消痰散结方对胃癌基质金属蛋白酶及其抑制剂表达的影响

目的：观察消痰散结方对裸鼠胃癌组织及体外培养的胃癌细胞中基质金属蛋白酶及其抑制剂表达的影响,初步探讨消痰散结方抑制胃癌浸润转移的作用机理。方法：体外培养MKN-45人胃癌细胞;建立裸鼠MKN-45人胃癌模型,采用免疫组化(SP法)检测裸鼠胃癌组织和胃癌细胞中基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达。结果：中药组胃癌组织和胃癌细胞中基质金属蛋白酶的表达水平明显低于生理盐水组和空白对照组,而金属蛋白酶抑制剂的表达结果与之相反。结论：消痰散结方抑制胃癌细胞浸润转移的作用机理,可能与其影响基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达、减少对细胞外基质和基底膜的降解有关。     

消痰散结方对人胃癌裸鼠移植瘤血管生成拟态的影响

目的 探讨消痰散结方对人胃癌裸鼠移植瘤血管生成拟态（vasculogenic mimicry,VM）的影响及其机制。 方法 30只裸鼠右前肢腋部皮下移植人胃癌瘤块建立荷瘤模型。造模后的荷瘤鼠随机分为模型组（10只）、消痰散结组（10只）和多西环素组（10只）,分别给予相应药物灌胃治疗4周后,脱颈椎处死荷瘤鼠。剥取肿瘤,称取瘤质量,计算抑瘤率;计数肿瘤中VM的数量;运用免疫组织化学法检测肿瘤中基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）和基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）蛋白的表达。     

消痰散结方对血管生成拟态相关蛋白表达的影响

目的探讨消痰散结方对血管生成拟态（VM）相关蛋白表达的影响。方法30只裸鼠皮下移植人胃癌瘤块建立荷瘤模型。造模后的荷瘤鼠随机分为生理盐水组、消痰散结组、盐酸多西环素组,每组10只,分别给予相应药物灌胃治疗4周后,脱颈椎处死荷瘤鼠。观察移植瘤中VM的形态结构,计数VM的数量;运用免疫组织化学法检测肿瘤中基质金属蛋白酶2（MMP-2）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和层黏连蛋白5γ2链（LN-5γ2）等VM相关蛋白的表达。结果人胃癌裸鼠移植瘤可以形成VM。消痰散结组和盐酸多西环素组VM数量明显少于生理盐水组,差异有统计学意义（P〈0．01）。消痰散结组和盐酸多西环素组MMP-2、MMP-9和LN-5γ2蛋白的阳性表达低于生理盐水组,差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论消痰散结方可抑制裸鼠移植瘤VM的形成,其机制可能与下调MMP-2、MMP-9和LN-5γ2蛋白表达有关。     

消痰散结方治疗中晚期胃癌的疗效观察

目的：观察消痰散结方治疗中晚期胃癌的疗效．方法：将78例中晚期胃癌患者随机分为中药组和化疗组，中药组给予消痰散结方，化疗组给予FM方案化疗，观察对比两纽疗效．结果：中药组总有效率82．5%，化疗组总有效率51．3%，两组有显著统计学差异（P〈0．05）．结论：中药消痰散结方治疗中晚期胃癌有良好作用．     

消痰散结方对胃癌组织核转录因子活性表达影响的研究

目的：通过建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型,观察消痰散结方对胃癌组织核转录因子（NF-κB）活性表达的影响,探讨消痰散结方抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法：采用OB胶粘贴法建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植模型,随机分成模型组,消痰散结低、中、高剂量组,5-Fu组,每组8只,采用EMSA方法检测胃癌组织NF-κB活性的表达。结果：①消痰散结方低、中、高剂量组的平均瘤重与模型组相比,有显著差异（P〈0.01）;②消痰散结方低、中、高剂量组NF-κB的活性表达与模型组相比逐渐降低,且呈明显的剂量依赖效应。消痰散结方低剂量组NF-κB的活性表达与模型组相比有统计学意义（P〈0.05）,消痰散结方中、高剂量组、5-Fu组NF-κB的活性表达与模型组相比,P〈0.01,有显著统计学意义,但组间相比无统计学意义。结论：①消痰散结方有明显的抑制胃癌细胞生长的作用;②消痰散结方可能通过抑制NF-κB活性而阻断胃癌细胞增殖进程,可有效抑制胃癌发展。     

消痰散结方联合卡培他滨治疗晚期胃癌临床研究

目的:研究探讨消痰散结方联合卡培他滨维持化疗对晚期胃癌复发转移的影响。方法:选自晚期胃癌患者80例,随机抽取平均分两组,各有40例,对照组采取卡培他滨维持化疗,观察组采取消痰散结方联合卡培他滨维持化疗,观察比较两组治疗后1年内复发、转移及生存情况,并比较治疗前后血清肿瘤标志物、卡氏功能评分(KPS)、血清基质金属蛋白酶3(MMP-3)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、T淋巴细胞亚群的变化,观察化疗期间不良反应发生率。结果:观察组总复发转移率25.00%,明显低于对照组总复发转移率55.00%(P<0.05);观察组1年生存率67.50%明显高于对照组1年生存率32.50%(P<0.05)。观察组治疗后血清肿瘤标志物、KPS评分、T淋巴细胞亚群均明显改善(P<0.05),MMP-3、MMP-9有所升高,但升高幅度明显小于对照组(P<0.05),组间比较均有统计学差异(P<0.05)。观察组的疾病控制率80.00%明显优于对照组50.00%(P<0.05);观察组化疗期间总不良反应率10.00%明显低于对照组42.50%(P<0.05)。结论:晚期...     

消痰散结方对裸鼠胃癌原位移植瘤模型P16基因甲基化的影响

目的观察消痰散结方对胃癌裸鼠原位移植瘤模型P16基因甲基化的影响,探讨消痰散结方抗癌作用机制。方法培养胃癌细胞系MKN-45,制备胃癌裸鼠原位移植瘤模型,分为模型对照组和中药组。中药组给予消痰散结方水煎剂(含原药材2.51g/mL),模型对照组给予生理盐水,连续6周。称重法测定抑瘤率,RT-PCR法测定P16基因表达,Methylight法测定P16基因甲基化水平。结果消痰散结方能抑制肿瘤生长,抑瘤率达54.82%。消痰散结方能逆转P16基因甲基化,增加P16mRNA表达,与模型对照组比较差异有统计学意义(P0.01)。结论消痰散结方可以有效抑制胃癌细胞生长,逆转P16基因甲基化可能是其作用机制之一。     

消痰散结方对裸鼠人胃癌组织环氧化酶(COX-2)蛋白表达的影响

目的:通过观察消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45原位移植模型COX-2蛋白表达的影响,探讨其抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法:采用OB胶粘贴法,建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植模型,随机分成模型组,消痰散结方低、中、高剂量组,5-Fu组,每组8只,运用免疫组化方法检测胃癌组织环氧化酶(COX-2)蛋白的表达。结果:①消痰散结方低、中、高剂量组的平均瘤重与模型组相比,有显著差异(P<0.01);②消痰散结方中剂量组COX-2蛋白阳性表达率与模型组相比P<0.05,有统计学意义;③消痰散结方高剂量组COX-2蛋白阳性表达率与模型组相比有显著统计学意义,P<0.01,与5-Fu组相比无统计学差异,P>0.05。结论:消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45细胞原位移植瘤有较好的抗肿瘤作用,抑制胃癌细胞增殖作用是多靶点的,有较好稳定下调胃癌细胞COX-2蛋白表达的作用,并且呈剂量依赖性。     

消痰散结方对胃癌细胞系P16基因甲基化的影响

目的 研究消痰散结方含药血清对胃癌细胞系基因甲基化的影响,探讨该方抗癌作用机制.方法 培养胃癌细胞系MKN45、BGC823,制备消痰散结方药物血清.细胞分为空白对照组、空白血清组(无药大鼠血清)、药物血清组(消痰散结方药物血清)、5-Aza-CAR组(5-Aza-CAR).CCK-8测定细胞活力,RT-PCR法测定P16基因表达,Methylight法测定基因P16甲基化水平.结果 5-Aza-CAR和消痰散结方含药血清给药后72h后细胞增殖受到明显抑制,在MKN45细胞系中经过5-Aza-CdR和消痰散结方含药血清给药后72h后细胞增殖分别降低为76.14%和83.15%,在BGC823细胞系中经过5-Aza-CdR和消痰散结方含药血清给药后72h后细胞增殖分别降低为76.17%和83.44%,且消痰散结方药物血清组细胞增殖率明显低于5-Aza-CdR组.5-Aza-CAR和消痰散结方药物血清均能逆转P16基因甲基化,增加P16 mRNA表达,与空白对照组比较有统计学差异(P<0.05).结论 消痰散结方可以有效抑制胃癌细胞生长,逆转P16基因甲基化可能是其作用机制之一.     

消痰散结方对胃癌组织细胞粘附分子CD44、CD49的影响

目的:探讨消痰散结方对胃癌的抑制作用及其可能的作用机制。方法:用流式细胞仪检测消痰散结方和化疗药环磷酰胺(CTX)对胃癌组织细胞粘附分子表达的影响。结果:消痰散结方的抑瘤率达45.2%,且消痰散结方能降低 CD44、CD49 d 的表达。结论:消痰散结方可能通过影响肿瘤组织间质中某些粘附分子的表达而起到阻滞肿瘤生长转移的作用。     

消痰散结方对裸鼠人胃癌细胞增殖相关蛋白表达的影响

目的:探讨消痰散结方抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法:采用OB胶粘贴法建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型,随机分成模型组,消痰散结低、中、高剂量组,5-Fu组,每组8只,观察消痰散结方干预胃癌组织NF-κBP65蛋白、COX-2蛋白表达的影响及相关性。结果:①消痰散结方中、高剂量组、5-Fu组NF-κBP65蛋白的阳性表达与模型组相比P0.05,有统计学意义;②消痰散结方中剂量组COX-2蛋白阳性表达率与模型组相比P0.05,有统计学意义,消痰散结方高剂量组COX-2蛋白阳性表达率与模型组相比有显著统计学差异,P0.01;③胃癌细胞中NF-κBP65蛋白与COX-2蛋白表达存在正相关(r=0.952,P0.01)。结论:胃癌MKN-45细胞中存在着活化的NF-κB及高表达的COX-2蛋白,并且存在线性相关,消痰散结方可能通过其抑制NF-κB活性,阻断了NF-κB对COX-2的活性调控,使胃癌细胞增殖受到抑制,从而阻断胃癌发展,控制胃癌复发与转移。     

基于差异蛋白质组学解析消痰散结方对胃癌裸鼠模型的影响

目的基于差异蛋白质组学探讨消痰散结方干预胃癌裸鼠模型的部分效应机制。方法20只BALB／c—nu／nu裸鼠随机分为模型组和干预组,每组10只,采用皮下移植人胃癌MKN-45瘤块制备胃癌裸鼠动物模型。建模成功后,模型组、干预组分别灌胃给予生理盐水、消痰散结方,剂量均为0．4mL／（只·d）,14d后全部处死取材。双向凝胶电泳（2-DE）分离肿瘤组织总蛋白,基质辅助激光解吸电离时间飞行串联质谱及数据库查询鉴定差异表达蛋白质。结果获得分辨率高和重复性、稳定性好的肿瘤组织2-DE图谱。经质谱鉴定的30个差异表达蛋白质中与细胞周期、增殖、分化与凋亡作用相关的4个蛋白分别是钙调蛋白、钙周期素结合蛋白、热休克蛋白27、热休克蛋白60。与模型组比较,在干预组中热休克蛋白27表达明显增高,热休克蛋白60、钙调蛋白、钙周期素结合蛋白表达显著降低。结论对细胞周期、增殖、分化与凋亡相关蛋白的调节可能是消痰散结方治疗胃癌的效应机制。     

消痰散结方对MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤微卫星不稳定的影响

目的探讨消痰散结方对MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤微卫星不稳定的作用机制。方法采用MKN-45人胃癌细胞株建立裸鼠皮下瘤模型皮下传3代作为实验模型的瘤源,采用0B胶黏合法建立人胃癌裸鼠原位移植瘤模型。20只模型裸鼠分为模型组和中药组。中药组予消痰散结方干预6周后,测瘤质量,计算抑瘤率并检测5个微卫星不稳定位点（D17S250、D2S123、D5S346、Bat-25和Bat-26）。结果中药组的瘤质量明显低于模型组（P〈0．01）,其抑瘤率为40．84％。模型组的肿瘤组织中能扩增到5个微卫星位点,其中微卫星位点D2S123、D5S346出现某些延长和缩短。使用消痰散结方干预6周后,微卫星位点D2S123、D5S346的变异趋于稳定。结论消痰散结方能抑制MKN-45人胃癌裸鼠原位移植瘤的微卫星不稳定。     

消痰散结方对MKN-45人胃癌细胞E-Cad表达的影响

目的:观察消痰散结方对裸鼠胃癌组织中胃癌细胞粘附分子E-Cad表达的影响,初步探讨消痰散结方抑制胃癌细胞转移的作用环节.方法:制备消痰散结药物血清,体外培养MKN-45人胃癌细胞,拟消痰散结方药物血清干预培养细胞,采用免疫组化ABC法检测胃癌组织中E-Cad的表达.结果:中药组胃癌组织中E-Cad表达水平明显高于空白对照组.结论:消痰散结方抑制胃癌细胞转移的环节可能和影响粘附分子的表达,从而影响细胞的粘附性机制有关.     

消痰散结方对荷瘤裸鼠胃癌组织中成纤维细胞活化蛋白表达的影响

目的：观察消痰散结方对MKN-45原位移植瘤裸鼠胃癌组织中成纤维细胞活化蛋白（fibroblast activation protein,FAP）表达的影响,探讨消痰散结方防止胃癌复发转移的作用机制。方法：建立人胃癌MKN-45裸鼠原位移植瘤模型,将40只模型鼠随机分为模型组、生理盐水组、中药组及化疗组,每组10只。观察各组荷瘤鼠肿瘤生长情况及抑瘤率;观察各组荷瘤鼠胃癌组织FAP蛋白及mRNA表达。结果：消痰散结方可明显抑制裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤的生长,下调胃癌组织中FAP蛋白及mRNA的表达。结论：消痰散结方可以下调FAP蛋白及mRNA的表达,可能是其抗胃癌复发转移的机制之一。     

消痰散结方对裸鼠胃癌原位移植瘤模型E-cad基因甲基化的影响

目的:研究消痰散结方对胃癌裸鼠原位移植瘤模型基因甲基化的影响,探讨消痰散结方抗癌作用机制。方法:培养胃癌细胞系MKN-45,制备胃癌裸鼠原位移植瘤模型,造模后分为模型对照组和中药组,分别给予生理盐水和消痰散结方水煎剂。称重法测定抑瘤率,RT-PCR法测定E-cad基因表达,Methylight法测定E-cad基因甲基化水平。结果:消痰散结方能抑制肿瘤生长以及转移,抑瘤率达45.17%。消痰散结方能逆转E-cad基因甲基化,增加E-cad mRNA表达,与模型对照组比较,差异有非常显著性意义(P0.01)。结论:消痰散结方可以有效抑制胃癌细胞生长和转移,逆转E-cad基因甲基化可能是其作用机制之一。     

消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白及mRNA表达的影响

目的:通过观察消痰散结方对裸鼠人胃癌MKN-45原位移植模型端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白及mRNA表达的影响,探讨其抑制胃癌细胞增殖的作用机制。方法:采用OB胶粘贴法建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植瘤模型,随机分成模型组、消痰散结方低剂量组、消痰散结方中剂量组、消痰散结方高剂量组、5-Fu组,每组8只,运用免疫组化、实时荧光定量RT-PCR方法检测hTERT蛋白及mRNA的表达。结果:①消痰散结方低、中、高剂量组的平均瘤重与模型组相比,有显著差异(P<0.01);②消痰散结方中、高剂量组hTERT蛋白的阳性表达率与模型组相比有统计学意义(P<0.05或P<0.01);③消痰散结方中、高剂量组hTERTmRNA含量与模型组相比有统计学意义(P<0.05)。结论:①消痰散结方有明显的抑制胃癌细胞生长的作用;②消痰散结方通过下调hTERT蛋白及mRNA的表达而抑制端粒酶的活性,使癌细胞端粒长度逐渐缩短,丧失无限增殖能力,起到抑制肿瘤细胞生长、增殖的作用。     

消痰散结方对裸鼠胃肿瘤中ICAM-1表达的影响

观察消痰散结方对裸鼠胃癌组织中胃癌细胞粘附分子ICAM 1表达的影响。建立裸鼠MKN 4 5人胃癌模型 ,采用免疫组化S P法检测胃癌组织中ICAM 1的表达。结果 ,中药组胃癌组织中ICAM 1表达水平明显低于空白对照组。说明 ,消痰散结方抑制胃癌细胞转移的环节可能与影响粘附分子的表达 ,进而影响细胞的粘附性机制有关。     

消痰散结方干预胃癌组织增殖细胞核抗原（PCNA）表达影响的研究

目的:观察消痰散结方对胃癌组织增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响,探讨消痰散结方抑制胃癌细胞增殖的作用机制.方法:建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植模型,采用随机数字表法随机分成生理盐水组,消痰散结方低、中、高剂量组,5-氟尿嘧啶(5-Fu)组,每组8只.观察指标有:①观察各组荷瘤鼠肿瘤生长情况及抑瘤率;②观察消痰散结方干预胃癌组织PCNA蛋白表达的影响.结果:消痰散结方对裸鼠人胃癌原位移植瘤有较好的抑制肿瘤生长作用,消痰散结方低、中、高剂量组抑瘤率分别为36.62%、44.82%、58.11%,呈现出剂量依赖效应.结论:消痰散结方有较好的抑制肿瘤生长的作用,其抑瘤作用机制可能与下调肿瘤细胞PCNA蛋白的表达有关,进而抑制细胞增殖、分裂,控制胃癌的复发与转移.     

消痰散结方对MKN—45人胃癌细胞ICAM—1表达的影响

目的：观察水痰散结方对体外培养的胃癌细胞粘附分子ICAM－1表达的影响，初步探讨消痰散结方抑制胃癌细胞转移的作用环节。方法：制备消痰散结药物血清，体外培养MKN－45人胃癌细胞，拟消痰散结方药物血清干预培养细胞，采用免疫组化ABC法检测胃癌组织中ICAM－1的。结果：中药组胃癌组织中ICAM－1表达水平明显低于空白对照组。结论：消痰散结方抑制胃癌细胞转移的环节可能和影响粘附分子的表达，从而影响细胞的粘附性机能有关。