实时定量PCR检测HBV核酸载量测量不确定度的构成分析

 目的 研究实时荧光定量PCR用于乙型肝炎病毒（HBV）核酸载量检测时的测量不确定度构成。 方法 采用实时荧光定量PCR检测乙型肝炎患者血清标本中HBV核酸载量，收集检测过程中的各类数据，计算以下6种来源的测量不确定度，对该方法的测量不确定度构成进行评估。⑴标本浓缩的不确定度（uenrich）；⑵核酸提取的不确定度（uex）；⑶扩增反应体系的不确定度（upcr）；⑷热循环仪的不确定度（uins）；⑸数据处理的不确定度（uana）；⑹加样枪的不确定度（upip）。其中热循环仪的不确定度检测样本数为7份，其他各种不确定度检测的样本数为10份。 结果 核酸浓度为5.610E+07拷贝/ml的标本，其浓缩过程来源的相对不确定度达0.437；核酸提取来源的浓度真值无偏估计在6.585E+03、9.067E+04、7.223E+06拷贝/ml样本的相对不确定度分别为0.249、0.173、0.140；热循环仪和数据分析来源的相对不确定度分别为0.020和不大于0.050。 结论 标本制备过程中的浓缩和DNA提取步骤所带来的不确定度是实时荧光定量PCR检测HBV核酸载量测量不确定度的主要分量，因此标本制备处理的方法与标准操作程序能否有效地提取核酸并去除PCR反应的抑制物对于该项检测十分关键；起始模板浓度与测量不确定度相关，低浓度的样本显示出更大的相对不确定度。     

实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒核酸载量的测量不确定度构成分析

目的 研究实时荧光定量PCR用于HBV核酸载量检测时的测量不确定度构成.方法 采用实时荧光定量PCR检测乙型肝炎患者血清标本中HBV核酸载量,收集检测过程中的各类数据,计算以下6种来源的测量不确定度,对该方法的测量不确定度构成进行评估.(1)标本浓缩的不确定度(uenrich);(2)核酸提取的不确定度(uex);(3)扩增反应体系的不确定度(upcr);(4)热循环仪的不确定度(uins);(5)数据处理的不确定度(uana);(6)加样枪的不确定度(upip).其中热循环仪的不确定度检测样本数为7份,其他各种不确定度检测的样本数为10份.结果 核酸浓度为5.610E+07拷贝/ml的标本,其浓缩过程来源的相对不确定度达0.437核酸提取来源的浓度真值无偏估计在6.585E+03、9.067E+04、7.223E+06拷贝/ml样本的相对不确定度分别为0.249、0.173、0.140;热循环仪和数据分析来源的相对不确定度分别为0.020和不大于0.050.结论 标本制备过程中的浓缩和DNA提取步骤所带来的不确定度是实时荧光定量PCR检测HBV核酸载量测量不确定度的主要分量,因此标本制备处理的方法与标准操作程序能否有效地提取核酸并去除PCR反应的抑制物对于该项检测十分关键;起始模板浓度与测量不确定度相关,低浓度的样本显示出更大的相对不确定度.     

三种HBV荧光定量PCR检测试剂的比较及结果分析

目的 评估3种HBV DNA荧光定量PCR检测试剂的临床应用性能.方法 通过平行检测1001例临床血清样本及梯度稀释的阳性样本,从定量线性范围、准确性、灵敏度、特异性等方面,比较分析A试剂（磁珠分离法）、B试剂（免核酸提取的＂一步法＂）与目前国内临床广泛应用的优质试剂C的相关性和差异,并与免疫学结果进行比较.结果 767例均有数值的标本中,三种试剂均值差异无统计学意义.但在低病毒载量组中,结果相差较大,A试剂灵敏度最高,B试剂次之,C试剂排后.结论 采用了＂一步法＂免核酸提取的B试剂,核酸得率高,具有较宽的检测范围和定量准确性,操作极其简单,不失为一种上佳的选择.     

一种国产乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂不同检测平台上的验证情况分析

目的 将圣湘公司乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)在不同荧光定量PCR系统进行性能验证,以给出该试剂盒在不同检测平台上的性能评价.方法 依据美国临床和实验室标准化协会(CLSI)颁布的EP系列文件和《医学实验室质量和能力认可准则》相关文件,应用Roche LightCycler(R)480 Ⅱ实时荧光定量PCR系统及美国ABI 7500型实时荧光定量PCR系统对圣湘公司乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)进行临床样本精密度、正确度、可报告范围和检测下限的性能验证实验.结果 LightCycler(R)480 Ⅱ实时荧光定量PCR系统:2×106 IU/mL浓度水平批内精密度为1.38％,批间精密度为0.25％;2×104IU/mL浓度水平批内精密度为0.35％,批间精密度为0.79％.正确度验证可溯源标准品,偏倚均小于7.5％,符合厂家说明及文件要求.HBV DNA定量结果在2.1×102IU/mL至2.1×107IU/mL浓度水平范围内线性关系良好(R2=0.9994),临床可报告范围为2.1×102IU/mL～2.1×108IU/mL.该系统检测下限为148 IU/mL.ABI 7500型实时荧光定量PCR系统:2×106IU/mL浓度水平批内精密度为0.70％,批间精密度为1.34％.2.5×104IU/mL浓度水平批内精密度为1.18％,批间精密度为3.01％.正确度验证可溯源标准品,偏倚均小于7.5％,符合厂家说明及文件要求.HBV DNA定量结果在2×102IU/mL至2×10sIU/mL浓度水平范围内线性关系良好(R2 =0.9991),临床可报告范围为2×102IU/mL ～2×109IU/mL.该系统检测下限为203 IU/mL.结论 圣湘公司乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)在Roche LightCycler(R)480 Ⅱ实时荧光定量PCR系统及美国ABI 7500型实时荧光定量PCR系统上的性能验证结果均符合试剂说明书性能范围,检测结果无明显差异,均可准确快捷的对HBV DNA定量检测,为后续超敏定量工作奠定基础.     

二种核酸检测法诊断幽门螺杆菌感染的临床比较

目的:二种核酸检测法诊断幽门螺杆菌(HP)感染的临床诊断价值,用以向临床日常实践中推荐使用。方法:117例胃炎、胃溃疡和胃癌患者胃黏膜活组织标本采用HP恒温扩增-防污染核酸试纸条和实时荧光定量PCR进行HP检测,并比较二种检测方法的特异性、灵敏度等。同时以组织学染色和细菌培养二种"金标准"法作为比较。结果:二种"金标准"法诊断了HP感染的阳性66例,阴性51例;66例"金标准"检测法诊断HP阳性的标本中,其中有62例HP恒温扩增-防污染核酸试纸条检测阳性,60例实时荧光定量PCR检测阳性;51例"金标准"检测法诊断HP阴性的标本中,其中有49例HP恒温扩增-防污染核酸试纸条检测阴性,50例实时荧光定量PCR检测阴性,据此HP恒温扩增-防污染核酸试纸条检测HP的诊断敏感性为93.9%(62/66),特异性为96.1%(49/51);实时荧光定量PCR检测HP的诊断敏感性为90.9%(60/66),特异性为98.0%(50/51)。结论:HP恒温扩增-防污染核酸试纸条和实时荧光定量PCR检测技术相当,但HP恒温扩增-防污染核酸试纸条检测不需要昂贵的仪器设备,结果便于阅读,操作方法简单,适宜于作为HP感染筛查的基础。     

锁核酸结合分子信标技术检测乙型肝炎病毒DNA G1896A点突变研究

目的研究和评估乙型肝炎病毒（HBV）DNA G1896A点突变的实时荧光PCR检测方法。方法收集经测序验证HBV DNA G1896A未突变的野生型样本150例和已发生突变的突变型样本58例,在突变区域设计分子信标探针,点突变处进行锁核酸处理,利用荧光PCR方法检测HBV前C区G1896A点突变;再从临床标本中随机抽取18例、8例和19例荧光PCR结果分别显示为G1896A突变的标本、杂合的标本以及野生型的标本的PCR产物进行序列测定。结果突变型质粒和野生型质粒的检测灵敏度均可以达到100copies/ml;突变型探针检测高浓度的野生型质粒时无检测信号,野生型探针检测高浓度突变型质粒时无检测信号;突变型模板在总杂合模板中的比例达到5%时则都可以将突变型检测出来;序列测定的8例G1896A突变标本、6例杂合标本和19例野生型标本的PCR产物结果和荧光PCR检测结果完全吻合。结论实时荧光PCR检测方法可以快速、简便、准确地检测HBVDNAG1896A点突变,是检测点突变的重要方法,具有重要的临床应用价值。     

实时荧光定量PCR检测幼儿腹泻腺病毒

目的:建立实时荧光定量PCR方法,并检测腺病毒Ad40或Ad41感染的粪便标本。方法:用T-A克隆技术构建含腺病毒基因的载体作为标准模板,采用Taqman探针标记技术,建立实时荧光定量PCR方法。采集幼儿腹泻标本248例,分别用直接免疫荧光法和实时荧光定量PCR检测腺病毒Ad40和Ad41,比较两种方法的阳性检出率。结果:实时荧光定量PCR灵敏度和准确度(95.60%和96.80%)均高于直接免疫荧光法(78.5%和82.40%)(P0.05),而两者特异度差异无统计学意义(97.30%vs 96.70%,P0.05)。248例待检样本,直接免疫荧光法检出率为2.42%(6/248),实时荧光定量PCR检出率为7.66%(19/248),明显高于直接免疫荧光法(χ2=3.675,P0.05)。结论:成功建立实时荧光定量PCR检测腺病毒Ad40或Ad41方法。其灵敏度、准确度和阳性检出率经均优于直接免疫荧光法,且简便快速。     

单核细胞乙型肝炎病毒cccDNA检测方法及应用价值

目的 建立检测HBV共价闭合环状DNA（ cccDNA）的巢式-荧光定量PCR法,检测外周血单核细胞（ PBMC）及骨髓单核细胞（MMNC）中cccDNA。方法 根据HBV cccDNA与松弛结构DNA（rcDNA）结构上的差异,设计2对跨缺口的特异性引物及下游的特异性TaqMan探针。根据Mung Bean Nuclease对rcDNA与cccDNA作用的不同,使cccDNA扩增而使rcDNA降解,分别用外引物及内引物进行PCR反应,再用荧光探针进行实时荧光定量PCR,根据阳性参照物,计算出检测标本定量值。结果 成功建立了HBV cccDNA巢式-荧光定量PCR的检测方法,线性范围为5.0× 10２～3.9×107拷贝/ml。用上述方法检测25例慢乙肝及肝硬化血清HBV DNA阳性患者外周血单核细胞中cccDNA,7例骨髓单核细胞中cccDNA,21例健康献血者外周血单核细胞中cccDNA,骨髓标本中有3例cccDNA阳性,25例外周血标本中有9例cccDNA阳性。结论 巢式-荧光定量PCR法可检测乙肝患者PBMC及MMNC中的HBVcccDNA含量。PBMC及MMNC中可检测到HBVcccDNA.     

核酸试纸条法检测HBV基因型方法的建立

目的 建立一种快速、肉眼可观测的方法检测乙型肝炎病毒(HBV)基因型.方法 根据GenBank中已发表的明确HBV分型全序列,设计特异的引物和标记生物素探针,建立核酸试纸条法检测150例乙型患者和20例健康体检者的乙型肝炎基因型,同时采用荧光定量PCR法进行比较.结果 150例标本中B型检出率为34.00%(51/150),C型占61.33%(92/150),B/C混合型占4.00%(6/150),未分型占0.67%(1/150).与荧光定量PCR法进行比较,结果一致.结论 核酸试纸条法检测HBV基因型与荧光定量pCR法相比较灵敏度和特异性相似,但该方法更简便、快速,更适合临床开展.     

尿液游离核酸的大小分布情况及检测方式选择

目的 探究泌尿系疾病患者尿液样本中游离核酸（cf DNA）的质量以及不同原理检测方法的选择。方法 采用试剂盒提取尿液上清中的cfDNA,使用Nanodrop One、Qubit 4、4200 TapeStation及PCR对样本进行检测,查看其纯度、浓度及片段大小。结果 467例尿液cf DNA样本浓度的中位数为16.70 ng/μl,最大值1710ng/μl。仅有50%的样本纯度较高,A260/A280值在1.70～2.00之间,对于纯度较高的样本,不同仪器测得的浓度值比较接近。尿液cf DNA片段大小主要是180bp左右且经常可见约180 bp整数倍的梯度条带,大分子量核酸片段分布在1.5kb及8kb左右。以游离核酸为模板,可扩增出不同大小的β球蛋白基因片段。结论 不同来源的尿液上清中cfDNA浓度差异较大,大分子量核酸片段出现的频率较多,尿液中盐类等杂质可能导致cfDNA样本纯度偏低。采用分光光度法测量尿液cfDNA浓度易出现偏差,而荧光计或生物分析仪可测得较准确浓度值。     

乙型肝炎病毒大蛋白检测在拉米夫定抗病毒治疗中的应用研究

目的 通过检测拉米夫定治疗患者血清中的乙型肝炎病毒大蛋白(HBV-LP),同时检测乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)载量,探讨拉米夫定治疗过程中HBV-LP与HBV-DNA的关系,观察乙型肝炎病毒大蛋白用于评估拉米夫定抗病毒治疗的应用效果.方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)的方法对HBV-LP进行检测;采用荧光定量PCR方法对HBV-DNA进行检测.结果抗病毒治疗有效的患者HBV-DNA和HBV-LP下降趋势一致,HBV-LP出现阴转的时间要晚3个月于HBV-DNA阴转;抗病毒治疗无效的患者HBV-DNA和HBV-LP都是始终没有出现阴转;抗病毒治疗效果反复组中患者HBV-LP始终没有出现阴转,HBV-DNA则暂时阴转.结论拉米夫定抗病毒治疗过程中动态检测乙型肝炎病毒大蛋白可用于评估抗病毒治疗效果.     

乙型肝炎病毒前S1抗原检测的临床意义

探讨乙型肝炎病毒前s1抗原（Pre-S1）检测在乙型肝炎病毒诊断中的临床意义。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和荧光定量聚合酶链反应技术（fluorescenee quantitative PCR,FQ-PCR）对650份HBV-M不同阳性模式及40份HBV—M全阴性模式血清标本进行乙型肝炎病毒Pre-S1、乙肝五项和HBV—DNA检测,并对三种检测结果进行统计学分析。在650份HBV—M不同阳性模式标本中,在119份大三阳标本中Pre—S1阳性检出率92．4％,HBV-DNA阳性检出率100％,在186份小三阳标本中Pre—SI阳性检出率42．5％,HBV—DNA阳性检出率63．4％,在21例HBsAg（＋）和HBcAb（＋）阳性组中Pres1阳性检出率47．6％,HBV．DNA阳性检出率66．7％;在297例HBsAb（＋）标本中Pre—S1阳性检出率0．4％,HBV-DNA阳性检出率0％,在268例HBV—DNA阳性的标本中Pre-S1阳性检出率79．3％。在40份HBV—M全阴模式中Pre-S1阳性检出率0％,HBV-DNA阳性检出率0％。Pre—S1在大三阳、小三阳及HBV-DNA阳性组阳性检出率明显高于阴性组（P〈0．01）,Pre—S1检测可补充和完善乙肝“两对半”检测的不足,尤其对HBeAg阴性或变异的HBV感染者能更好的反映病毒的复制状态和传染性。     

Cellular chromosome DNA interferes with fluorescence quantitative real-time PCR detection of HBV DNA in culture medium

Fluorescence quantitative real-time PCR (FQ-PCR) is a recently developed technique increasingly used for clinical diagnosis by detection of hepatitis B virus (HBV) DNA in serum. FQ-PCR is also used in scientific research for detection of HBV DNA in cell culture. Understanding potential FQ-PCR interference factors can improve the accuracy of HBV DNA quantification in cell culture medium. HBV positive serum was diluted with culture medium to produce three test groups with HBV DNA levels of 5 x 10(7) copies/ml (high), 5 x 10(5) copies/ml (medium), and 5 x 10(3) copies/ml (low). Chromosome DNA was extracted from HepG2 cells and then added to high, medium, and low group samples at final concentrations of 0, 12.5, 25, 50, and 100 microg/ml. The samples were quantified by FQ-PCR and data were evaluated using statistical software. No marked changes were seen in the quantitative curves for high level HBV DNA samples when the samples were supplemented with 0-100 microg/ml of chromosome DNA. Interference was observed in medium level samples when 50 and 100 microg/ml of chromosome DNA was added. Interference was also observed in low level HBV DNA samples when the concentration of added chromosome DNA was greater than 25 microg/ml. The interference was eliminated when samples were digested by DNase I prior to PCR detection. In Conclusions, the presence of cellular chromosome DNA can interfere with the detection of HBV DNA by FQ-PCR. Removal of cellular chromosome DNA from culture media prior to FQ-PCR is necessary for reliable HBV DNA quantitative detection.     

乙肝不同血清模式及乙肝DNA定量与前S1抗原联合检测的临床意义

目的 探讨乙型肝炎患者不同的血清学模式、乙肝病毒DNA(HBV-DNA)与乙肝前S1抗原(Pre-S1 Ag)联合检测的临床意义.方法 采用化学免疫发光法(CLIA)定量筛选339例乙肝血清标志物阳性血清,采用荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR)检测HBV-DNA,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测Pre-S1 Ag.结果 乙肝不同血清模式下,HBV-DNA与Pre-S1 Ag检测结果比较差异无统计学意义(P＞0.05).HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性组HBV-DNA检出率93.1％,Pre-S1Ag检出率86.1％.HBsAg、HBeAb、抗-HBc阳性组HBV-DNA检出率45.9％,Pre-S1 Ag检出率69.2％.HBsAg、抗-HBc阳性组HBV-DNA检出率61.0％,Pre-S1 Ag检出率72.9％.HBsAg、HBeAg阳性组HBV-DNA及Pre-S1 Ag检出率均为100％.以HBeAg阳性为对照HBV-DNA及Pre-S1 Ag检出率分别为87.3％和93.7％.HBV-DNA与Pre-S1 Ag检测结果比较差异有统计学意义(P＞0.05).结论 乙肝五项、HBV-DNA、Pre-S1Ag联合检测能够对乙肝病毒的感染、复制程度做出准确的判断,为临床治疗方案的选择和疗效的观察提供可靠的依据.     

非甲-非戊型慢性病毒性肝炎患者隐匿性HBV感染的研究

目的 观察非甲-非戊型慢性病毒性肝炎患者隐匿性HBV感染的状况,探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术对隐匿性HBV感染的诊断价值.方法 应用FQ-PCR技术对57例非甲-非戊型慢性病毒性肝炎患者进行了血清、肝组织HBV-DNA定量检测,并将肝组织HBV DNA定量水平与肝脏炎症活动度的关系进行了分析.结果 血清、肝组织HBV DrqA定量阳性分别为13例(22.81%)、22例(38.60%).13例血清HBV DNA定量阳性患者其肝组织定量亦均阳性,但9例肝组织HBV DrqA定量阳性患者其血清定量为阴性,差异有统计学意义(P<0.01);同时13例血清与肝组织定量均阳性患者比较.显示肝组织HBV DNA定量水平显著高于血清定量水平[(6.62±1.21)拷贝,gvs.(4.03±1.06)拷贝/ml,(P<0.01)].肝组织HBV DNA水平与肝脏炎症活动度并无相关性,10例G2,7例G3,5例G4患者HB'q DNA定量分别为(6.13±1.65)拷贝/g、(5.92±1.81)拷贝,g、(5.83±1.89)拷贝/g,(P0.05),但HBV DNA定量阳性患者均为活动性肝脏病变.结论 HBV隐匿性感染是部分非甲-非戊型慢性病毒性肝炎患者的病因.单纯检测血清免疫学标志物对HBV感染诊断存在漏诊,对非甲-非戊型慢性病毒性肝炎患者应用FQ-PCR技术开展血清定量尤其是肝组织中HBV DNA定量检测可提高HBV感染的诊断.对隐匿性HBV感染的慢性病毒性肝炎亦应给予有效的抗病毒治疗.     

荧光定量PCR检测HBV-DNA与化学发光酶免疫法检测乙肝五项的相关性调查

目的 探讨FQ-PCR检测HBV-DNA与CLEIA检测乙肝五项之间的相关性.方法 将以FQ-PCR法检测筛选的HBV-DNA阳性结果的血清用CLEIA法对其进行乙肝病毒血清学标志物（即乙肝五项）的检测.结果 大三阳与小三阳所占全部样本的比例最高,其低中高HBV-DNA水平的比例分别为17.2％,17.2％,65.5％和81.8％,15.2％,3.0％,而且差异有统计学意义（P＜0.05）;HBeAg与HBeAb阳性标本的HBV-DNA水平不同,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 FQ-PCR检测HBV-DNA水平与CLEIA检测的乙肝五项水平在判断患者乙肝病毒感染病程方面的相关性较好,但乙肝五项定量结果数值与HBV-DNA载量数值并没有直接相关的关系.     

Hepatitis B infection of the liver in chronic hepatitis C without detectable hepatitis B virus DNA in serum

Hepatitis B virus (HBV) DNA may persist in the liver in the absence of serum HBV-DNA after a self-limited acute hepatitis B. This may also occur in patients with chronic hepatitis C virus (HCV) infection but its prevalence and its impact on liver histology is unknown. HBV-DNA was tested by polymerase chain reaction (PCR) and by in situ hybridisation in liver biopsies from 98 patients with chronic hepatitis C who were hepatitis B surface antigen negative and serum HBV-DNA negative by PCR. HBV-DNA resulted positive in the liver of 37/98 (37.7%) patients without serum HBV-DNA. To test whether these patients had serum HBV-DNA levels under the detection limit of the PCR assay used in this study (50 copies/ml), PCR products in which HBV-DNA was undetectable after visualization of agarose gels were analysed by dot-blot hybridisation. With this method, HBV-DNA was positive in serum of 12/37 patients with liver HBV-DNA. Thus, 25/98 (25.5%) patients have HBV-DNA detectable only in liver. This was confirmed by in situ hybridisation, the percentage of infected hepatocytes ranging from 0.1% to 12%. In patients in whom the HCV infection was shorter than 20 years, HBV infected patients had higher (P = 0.01) fibrosis score (1.64 +/- 1.21) than HBV negative cases (0.53 +/- 0.66). In conclusion, a significant proportion of patients with chronic HCV infection have HBV-DNA in the liver in the absence of viral DNA in serum. The impact of this finding on liver histology deserves further research.     

乙型肝炎病毒外膜大蛋白检测的临床意义

目的：通过检测患者血清乙肝病毒外膜大蛋白（HBV-LP）、HBV-DNA、乙肝病毒标志物（HBV-M）,探讨HBV-LP对于反映体内乙肝病毒复制的意义。方法：采用荧光定量PCR方法对180份HBV感染血清的HBV-DNA进行检测,并采用酶联免疫吸附试验（ELISA）对HBV-LP、HBV-M及HBV-DNA进行检测。结果：大蛋白的检出结果与HBV-DNA的检出结果无明显差异。不同HBV-M模式的HBV-DNA与HBV-LP的检出结果均无显著性差异。HBV-DNA拷贝数的对数值与HBV-LP表达具有相关关系（r=0.95,P〈0.05）。结论：HBV-LP能够反映HBV的复制情况。血清中HBV-LP的含量与HBV-DNA的拷贝数具有较好的相关性。     

乙型肝炎病毒表面大蛋白检测用于筛查隐匿性HBV感染

目的 用血清学方法检测乙型肝炎病毒表面大蛋白(HBLP)来筛查隐匿性HBV感染,探讨临床隐匿性HBV感染的血清学检测策略.方法 在日常工作中从临床榆测备份管随机收集2000份用国产ELISA试剂检测HBsAg阴性结果的血清标本,双份分装-20℃冻存,单份标本实施HBLP检测,HBLP阳性标本增加另外两种共三种国产ELISA试剂双份复查HBsAg;HBLP阳性标本再经美国超灵敏MONOLISA HBsAg ULTRA试剂双份检测HBsAg,并行双份DNA定量分析、结果取均值.结果 2000份HBsAg阴性标本共检出15例HBLP阳性:HBLP阳性标本用三种国产ELISA试剂双份复查HBsAg结果一致阴性;通过美国超灵敏MONOLISA HBsAS ULTRA试剂复查HBsAg结果全部阳性;前述15份标本HBV DNA定量分析结果显示均小于500拷贝/ml,其中400～500拷贝/ml 1例,300～400拷贝/ml 3例,200～300拷贝/ml 5例,100～200拷贝/ml 4例,小于100拷贝/ml 2例.结论 用国产常规ELISA试剂检测HBsAg普遍存在漏检,漏检标本HBLP结果可能阳性,检测HBLP有利于筛查出隐匿性H BV感染,为积极寻找临床隐匿性HBV感染的检测策略提供了血清学参考.     

HBV-LP与HBV-DNA联检的临床应用

目的：探讨血清乙型肝炎病毒大蛋白与HBV-DNA联检在乙型肝炎患者诊治中的意义。方法：对162例HBV感染者及47名健康对照组血清采用ELISA检测乙型肝炎病毒大蛋白及乙型肝炎病毒标志物;FQ-PCR定量检测HBV-DNA。结果：162例HBV感染者血清中,HBV-LP浓度与HBV-DNA拷贝数间具有良好的正相关性（rs=0.64,P〈0.001）,不同HBV-DNA拷贝数组别间HBV-LP浓度存在差异显著性（P〈0.01）;HBV-LP与HBV-DNA、HBeAg间均关联显著（P〈0.01）。HBV-LP与HBV-DNA、HBeAg间阳性率均存在差异显著性（P〈0.05）,HBV-LP阳性率为84.57%,较HBV-DNA、HBeAg均敏感。其中HBV-LP在HBV-DNA阳性组中阳性率为91.18%（93/102）,DNA阴性组中阳性率为73.33%,均较HBeAg高;在58例HBV-DNA和HBeAg共同阴性的HBV感染血清中,HBV-LP检出42例阳性。结论：血清HBV-LP浓度与HBV-DNA联检有利于提高HBV感染者体内病毒复制、疾病进程、疗效与预后判断的血清学诊断与监测水平。