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1.
目的评价SYBR GreenⅠ实时荧光聚合酶链反应检测人类白细胞抗原-B27。方法对65例SpA患者和100例健康人群,分别以PCR-SSP和SYBR GreenⅠ荧光PCR检测外周血HLA-B27 DNA进行检测,比较两种检测方法。结果丳CR-SSP检测HLA-B27阳性样本呈现135bp和268两个条带,阴性标本仅有268bp一条条带。SYBR GreenⅠRT-PCR检测结果示,阳性标本的熔解曲线呈现HLA-B27的90.37℃和β-globin的86.71℃两个Tm峰,阴性标本仅有β-globin一个Tm峰;侾CR-SSP和SYBR GreenⅠRT-PCR结果符合率为100%;僑pA患者和健康人的HLA-B27阳性率分别为70.76%和6%。结论 SYBR GreenⅠRT-PCR是一种可靠、快速的检测HLA-B27方法。  相似文献   

2.
目的研究孕中期乙肝孕妇血清白细胞介素IL-16、T细胞亚群、AFP的水平变化及相互关系。方法采用实时荧光PCR检测2011年1月~2014年3月73例乙肝孕妇HBV DNA并分组,A组(HBV DNA〈10^3copies/ml),B组(10^3copies/ml≤HBV DNA〈10^6copies/ml),C组(HBV DNA≥10^6 copies/ml)。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清IL-16;流式细胞仪测定T细胞亚群;电化学发光法检测血清AFP;并纳入30例正常孕妇作对照。结果 B、C组血清IL-16水平高于A组和对照组,差异有统计学意义(tIL-16=3.568~5.329,P均〈0.05)。B组血清AFP水平高于对照组和A组,差异有统计学意义(tAFP=3.435,3.857,P均〈0.05);C组血清AFP水平高于其他3组,差异有统计学意义(tAFP=1.758~5.354,P值均〈0.05)。B、C组CD4^+T细胞及CD4^+/CD8^+比值较A组和对照组减低,CD8^+T细胞较A组和对照组升高,差异有统计学意义(tCD4^+=2.101~3.586,tCD4^+/CD8^+=1.903~2.259,tCD8^+=1.774~2.816,P均〈0.05)。乙型肝炎孕妇组血清IL-16与AFP呈正相关(r=0.413,P〈0.05)。结论乙肝孕妇血清IL-16、T细胞亚群的动态变化可提示HBV感染孕妇机体免疫功能的变化,且与AFP联合检测可减少乙型肝炎对孕妇产前筛查结果的影响。  相似文献   

3.
慢性乙肝患者血清HBV-DNA和HBeAg定量的相关性分析   总被引:3,自引:0,他引:3  
目的:研究慢性乙型肝炎病毒(chronic HBV,CHB)患者血清HBV-DNA含量与e抗原定量的相关性。方法:实时荧光定量PCR(FQ-PCR)和化学发光法(CLIA)分别测定1084例CHB患者血清HBV-DNA、HBeAg含量。结果:1084例HBV患者中HBeAg阳性组和阴性组HBV-DNA检出率分别为74.2%和23.8%,平均含量分别为(4.9±1.9)log10(copies/ml)和(3.9±1.0)log10(copies/ml);HBV-DNA和HBeAg之间的kap-pa系数为0.49;HBV-DNA定量和HBeAg定量之间相关系数(r)为0.659,HBeAg阳性组HBV-DNA定量和HBeAg定量之间r为0.664;不同载量HBV-DNA组,HBeAg量相差显著,HBV-DNA载量高,HBeAg量也高。结论:HBeAg阳性模式的HBV-DNA阳性率及含量进一步证实了HBeAg确实是反映HBV复制活跃的一个可靠指标,但这并不意味HBeAg转阴病毒复制就停止,HBeAg阴性CHB患者血清中仍有部分患者存在乙肝病毒颗粒;HBV-DNA载量与HBeAg量之间有一定的相关性,但相关性一般;同时检测HBV-DNA和HBeAg量对乙肝患者HBV感染、复制、传染性的判断、治疗方案的选择和疗效判断有一定的指导意义。  相似文献   

4.
目的了解孕妇血清中乙肝前S1抗原、其他乙肝血清学指标及HBV-DNA定量结果间的相关性。方法用荧光定量PCR法检测其他乙肝血清学指标阳性孕妇血清中HBV-DNA。结果254例不同乙肝血清学指标阳性孕妇血清中乙肝前S1抗原总阳性率为47.6%,HBV-DNA总阳性率为42.9%;其中乙肝前S1抗原阳性组、阴性组HBV-DNA阳性率分别为47.1%、39.1%,无显著性差异(P〈0.05);乙肝血清学指标HBVsAg/HBVeAg/HBVcAb(简称1.3.5)阳性组、HBVsAg/HBVcAb(简称1.5)阳性组及HBVsAg/HBVeAb/HBVcAb(简称1.4.5)阳性组的乙肝前S1抗原阳性率分别为57.6%、43.1%、44.6%,无显著性差异(P〈0.05);HBV-DNA阳性率1.3.5阳性组为86.3%,1.5阳性组32.8%,1.4.5阳性组25.4%,其结果1.3.5阳性组较1.4.5阳性组阳性率高,有高度显著性差异(P〈0.005),而1.5阳性组无差异。1.3.5阳性组HBV-DNA含量90%左右在10^7-10^8copy/ml之间,1.5阳性组和1.4.5阳性组85%左右在10^3-10^4copy/ml之间。结论我们的检测结果提示乙肝前S1抗原与其它乙肝血清学指标及HBV-DNA定量结果间无相关性;而HBVeAg与HBV-DNA复制和传染性有相关性。  相似文献   

5.
目的比较Nested-PCR和SYBR GreenⅠReal-Time PCR两种方法检测狂犬病毒的敏感性、特异性和时效性。方法对10倍连续稀释的狂犬病毒(疫苗株)核酸样品,采用Nested-PCR和SYBR GreenⅠReal-Time PCR方法进行平行检测,比较两种方法的敏感性;同时以登革热2型病毒、诺如病毒、星状病毒、EV71和乙型脑炎病毒核酸对两种方法的特异性进行评价。结果 SYBR GreenⅠReal-Time PCR方法可检测出2.3×106copies/μl核酸分子,与Nested-PCR方法相比,敏感度提高10倍。两种检测方法的特异性均好,与登革热2型病毒、诺如病毒、星状病毒、EV71和乙型脑炎病毒核酸均无交叉反应。SYBR GreenⅠReal-Time PCR方法检测花费3h,检测时间比Nested-PCR方法节省2h。结论与Nested-PCR相比,SYBR GreenⅠReal-Time PCR是相对高效的检测狂犬病毒的方法。  相似文献   

6.
目的 探讨初乳HBV-DNA定量检测对乙肝产妇哺乳的指导意义.方法 选择住院分娩产妇325例,依据乙肝五项血清学指标分为五组感染模式.其中A组(65例):乙肝HB、HBeAg和HBcAb均为阳性;B组(9例):乙肝HBsAg、HBeAg、HBeAb和HBcAb均为阳性;C组(152例):乙肝HBsAg、HBeAb和HBcAb均为阳性;D组(47例):乙肝HBsAg、HBcAb为阳性;E组(52例):乙肝五项指标全阴性为对照组.采用化学发光法检测产妇HBV标志物,同时采用实时荧光定量PCR检测产妇血清和初乳HBV-DNA载量,对相关数据进行组间卡方检验分析.结果 A组血清和乳汁HBV-DNA阳性率分别为100.00%(65/65)和83.08% (54/65),乳汁HBV-DNA载量平均为3.82 ×104copies·ml-1;B组血清和乳汁HBV-DNA阳性率分别为100.00% (9/9)和77.78%(7/9),乳汁HBV-DNA载量平均为1.26×104copies·ml-1;C组血清和乳汁HBV-DNA阳性率分别为17.10%(26/152)和1.97% (3/152),乳汁HBV-DNA载量平均为2.31×103copies·ml-1;D组血清和乳汁HBV-DNA阳性率分别为44.68%(21/47)和23.40%(11/47),乳汁HBV-DNA载量平均为6.17×103copies·ml-1;E组血清和乳汁HBV-DNA阳性率均为0(0/52),乳汁HBV-DNA载量为<1.0×103copies·ml-1.A组与B组乳汁HBV-DNA阳性率(83.08%、77.78%)明显高于C组(1.97%),差异有统计学意义(x2值分别为135.26和115.31,P <0.05);产妇乳汁HBV-DNA与血清中HBV-DNA水平呈正相关.结论 血清乙肝免疫学检测呈HBsAg和HBeAg双阳性的产妇不宜哺乳,血清呈HBsAg、HBeAb和HBcAb阳性但同时乳汁HBV-DNA阴性者宜谨慎哺乳.  相似文献   

7.
目的:建立一种新的杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因分型方法.方法:利用16对KIR序列特异性引物和两对内参照引物及荧光染料SYBR Green Ⅰ进行实时聚合酶链反应( real-time PCR),分析各扩增产物的熔解曲线,确定各个KIR基因熔解温度和特征,并以此为依据判断16种KIR基因的出现或缺失.对样本DNA进行不同倍数稀释检测该方法的敏感性.结果:分析熔解曲线能有效地进行KIR基因分型.该方法甚至可以对0.1 ng DNA的样本成功进行KIR分型.利用该方法成功地对10例外周血基因组DNA和10例宫颈细胞基因组DNA进行了KIR分型.结论:SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR应用于KIR基因分型,具有简单、快速、敏感、实时和环保的特点,为实现KIR分型的自动化提供可能性.  相似文献   

8.
目的了解孕妇血清中不同乙肝血清学指标与HBV-DNA定量结果间的相关性。方法用荧光定量PCR法检测不同乙肝血清学指标阳性孕妇血清中HBV-DNA。结果204例乙肝血清学指标阳性孕妇血清HBV-DNA总阳性率为42.6%(87/204),其中乙肝血清学指标HBVsAg/HBVeAg/HBVcAb(简称1.3.5)阳性组HBV-DNA阳性率为87.5%(42/48),HBVsAg/HBVcAb(简称1.5)阳性组HBV-DNA阳性率为34.8%(16/46),HBVsAg/HBVeAb/HBVcAb(简称1.4.5)阳性组HBV-DNA阳性率为26.4%(29/110);1.3.5阳性组HBV-DNA含量90%以上在107-108copy/ml之间,1.5阳性组和1.4.5阳性组85%以上在103-104copy/ml之间。统计学处理经卡方检验HBV-DNA定量检测结果1.3.5阳性组较1.4.5阳性组阳性率高,有高度显著性差异(P(0.005),而1.5阳性组无差异。结论我们的检测结果1.3.5阳性组HBV-DNA阳性率显著高并且病毒复制水平也高,说明其传染性也很高。所以,建议对孕早期乙肝血清学指标1.3.5阳性的孕妇在孕6个月以前进一步检测HBV-DNA,以确定其有否传染性,并进一步采取阻断母婴传播措施。  相似文献   

9.
目的建立鸭乙型肝炎病毒(DHBV)cccDNA TaqMan荧光定量PCR方法。方法用pUCm-T载体和PCR纯化产物连接,转染TOP10菌,筛选阳性菌落,提取质粒,制作外标准品;在DHBV基因组负链两侧设计一对引物,并在引物间设计和荧光标记一段TaqMan探针,严格优化反应物的组成和扩增条件,建立了DHBVcccDNA TaqMan荧光定量PCR方法。结果最低可检出104拷贝/ml;批内误差为0.2%~3.14%,批间误差为2.22%~4.43%;在10^5—10^12拷贝/ml之间与Ct值具有很好的线性[Ct=-2.8361ln(x)+41.45,r=-0.9985]。结论该法是一种灵敏度高、特异性强、较为简便的DHBV cccDNA定量检测技术。  相似文献   

10.
目的探讨HBV感染者血清中PreS1与HBV-DNA、HBeAg三者间的关系,进而评估PreS1在HBV感染、复制、诊断中的作用。方法收集1750例乙型肝炎患者血清,按不同HBV-M进行分组:HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)为A组,HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)为B组,HBsAg(+)、HBcAb(+)为C组,HBsAg(+)为D组,采用酶联免疫法(ELISA)检测乙肝病毒PreS1与HBV血清标志物,荧光定量PCR法检测HBV-DNA。结果以HBV-DNA>5×102拷贝/mL为阳性诊断标准,不同HBV-M模式中,PreS1与HBV-DNA的检出率无显著差异(P>0.01),PreS1与HBV-DNA的总符合率高于HBeAg与HBV-DNA的符合率,在HBeAg(-)患者中仍可不同程度地检出PreS1与HBV-DNA。结论PreS1可作为HBV感染、复制的一项新指标,在乙型肝炎诊断中具有很大的应用价值。  相似文献   

11.
目的检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阴性孕妇血清中HBV-DNA存在情况。方法用荧光定量PCR方法检测HBsAg阴性孕妇血清中HBV-DNA。结果检测680例HBsAg阴性孕妇血清HBV-DNA,阳性53例,阳性率7.8%。结论HBsAg阴性孕妇血液中有相当一部分人存在乙型肝炎病毒(HBV),使用PCR法对HBsAg阴性孕妇进行血清中HBV-DNA检测筛查,有利于对HBV-DNA阳性孕妇早期进行免疫阻断,以减少宫内感染、阻断HBV母婴垂直传播有重要意义。  相似文献   

12.
HBV基因分型与病毒载量及血清标志物关系的探讨   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的探讨HBV基因型与HBV-DNA水平及血清标志物的相关性。方法选择125例乙肝患者血清HBV-DNA复制阳性的标本分别检测HBV病毒基因分型、HBV-DNA、乙肝血清标志物、谷丙转氨酶(ALT)和总胆红素(TBL)。结果 125例HBV-DNA复制阳性标本中HBV基因分型以B型为主占71.2%(89/125),C型占24.0%(30/125),BC混合型占2.4%(3/125),非B非C型占2.4%(3/125);B基因型患者血清ALT(297.3±193.6)U/L和TBL(105.1±59.7)mol/L水平高于C基因型患者ALT(158.1±107.5)U/L和TBL(53.1±22.7)mol/L,P〈0.01;B基因型患者血清抗-HBe阳性率91.0%(81/89)显著高于C基因型的23.3%(7/30),P〈0.01;B型HBV-DNA水平(5.87±1.72)log10copies/mL与C型(6.01±1.91)log10copies/mL无差异(P〉0.05)。结论本地区HBV病毒基因型以B型为主,C型次之,B基因型对肝脏损害较C基因型重,并与HBV载量及HBeAg系统具有相关性,B基因型易发生YMDD突变。  相似文献   

13.
建立和检测新型乙型肝炎病毒(HBV)DNA检测技术锁核酸(LNA)捕获TaqMan探针实时聚合酶链反应(PCR)。方法 2009年8月至2010年3月选取本院20例健康献血者和肝病专科住院的75例经COBAS Amplicor检测HBV DNA阳性慢性乙型肝炎(CHB)患者,分别采集血液样本进行LNA捕获TaqMan探针实时PCR特异性试验。同时对LNA-实时PCR方法的重复性、特异性和线性范围等进行分析。结果 其线性范围为10~2.3×109 IU/ml。将10 IU/ml作为检测下限,具有95%可信区间。线性回归分析显示其斜率接近1.0 (R2=0.999)。批内变异值为3.88%~4.36%,批间变异值为8.5%~11.7%。20例健康献血者的阴性对照血清HBV-DNA检测均为阴性,而75例经COBAS Amplicor检测HBV DNA阳性患者的血清样本除1例阴性外,其余都为阳性。结论 LNA捕获TaqMan探针实时PCR方法为HBV-DNA检测的一种快捷灵敏、准确度高的新方法,值得临床实验室推广应用。  相似文献   

14.
目的 对比肾移植患者和常规手术患者免疫状态,验证以β-actin mRNA为模板参照定量PCR技术的有效性.方法 采用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR对29例肾移植患者和10例常规手术患者术前、术后3和7天外周血淋巴细胞IL-2和IL-10 mRNA表达进行检测.结果 两组术前IL-2和IL-10 mRNA水平无差别;术后肾移植组IL-2mRNA明显降低,而对照组无明显变化;两组术后第3天IL-10 mRNA表达水平均明显升高,肾移植组高于对照组(P<0.01),术后第7天对照组降至正常,肾移植组亦下降,但水平仍高于术前.结论 SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR技术对于监测肾移植患者免疫状况和研究免疫耐受意义重大,以β-actin mRNA为模板参照的定量PCR技术是测定细胞因子基因表达的简单有效方法.  相似文献   

15.
目的:探讨慢性乙型肝炎患者血清HBV-DNA病毒载量与血清肝纤维化指标变化的关系。方法:以慢性乙型病毒性肝炎患者20例为对象,分为应用抗病毒药有效抑制组10例与未进行抗病毒药治疗组10例,跟踪调查治疗情况5年(2002~2007年),用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测HBV-DNA病毒载量,采用放射免疫分析对20例慢性乙肝患者检查血清肝纤维化指标透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)水平。结果:5年来,抗病毒药有效抑制组10例患者平均HBV-DNA病毒载量对数水平3.56±1.12,未进行抗病毒药治疗组10例平均HBV-DNA病毒载量对数水平7.76±1.23,有显著差异(P〈0.05)。2002年抗病毒药有效抑制组血清肝纤维化指标分别为HA(82.72±30.62)μg/ml、LN(71.18±26.71)μg/ml、Ⅳ-C(93.77±69.87)μg/ml、PCⅢ(91.4±18.64)μg/ml,2002年未进行抗病毒药治疗组血清肝纤维化指标分别为HA(79.32±31.34)μg/ml、LN(70.25±28.23)μg/ml、Ⅳ-C(90.35±67.81)μg/ml、PCⅢ(85.77±20.56)μg/ml,两组间各项指标统计学无显著差异(P〉0.05)。2007年抗病毒药有效抑制组血清肝纤维化指标分别为HA(85.72±29.52)μg/ml、LN(70.18±25.4)μg/ml、Ⅳ-C(94.2±70.92)μg/ml、PCⅢ(93.4±19.32)μg/ml,2007年未进行抗病毒药治疗组血清肝纤维化指标分别为HA(105.67±28.54)μg/ml、LN(97.75±26.25)μg/ml、Ⅳ-C(132±72.13)μg/ml、PCⅢ(120.72±19.87)μg/ml,两组间各项指标比较均有显著差异(P〈0.05)。结论:有效控制慢性乙肝患者HBV-DNA病毒载量可能是控制患者肝纤维化进展的重要因素。  相似文献   

16.
应用荧光定量PCR检测缺失型DMD携带者的研究   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的建立荧光定量PCR技术检测缺失型DMD携带者.方法应用9对引物扩增抗肌萎缩蛋白缺失热点区域,检测出常见的缺失型DMD患儿17例.用SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR技术对缺失型DMD患儿家系中21例女性亲属进行检测.结果1例肯定携带者、11例可疑携带者和3例可能携带者证实为携带者;5例可疑携带者和1例可能携带者被排除.结论SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR技术是一种检测缺失型DMD携带者的准确、快速、简便的方法.  相似文献   

17.
慢性粒细胞白血病病人TCRζ链表达特点   总被引:1,自引:1,他引:1       下载免费PDF全文
目的: 建立实时定量PCR方法检测TCRζ链表达水平的方法,了解慢性粒细胞白血病(CML)外周血TCRζ链表达水平。方法: 采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR,相对定量检测30例CML患者和30例正常人外周血的单个核细胞的TCRζ链表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,根据相对定量公式:2-△△Ct计算CML病人与正常人TCRζ链表达差异倍数。结果: 成功建立SYBR GreenⅠ荧光实时定量PCR检测TCRζ链表达检测技术。18例CML患者TCRζ链出现表达低于正常人,而12例CML患者TCRζ链出现表达高于正常人。结论: CML病人中TCRζ链表达水平可分为表达下调(60%)和表达上调(40%)2组,提示部分CML病人的细胞免疫缺陷可能与其TCRζ链表达下调有关。  相似文献   

18.
目的探讨乙型肝炎患者HBV—DNA含量与血清免疫学标志物、肝功能的关系。方法将362例乙肝患者按血清免疫学标志物不同模式分成两组:HBeAg阳性组,82例;HBeAg阴性组,280例。HBV-DNA、免疫学标志物和肝功能检测分别采用荧光定量PCR法、酶联免疫吸附法和生化分析法,数据分析采用SPSS11.0统计学软件。结果HBeAg阳性组HBV—DNA含量≥10^3IU/mL者为97.56%,高于HBeAg阴性组的43.57%,二者间差异有统计学意义(X^2=74.96,P〈0.01)。HBV-DNA含量10^3~10^4IU/mL者,HBeAg阳性组为2.44%,低于HBeAg阴性组的35.00%。二者间差异有统计学意义(X^2=33.63,P〈0.01)。HBV-DNA含量为10^5—10^6IU/mL者,肝功能异常者的比例为64.70%。结论HBeAg阳性者乙肝病毒复制水平较高,HBeAg阴性者病毒复制水平相对较低,但病毒并非停止复制,HBeAg阴性者也存在高水平病毒复制。判断乙型肝炎患者是否存在病毒复制,是否具有传染性,最直接、最可靠的指标是HBV—DNA定量检测。  相似文献   

19.
目的评价实时荧光定量PCR(FQ—PCR)技术在乙型肝炎诊断和治疗中的应用价值。方法用FQ-PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)同时检测693份初诊标本和治疗3个月前后231份复诊病人标本的HBVM和HBV-DNA。结果HBVM模式共16组,其中HBeAg(+)组HBV-DNA检出率98.3%,定量对数值均在6.49以上;HBeAg(-)但前S1抗原(+)组HBV-DNA检出率93.6%,定量对数值为4.48±1.40;HBsAg(+)HBcAb(+)前S1抗原(-)组HBV-DNA检出率51.6%,定量对数值为4.46±1.43;HB-sAg(+)HBeAg(-)HBcAb(-)组HBV—DNA检出率16.7%,定量对数值为4.29±0.43;HBsAg、HBeAg、前S1抗原同为(-)组HBV-DNA检出率很低且定量对数值也低。大、小三阳患者治疗3个月后HBV—DNA定量对数值改变1.5以上者,分别为50.0%、31.4%。结论FQ-PCR定量检测HBV-DNA对乙型肝炎诊断、治疗、预后判断具有重要的指导意义。  相似文献   

20.
目的 探讨HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)(简称"大三阳")及HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)(简称"小三阳")乙型肝炎患者病毒DNA(HBV-DNA)和血清天冬氨酸氨基转移酶类(AST)的相关性.方法 酶联免疫方法 检测乙型肝炎表面血清标记物,将乙型肝炎患者血清标本分2组:大三阳组138例,小三阳组362例.实时荧光定量(FQ)PCR法定量检测HBV-DNA水平.酶耦联速率法检测AST水平,并对检测结果 行分析比较.结果 大三阳组和小三阳组HBV-DNA[(1.30±0.48)x107、(3.87±3.12)×102 copies/ml]和AST[(46±8)、(27±5)U/L]含量的差异均有统计学意义(均为P<0.05).大三阳组HBV-DNA异常率(92.03%)和AST异常率(43.48%)显著高于小三阳组(22.10%,21.27%)(均为P<0.01),但两组的HBV-DNA含量与AST并无相关性(P>0.05).结论 大三阳患者HBV-DNA含量及肝损伤程度高于小三阳患者,但HBV-DNA与AST未发现明显相关性.检测HBV-DNA与AST可以更准确地反映患者体内病毒感染情况,对于乙型肝炎诊断、治疗、预后判断具有重要的指导意义.  相似文献   

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