抗日本血吸虫未成熟虫卵单克隆抗体的制备和鉴定

采用日本血吸虫来成熟卵抗原（SIEA）免疫BALB／c小鼠，制备抗SIEA单克隆抗体。获得一株强阳性、高特异的抗未成熟虫卵的单抗（2B2），免疫球蛋白为IgG1类。免疫印迹分析表明该单抗单一识到日本血吸虫未成熟虫卵抗原中的50kDa分子。免疫荧光染色表明，与雌虫子宫内虫卵呈现强阳性反应，而不与成虫抗原交叉。     

曼氏血吸虫:两种含岩藻糖糖类抗原决定簇的免疫定位

作者用128C3/3、504B1两株单抗免疫定位不同发育期曼氏血吸虫碳水化合物抗原决定簇。这两株单抗分别由曼氏血吸虫尾蚴糖蛋白和虫卵蛋白免疫小鼠获得。实验方法:1)在有抑制剂L-岩藻糖、KLH或Lacto-N-fucopentoseⅢ(含三糖Le~x半抗原)存在的条件下,用~(35)S-蛋氨酸标记的雄性成虫可溶性抗原与504B1单抗进行放射免疫沉淀反     

用抗日本血吸虫虫卵单克隆抗体NP28-5B检测循环抗原的研究

本研究使用杂交瘤技术制备鼠抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)单克隆抗体NP28-5B,其同型鉴定为IgGl,针对的靶抗原分子量为140kD。将酶标记单抗NP28-5B进行Dot-ELISA直接法检测急性患者血清100份和慢性血吸虫病患者血清200份中循环抗原,阳性率分别为96％和98％,检测正常人血清200份,仅3例假阳性(1.5％)。用双盲法检测血吸虫病流行区江西矶山岛居民血清339份,其中粪检阳性血清114份,阳性率为89.47％,粪检阴性血清225份,阳性率为69.33％,研究证明NP28-5B具有高度诊断潜能。     

分泌抗日本血吸虫卵单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用SP2/0骨髓瘤细胞与日本血吸虫可溶性虫卵抗原免疫的BALB/C小鼠脾细胞融合,经筛选和克隆化后获得4株分泌抗血吸虫卵单克隆抗体的杂交瘤细胞.此4株单克隆抗体均能用虫卵抗原的ELISA、IHA和COP检出。用成虫冰冻切片作IFA可出现3种不同的免疫荧光反应类型。经交叉和吸收试验(ELISA法)证明其中3株对血吸虫卵具有高度特异性,另1株针对血吸虫、肺吸虫、华支睾吸虫共同抗原决定簇。4株单克隆抗体免疫球蛋白亚类鉴定均属小鼠IgM。     

日本血吸虫抗独特型单克隆抗体的建株及特性测定

BALB/C小鼠感染10条日本血吸虫尾蚴,半年后用一株在小鼠体内、外具有杀伤血吸虫作用的IgM单抗ssj14进行加强免疫,3d后取其脾细胞和骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,筛选到10株单克降抗独特型抗体(抗-Id).选择其中6株作进一步特征测定,ELISA抑制法表明它们能不同程度地抑制单抗ssj14识别可溶性虫卵抗原(SEA),抑制率与抗-Id的浓度呈正比,而这些抗-Id都不与SEA直接起反应.双向琼扩试验测定表明,6株抗-Id中2株为IgG:亚型(C_8和D_5),3株为IgG_3亚型(B_3、E_3和C_(10) ),1株为非IgM和IgG亚型(E_4).小鼠免疫试验结果显示,两株抗-Id(D_5和E_4)诱导了较高的减虫率(44.67%,(P<0.05)、47.28%(P<0.01))和减雌率(46.99%(P<0.01)、54.26%(P<0.01)),2株抗-Id(C_3和E_4)诱导了较高的减卵率(56.68%和61.13%);ELISA检测结果显示,小鼠用抗-Id免疫后均不同程度地产生了针对抗-Id和抗SEA及抗可溶性雄虫抗原(m-SWAP)的抗体,说明抗-Id模拟了单抗ssj14的靶抗原的部分结构,诱导了免疫鼠特异性的免疫应答.     

抗rSjCTPI单克隆抗体检测血吸虫循环抗原的研究

为探讨抗重组血吸虫磷酸丙糖异构酶（ｒＳｊＣＴＰＩ）的单克隆抗体检测血吸虫循环酶抗原在血吸虫病免疫诊断和疗效考核中的价值。制备日本血吸虫ｒＳｊＣＴＰＩ表达蛋白,以此重组蛋白免疫小鼠,筛选出高效价的抗ｒＳｊＣＴＰＩ单抗,建立以纯化的抗血吸虫可溶性虫卵抗原（ＳＥＡ）的多克隆抗体（ＩｇＧ）为捕捉系统,以酶标的抗ｒＳｊＣＴＰＩ单抗为检测系统的酶联免疫吸附试验（Ｐ－Ｍ－ＥＬＩＳＡ）法检测血吸虫病人等血清。并对该法的敏感性、特异性、交叉反应以及疗效考核与常规的ＳＥＡ－ＥＬＩＳＡ比较。结果获得了一株抗ｒＳｊＣＴＰＩ的单克隆抗体,其抗体同型为ＩｇＧ１。Ｐ－Ｍ－ＥＬＩＳＡ检浊急性、慢性血吸虫病人、健康人以及华枝睾吸虫病人、肺吸虫病人血清的阳性率分别为１００％、９１．７％、０、０和０。而ＳＥＡ－ＥＬＴＳＡ为１００％、９８．３％、６．     

多价单克隆抗体Dot—ELISA对人和家兔血吸虫病治疗前后的追踪观察

采用自制的多价单抗酶结合物和Dot-ELISA法检测血吸虫病人和感染家兔治疗前后血清循环抗原。报告如下: 1 材料和方法 1.1 单克隆抗体的制备感染血吸虫尾蚴或SEA免疫的BALB/c小鼠脾细胞分别与SP2/O骨髓瘤细胞融合,经克隆化后,用IFA筛选出2株分泌抗血吸虫成虫肠相关阳极抗原(CAA)单克隆抗体杂交瘤细胞株3B_(11)E_3、3B_(10)G_8和1株抗血吸虫卵糖蛋白抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株3G_4A_4。将细胞株分别注入小鼠腹腔,诱生的腹水置低温保存。 1.2 多价单克隆抗体酶结合物的制备三种单抗腹水经PEG法提纯后,按相同比例混合成多价单抗,用戊二醛二步法交联辣根过氧化物酶。Dot-ELISA测定酶结合物最适工作浓度为1:1000用于     

抗华支睾吸虫单克隆抗体的制备和鉴定

目的：建立分泌抗华支睾吸虫成虫的单克隆抗体杂交瘤细胞株并进行鉴定。方法：用华支睾吸虫成虫可溶性抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合，筛选分泌高滴度单克隆抗体的杂交瘤细胞株，测定单抗免疫球蛋白亚类和单抗效价，检测单抗与日本血吸虫虫卵抗原、卫氏并殖吸虫成虫抗原和猪囊尾蚴抗原的交叉反应，用ＩＦＡＴ进行单抗识别的抗原定位。结果：获得５株分泌高滴度抗华支睾吸虫成虫单抗的杂交瘤细胞株，其分泌的抗体与日本血吸虫、卫氏并殖吸虫和猪囊尾蚴抗原均不发生交叉反应；５株单抗均属ＩｇＭ；单抗所识别的抗原定位于华支睾吸虫肠管壁。结论：制备的抗华支睾吸虫成虫的杂交瘤细胞株能分泌高滴度和高特异性的单抗。     

McAb-Dot-ELISA检测牛日本血吸虫病血清循环抗原

目的 应用McAb-Dot-ELISA检测牛日本血吸虫病血清循环抗原并观察其与现场粪孵结果的符合情况。方法 用辣根过氧化物酶标记日本血吸虫单抗SSJ14；应用McAb-Dot-ELISA检测现场和实验室感染牛日本血吸虫血清循环抗原。结果 检验酶标单抗的特异性和敏感性显示该株单抗有较高的特异性和敏感性，用实验室感染血吸虫病的阳性牛血清及阴性血清检测有100％的符合率，检测现场采集血清的循环抗原的结果和粪孵结果对比，总符合率达到82．91％。结论 SSJ14单抗和由此研制的McAb-Dot-ELISA方法能应用于牛日本血吸虫病血清循环抗原的检测。     

检测日本血吸虫感染兔尿中循环抗原的研究

目的：建立检测尿液中血吸虫循环抗原的方法。方法：从感染家兔尿中提取血吸虫循环抗原,并用所提取的抗原制备和筛选抗该抗原的特异性单克隆抗体。用单抗二抗一步法酶联免疫试验检测感染家兔中的日本血吸虫循环抗原。结果：２２只家兔感染前尿液中的循环抗原全部阴性;感染后尿液中循环抗原的阳性率与感染度及感染时间有关。感染２５条尾蚴的家兔在感染后３ｗｋ未能测到循环抗原,而感染２００条尾蚴的家兔在感染３ｗｋ和６ｗｋ的尿循环抗原阳性率分别为４０％和１００％。结论：用感染兔尿中提取的循环抗原所制备的单抗作为探针,可用于检测感染动物尿液中血吸虫循环抗原     

检测血吸虫循环抗原的多价单克隆抗体诊断试剂盒的研制和应用

用杂交瘤技术生产抗血吸虫肠相关循环阳极抗原单克隆抗体与血吸虫卵糖蛋白单克隆抗体经混合后标记辣根过氧化物酶，制成Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒，检测轻、中、重不同疫区粪检阳性的血吸虫闰人血清中循环抗原，阳性率分别为８４．３％、８７．２％和９１．５％。     

抗IL-2抗体处理曼氏血吸虫感染鼠减轻肝脏病理学、嗜酸粒细胞增多和选择性抑制T细胞产生IL-5

IL-2在血吸虫病肉芽肿和纤维化形成和调节中作用报道各异。本文通过注射抗IL-2和抗IL-2受体(IL-2R)单抗观察IL-2对虫卵诱导的病理学影响。4～6周龄的C3H/HeV雌性小鼠,经皮肤感染曼氏血吸虫波多黎各株尾蚴50条。5周后,每周皮下注射抗IL-2的S4B6和抗IL-2R的PC61单抗5mg,另3组小鼠注射J1。2或GL113单抗或生理盐水作为对照。感染8周时解剖观察寄生虫和病理学,嗜酸粒细胞计数,IgG1和IgE水平及可溶性虫卵抗原(SEA)或ConA诱生脾细胞产生的细胞因子变化。结果:抗IL-2组鼠(n=10)每鼠成虫对数(条)、组织中和粪便中每对成虫的虫卵数(个)分别为10.9±0.8、6.52±0.45和252±26。抗IL-2R组鼠(n=10)分别为10.3     

抗rSjCTPI单克隆抗体检测血吸虫循环抗原的研究

为探讨抗重组血吸虫磷酸丙糖异构酶（rSjCTPI）的单克隆抗体检测血吸虫循环酶抗原在血吸虫病免疫诊断和疗效考核中的价值。制备日本血吸虫rSjCTPI表达蛋白,以此重组蛋白免疫小鼠,筛选出高效价的抗rSjCTPI单抗,建立以纯化的抗血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）的多克隆抗体（IgG）为捕捉系统,以酶标的抗rSjCTPI单抗为检测系统的酶联免疫吸附试验（P-M-ELISA）法检测血吸虫病人等血清。并对该法的敏感性、特异性、交叉反应以及疗效考核与常规的SEA-ELISA比较。结果获得了一株抗rSjCTPI的单克隆抗体,其抗体同型为IgG1。P-M-ELISA检测急性、慢性血吸虫病人、健康人以及华枝睾吸虫病人、肺吸虫病人血清的阳性率分别为100%、91.7%、0、0和0。而SEA-ELTSA为100%、98.3%、6.69%、10%和20%。P-M-ELISA法对30例同批血吸虫病人治疗前的阳性率和治愈后4个月的阴转率分别为100%和30%;而SEA-ELTSA分别为100%和10%。结果表明,应用抗rSjCTPI单抗检测血吸虫病人循环抗原的P-M-ELISA法具有较高的敏感性和特异性,并有一定的疗效考核价值。     

单克隆抗体NP28—5B对日本血吸虫卵肉芽肿形成的调节作用

本研究首先应用针对中国大陆株日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)中140kD靶抗原的单克隆抗体NP28-5B(lgG_1),经体内被动转移试验表明对虫卵致敏/虫卵攻击的小鼠肺肉芽肿模型中日本血吸虫虫卵肉芽肿形成具显著的抑制或调节作用(抑制率为53％,P<0.002),进一步提供证据表明抗体参与虫卵肉芽肿形成的调节网络,也将为日本血吸虫病抗病免疫和抗病疫苗研究提供重要的分子基础。作者对上述作用机理作了有限探讨。     

日本血吸虫病患者体内自然抗独特型抗体的初步研究

成用杂交瘤技术所制备的鼠抗日本血吸虫可溶性抗原(SEA)单克隆抗体5B5H腹水经饱和硫酸铵提纯后制成亲和层析柱,血吸虫病人血清过此柱后获得抗Id抗体提取物。经McAb-ELISA测试,提取物与5B5H单抗特异性结合,与另一株抗SEA单抗W_(29)及抗成虫单抗W_(46)均不结合,补体结合试验表明此提取物不含有免疫复合物。SEA可显著竞争抑制Id(5B5H)-抗Id抗体的结合,提示抗Id抗体所针对的5B5H单抗的Id位于抗原结合部位或其邻近。用5B5H-ELISA检测两个不同地区血吸虫病患者的抗Id抗体,阳性率分别为35.1％和60％,与姜片虫病人血清(0/15)、华支睾吸虫病人血清(0/15)无交叉反应,在并殖吸虫病人血清中出现一例阳性(1/20),与健康人也无假阳性反应(0/50)。     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30的建株及初步鉴定

用感染8条日本血吸虫尾蚴,时间长达一年半的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用兔抗日本血吸虫肠相关抗原和兔抗可溶性虫卵抗原免疫血清与细胞培养上清进行ELISA筛选阳性克隆,最终建立了分泌单克隆抗独特型抗体细胞株NP30。作者用一系列试验证明,NP-30是日本血吸虫肠相关抗原的内影象抗独特型抗体,有替代日本血吸虫虫源性抗原用于血清学诊断的可能性。     

抗华支睾吸虫代谢抗原单克隆抗体的制备及鉴定研究

目的建立分泌抗华支睾吸虫代谢抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株。方法用华支睾吸虫成虫代谢抗原免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0融合，筛选分泌高滴度单克隆抗体的杂交瘤细胞株，测定单抗免疫球蛋白亚类和单抗效价，检测单抗与日本血吸虫全虫可溶性抗原、卫氏并殖吸虫成虫抗原和猪囊尾蚴抗原的交叉反应。结果获得3株分泌高滴度抗华支睾吸虫代谢抗原的杂交瘤细胞株，其分泌的抗体与日本血吸虫、卫氏并殖吸虫和猪囊尾蚴抗原均不发生交叉反应，3株单抗均属IgG。结论制备的抗华支睾吸虫代谢抗原的杂交瘤细胞株能分泌高滴度和高特异性的单抗，为制备免疫诊断试剂盒奠定了基础。     

单克隆抗体74D11,SJA111检测慢性日本血吸虫病循环抗原的研究

本研究用双抗夹心ＥＬＩＳＡ法检测慢性日本血吸虫病人血清循环抗原，观察血吸虫感染家兔血清循环抗原的动态变化。该方法采用兔抗ＡＷＡ－ＩｇＧ作包被抗体，抗日本血吸虫成虫和血卵单抗ＳＪＡ１１１和７４Ｄ１１组合作Ⅱ抗，１７２例经粪孵毛蚴确诊的血吸虫病人中，１３６例循环抗原阳性（７９．１％），其中轻度（毛蚴数〈５只／２０克粪）、中度（－２０）、重度（大于２０）感染者循环抗原阳性率分别为７３．４％、８７．７％、     

抗重组日本血吸虫P38抗原单克隆抗体的制备与鉴定

目的?摇在大肠埃希菌中可溶性表达日本血吸虫P38（SjP38）抗原分子，并以其纯化产物为抗原，制备抗SjP38单克隆抗体(McAb)。 方法 将pET32(a)-P38重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)，在1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导下表达，超声破菌后获得可溶性表达产物，通过镍柱一步法纯化，以纯化的重组SjP38为抗原，免疫BALB/ｃ小鼠，采用杂交瘤技术制备McAb，用ELISA和有限稀释法筛选出高分泌滴度McAb杂交瘤细胞株，测定其免疫球蛋白亚类及其效价，蛋白质印迹法（Western blotting）分析其特异性。 结果 筛选出能稳定分泌抗重组SjP38单克隆抗体的8株杂交瘤细胞株，均为IgG1； Western blotting 分析显示8株单抗能与日本血吸虫虫卵抗原中的天然P38发生特异性结合。 结论 制备的抗P38杂交瘤细胞株能分泌高滴度、高特异性的McAb。     

单克隆抗体74D_(11)、SJA_(111)检测慢性日本血吸虫病循环抗原的研究

本研究用双抗夹心ＥＬＩＳＡ法检测慢性日本血吸虫病人血清循环抗原，观察血吸虫感染家兔血清循环抗原的动态变化。该方法采用兔抗ＡＷＡ－ＩｇＧ作包被抗体，抗日本血吸虫成虫和虫卵单抗ＳＪＡ１１１和７４Ｄ１１组合作Ⅱ抗，１７２例经粪孵毛蚴确诊的血吸虫病人中，１３６例循环抗原阳性（７９．１％），其中轻度（毛蚴数＜５只／２０克粪）、中度（６－２０）、重度（大于２０）感染者循环抗原阳性率分别为７３．４％、８７．７％、９２．８％，检测６５例健康献血员，２０例肺吸虫病人，１２例华支睾吸虫病人，１０倒包虫病人，交叉反应率依次为１．５％、５％、０％、０％，４２例经吡喹酮治疗后的血吸虫病人用该方法复查，治后３月和６月随访粪孵毛蚴阴转者中，循环抗原阴转率分别为７８．０％和９２．１％，考核疗效明显优于检测循环抗体。用单抗ＳＪＡ１１１检测感染家兔循环抗原动态变化，循环抗原于感染后３—４周可检出，７周达高峰，以后逐渐消退，而循环抗体（ＩｇＧ）推迟１周出现，８－９周达高峰。实验结果表明，血吸虫病血清ＣＡｇ阳性率与感染度有关，可在早期检出，检测方法具有较高敏感性和特异性，可用于早期诊断和疗效考核。