蜕膜细胞条件培养液对滋养细胞侵袭调节基因表达的影响

目的　探讨蜕膜细胞条件培养液（DCM）对滋养细胞侵袭调节基因表达的影响。方法　用体外培养早孕、晚孕蜕膜细胞的方法制备DCM,然后将其处理体外培养的早孕滋养细胞。用半定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分析早孕滋养细胞侵袭调节基因表达的变化。结果　正常培养的早孕滋养细胞中基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9、基质金属蛋白酶抑制物（TIMP-1）、尿激酶型纤溶酶原激活因子（u-PA）mRNA均有表达;而TIMP-2、纤溶酶原激活因子抑制因子（PAI-1）mRNA未见表达。早孕和晚孕DCM均能下调滋养细胞MMP-2、MMP-9、u-PAmRNA的表达,而上调TIMP-1mRNA的表达。早孕、晚孕DCM均能诱导滋养细胞PAI-1mRNA的表达,但对TIMP-2mRNA的表达未见有影响。结论　蜕膜细胞可能通过调节滋养细胞中MMP-2、MMP-9与TIMP-1之间的平衡以及u-PA与PAI-1之间的平衡,而影响滋养细胞的侵袭能力。     

蜕膜细胞条件培养液对卵巢癌细胞株COC1侵袭相关基因表达的影响

目的 研究蜕膜细胞条件培养液(DCM)对卵巢癌相关侵袭基因表达的影响。方法 原代培养早孕蜕膜细胞及晚孕蜕膜细胞并提取DCM，用DCM处理卵巢癌细胞株COC1，利用RT-PCR法对卵巢癌侵袭相关基因的表达进行分析。结果 卵巢癌细胞株COC1表达基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-2)及纤溶酶原抑制剂(PAI-1)，而不表达MMP-9、TIMP-1及尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)。早孕及晚孕DCM能显著下调卵巢癌细胞株COC1 MMP-2的表达(P＜0．01)；早孕及晚孕DCM处理的卵巢癌细胞株COC1也表达TIMP-2、PAI-1mRNA，且有显著差异（P＜0．00）。结论 DCM可以通过改变卵巢癌细胞株COC1侵袭基因MMP-2／TIMP-2以及u-PA／PAI-1之间的平衡，从而降低卵巢癌细胞株COC1的侵袭能力。     

蜕膜细胞条件培养液对卵巢癌细胞株COC1侵袭相关基因表达的影响

目的 研究蜕膜细胞条件培养液(DCM)对卵巢癌相关侵袭基因表达的影响。方法 原代培养早孕蜕膜细胞及晚孕蜕膜细胞并提取DCM,用DCM处理卵巢癌细胞株COCl,利用RT-PCR法对卵巢癌侵袭相关基因的表达进行分析。结果卵巢癌细胞株COC1表达基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶抑制剂(TIMP-2)及纤溶酶原抑制剂(PAI-1),而不表达MMP-9、TIMP-1及尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)。早孕及晚孕DCM能显著下调卵巢癌细胞株COC1 MMP-2的表达(P<0.01);早孕及晚孕DCM处理的卵巢癌细胞株COC1也表达TIMP-2、PAI-1 mRNA,且有显著差异(P<0.01)。结论DCM可以通过改变卵巢癌细胞株COCl侵袭基因MMP-2/TIMP-2以及B-PA/PAI-1之间的平衡,从而降低卵巢癌细胞株COCl的侵袭能力。     

蜕膜细胞条件培养液中TNF-α及EGF对卵巢癌细胞侵袭基因uPA/PAI-1表达的影响

目的 研究蜕膜细胞条件培养液(decidual cell conditioned media,DCM)中肿瘤坏死因子(TNF-α)及表皮生长因子(EGF)对卵巢癌细胞株(COC1)侵袭基因尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)/纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)表达的影响.方法 原代培养早孕蜕膜细胞及晚孕蜕膜细胞并提取蜕膜细胞条件培养液(DCM),分别将加有TNF抗体及EGF抗体的DCM处理卵巢癌细胞株(COC1),利用RT-PCR法对卵巢癌侵袭基因uPA/PAI-1的表达进行分析.结果 COC1表达PAI-1,不表达uPA.与DCM组比较,TNF-α抗体组可以使COC21 PAI-1mRNA的表达上调,二者之间差异有显著性(P＜0.01).与DCM组比较,FGF抗体组PAI-1mRNA的表达不明显,呈下调的趋势,二者之间亦差异有显著性(P＜0.01).结论 早孕DCM中TNF-α降低了DCM抑制COC1纤溶酶原系统作用的能力;而EGF增加了DCM的上述能力.同时说明纤溶酶原系统在COC1的侵袭能力方面不起主导作用.     

蜕膜细胞条件培养液中TNF-α及EGF对卵巢癌细胞株COC1侵袭基因MMPs/TIMPs表达的影响

目的研究蜕膜细胞条件培养液(decidual conditioned media,DCM)中TNF-α及EGF对卵巢癌细胞株COC1侵袭基因基质金属蛋白酶(MMPs)/基质金属蛋白酶抑制剂(TIMPs)表达的影响。方法原代培养早孕蜕膜细胞并提取DCM,用DCM及分别加入TNF-α及EGF抗体的DCM处理COC1,利用RT-PCR法对COC1侵袭基因MMPs/TTMPs的表达进行分析。结果COC1表达MMP-2,TIMP-2,而不表达MMP-9,TIMP-1。早孕EGF-Ab组与对照组(DCM组)比较,前者可以使COC1的MMP-2 mRNA表达降低,且差异有显著性(P<0.01)。而TNF-α抗体组可以降低MMP-2 mRNA的表达,但与对照组比较差异无显著性(P=0.280)。与DCM组比较,EGF-Ab组可以使COC1的TIMP-2 mRNA表达增加,两者差异有显著性(P<0.01)。而TNF-α抗体组有增加TIMP-2 mRNA表达,但差异无显著性(P>0.05)。结论早孕DCM中TNF-α可能抑制COC1侵袭力。早孕DCM中EGF可能促进COC1侵袭力。     

子癎前期患者血清对人早孕细胞滋养细胞活力和浸润功能的影响

目的 探讨子癎前期患者血清对人早孕细胞滋养细胞活力和浸润功能的影响。方法采用组织块贴壁法培养人早孕期（孕6～8周）细胞滋养细胞,传代后待细胞长满至70％～80％,分别加入正常孕妇血清（正常组）和子癎前期患者血清（子癎前期组）培养24h;CCK-8法测定细胞活力;Transwell技术检测细胞滋养细胞的浸润功能;RT—PCR法检测滋养细胞MMP-2、MMP-9和PAI-1 mRNA的表达。结果子癎前期组细胞滋养细胞活力和浸润能力均低于正常组（P〈0．05和P〈0．01）。与正常组比较,子癎前期组细胞滋养细胞MMP-2和MMP-9 mRNA的表达明显下降,而PAI-1 mRNA的表达明显升高,差异均有统计学意义（P〈0．01）。正常组和子痴前期组中,MMP-2 mRNA与PAI-1 mRNA的表达均呈负相关（r=-0．985,P〈0．01;r=-0．933,P〈0．05）;MMP-9 mRNA与PAI-1 mRNA的表达无相关性。结论子癎前期患者血清可能通过调节细胞滋养细胞中MMP-2、MMP-9 和PAI-1的表达而影响细胞的浸润能力。     

低氧对人鼻咽癌细胞尿激酶型纤溶酶原激活物系统表达的影响

[摘要] 目的 研究低氧微环境对鼻咽癌细胞（CNE-2Z）尿激酶型纤溶酶原激活物（u-PA）系统表达的影响。方法 以混合气体（5% CO2, 95% N2, O2<0.1%）置换法处理24 h,建立CNE-2Z细胞体外低氧培养模型。RT-PCR检测PAI-1、u-PA、u-PAR在CNE-2Z细胞的mRNA表达;酶联吸附法（ELISA）测定PAI-1和u-PA蛋白表达;细胞免疫化学方法检测u-PAR蛋白表达。结果 低氧处理后,CNE-2Z细胞u-PA系统中PAI-1 mRNA和蛋白表达均显著增加（P<0.05）;细胞裂解液中u-PA蛋白含量降低（P<0.001）,但u-PA mRNA含量无显著变化（P＞0.05）;而对u-PAR mRNA和蛋白表达均无显著影响（P＞0.05）。结论 低氧能影响人鼻咽癌细胞CNE-2Z u-PA系统的表达,主要表现为上调PAI-1的表达,并可能通过促进u-PA/u-PAR复合体内吞降解的机制降低u-PA蛋白表达,但对u-PAR的表达不产生显著影响。低氧可能通过影响u-PA系统的表达而改变CNE-2Z细胞的侵袭转移能力。     

IL-18对人早孕滋养细胞MMP-9和TIMP-1 mRNA表达的影响

目的研究不同浓度白细胞介素18(interleukin-18,IL-18)对人早孕滋养细胞MMP-9和TIMP-1表达的影响。方法分离、培养早孕期滋养细胞,以不同浓度的IL-18作用于体外培养的细胞滋养细胞。PCR(Real-TimePCR)检测MMP-9及TIMP-1 mRNA的表达。结果随着IL-18浓度的增高,滋养细胞中MMP-9 mRNA的表达水平下降(P<0.01),TIMP-1 mRNA的表达水平则相反(P<0.05)。结论 IL-18能减弱滋养细胞表达MMP-9的能力,而增强TIMP-1的表达,IL-18可能通过节制性调节MMPs/TIMPs平衡,进而影响滋养细胞的侵袭。     

子癇前期患者血清对人早孕细胞滋养细胞活力和浸润功能的影响

目的 探讨子(癎)前期患者血清对人早孕细胞滋养细胞活力和浸润功能的影响.方法 采用组织块贴壁法培养人早孕期(孕6-8周)细胞滋养细胞,传代后待细胞长满至70%-80%,分别加入正常孕妇血清(正常组)和子(癎)前期患者血清(子(癎)前期组)培养24 h;CCK-8法测定细胞活力;Transwell技术检测细胞滋养细胞的浸润功能;RT-PCR法检测滋养细胞MMP-2、MMP-9和PAI-1 mRNA的表达.结果 子(癎)前期组细胞滋养细胞活力和浸润能力均低于正常组(P<0.05和P<0.01).与正常组比较,子(癎)前期组细胞滋养细胞MMP-2和MMP-9 mRNA的表达明显下降,而PAI-1 mRNA的表达明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01).正常组和子(癎)前期组中,MMP-2 mRNA与PAI-1 mRNA的表达均呈负相关(r=-0.985,P<0.01;r=-0.933,P<0.05);MMP-9 mRNA与PAI-1 mRNA的表达无相关性.结论 子(癎)前期患者血清可能通过调节细胞滋养细胞中MMP-2、MMP-9和PAI-1的表达而影响细胞的浸润能力.     

基质金属蛋白酶及其抑制物在妊娠滋养细胞疾病中的表达分析

目的探讨基质金属蛋白酶（MMP）及其抑制物（TIMP）在妊娠滋养细胞疾病中的表达水平与其侵袭程度的关系。方法采用免疫组织化学PV-6000法测定49例葡萄胎（其中8例发生恶变，为葡萄胎恶变组；另外41例为葡萄胎未恶变组）、6例侵蚀性葡萄胎（侵蚀性葡萄胎组）、2例绒毛膜癌（绒毛膜癌组）和18例正常早孕绒毛组织（正常绒毛组）的MMP-7、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2的表达及分布情况。结果MMP-7、MMP-9、TIMP-2、MMP-9／TIMP-1值在绒毛膜癌、侵蚀性葡萄胎及葡萄胎恶变组中的表达分别高于正常绒毛和葡萄胎未恶变组（F=10．950，7．760，7．304，3．442；P均〈0．05）；MMP-7、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2表达在正常绒毛和葡萄胎未恶变组之间差异均无统计学意口．结论MMP和TIMP表达水平的高低与妊娠滋养细胞疾病的侵袭程度有关。     

自发性高血压大鼠Klotho与MMP-9, TIMP-1和 PAI-1基因的表达及福辛普利和缬沙坦对其的干预作用

目的：观察自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rats,SHR）肾脏组织中Klotho、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1）和纤溶酶原激活物抑制剂-1（plasminogen activator inhibitor,PAI-1）基因的表达状况,探讨其在高血压肾间质纤维化中的作用及福辛普利和缬沙坦的肾保护作用机制。 方法：22周龄雄性SHR 20只随机分为4组（每组5只）：高血压组（SHR组）、fosinopril组［Fos组,10 mg/( kg·d)灌胃］,Valsartan组［Val组,50 mg/( kg·d)灌胃］和fosinopril+valsartan组［Fos＋Val组,fosinopril 10 mg/( kg·d)+valsartan 50 mg/( kg·d)灌胃］。22周龄雄性Wistar Kyoto大鼠（WKY组）5只作为对照组。用药物干预连续喂养8周,分别用RT-PCR和Western 印迹检测肾脏组织中Klotho,MMP-9,TIMP-1和PAI-1 mRNA和蛋白的表达水平。 结果：SHR组肾脏组织Klotho mRNA和蛋白表达较WKY组明显下调(P＜0.01),而MMP-9,TIMP-1和PAI-1mRNA和蛋白的表达较WKY组均明显上调(P＜0.01);用fosinopril和/或valsartan干预后,可上调Klotho mRNA在Fos,Fos＋Val组(P＜0.01）和Val组(P＜0.05）的表达,上调Klotho 蛋白在Val,Fos＋Val组(P＜0.01）和Fos组(P＜0.05）的表达。同时下调MMP-9,TIMP-1,PAI-1 mRNA和蛋白在Fos,Val,Fos＋Val组的表达(P＜0.01）。相关分析表明：Klotho mRNA和蛋白的表达与MMP-9,TIMP-1,PAI-1 mRNA (r值分别为-0.864,-0.725和-0.785,P＜0.01)和蛋白（r值分别为-0. 614,-0.579和-0.552,P＜0.05）的表达均呈负相关。 结论：高血压肾损害与抗衰老基因Klotho和基质降解相关基因MMP-9,TIMP-1,PAI-1关系密切;Klotho基因与MMP-9,TIMP-1和PAI-1基因的表达呈负相关。上调抗衰老基因Klotho表达的药物fosinopril 和/或valsartan可改善Klotho-MMPs/TIMPs-PAI-1的表达,这可能是其抗肾纤维化的重要机制。     

纤溶酶原激活因子及抑制因子在多囊卵巢综合征患者卵巢中的表达

\[摘要\]目的探讨纤溶酶原激活因子\[组织型纤溶酶原激活因子(t-PA)、尿激酶型纤溶酶原激活因子(u-PA)\]及其抑制因子1(PAI-1)与多囊卵巢综合征(PCOS)发病机制之间的关联。方法选择2007年12月至2008年10月于中南大学湘雅三医院接受宫腹腔镜检查及手术的PCOS患者共30例及正常卵巢活检标本20例,用化学发光法检测血清性激素水平,免疫组化方法检测t-PA、u-PA及PAI-1的表达。结果PCOS组u-PA、t-PA在颗粒细胞中表达阳性率分别为20.00%及26.67%,在卵泡膜细胞中表达阳性率分别为33.33%及20.00%,对照组u-PA、t-PA在颗粒细胞中表达阳性率分别为65.00%及75.00%,在卵泡膜细胞中表达阳性率分别为75.00%及50.00%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。PCOS组PAI-1在卵泡膜细胞中表达阳性率为56.67%,在间质细胞中表达阳性率为63.33%,对照组PAI-1在卵泡膜细胞中表达阳性率为10.00%,在间质细胞中表达阳性率为10.00%,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论PCOS患者卵巢组织中纤溶酶原激活、抑制因子的异常表达与PCOS排卵障碍的发生密切相关。     

自发性高血压大鼠Klotho与MMP-9,TIMP-1和PAI-1基因的表达及福辛普利和缬沙坦对其的干预作用（英文）

目的：观察自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rats,SHR）肾脏组织中Klotho、基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（tissue inhibitor of metallo-proteinase-1,TIMP-1）和纤溶酶原激活物抑制剂-1（plasminogen activator inhibitor,PAI-1）基因的表达状况,探讨其在高血压肾间质纤维化中的作用及福辛普利和缬沙坦的肾保护作用机制。方法：22周龄雄性SHR20只随机分为4组（每组5只）：高血压组（SHR组）、fosinopril组[Fos组,10mg/（kg.d）灌胃],Valsartan组[Val组,50mg/（kg·d）灌胃]和fosinopril＋valsartan组[Fos＋Val组,fosinopril10mg/（kg·d）＋valsartan50mg/（kg·d）灌胃]。22周龄雄性Wistar Kyoto大鼠（WKY组）5只作为对照组。用药物干预连续喂养8周,分别用RT-PCR和Western印迹检测肾脏组织中Klotho,MMP-9,TIMP-1和PAI-1mRNA和蛋白的表达水平。结果：SHR组肾脏组织Klotho mRNA和蛋白表达较WKY组明显下调（P〈0.01）,而MMP-9,TIMP-1和PAI-1mRNA和蛋白的表达较WKY组均明显上调（P〈0.01）;用fosinopril和/或valsar-tan干预后,可上调Klotho mRNA在Fos,Fos＋Val组（P〈0.01）和Val组（P〈0.05）的表达,上调Klotho蛋白在Val,Fos＋Val组（P〈0.01）和Fos组（P〈0.05）的表达。同时下调MMP-9,TIMP-1,PAI-1mRNA和蛋白在Fos,Val,Fos＋Val组的表达（P〈0.01）。相关分析表明：Klotho mRNA和蛋白的表达与MMP-9,TIMP-1,PAI-1mRNA（r值分别为-0.864,-0.725和-0.785,P〈0.01）和蛋白（r值分别为-0.614,-0.579和-0.552,P〈0.05）的表达均呈负相关。结论：高血压肾损害与抗衰老基因Klotho和基质降解相关基因MMP-9,TIMP-1,PAI-1关系密切;Klotho基因与MMP-9,TIMP-1和PAI-1基因的表达呈负相关。上调抗衰老基因Klotho表达的药物fosinopril和/或valsartan可改善Klotho-MMPs/TIMPs-PAI-1的表达,这可能是其抗肾纤维化的重要机制。     

狼疮性肾炎中u—PA和PAI—1的表达及其意义

目的了解尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)及其Ⅰ型抑制因子(PAI-1)在狼疮性肾炎(LN)肾小球病变中的表达及其意义。方法对50例不同类型的LN和10例原发性肾小球轻微病变的肾活检组织,采用免疫组化及图象分析法比较观察了u-PA和PAI-1在肾小球的表达强度,并与肾小球增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞数和Ⅳ型胶原染色强度作相关分析。结果u-PA和PAI-1在各型LN病变肾小球中的表达,均比肾小球轻微病变明显增强(P<0.05或<0.01),并以LN-IV型为最明显。PAI-1的染色反应强于同组的u-PA,两者有显著差异(P<0.05)。肾小球u-PA和PAI-1的表达均与PCNA阳性细胞核数呈正相关(P<0-05)。而且PAI-1的表达还与肾小球内IV型胶原沉积呈正相关(P<0.05)。结论狼疮性肾炎中u-PA和PAI-1的异常表达与肾小球的病变程度和病理类型相关,并可能是影响狼疮性肾炎发生发展的重要因素。     

乳腺癌患者血浆尿激酶型纤溶酶原激活系统的变化及其意义

目的 :观察乳腺癌患者血浆尿激酶型纤溶酶原激活物 (u -PA)及其特异性受体 (u -PAR)和纤溶酶原激活物抑制物 - 1 (PAI- 1 )含量的变化及其与肿瘤转移和预后的关系。方法 :用ELISA法测定 2 2例乳腺癌患者和 2 1例正常人血浆中u -PA、u -PAR和PAI- 1含量。结果 :乳腺癌患者的血浆u -PA、u -PAR和PAI - 1含量均显著升高 (P <0 .0 5～ 0 .0 1 ) ;中、晚期组u -PA显著高于早期组 (P <0 .0 5 ) ,已转移组u -PA、u -PAR和PAI- 1较未转移组显著升高 (P <0 .0 5～ 0 .0 1 )。结论 :乳腺癌患者血浆中u -PA、u -PAR和PAI - 1含量不同程度升高 ,并与肿瘤转移和预后相关     

尿激酶型纤溶酶原活化物和基质金属蛋白酶类在腹主动脉瘤组织中的表达

目的探讨尿激酶型纤溶酶原活化物（u-PA）和明胶酶A（MMP-2）、明胶酶B（MMP-9）在腹主动脉瘤（AAA）组织中的表达及产生的源泉.方法用u-PA和MMP-2、MMP-9单克隆抗体以免疫组织化学方法在30例AAA组织和30例正常腹主动脉组织切片上检测u-PA和MMP-2、MMMP-9抗原（蛋白）;用u-PA的寡核苷酸探针和MMP-2、MMP-9的cDNA探针以原位杂交方法,在上述AAA组织和正常腹主动脉组织的冰冻切片上探测u-PA和MMP-2、MMP-9的mRNA.结果u-PA和MMP-9主要在AAA组织中层和外膜巨噬细胞表达,在正常腹主动脉组织中无表达;MMP-2在AAA组织中主要由中层平滑肌细胞表达,在正常腹主动脉组织中无表达.结论由巨噬细胞产生的u-PA直接激活原MMP-2和原MMP-9,在AAA形成和扩张中起着关键性作用.