三种补肾方含药血清对衰老骨髓间充质干细胞中COLⅠ和ALP的影响

目的 研究健骨二仙丸、金匮肾气丸和六味地黄丸含药血清对衰老骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）成骨分化过程中Ⅰ型胶原蛋白（collagen typeⅠ, COLⅠ）和碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP）表达的影响,探讨3种补肾方治疗骨质疏松症的机制。方法 将40只SD大鼠分为健骨二仙丸组、金匮肾气丸组、六味地黄丸组、空白对照组,每组10只。分别灌胃75.9 g/kg健骨二仙丸、89.1 g/kg金匮肾气丸、85.8 g/kg六味地黄丸和等体积生理盐水,每天定时灌胃2次,连续7 d,制备含药血清。用H2O2将P3代BMSCs处理成衰老细胞,采用β-半乳糖苷酶染色进行观察。衰老BMSCs分为6组：模型组、诱导组、健骨二仙丸含药血清组、金匮肾气丸含药血清组、六味地黄丸含药血清组、空白血清组,于诱导第4、8、12、16天采用Real-time PCR法和Western blot法检测COLⅠmRNA及蛋白表达水平,并在第4、8天时收集细胞上清液检测ALP活性。结果 衰老BMSCs被β-半乳糖苷酶染色成...     

金匮肾气丸中干地黄延缓衰老的作用

目的：探讨干地黄在金匮肾气丸中延缓衰老作用的机制。方法：（1）以果蝇为受试对象,在培养基中分别加入干地黄,金匮肾气丸,金匮肾气丸去干地黄水煎剂,观察对照组及用药组果蝇的寿命。（2）采用D－半乳糖背部皮下注射复制昆明种小鼠亚急性衰老模型,用干地黄,金匮肾气丸,金匮肾气丸去干地黄水煎剂灌胃给药,对照组,模型组给以等量的蒸馏水,观察干地黄等用药组,模型组和对照组血清SOD活性。结果：3种剪剂均有延缓衰老作用（与模型组比较,P＜0．05）,金匮肾气丸延缓衰老作用优于干地黄和金匮肾气丸去干地黄（P＜0．01）,结论：干地黄是作为整体发挥延缓衰老作用的金匮肾气丸中不可缺少的主药。     

六味地黄丸和金匮肾气丸对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脑和脊髓中CD4＋、CD8＋的影响

目的 观察六味地黄丸和金匮肾气丸对实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）小鼠脑和脊髓中淋巴细胞亚群CD4＋、CD8＋的影响.方法 皮下注射抗原,建立EAE模型.取脑和脊髓,HE染色后进行病理观察;用免疫组化法检测小鼠脑和脊髓组织中CD4＋、CD8＋;结果 六味地黄丸组和金匮肾气丸组明显减轻病灶区域的炎性细胞浸润,对CD4＋和CD8＋及CD4＋/CD8＋均有一定的调节作用.结论 六味地黄丸和金匮肾气丸均有防治小鼠EAE的作用,其作用机制可能与调节细胞免疫系统有关.     

六味地黄丸及其加减方的传统用法和临床新用途

六味地黄丸原名地黄丸,是中医著名的经典方剂之一。六味地黄丸最早源自东汉“医圣”张仲景,从其《金匮要略》的“金匮肾气丸”衍化而来。北宋名医、儿科学家钱乙（字仲阳）把金匮肾气丸里面的“附子”和“桂枝”两种温补的药物去掉,演变成“六味地黄丸”,记载在《小儿药证直决》卷下中。此外,其他著作中也有记载,如宋·刘防《幼幼新书》卷六的“补肾地黄丸”,     

漫谈六味地黄丸

六味地黄丸，原名“地黄丸”。在古医籍中有地黄丸方近20首，而流传最为广泛且沿用不衰的是宋代钱乙（仲阳）所撰《小儿药证直诀》中的一首。该方是钱仲阳从金匮肾气丸减桂、附而成，以为幼科补肾专药。《成方切用》说：“小儿行迟齿迟，脚软，囟开，阴虚发热诸病，皆属肾虚，而小儿稚阳纯气，无补阳之法，乃用此方，应手而效。”其方由六味药组成，《校注妇人良方》名之为六味丸，《正体类要》则名为六味地黄丸。     

补肾丹对D-gal致衰老模型大鼠细胞因子IL-2、IL-6的影响

目的:研究补肾丹对亚急性衰老模型大鼠的调节免疫功能的作用。方法:清洁级健康Wistar大鼠,雄性,体重200±20g,77只。随机分为7组:正常对照组、金匮肾气丸组、补肾丹高、中、低剂量组、维生素E组、模型组。采用D-半乳糖致亚急性衰老法,除空白组外,各组腹腔注射D-gal(250mg/kg.d)60d,造成大鼠拟衰老动物模型。正常对照组和模型对照组给等体积的生理盐水,中药对照组同时给予金匮肾气丸0.72g/kg.d灌胃,补肾丹高、中、低剂量组同时分别给予相当于生药2.7g/kg.d、1.35g/kg.d、0.675g/kg.d灌胃。西药对照组每日灌服维生素E0.027g/kg.d,每日1次,共60d。观察血清中白介素2(IL-2)和白介素6(IL-6)的水平变化。结论:补肾丹各剂量组可不同程度升高D-gal所致衰老模型大鼠的IL-2,降低IL-6的含量,从而增强机体免疫功能,起到延缓衰老,增强老年机体的抗病能力的作用。     

金锁二仙饮对雄性小鼠肾精亏虚证治疗作用及其机理实验研究

目的：观察金锁二仙饮对恐伤肾小鼠的影响并探讨其补肾填精作用机理。方法：将60只小鼠随机分为正常组、模型组、金匮肾气丸组以及金锁二仙饮高、中和低剂量组,共6组。除正常组外,其余5组制造＂恐伤肾＂肾精亏虚动物模型,连续21天,造模第8天开始模型组每天灌胃生理盐水（0.2mL/10g）、金匮肾气丸组灌胃金匮肾气丸混悬液（2.7g·kg-1·d-1）、金锁二仙饮高、中和低剂量组分别以金锁二仙饮（36、18、9g·kg-1·d-1）灌胃,共14天。观察动物一般情况,体重、性腺重量及其指数,血清睾酮（T）、精子生成素（FSH）和间质细胞刺激素（LH）含量的变化。结果：金锁二仙饮能够改善小鼠肾精亏虚症状,增加小鼠体重及性腺重量,提高血清T、FSH、LH水平。结论：金锁二仙饮可能通过对下丘脑-垂体-性腺轴激素水平的合成和释放的调节,发挥补肾填精作用。     

补肾法对肾虚大鼠空间学习记忆能力的影响

【目的】探讨补肾法对房室不节肾虚大鼠空间学习记忆能力及海马DG区细胞超微结构的影响。【方法】将连续配种6个月经鉴定生殖功能下降的SD大鼠随机分为肾虚模型组,六味地黄丸低、高剂量组(剂量分别为4.8、9.6 g·kg-1·d-1)和金匮肾气丸低、高剂量组(剂量分别为5.2、10.4 g·kg-1·d-1),并以2月龄大鼠作为正常对照组。连续给药30 d后,进行Morris水迷宫实验,采用透射电镜观察海马DG区细胞超微结构。【结果】Morris水迷宫定位航行实验结果显示:与正常对照组比较,肾虚模型组逃避潜伏期显著延长(P<0.01);与肾虚模型组比较,各给药组潜伏期显著缩短(P<0.05或P<0.01)。空间探索实验结果显示:与正常对照组比较,肾虚模型组原平台所在象限停留时间和平台周边区域一停留时间均显著减少(P<0.01);与肾虚模型比较,金匮肾气丸高剂量组2项停留时间均显著增加(P<0.05或P<0.01),六味地黄丸低剂量组平台周边区域一停留时间显著增加(P<0.05)。电镜观察结果显示:与肾虚模型组比较,六味地黄丸高剂量组和金匮肾气丸高剂量组可减轻大鼠海马DG区细胞超微结构病变。【结论】(1)长期房室不节可引起海马DG区细胞超微结构病变,导致空间学习记忆障碍。(2)补肾法可减轻房室不节对大鼠空间学习记忆能力的损伤及海马DG区细胞超微结构病变。(3)补肾方药在改善肾虚大鼠空间学习能力及细胞超微结构病变方面无显著性差异,金匮肾气丸改善房室不节肾虚大鼠的空间记忆能力的作用优于六味地黄丸。     

怡肾丸对阿霉素肾病大鼠肾脏TNF-α的影响

目的：观察怡肾丸对阿霉素肾病大鼠肾脏肿瘤坏死因子（T N F-α）的影响,并探讨其作用机制。方法将80只S D雄性大鼠随机分为空白组、模型组、六味地黄丸组和怡肾丸组。采用一次性尾静脉注射阿霉素（6 mg/kg）制备阿霉素肾病大鼠模型,造模7 d后开始给药,每日1次,灌胃后第2、4、6、8周用免疫组织化学法检测大鼠肾脏 TNF-α的表达。结果模型组 TNF-α表达明显高于空白组,而怡肾丸组和六味地黄丸组与模型组比较表达显著降低;在怡肾丸组与六味地黄丸组肾间质纤维化程度低（P＜0.05）。结论怡肾丸可能通过下调 TNF-α的表达,减轻炎症反应和纤维化程度,从而达到保护肾脏、防止肾间质损害的作用。     

金匮肾气丸历史演变考证

查阅历代医方著作、本草典籍,对金匮肾气丸名称以及药物组成演变进行考证。考证发现:金匮肾气丸因出自《金匮要略》而得名,其组成应为八味。在元代时期有部分医家认为金匮肾气丸组成为六味,并将其与六味地黄丸等同,显然这种认识是错误的。明清时期有部分医家认为金匮肾气丸组成为十味,对现代制药产生了较大的影响,但经考证发现,现代十味药物组成的金匮肾气丸是由济生肾气丸演变而来,并非金匮肾气丸原方。所以现在《中药成方制剂》规定金匮肾气丸药物组成为十味并不合理。历代医方著作所载金匮肾气丸多以八味肾气丸、八味丸、桂附地黄丸等名称出现,其药物组成中“地黄”经历了“地黄→熟干地黄→熟地黄”的变化,“桂”经历了“桂→桂心→肉桂”的变化,体现了历代医家中药炮制技术以及中药材分部位用药认识的进步。     

六味地黄丸含药血清对Eahy926细胞ERK/Nrf2-HO-1信号通路的影响

目的 观察六味地黄丸含药血清对人血管内皮细胞Eahy926增殖及其ERK/Nrf2-HO-1信号通路的影响.方法 CCK-8检测大鼠5％、10％、20％空白血清与5％、10％、20％含药血清对Eahy926细胞增殖的影响,并用Western-blotting方法检测10％含药血清对Eahy926细胞ERK/Nrf2-HO-1信号通路分子蛋白表达的影响.结果 六味地黄丸含药血清可以促进Eahy926细胞的增殖;在Eahy926细胞中,10％六味地黄丸含药血清能够促进ERK的磷酸化、Nrf2核转位和HO-1蛋白的表达,明显高于无大鼠血清组和10％空白血清组.结论 10％六味地黄丸含药血清诱导ERK磷酸化介导Nrf2入核和HO-1蛋白的表达.     

六味地黄丸联合金匮肾气丸加减治疗较小肾结石的疗效分析

目的研究较小肾结石采用六味地黄丸联合金匮肾气丸加减治疗的效果。方法选择我院接收的104例较小肾结石患者,抽签法分观察组(六味地黄丸联合金匮肾气丸加减)与对照组(口服排石冲剂)各52例,比较肾功能及有效率。结果与对照组比较,观察组尿素氮、血肌酐及24h尿蛋白低,血浆白蛋白高;临床有效率高,P0.05。结论六味地黄丸联合金匮肾气丸加减治疗较小肾结石能提高整体疗效且改善不适症状,达到控制疾病进展的目的。     

六味地黄丸含药血清调控黑色素瘤B16细胞株缝隙连接蛋白表达的作用

[目的] 观察六味地黄丸含药血清调控小鼠黑色素瘤B16细胞株缝隙连接蛋白(Cx)表达的作用.[方法]采用SD大鼠灌胃8 d制备六味地黄丸含药血清(药物荆量为32 g·kg-1·d-1)和对照血清(灌胃等容积生理盐水);选择对B16细胞生长和形态影响不大的血清浓度 (体积分数为10%) 作为大鼠血清的工作浓度;采用Western blot技术和间接免疫荧光法及流式荧光法检测六味地黄丸含药血清对黑色素瘤B16细胞株缝隙连接蛋白(Cx26/30/32)表达的影响.[结果]Westem blot检测显示空白组 (无鼠血清) 3种Cx几乎不表达,而对照血清和六味地黄丸各浓度含药血清均能提高Cx蛋白的表达,但含药血清的作用更为明显且有显著的量效关系;间接免疫荧光法和流式荧光法检测显示类似的结果:对照血清组和中、高剂量含药血清组的Cx蛋白荧光强度均较空白组显著增加(P<0.01),但与对照血清组比较,只有高剂量含药血清组荧光强度显著增加(P<0.05),低剂量舍药血清组Cx蛋白表达反而下降(P<0.01).[结论]六味地黄丸含药血清具有调控小鼠黑色素瘤B16细胞株缝隙连接蛋白表达的作用.     

金匮肾气丸改善老年肾气虚证的临床观察

目的 观察金匮肾气丸对老年肾气虚证患者的临床症状及生活质量的影响.方法 选取2011年10月-2012年12月在我院住院的肾气虚证患者90例,所有患者按完全随机原则,分为对照组44例和治疗组46例,对照组药用六味地黄丸治疗,治疗组药用金匮肾气丸治疗,采用组间对照方法,观察治疗前后症状及生活质量改善情况.结果 治疗1个月后,与对照组疗效比较,治疗组能改善患者的肾气虚症状,两者比较差异有统计学意义（P＜0.05）;与对照组生活质量改善比较,治疗组能改善生活质量,两者比较差异有统计学意义（P＜0.05）;结论金匮肾气丸能明显改善肾气虚患者的临床症状,同时能提高患者的生活质量.     

从下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴探讨附子肉桂在肾气丸中补肾阳的作用

[目的]通过研究肾气丸、附桂混悬液和六味地黄丸对肾阳虚证大鼠下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴功能的影响,探求附子和肉桂在肾气丸中补肾阳的作用。[方法]将60只SD大鼠随机分为5组,即正常组、模型组、肾气丸组、附桂混悬液组和六味地黄丸组,每组12只。采用氢化可的松肌内注射制备肾阳虚大鼠模型,药物干预组在造模同时分别给予相应的药物进行干预,1次/d,连续20d。每隔4d记录1次动物的症状体征（体重、肛温、饮水、摄食、大小便、脱毛、拱背、蜷缩及抓取激惹反应）。实验结束后,腹腔静脉采血,分离血清,ELISA法测ACTH、CORT含量;取下丘脑制备匀浆,ELISA法检测CRH和CRHR1含量。[结果]肾阳虚模型组动物出现体重下降,肛温降低,摄食量和饮水量减少等肾阳虚典型症状。与正常组相比,大鼠下丘脑、垂体、肾上腺、性腺（卵巢、睾丸）脏器显著萎缩;血清ACTH、CORT及下丘脑CRH和CRHR1含量显著降低。药物干预后,肾气丸能显著改善肾阳虚动物的症状体征,升高血清ACTH、CORT和下丘脑CRH、CRHR1含量;附桂混悬液能在一定程度上改善肾阳虚大鼠上述检测指标,但较肾气丸弱。六味地黄丸不能改善肾阳虚大鼠的上述检测指标。[结论]附子和肉桂在肾气丸中可能是通过调节下丘脑-垂体-肾上腺皮质轴的功能发挥补肾阳的作用。     

六味地黄丸含药血清及梓醇对肾小管上皮细胞HK-2转化生长因子β1/Smad通路的影响

目的：观察六味地黄丸含药血清及其主要单体梓醇对肾小管上皮细胞株HK-2转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）/Smad信号通路的影响。方法：制备大鼠六味地黄丸含药血清,采用四甲基偶氮唑盐法和乳酸脱氢酶释放实验确定药物最适作用浓度。六味地黄丸含药血清和梓醇作用于TGF-β1刺激（或不刺激）的HK-2细胞,并设肝细胞生长因子（hepatocyte growthfactor,HGF）为阳性对照,采用蛋白质印迹法观察Smad通路分子Smad2、Smad7和Ski相关活性蛋白N（Ski-related novel protein N,SnoN）蛋白表达的情况。结果：与HGF作用相似,10%浓度六味地黄丸含药血清可抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞Smad2蛋白磷酸化并促进核转录抑制因子SnoN的表达。梓醇亦可显著抑制HK-2细胞Smad2蛋白磷酸化。六味地黄丸含药血清及梓醇对HK-2细胞Smad7蛋白表达未见明显调控作用。结论：在TGF-β1刺激HK-2细胞模型中,六味地黄丸含药血清拮抗Smad通路活化的作用与HGF相似,梓醇是六味地黄丸中主要发挥作用的单体之一。     

金匮肾气丸延缓衰老作用的实验研究

目的：探讨金匮肾气丸延缓衰老作用的机理。方法：用环磷酰胺（ＣＰＰ）诱致小鼠骨髓细胞ＤＮＡ损伤，以微核（ＭＮ）和姐妹染色单体互换（ＳＣＥ）为指标，观察温补肾阳、延缓衰老代表方金匮肾气丸的抗ＤＮＡ损伤作用。结果：金匮肾气丸对由环磷酰胺所致ＤＮＡ损伤具有良好的拮抗作用。结论：提高机体抗ＤＮＡ损伤能力可能是金匮肾气丸延缓衰老作用的主要机理所在。     

Smad3介导补肾中药对增龄成骨细胞VDR mRNA表达的影响

目的：探讨smad3是否介导了补肾中药对增龄成骨细胞VDR mRNA表达的影响,从而阐明补肾中药具有促进骨形成的机制。方法：分离6月龄和16月龄SD大鼠成骨细胞,采用组织块翻转方法培养,通过倒置显微镜观察细胞形态,并以矿化结节染色对成骨细胞加以鉴定。将SD大鼠随机分为正常组、生理盐水组、单味补阳组（固本壮骨粉）、复方补阳组（金匮肾气丸）、复方平补组（补肾益精方）、复方补阴组（知柏地黄丸）和西药对照组（阿法骨化醇片）,制备药物血清;当成骨细胞汇合达60％,换无血清培养液培养细胞24h后,加入含药血清（浓度为10％）再继续培养3d。采用RT-PCR方法检测含药血清干预后成骨细胞smad3和VDR mRNA的表达。结果：在增龄成骨细胞smad3 mRNA表达是下降的,这与增龄所致VDR mRNA表达下降相一致;单味补阳组、复方补阳组和西药对照组上调smad3 mRNA的趋势与它们上调VDR mRNA的趋势相一致。结论：补阳中药可能通过启动Smad3 mRNA表达而上调VDR mRNA表达,从而促进骨形成。     

“外气”与金匮肾气丸对“阳虚”小鼠血浆中分子物质含量的影响

用羟基脲造成“阳虚”小鼠模型，然后采用补肾壮阳中成药金匮肾气丸和气功师发放“外气”进行治疗，并检测血浆中分子物质的含量。实验结果：（１）“阳虚”小鼠组明显高于正常小鼠组（Ｐ〈０．０５）。（２）金匮肾气丸治疗组显著低于“阳虚”组（Ｐ〈０．０１）。（３）气功外气治疗组显著低于阳虚组（Ｐ〈０．００１）。     

六味地黄丸抑制巨噬细胞激活抗肾纤维化实验研究

目的 研究六味地黄丸对单侧输尿管结扎（Unilateral ureteral obstruction,UUO）致肾纤维化过程中巨噬细胞激活的影响。 方法 24只C57BL/6小鼠随机分为假手术组（8只）和结扎组（16只）,结扎小鼠随机分为模型组和六味地黄丸组,每组8只。造模开始给予六味地黄丸（0.617 1 g/kg）灌胃给药至2周末,实验结束留取肾组织样本,检测肾组织病理学。免疫组化检测平滑肌肌动蛋白（Alpha-sooth muscle actin,α-SMA）和人磷酸化信号转导分子-2（p-Smad2）,以及肾组织F4/80表达。实时定量PCR测定TNF-α mRNA表达,Western blot检测趋化因子11（Chemokine (C-X-C motif) ligand,CXCL11）和CD68蛋白表达。 结果 UUO造模2周肾脏间质纤维化形成,六味地黄丸显著抑制肾纤维化形成。假手术组α-SMA表达较低,模型组α-SMA染色阳性表达显著增强,主要分布在肾小管上皮细胞和增宽的肾间质;与模型组相比,六味地黄丸组α-SMA表达显著降低。假手术组F4/80表达较低,UUO造模2周,F4/80表达显著升高,促炎症因子及趋化因子等表达显著升高,而六味地黄丸显著抑制F4/80及促炎症因子和趋化因子表达。 结论 六味地黄丸显著抑制巨噬细胞激活可能是其有效抑制肾纤维化的作用机制,为其治疗肾纤维化提供基础依据。