佐剂诱导关节炎大鼠模型的建立及成纤维样滑膜细胞的分离

目的建立类风湿性关节炎(RA)动物模型；从炎性关节滑膜中分离成纤维样滑膜细胞(FLS)。方法应用热灭活结核杆菌H37Ra菌株与矿物油混合制备改良的佐剂,尾根部皮内注射Lewis大鼠诱导关节炎；剪取成功诱导关节炎大鼠的病变踝关节,从中剥离滑膜组织,充分剪碎后采用胶原酶消化法分离成纤维样滑膜细胞。结果成功诱导了大鼠关节炎,发病率为100%,发病时间有规律,组织学表现与RA相似；成功在体外培养了FLS并对其进行了鉴定,掌握了其生长形态和特征。结论成功制备RA动物模型并获得FLS,为今后RA发病机制探索和药物评价提供了良好的体内动物模型和体外细胞模型。     

沙利度胺对类风湿关节炎滑膜细胞及外周血单个核细胞分泌肿瘤坏死因子-α和血管内皮生长因子的影响及机制研究

目的:观察沙利度胺(THD)对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖的抑制作用及其对FLS和外周血单个核细胞(PBMCs)分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)的影响,初步探讨THD治疗RA的可能机制。方法:分离RA患者FLS进行体外培养,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测分别加入10、50、100、200μg/ml的THD对FLS增殖的影响,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测50、100、200μg/ml的THD分别对FLS及PBMCs进行干预24、48 h后分泌VEGF和TNF-α的变化。结果:THD在50～500μg/ml浓度范围内对FLS增殖有抑制作用。与对照组比较,不同浓度(50、100、200μg/ml)不同作用时间(分别干预24、48 h)的THD对FLS和PBMCs分泌TNF-α及VEGF均有抑制作用(均P<0.05)。结论:THD可能通过抑制RA患者FLS的增殖,抑制FLS及PBMCs分泌VEGF、TNF-α,从而抑制新生血管的形成,减轻炎症反应,起到治疗RA的作用。     

程序化细胞死亡因子5过表达促进雷公藤内醇酯诱导的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡

目的:探讨程序化细胞死亡因子5(progrmmed cell death 5,PDCD5)过表达对雷公藤内醇酯(triptolide)诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(rheumatiod arthritis fibroblast-likes synoviocytes,RA FLS)凋亡的作用.方法:体外分离培养RA FLS进行腺病毒Ad-PDCD5(含有PDCD5基因的腺病毒载体)的转染,分别用免疫印迹法和流式细胞术检测Ad-PDCD5转染后的RA FLS中PDCD5蛋白表达及经雷公藤内醇酯处理后的PDCD5蛋白过表达的RAFLS的凋亡率.结果:用感染复数(multiplicity of infection,MOI)分别为50、100、200和300的Ad-PDCD5感染RAFLS 36 h后,PDCD5蛋白表达水平呈现剂量依赖性增加.未经雷公藤内醇酯处理的非感染组、Ad-null组(不含目的基因的空载体)和Ad-PDCD5组RA FLS的凋亡之间差异无统计学意义,经雷公藤内醇酯处理后,其RA FLS的凋亡率分别为(22.51±3.87)%,(28.77±12.97)%和(48.87±12.69)%.表明此腺病毒体系能够有效地使PDCD5蛋白过表达,在RA FLS中,单独使用雷公藤内醇酯或者单独转染PDCD5都不能明显地诱导细胞凋亡,但过表达PDCD5再进行雷公藤内醇酯处理可以诱导细胞凋亡.结论:腺病毒Ad-PDCD5转染使PDCD5过表达,从而能够促进雷公藤内醇酯诱导的RA FLS凋亡,为类风湿关节炎的临床治疗提供了一个可能的干预靶点.     

选择性β肾上腺素受体激动剂对人滑膜细胞增殖能力的影响

目的：观察β-肾上腺素受体( AR)激动药对人成纤维样滑膜细胞( FLS)增殖的作用,探讨β-AR信号对人FLS功能的影响。方法组织块培养法培养人FLS;使用肿瘤坏死因子α( TNF-α)作为刺激剂,MTT法分别检测β1-AR选择性激动剂多巴酚丁胺和β2-AR选择性激动剂沙丁胺醇对人FLS增殖作用的影响,并计算增殖抑制率;使用沙丁胺醇+β2-AR选择性拮抗剂ICI 118551观察其对FLS增殖功能的影响;Western blot法检测人FLSβ-AR、G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)和β抑制蛋白2(β-arrestin2)胞膜蛋白的表达水平。结果 TNF-α可以显著促进人FLS的增殖;β2-AR激动剂沙丁胺醇能明显抑制FLS的增殖,其拮抗剂ICI 118551能显著拮抗沙丁胺醇的作用;β1-AR选择性激动剂多巴酚丁胺对FLS的增殖无显著影响;TNF-α和沙丁胺醇均能显著降低β2-AR胞膜表达,上调 GRK2、β-arrestin2的胞膜表达。结论β2-AR信号的激活可以抑制FLS增殖;TNF-α和沙丁胺醇可以使GRK2、β-arrestin2的胞膜表达增加,β2-AR胸膜表达下降。     

肥大细胞和类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞共培养对白细胞介素-6分泌的影响

目的 观察肥大细胞和关节成纤维样滑膜细胞(FLS)共培养对FLS分泌白细胞介素(IL)-6的影响及其作用机制.方法 应用免疫组化染色法观察肥大细胞在关节滑膜中的分布.分离培养RA患者的FLS,加入肥大细胞系LAD-2共培养或用Transwell小室隔离共培养,观察上清中FLS分泌的细胞因子IL-6的变化.结果 LAD-2几乎不产生IL-6,FIS组IL-6的浓度为(3019±57)μg/L,而FLS与等量LAD-2细胞共培养的IL-6浓度为(7150±114) μg/LL(P<0.01).且其增加程度与LAD-2细胞数量呈正相关.以4%甲醛固定和Transwell小室隔离两种方法分别阻断可溶性介质分泌和细胞间相互黏附,前一组中IL-6增加可被阻断,但在后一组中不受影响.结论 肥大细胞与FLS通过可溶性介质相互作用可增加FLS的IL-6分泌,在RA发病中可能有重要意义.     

有机阴离子转运蛋白1对大鼠滑膜细胞吸收甲氨蝶呤、增殖及迁移的影响

目的 探讨有机阴离子转运蛋白1(OAT1)对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)吸收甲氨蝶呤(MTX)以及对其增殖和迁移的影响.方法 对CIA大鼠FLS使用转染技术上调OAT1的表达,并用Western blot、RT-qPCR方法验证转染效率.将FLS分为阴性对照组(NC组)、Overexpress组,并用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)(20 ng/ml)刺激.另取正常大鼠FLS为对照组(Control),给予同浓度(100 ng/ml) MTX和OAT1特异性底物对氨基马尿酸(PAH),采用UPLC-MS/MS方法评估FLS对MTX及PAH吸收功能.给予MTX(100 ng/ml)后使用CCK-8、Transwell方法检测FLS增殖效应及迁移能力.结果 与NC组相比,Overexpress组的OAT1及Slc22a6表达均上升;与NC组比较,OAT1过表达组FLS对MTX和PAH的吸收在15、30、45、60、120 min时均增加;与NC组比较,Overexpress组FLS的增殖效应在12 h时下降,并趋近于Control组水平;与NC组比较,12 h时OAT1过表达组的迁移能力下降,并趋近于Control组水平.结论 OAT1表达的升高能增加炎性FLS对MTX的吸收,并可抑制其异常的增殖效应和迁移能力.     

白藜芦醇抑制低浓度H2O2处理佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞增殖的机制研究

目的 探讨抗氧化剂白藜芦醇(Res)对低浓度H2 O2处理的佐剂性关节炎(AA)大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖的抑制作用.方法 弗氏完全佐剂足趾皮下注射SD雄性大鼠,建立AA模型,14 d后股动脉放血处死AA大鼠,取血清检测氧化应激指标,组织块培养法培养大鼠滑膜细胞,CCK-8法观察不同浓度的H2O2对FLS的增殖影响,Western blot法检测氧化应激相关蛋白去乙酰化酶3(SIRT3)、锰超氧化物歧化酶(MnSOD)蛋白的表达.结果 AA模型大鼠血清氧化应激指标升高,体外实验表明,随着Res的浓度增加,低浓度H2O2处理的AA大鼠FLS增殖受抑制,SIRT3、MnSOD蛋白表达降低.结论 Res可减轻AA大鼠体内的氧化应激状态,机制与降低抗氧化应激蛋白SIDT3、MnSOD的表达有关.     

增强表达PTEN蛋白对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的作用

目的研究增强表达PTEN蛋白对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA FLS)增殖的影响。方法慢病毒表达载体pLenti6/V5-PTEN转染RA FLS并表达PTEN蛋白,应用RT-PCR、Western blot检测PTEN表达,MTT法检测RA FLS增殖能力的变化。结果转染pLenti6/V5-PTEN后,RA FLS中PTEN mRNA表达提高60%以上,PTEN蛋白表达在48 h后提高了107.85%(P<0.05),RA FLS增殖在487、29、6 h分别下降了25.14%、41.84%和52.46%(P<0.05)。结论慢病毒表达载体pLenti6/V5-PTEN能够提高PTEN蛋白表达水平,并显著抑制RA FLS增殖。     

多药耐药基因-1高表达可加剧类风湿关节炎患者对氨甲蝶呤的耐药

目的 观察多药耐药基因-1(MDR1)在类风湿关节炎(RA)患者氨甲蝶呤(MTX)耐药中的作用。方法 体外利用重组腺病毒Ad-EGFP-MDR1感染RA患者成纤维样滑膜细胞(FLS),获得MDR1过表达RA FLS。采用Real-time PCR和Western blot法检测MDR1过表达RA FLS中 MDR1基因转录水平及其编码产物P-糖蛋白(P-gp)的表达水平,罗丹明123外排实验验证MDR1过表达RA FLS外排罗丹明123功能,MTT法检测MDR1过表达RA FLS对MTX的耐药性。 结果 重组腺病毒Ad-EGFP-MDR1感染RA FLS 72 h后,MDR1过表达RA FLS细胞内颗粒增加,细胞体积变大,生长速度变慢。MDR1过表达组RA FLS中MDR1 mRNA表达水平(1.4325±0.3924比0.0650±0.0070;t=6.035,P=0.004)、P-gp蛋白表达水平(1.8667±0.2857比 0.9367±0.0551;t=5.536,P=0.005)和细胞外排罗丹明123能力(979.43±196.81比1680.06±147.04;t=-4.940,P=0.008)均明显高于阴性病毒对照组。MTX各个浓度下MDR1过表达RA FLS的存活率均显著增高(P均<0.05)。结论 MDR1基因高表达可通过上调P-gp蛋白的表达影响RA FLS对MTX的外排能力,从而增强RA FLS对MTX的耐药性。     

白头翁皂抑制佐剂性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞凋亡

目的：研究白头翁皂苷(pulchinenoside,PULC)对佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠成纤维样滑膜细 胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)凋亡的影响。方法：60只 SD大鼠被随机分为正常对照组、AA组、PULC低剂量组 (50 mg/kg)、PULC中剂量组(100 mg/kg)、PULC高剂量组(150 mg/kg)、布洛芬8 mg/kg阳性药物组,每组10只。原代 培养AA大鼠FLS,real time qPCR检测PULC灌胃治疗对AA大鼠FLS抗凋亡基因Bcl-2,促凋亡基因Bax和细胞凋亡因子 caspase-3表达的调控作用;MTT 检测PULC治疗对FLS增殖的影响;ELISA检测PULC对FLS的IL-6和IL-8表达的影响。结 果：与AA组比较,各治疗组FLS中抗凋亡基因Bcl-2表达明显降低(均P<0.05),促凋亡基因Bax和细胞凋亡因子caspase-3 表达显著升高(均P<0.05),AA大鼠FLS增殖活力明显降低(均P<0.05),IL-6和IL-8表达显著下降(均P<0.05)。结论： PULC可能通过促进FLS凋亡而抑制AA大鼠滑膜的异常增殖。     

乌梢蛇蛋白对滑膜细胞增殖、凋亡及wt-p53/bcl-2 mRNA表达的影响

目的研究乌梢蛇蛋白对体外培养的类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)生长的抑制情况,探讨乌梢蛇蛋白影响FLS凋亡的可能分子机制。方法常规方法提取乌梢蛇总蛋白,组织贴块法培养FLS;采用不同剂量(高、中、低剂量)乌梢蛇蛋白作用FLS后,应用MTT法检测乌梢蛇蛋白对细胞增殖的影响,流式细胞仪技术检测细胞的凋亡情况,RT-PCR方法检测细胞wt-p53/bcl-2mRNA的变化。结果乌梢蛇蛋白中高剂量组FLS增殖率与空白对照组比较明显减少,细胞凋亡率明显增加,差异均有统计学意义(P<0.01);乌梢蛇蛋白中高剂量组FLS的wt-p53mRNA表达量增加,Bcl-2mRNA表达量降低,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论乌梢蛇蛋白可抑制FLS增殖和促进其凋亡,其作用机制可能是通过调节wt-p53/bcl-2基因表达来实现。     

AD5-10与表阿霉素联合作用治疗类风湿性关节炎

目的 研究抗死亡受体抗体(AD5-10)与表阿霉素联合作用治疗类风湿性关节炎的机制.方法 采用MTI法检测成纤维样滑膜细胞(FLS)存活率,用蛋白免疫印迹研究细胞凋亡信号通路蛋白和p53、p21的变化.结果 不同剂量的表阿霉素可增强FLS对AD5-10的敏感性,促进FLS凋亡.表阿霉素处理可使FLS细胞中caspase-3、-8、-9,c-FLIP,Bc1-2,p53和p21表达水平发生变化.结论 表阿霉素可能通过改变p53、p21、c-FLIP和Bc1-2协同AD5-10诱导FLS凋亡.     

人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞培养及生物学特性研究

目的 探讨人类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)的分离及生物学特性.方法 分别取4例RA患者膝关节滑膜组织、1例软骨瘤患者膝关节滑膜组织和1名健康人膝关节滑膜组织,采用组织块培养法培养FLS,使用相差显微镜观察细胞形态,流式细胞术(FCM)检测培养细胞的表面标志,酶联免疫吸附法定量检测RA第4代FLS细胞培养液上清液白细胞介素-1受体I型(IL-1RI)和白细胞介素1β(IL-1β)水平.结果 组织块培养法成功培养出FLS.RA患者FLS细胞4~7 d细胞数量明显增加,8~12 d细胞可以长满瓶底.第3代以后细胞均质性最好,3~7代细胞稳定且增殖活跃,8代以后增长缓慢并逐渐老化.软骨瘤患者和健康人滑膜组织培养7 d后才有散在单个FLS细胞爬出,大约16 d后FLS细胞可以长满瓶底.FCM分析RA第4代FLS CD90+细胞的百分率为99.04%,CD3+为2.73%,CD3-CD19+为0.29%,CD3-CD16+CD56+为2.81%,CD14+为5.89%,CD55+为54.17%.RA第4代FLS细胞培养上清液IL-1RI浓度为(158.63±20.32) pg /ml,IL-1β为(4.67±0.82) pg/ml. 结论 组织块培养法能有效分离RA患者FLS,FLS具有高水平表达CD90、IL-1RI和IL-1β的特性.     

王枣子总黄酮对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用及机制研究

目的 研究王枣子中总黄酮(TFIA)对佐剂性关节炎(AA)的治疗作用及机制。方法 采用注射完全弗氏佐剂制备AA模型大鼠后随机分为4组:AA组、AA+TFIA 50 mg/kg组、AA+TFIA 100 mg/kg组、AA+TFIA 150 mg/kg组,每组10只。另设空白对照组大鼠,不造模（n=10）。造模后4 d,TFIA各剂量组大鼠采用TFIA灌胃治疗,分别按上述3个剂量灌胃,每天1次,共24 d,空白对照组和AA组灌胃生理盐水。治疗第12天、16天、20天、24天采用大鼠关节炎评分法评价TFIA对AA大鼠的治疗作用。治疗第24天处死各组大鼠,分离大鼠滑膜组织,原代培养各组大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS),ELISA检测各组FLS中白细胞介素（IL-1）表达,MTT检测各组FLS增殖活力,real time qPCR检测各组FLS miR-152和经典Wnt信号通路关键基因〔β-catenin、细胞周期蛋白基因（ccnd1）〕表达。向AA大鼠FLS转染miR-152 mimics和对照NC mimics,向TFIA 100 mg/kg剂量组大鼠FLS转染miR-152 inhibitors和对照NC inhibitors,36 h后检测miR-152、β-catenin、ccnd1、IL-1表达和FLS的增殖。结果 TFIA各剂量灌胃治疗均能抑制AA大鼠关节炎评分,抑制β-catenin、ccnd1、IL-1表达和FLS增殖活力（P<0.05),各剂量组间比较差异无统计学意义（P>0.05),与空白对照组相比,各剂量组均未恢复至正常水平（P<0.05)。与空白对照组相比,AA组FLS中miR-152表达降低（P<0.05),向AA组FLS转染miR-152 mimics后,与对照组相比,过表达的miR-152抑制β-catenin、ccnd1、IL-1表达,抑制FLS增殖（P<0.05)。向TFIA 100 mg/kg剂量组FLS转染miR-152 inhibitors,与对照组相比,抑制了miR-152的表达,促进了β-catenin、ccnd1、IL-1表达,促进了FLS增殖（P<0.05)。结论 TFIA对AA大鼠有一定治疗作用,此作用可能通过上调miR-152的表达,影响经典Wnt信号通路实现。     

青藤碱对类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞体外增殖及凋亡的影响

目的 观察青藤碱(sinomenine, SN)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes, FLS)凋亡及增殖的影响,为青藤碱在临床上的应用提供实验依据.方法 光镜和荧光显微镜观察FLS形态的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,MTT比色法检测SN对FLS生长的抑制作用.结果 光镜及荧光显微镜下可见核固缩,变圆,荧光染色增强等凋亡形态学变化.流式细胞仪结果显示,随着SN浓度及作用时间的增加,被处理的FLS的凋亡率增加,未处理组与各处理组比较差异具有显著性(P＜0.05),其中3.2 mmol/L浓度的SN作用48 h对FLS凋亡影响最为显著.MTT结果显示,加入不同浓度SN(2.8～3.2 mmol/L),培养的FLS24 h、48 h后对增殖的抑制水平显著高于未处理组,与凋亡率呈现正相关(r=0.787, P＜0.05).结论 SN在一定浓度及作用时间内可抑制RA患者FLS增殖,诱导凋亡,这可能是SN治疗RA机制之一.     

Fcα受体在类风湿性关节炎人成纤维样滑膜细胞的表达与功能研究

目的探讨Fcα受体在类风湿性关节炎人成纤维样滑膜细胞的表达特征及其功能。方法采用RT-PCR和免疫荧光技术,从基因和蛋白水平检测Fcα受体在类风湿性关节炎人成纤维样滑膜细胞(RA FLS)的表达;采用ELISA方法,检测IgA对RA FLS分泌IL-6的影响。结果采用RT-PCR和免疫荧光染色方法,均检测到Fcα受体在RA FLS的表达。sIgA与RAFLS孵育12h后,细胞分泌IL-6的水平明显增高,差异具有显著性(P<0.01)。mIgA与RA FLS孵育12h后,细胞分泌IL-6的量无明显改变(P>0.05)。sIgA+TNF-α同时与RA FLS孵育12h后,细胞分泌IL-6含量明显高于sIgA或TNF-α单一组(P<0.01)。结论 Fcα受体在类风湿性关节炎人成纤维样滑膜细胞存在表达,sIgA增高RA FLS分泌IL-6的水平,并与TNF-α产生协同作用。     

The effects of PTEN expression on reproduction of FLS in rheumatoid arthritis

目的 研究增强表达PTEN蛋白对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA FLS)增殖的影响.方法 慢病毒表达载体pLenti6/V5-PTEN转染RA FLS并表达PTEN蛋白,应用RT-PCR、Western blot检测PTEN表达,MTT法检测RA FLS增殖能力的变化.结果 转染pLenti6/V5-PTEN后,RA FLS中PTEN mRNA表达提高60%以上,PTEN蛋白表达在48 h后提高了107.85%(P＜0.05),RA FLS增殖在48、72、96 h分别下降了25.14%、41.84%和52.46%(P＜0.05).结论 慢病毒表达载体pLenti6/V5-PTEN能够提高PTEN蛋白表达水平,并显著抑制RA FLS增殖.     

赤芍801对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞fas/faslmRNA表达的影响

目的 :探讨赤芍801对类风湿关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLS)中fas/fasl mRNA表达的影响。方法:RA患者关节液原代培养获取FLS,分别用浓度为0、4和64μg/mL的赤芍801作用24h后,提取总RNA并逆转录成cDNA,分别采用RT-PCR和SYBR Green实时荧光定量PCR检测fas/fasl的表达。结果:逆转录PCR结果显示,fasl mRNA在RA FLS中未被检测出,fas mRNA在RA FLS中有表达。实时荧光定量PCR结果表明fas mRNA相对表达量在4μg/mL赤芍801刺激24h后增加无统计学意义。但在64μg/mL赤芍801刺激24h后增加有统计学意义(P<0.05)。结论:赤芍801可体外诱导RA FLS fas mRNA表达上调;未检测到fasl mRNA在RA FLS中的表达。     

CD147与类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞MMPs合成的关系

目的观察类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes, FLS)与高表达CD147的单核细胞株(THP-1)共培养后,基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)合成的变化.方法从手术切除的RA患者滑膜组织中,分离FLS,经流式细胞术测定CD14,CD68及免疫组化测定波形纤维蛋白(vimentin)证实后,传代培养.将FLS与高表达 CD147的THP-1共培养,观察THP-1细胞对FLS MMPs合成的影响.用明胶酶谱法测FLS MMP-2,MMP-9含量.同时观察CD147拮抗肽(AP9)对MMPs表达的影响.结果高表达CD147,低表达MMP-2、 MMP-9的THP-1细胞与CD147表达水平低的RA FLS混合培养后,FLS合成MMP-2、 MMP-9水平显著升高,随着THP-1细胞数的增加,MMP-2、 MMP-9的合成量也增加.THP-1对FLS合成MMP-2、 MMP-9的刺激作用可被CD147拮抗肽AP-9所抑制.结论高表达CD147的THP-1细胞对共培养的RA FLS合成MMP-2、MMP-9有刺激作用,这种刺激作用可被CD147拮抗肽AP-9所抑制,提示THP-1表面的CD147对FLS合成MMPs有促进作用.     

重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白联合芍药苷对人滑膜细胞增殖的影响及部分机制

目的观察重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(rhTNFR:Fc)与芍药苷(Pae)联合应用对人成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖的影响,探讨其对肿瘤坏死因子受体(TNFR)信号通路的调节作用。方法经知情同意,收集行髋关节置换术患者正常滑膜组织,采用组织块培养法对人滑膜细胞进行培养。取第3代人FLS,用肿瘤坏死因子α(TNF-α,20μg/L)刺激,分别用rhTNFR:Fc(10 mg/L)、Pae(10-5mol/L)及二者联合干预。MTT法检测人FLS的增殖反应,免疫组化法半定量分析肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)、肿瘤坏死因子受体相关死亡结构蛋白(TRADD)在FLS中的表达情况。结果 rhTNFR:Fc与Pae联合用药对FLS增殖的抑制作用优于rhTNFR:Fc和Pae单独给药组。rhTNFR:Fc、Pae及联合用药均能明显下调FLS中TNFR1和TRAF2表达,上调TRADD表达;与单独用药相比,联合用药能进一步上调TRADD表达,而对TNFR1和TRAF2的表达无明显影响。结论 rhTNFR:Fc和Pae联合用药对人FLS增殖的抑制作用优于单独给药,其作用机制可能与调节TRADD有关。