HPLC法建立指纹图谱,选用Diamonsil C18柱(5 μm,250 mm×4.6 mm),流动相为乙腈-水梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,检测波长258 nm.通过对配伍后与单味药材的指纹图谱中各峰相对保留时间的比较分析.进行主要色谱峰的药味归属;利用色谱峰保留时间的对比,鉴定相关色谱峰.结果 建立了苍耳子与辛夷配伍的HPLC指纹图谱,未见新成分的增加,苍耳子与辛夷合煎有相互增溶的作用,并对辛夷某些成分溶出有抑制溶出作用.结论 该实验方法简便、准确、重复性好,具有良好的精密度和较好的分离效果,为苍耳子与辛夷临床配伍应用提供了科学依据.     

茵陈蒿汤HPLC指纹图谱研究及共有峰归属分析

目的 建立茵陈蒿汤HPLC指纹图谱,并对其共有峰进行归属分析和指认。方法 Symmetry C18（4.6 mm×250 mm,5 μm）色谱柱,乙腈-0.1％磷酸梯度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温30 ℃,检测波长238 nm和440 nm。测定10批茵陈蒿汤样品指纹图谱,建立共有模式,并进行相似度评价,通过与各组方药味及对照品保留时间和紫外光谱图比对,对共有峰进行归属分析和指认。结果 238 nm和440 nm下10批样品指纹图谱与共有模式的相似度分别≥0.931和0.951;238 nm下标定共有峰56个,其中24个来源于大黄、27个来源于栀子、4个来源于茵陈、1个为栀子和茵陈共有。来源于大黄的10个成分被指认,另有8个和2个成分分别具有蒽醌类和儿茶素类化合物的紫外吸收特征;来源于栀子中的4个成分被指认,另外10个、1个和3个成分分别具有环烯醚萜类化合物、西红花酸类化合物和绿原酸类似物的紫外吸收特征;来源于茵陈和栀子共有成分被指认为绿原酸;来源于茵陈的2个成分具有绿原酸类似物的紫外吸收特征;440nm下标定共有峰32个,其中16个与238 nm下为同一成分,另外16个新成分均来源于栀子,且均具有西红花酸类化合物的紫外吸收特征。结论 该法建立的指纹图谱可较全面地对茵陈蒿汤进行成分分析,为该方剂质量控制提供了依据。      

基于militarine含量结合UPLC指纹图谱的不同产地白及饮片质量分析

[目的] 采用超高效液相色谱法（UPLC）测定militarine（1,4-二[4-（葡萄糖氧）苄基]-2-异丁基苹果酸酯）的含量,并建立不同产地白及饮片的UPLC指纹图谱,为白及饮片的质量控制提供参考依据。[方法] 采用ACQUITY UPLC^® BEH C₁₈色谱柱（2.1 mm×150 mm,1.7 μm）,以乙腈-纯水为流动相进行梯度洗脱,流速0.3 mL/min,检测波长270 nm,柱温46℃,建立白及饮片的指纹图谱,进行相似度评价,在含量测定和指纹图谱基础上,采用聚类分析和主成分分析对不同产地白及饮片质量进行分析。[结果] 24批次的白及饮片militarine含量在18.98～44.87 mg/g之间,指纹图谱分析共标定12个共有峰,相似度在0.812～0.976之间,其中22批白及饮片的相似度均大于0.9,表明市售白及饮片整体质量基本一致;聚类分析和主成分分析将militarine含量和指纹图谱中4个关键成分的总相对含量均较低的样品聚为一类,聚类结果与相似度高低关系不大。[结论] 测定militarine含量结合UPLC指纹图谱评价白及饮片的质量,具有一定的科学性和可行性。