氯化甲基汞和甲氨蝶呤对Jurkat细胞凋亡的影响

目的通过体外细胞实验研究氯化甲基汞(Methyl mercury chloride,MMC)和甲氨蝶呤(Methotrexate,MTX)对人T淋巴细胞白血病细胞(Jurkat)凋亡的影响。方法 Jurkat细胞经1.25、2.5、5、10、20μmol.L-1 MMC和MTX作用24h。应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度MMC和MTX对Jurktat细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞术应用AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测不同浓度MMC和MTX对Jurktat细胞凋亡的影响。结果 MMC和MTX作用Jurkat细胞24h,均能够抑制Jurkat细胞增殖,促进其凋亡;且与药物浓度正相关。10μmol.L-1 MMC的细胞凋亡率为(54.65±3.15)%,与对照组(0.15±0.03)%以及MTX组(26.32±2.64)%相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 MMC和MTX均能够抑制Jurkat细胞增殖,诱导其凋亡;但前者作用更为明显。     

氯化镧抑制人脑胶质瘤SHG44细胞增殖及作用机制研究

目的探讨氯化镧对人脑胶质瘤SHG44细胞增殖的影响及其作用机制。方法体外培养人胶质瘤细胞，MTT法测定氯化镧对SHG44细胞的增殖影响，电镜检查细胞超微结构的改变，原位杂交技术及免疫组织化学染色技术检测PTEN基因及其蛋白表达情况。结果氯化镧可抑制人脑胶质瘤SHG44细胞的生长，电镜下见胶质瘤细胞核染色质浓缩、核固缩、核溶解，出现凋亡细胞。PTEN基因在蛋白、mRNA水平均显著增强。结论氯化镧可抑制人脑胶质瘤SttG44细胞的生长，并促进凋亡。     

羟基喜树碱联合甲氧胺对SHG44胶质瘤细胞增殖作用的影响

目的观察羟基喜树碱（hydroxycamptothecin, HCPT）单独及与甲氧胺（methoxyamine,MX）联合用药在抑制神经胶质瘤（SHG44）胶质瘤细胞增殖过程中是否具有协同作用,以期减少HCPT用量,降低毒副反应,为HCPT联合MX应用于抗胶质瘤治疗提供理论支持。方法联合运用HCPT与碱基切除修复抑制剂MX,用MTT法、流式细胞等方法检测联合用药的体外抑瘤效果及可能的机制。结果 HCPT联合甲氧胺能显著抑制SHG44胶质瘤细胞增殖,随着浓度增加和作用时间延长,其增殖抑制效应也随之增强。流式细胞检测结果表明,HCPT联合MX组凋亡细胞比例明显增多,但与单独HCPT用药组比较未见明显差异。结论 HCPT联合MX对SHG44胶质瘤细胞具有显著增殖抑制作用,且具有明显剂量-时间依赖性。     

氯化甲基汞-L-半胱氨酸共轭物诱导恶性脑胶质瘤凋亡的体外研究

目的探讨氯化甲基汞(methylmercury chloride,MMC)-L-半胱氨酸(L-cys)共轭物体外诱导恶性脑胶质瘤U251细胞凋亡并抑制其增殖的作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定不同剂量的MMC-L-cys共轭物分别作用24、48、72h后对U251胶质瘤细胞增殖的影响,并与三氧化二砷(ATO)做平行对照研究。流式细胞仪用异硫氰酸荧光素标记的膜联蛋白V(Annexin V-FITC)和碘化丙啶(PI)双染检测凋亡情况。结果 MMC-L-cys共轭物抑制U251胶质瘤细胞的生长和增殖,与正常对照组相比差异显著(P<0.05),其抑制作用强于ATO组(P<0.05),抑制作用呈剂量、时间依赖性;U251胶质瘤经不同浓度的MMC-L-cys共轭物作用后,24h其凋亡率显著高于对照组(P<0.05),诱导凋亡作用具有剂量依赖关系。结论 MMC-L-cys共轭物能诱导胶质瘤细胞凋亡、抑制其增殖,呈时间剂量依赖性,为胶质瘤的治疗提供实验依据。     

氯化三乙基锡抑制大鼠C6胶质瘤细胞增殖并诱导凋亡

目的探讨氯化三乙基锡对体外培养大鼠C6胶质瘤细胞的抑瘤作用。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测氯化三乙基锡对C6胶质瘤细胞的增殖抑制作用，采用普通倒置显微镜和HE染色形态学方法观察氯化三乙基锡对C6细胞增殖抑制作用。结果不同浓度的氯化三乙基锡在体外可抑制C6胶质瘤细胞的增殖，药物浓度为0．5μM、1．0μM和2．0μM时，抑制率分别为15．62％、36．16％和41．92％，存在着剂量依赖关系。氯化三乙基锡对C6胶质瘤细胞的增殖抑制率在不同浓度组与对照组之间具有显著性差异（P〈0．05），以及不同浓度组之间具有显著性差异（P〈0．01）。HE染色观察到2．0μM氯化三乙基锡作用于C6胶质瘤细胞48h后，出现细胞凋亡特有的形态学改变。结论氯化三乙基锡可抑制体外培养C6胶质瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

microRNA-101诱导zeste基因增强子的表达沉默及其对人脑胶质瘤细胞的增殖抑制

目的:研究外源性microRNA-101前体在人脑胶质瘤SHG44细胞中的表达,及其对靶基因EZH2的沉默机制及调控宿主细胞的增殖抑制作用。方法:构建真核表达载体pRNAT-CMV3.2-mir101;利用脂质体转染法将空白质粒及重组子pRNAT-CMV3.2-mir101转染至SHG44细胞;检测microRNA-101的表达对于SHG44的增殖抑制的影响。结果:pRNAT-CMV3.2-mir101转染组细胞中mature microRNA-101呈高水平表达,pRNAT-CMV3.2-mir101转染组SHG44细胞中的EZH2蛋白表达量显著低于对照组的表达量,两者具有显著的统计学差异。利用上调microRNA-101的表达,可以引起人脑胶质瘤细胞在体外培养过程中的增殖抑制。结论:microRNA-101可以有效的沉默宿主细胞SHG44中靶基因EZH2的表达,并且诱导该细胞在体外培养过程中的增殖抑制。     

姜黄素对γδT细胞和神经胶质瘤细胞的作用比较

目的:比较姜黄素对γδT细胞和神经胶质瘤细胞的作用.方法:不同浓度姜黄素诱导γδT细胞和3株神经胶质瘤细胞,检测姜黄素的抑制率和测定γδT细胞的杀伤活性,检测诱导前后的细胞凋亡率.结果:姜黄素时神经胶质瘤细胞的生长抑制率明显高于对γδT细胞.姜黄素在低浓度时对γδT细胞杀伤活性影响不明显,2.5～10μm/L时,姜黄素诱导的γδT细胞杀伤活性最高,浓度超过20μmol/L时杀伤活性呈下降趋势.结论:一定浓度的姜黄素对肿瘤细胞有抑制作用,能增强γδT细胞杀伤活性,超过该浓度可明显抑制γδT细胞的增殖能力和杀伤活性及增加其凋亡率,而对肿瘤细胞作用不明显.γδT细胞杀伤活性增强可能与细胞内穿孔素和颗粒酶含量相关.     

CM通路AEA对人胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响

目的观察在神经酰胺(CM)通路中,大麻受体激动剂花生四烯酸乙醇胺(AEA)抑制人胶质瘤U251细胞增殖及在诱导细胞凋亡中的作用。方法采用噻唑蓝(MTT)法,分别测定不同浓度的CM(5~20μmol/L)和烟曲霉毒素(FB1)(10μmol/L)预处理24h后对AEA(1~10μmol/L)抑制人胶质瘤U251细胞增殖作用的影响;流式细胞仪Annexin-V/PI双染色法定量分析FB1(10μmol/L)预处理24h后对AEA(10μmol/L)促细胞早期凋亡作用的影响。结果不同浓度的AEA对人胶质瘤U251细胞增殖的抑制作用不同,且与CM具有协同作用;10μmol/L FB1预处理24h后可显著对抗AEA对人胶质瘤U251细胞增殖的抑制作用;AEA(10μmol/L)可诱导人胶质瘤U251细胞发生早期凋亡,而FB1(10μmol/L)预处理24h后凋亡发生率明显下降。结论 AEA可通过CM从头合成通路,与CM呈浓度依赖性协同,从而抑制人胶质瘤U251细胞的增殖并诱导其早期凋亡。     

不同浓度的异鼠李素对体外培养大鼠C6脑胶质瘤 细胞的影响

目的:探讨不同浓度的异鼠李素对体外培养大鼠C6脑胶质瘤细胞的影响。方法:将大鼠C6胶质瘤细胞随机分为空白对照组、药物组(20、40、80 mg/L异鼠李素)处理细胞,观察细胞生长状况、异鼠李素对体外培养C6脑胶质瘤细胞影响、细胞抑制率和存活率、加入不同浓度异鼠李素与C6脑胶质瘤细胞凋亡率之间的关系。结果:应用异鼠李素后,肿瘤细胞出现明显的凋亡及坏死改变。MTT比色法显示,加入异鼠李素的浓度越高,脑胶质瘤细胞增殖率越差,抑制率越高,存活率越低。40 mg/L异鼠李素组的脑胶质瘤细胞凋亡率最高;80 mg/L异鼠李素组的脑胶质瘤细胞的存活率最低。Western blot检测细胞内总AKT蛋白和Ser473位点AKT蛋白密度随加入异鼠李素浓度的增高变化呈反比关系。高效液相色谱法测定大鼠血浆、脑组织,显示均有面积不等的异鼠李素峰,表明血浆和脑组织均有异鼠李素分布,其中异鼠李素主要存在于脑组织。结论:低浓度异鼠李素能促使C6脑胶质瘤细胞发生凋亡,高浓度异鼠李素可以导致体外培养C6脑胶质瘤细胞发生凋亡和坏死,具有明显的抑制脑胶质瘤细胞生长的作用,并且发生机制与PI3K/AKT途径有紧密的联系。     

塞来昔布对神经胶质瘤细胞U251增殖及凋亡的影响

目的探讨非甾体类抗炎药(NSAIDs)对神经胶质瘤细胞增殖的影响。方法选用神经胶质瘤细胞U251,分别加入0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L和80μmol/L的塞来昔布进行处理。四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测U251细胞增殖水平及抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果随塞来昔布浓度的增加,神经胶质瘤细胞U251增殖水平明显降低,增值抑制率升高。不同浓度和不同作用时间,塞来昔布对U251细胞增殖抑制率有显著性差异(P<0.05);流式细胞术细胞凋亡率检测显示,80μmol/L塞来昔布处理48 h的U251细胞凋亡率(17.86%)较0μmol/L(11.23%)增高(P<0.05)。结论塞来昔布可抑制人胶质瘤细胞U251的生长和增殖,促进U251的凋亡发生,以80μmol/L为佳。     

直接和间接共培养条件下人脐带间充质干细胞对恶性胶质瘤细胞系SHG44生长的抑制作用

背景:SHG44是一种恶性胶质瘤细胞系,其生物学性状稳定、易于培养,广泛应用于动物成瘤模型制作,目前对其研究主要集中在运用药物、基因转染及电离辐射等途径抑制其生长,未见间充质干细胞对其作用的相关报道。目的:通过直接和间接共培养的方法,探讨人脐带间充质干细胞对恶性胶质瘤细胞系SHG44的作用,观察SHG44胶质瘤细胞数量及细胞周期的变化。方法:将人脐带间充质干细胞与SHG44细胞,分别在24孔板进行直接共培养,在Transwell板进行间接共培养,分别设对照组。培养3d后在荧光显微镜下观察,并收集Transwell板中的SHG44胶质瘤细胞,应用流式细胞术分别检测SHG44细胞周期。结果与结论:直接接触共培养组SHG44胶质瘤细胞数量少于对照组(P<0.05)。Transwell间接接触共培养组SHG44胶质瘤细胞数量与对照组相比,差异无显著性意义(P>0.05),其细胞周期位于G0/G1期的SHG44胶质瘤细胞比率高于对照组(P<0.05)。证实,体外培养的人脐带间充质干细胞可以通过直接及间接接触抑制恶性胶质瘤细胞系SHG44细胞的生长。     

胶质瘤细胞系SHG44中肿瘤干细胞存在的可能性

[摘要] 目的 探讨人类胶质瘤SHG44干细胞存在的可能性。方法 应用N2无血清培养基进行培养，碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子刺激细胞扩增；应用免疫组织化学染色对培养的细胞及其分化的细胞进行鉴定。结果 SHG44在无血清的培养条件下细胞的形态明显改变，部分细胞聚集成球，类似神经干细胞的神经球，呈悬浮状态生长，其余细胞贴壁生长，细胞体呈球形或椭球形，伸出双极或多极的突起。细胞表达波形蛋白和巢蛋白两种神经干细胞的标志物，细胞表达胶质纤维酸性蛋白；大部分细胞也表达神经元的标志物神经元特异性烯醇化酶、神经微丝蛋白200和βⅢ管蛋白。结论 体外的培养条件下，胶质瘤细胞系SHG44可以同时表达神经元和星形胶质细胞表型，具有干细胞的性质。     

Retracted Article: Long noncoding RNA PTPRG-AS1 regulates growth of glioma cells by sponging miR-185-5p

Previous studies have found that long noncoding RNA (lncRNA) protein tyrosine phosphatase, receptor type, G, antisense (PTPRG-AS1) was upregulated in glioma cells. Our study aimed to explore the detailed molecular mechanisms of PTPRG-AS1 involved in glioma progression. qRT-PCR assay was performed to measure the expressions of PTPRG-AS1 and microRNA-185-5p (miR-185-5p). Cell viability, migration, invasion, and apoptosis were determined by CCK-8 assay, colony formation assay, transwell assay, and flow cytometry assay. Autophagy was evaluated using GFP-LC3 puncta analysis and western blot. Luciferase reporter and RIP assays were employed to explore the association between PTPRG-AS1 and miR-185-5p. Our data showed PTPRG-AS1 was upregulated in glioma cells and tissues. Besides, high expression of PTPRG-AS1 was positively associated with a low survival rate. Upregulation of PTPRG-AS1 promoted proliferation, migration, invasion, colony formations, and autophagy, and inhibited cell apoptosis in U373-MG cells. By contrast, PTPRG-AS1 downregulation had the inverse effect in SHG44 cells. PTPRG-AS1 negatively regulated the expression of miR-185-5p in U373-MG and SHG44 cells and the expression of miR-185-5p was decreased in glioma tissues and cells. In addition, miR-185-5p overexpression suppressed proliferation, metastasis, colony formations, and autophagy, while inducing cell apoptosis in SHG44 cells. As expected, miR-185-5p depletion exhibited the inverse effect in U373-MG cells. Enhanced expression of miR-185-5p attenuated the effect of PTPRG-AS1 upregulation on U373-MG cells, while silencing of miR-185-5p undermined the effect of downregulation of PTPRG-AS1 on SHG44 cells. Our data disclosed that LncRNA PTPRG-AS1 was upregulated in glioma cells and tissues. PTPRG-AS1 regulated glioma proliferation, invasion, migration, apoptosis and autophagy by sponging miR-185-5p in vitro. A new signaling pathway PTPRG-AS1/miR-185-5p was first observed in glioma.

Previous studies have found that long noncoding RNA (lncRNA) protein tyrosine phosphatase, receptor type, G, antisense (PTPRG-AS1) was upregulated in glioma cells.     

人B7-H3两种异构体基因转染细胞株的建立及对T细胞协同刺激作用的比较

目的 建立2IgB7-H3基因转染细胞株和4IgB7-H3基因转染细胞株,探讨B7-H3两种异构体对T细胞的协同刺激作用.方法 RT-PCR 法从诱导成熟的DC细胞中克隆人B7-H3两种异构体基因2IgB7-H3和4IgB7-H3的编码区,经EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后插入pIRES2-EGFP真核表达载体构建pIRES2-EGFP/2IgB7-H3和pIRES2-EGFP/4IgB7-H3重组子,采用脂质体法转染脑胶质瘤细胞株SHG44.经G418抗性筛选,采用免疫荧光标记和流式细胞术分析2IgB7-H3和4IgB7-H3在SHG44细胞上的表达.继而,利用MTT法和酶联免疫吸附测定法（ELISA）分析两种异构体基因转染细胞株对T细胞体外增殖和细胞因子的分泌.结果 成功构建了可以稳定表达2IgB7-H3和4IgB7-H3的基因转染细胞株.体外生物学功能分析表明,与转染空载体的SHG44/mock细胞相比,SHG44/2IgB7-H3和SHG44/4IgB7-H3均能有效抑制T细胞增殖以及对IFN-γ的分泌,且两者的协同抑制作用不存在显著差异.结论 B7-H3两种异构体分子均能负性调控T细胞介导的免疫应答,但两者的生物学功能并不存在显著的差异.     

pEgr-hPTEN体外稳定转染对人脑胶质瘤SHG-44 细胞周期及增殖的影响

目的　探讨外源野生型PTEN基因对人脑胶质瘤SHG 4 4细胞周期及增殖的影响 ,阐明PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法　脂质体包裹重组质粒pEgr hPTEN体外转染内源性PTEN基因突变的SHG 4 4胶质瘤细胞 ;G4 18筛选稳定表达细胞株并扩增培养 ;采用细胞计数法检测肿瘤细胞增殖速度 ;流式细胞术检测肿瘤细胞周期的变化。结果　经 10到 2 0dG4 18筛选得到稳定表达细胞株 ;重组质粒pEgr hPTEN稳定转染可明显抑制SHG 4 4细胞的体外增殖 ,细胞周期明显改变 ,细胞从G1期到S期发生阻滞。结论　提示转染外源野生型PTEN基因可使SHG 4 4细胞周期阻滞于G1期 ,并可抑制肿瘤细胞增殖。     

RbAp46基因激活IGFBP-rP1基因在K562细胞中的表达

目的探讨视网膜母细胞瘤相关蛋白46(RbAp46)基因对白血病细胞的作用机制.方法将全长RbAp46基因的cDNA转染人白血病细胞系K562细胞及人脑膜胶质瘤细胞系SHG44细胞,建立稳定过度表达RbAp46基因的细胞株,观察细胞的生物学行为的同时,通过RT-PCR方法寻找表达差异的相关基因.结果过度表达RbAp46基因的K562细胞及SHG44细胞生长受抑.表现在K562/RbAp46细胞与K562/CMV细胞于生长第4天分别为(90.00±8.40)×104和(119.58±9.87)×104,SHG44/RbAp46细胞与SHG44/CMV细胞于生长第5天分别为(89.13±4.88)×104和(149.42±10.83)×104.生长第7天时,K562/RbAp46细胞和K562/CMV细胞集落数分别为131.67±15.57和250.33±26.31(P＜0.01),SHG44/RbAp46细胞和SHG44/CMV细胞集落数分别为50.78±6.77和206.67±37.18(P＜0.01).K562/RbAp46细胞与K562/CMV细胞S期细胞分别占(48.88±4.35)%和(62.78±4.78)%(P＜0.01),G0/G1期细胞分别占(29.10±4.14)%和(22.40±2.43)%(P＜0.05),而SHG44/RbAp46细胞与SHG44/CMV细胞G0/G1期细胞分别占65.6%和48.8%,S期细胞分别占22.6%和38.4%.过度表达RbAp46基因的K562细胞出现胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBP-rP1)基因的诱导性表达.结论在K562细胞中可能存在RbAp46和IGFBP-rP1基因之间的调控通路.