SOS显色反应筛选抗遗传毒物的方法学研究

SOS显色反应是检测细菌SOS反应诱导的遗传毒理学短期试验．本文报告以SOS显色反应筛选抗遗传毒物的方法学研究．我们设计了5种实验①抗致癌性亚硝胺生成，②抗间接致突变物(苯并(a)芘)；③抗直接致突变物(丝裂霉素C)：④抗UV致DNA损伤诱发SOS反应；⑤受试物对半乳糖苷酶（βG）和碱性磷酸酶(AP)活性的影响．     

冬凌草甲素对哺乳动物细胞DNA损伤作用的影响

目的　探讨冬凌草甲素对哺乳动物细胞DNA损伤的抑制作用。方法　用小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验和大白鼠肝原代细胞非程序DNA合成(unscheduledDNAsynthesis ,UDS)实验检测冬凌草甲素对哺乳动物细胞DNA损伤的影响。结果　冬凌草甲素可明显地抑制环磷酰胺(CP)诱导的小鼠骨髓PCE微核发生率(P <0 .0 1)及盐酸氧芥(NH2 ·HCl)诱导的小鼠肝原代细胞UDS(P<0 .0 1)。结论　冬凌草甲素具有明显的抑制哺乳动物细胞DNA损伤的作用。     

关于遗传毒物的细菌测试系统

一系列物理和化学因素能直接或间接地引起生物细胞中遗传物质DNA发生损伤或阻断DNA复制,这些因素被总称为遗传毒性因子(Genotoxic agent)或遗传毒物(Genotoxin)。遗传毒物之所以受到人们重视,因为有证据表明环境中存在的遗传毒物不但能引起生物发生遗传性变异,有些还能致癌(据估计人类的癌症中70％以上是由环境中存在的致癌因子所引起)。所以检测     

老年胃癌患者的DNA修复功能的特点

在我国胃癌的发病率和死亡率均居恶性肿瘤的首位,它严重危害着人民的生命。而目前认为大多数致癌物均可损伤DNA并由此导致细胞的突变和癌变,DNA的损伤及其修复同致突变和致癌变有直接关系。而检测非程序DNA合成方法(UnscheduledDNA Synthesis,UDS)是一种敏感、快速、经济、简便的反映DNA修复功能的方法。     

DNA修复:致癌作用的新线索

所有细胞都是和化学物或辐射——例如太阳光中的紫外线照射接触的。这些都可以引起细胞遗传物质DNA结构的改变。由于DNA结构上个别的变化可能是有害的,甚至是致死性的,因此毫不奇怪体内存在有修复损伤的DNA的一系列精细的机制。已知细菌具有几个不同的修复机制,在哺乳动物细胞,包括人细胞中似乎也存在有相似     

铅对果蝇生殖细胞显性致突变性的研究

铅是有毒重金属之一,其对人类生殖的影响早在1980年就有报告。近年来铅的致突变性的问题已引起了人们的重视。已证明铅能聚积在细胞核内,干扰细胞增殖和DNA的合成,影响DNA合成的精确性。能引起果蝇染色体丢失。铅对哺乳动物有显性致死作用。但铅的某些短期致突变实验的结果均为阴性,因此目前关于铅的致突变性的问题尚有争议。一种致突变物往往引起遗传物质的多种损伤,包括点突变和染色体畸变等。传统的显性致死性突变实验主     

5—单硝酸异山梨酯的致突变性研究

本文选用Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验和体外细胞染色体畸变试验,对5-单硝酸异山梨酯(5-ISMN)的致突变性进行了研究。Ames试验结果显示,在所选剂量范围内和±S9的条件下,5-ISMN对测试菌株的回复突变菌落数无明显影响,为致突变阴性。在微核试验中,各给药组微核发生率与阴性对照组相比,无显著性差异,P>0.05。染色体畸变试验中也未观察到5-ISMN对体外培养CHL细胞的染色体损伤作用。研究结果表明,5-ISMN对原核生物和哺乳动物细胞无致突变作用。     

DNA甲基化与癌

在哺乳动物DNA中,5-甲基胞嘧啶(5-methylcytosin,~mC)是唯一天然存在的修饰碱基,约占全部胞嘧啶的2～5％,这些甲基化部位的绝大部分存在于CG顺序中,按如下形式对称排列:5’-~mCG-3’ 3’-G~mC-5’,但是新复制的DNA是半甲基化(hemimethyla-tion)的,新合成链无~mG。核内DNA甲基化酶(DNA methylase)识别模板链上的甲基化部位,按照原则,在新链的相应部位进行甲基化修饰,完成~mC复制。因此,DNA甲基化类型(DNA methylation pattern)具有相对稳定的体细胞遗传性(somatically     

城市回用水致突变性研究

背景与目的： 对城市回用水的致突变性进行分析。 材料与方法: 分别于丰水期(2005年8月)、枯水期(2006年3月)采集处理前、后的某城市回用水水样,利用固相萃取技术提取水中有机物。采用Ames试验、体外胞质阻滞法微核试验和质粒DNA断裂试验研究水样对遗传物质的损伤,并采用基因测序方法研究水样对p53基因外显子的致突变性。 结果: 对两次水样的出水和入水检测结果显示,除丰水期入水在活化条件下无致突变性外,其余水样在非活化和活化条件下TA98和TA100菌落回变数均为自然回变菌落数的2倍以上,且具有剂量-反应关系(P<0.05)。微核试验中相当于原水体积16.7、33.3和66.7 ml/ml 的3个剂量组中,微核数仅在相当于原水66.7 ml/ml浓度组有升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。DNA断裂试验显示随着城市回用水(出水及入水)剂量的增加,对质粒的损伤作用也明显增加(P<0.05),且在枯水期水样的实验中出现了线性DNA。基因测序法证实,城市回用水(出水及入水)有机提取物能诱导人胚肝细胞(L-02细胞)p53基因突变。 结论: 城市回用水具有一定的致突变作用,对环境与健康具有潜在的风险。     

甲基磺酸乙酯对原核与真核细胞内的穿梭质粒的诱变研究

近年来,随着分子生物学技术的发展,推动和促进了遗传毒理学研究的发展。80年代中期起从分子水平上利用穿梭质粒进行细胞诱变研究,成为遗传毒理学的一个新领域。穿梭质粒是利用重组DNA技术构建的DNA分子。大肠杆菌——哺乳动物细胞穿梭质粒既可在大肠杆菌中复制,也能在哺乳动物细胞中增殖。利用这种穿梭梭质粒可     

汞、镉对小鼠离体骨髓细胞和睾丸生殖细胞的DNA损伤作用

背景与目的: 研究氯化汞、氯化镉对小鼠离体骨髓细胞和睾丸生殖细胞的DNA损伤作用,比较两种细胞DNA损伤的敏感性差异。材料与方法: 分别以0、0.01、0.1、1 mmol/L剂量氯化汞和0、0.04、0.2、1、5 mmol/L剂量氯化镉处理离体小鼠骨髓细胞和睾丸生殖细胞1h,应用单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis, SCGE)技术检测氯化汞和氯化镉对细胞DNA的损伤率和细胞DNA迁移距离的影响。结果： 氯化汞、氯化镉处理组两种细胞DNA损伤率增高, DNA迁移距离增加。DNA损伤率和迁移距离存在明显的剂量效应关系。0.01 mmol/L剂量氯化汞、1 mmol/L氯化镉及以下剂量处理两种细胞引起睾丸生殖细胞DNA的损伤率高于骨髓细胞的DNA损伤率。结论： 氯化汞和氯化镉可引起小鼠骨髓细胞和睾丸生殖细胞DNA损伤,且睾丸生殖细胞DNA受氯化汞和氯化镉损伤更敏感。     

柴油机颗粒物对程序外DNA合成的影响

柴油机由于具有动力大、效率高、燃料经济等优点，而得到越来越广泛的应用，但是，与汽油机相比它排出的颗粒物多，是汽油机的20～100倍，且粒径小、易吸入，故关于柴油机颗粒物可能对人体造成的危害已日益引起国内外学者的关注，为研究柴油机颗粒物对哺乳动物细胞DNA的损伤作用，我们采用了大鼠肝细胞程序外DNA合成实验（UDS)来检测5种柴油机颗粒物的致突变活性．     

核苷酸切除修复基因XPB反义RNA表达质粒的构建及其功能的初步研究

背景与目的：核苷酸切除修复机制是细胞修复损伤DNA的重要途径,肿瘤细胞的耐药常伴随DNA损伤修复基因表达增强,采取反义策略降低细胞的DNA损伤修复能力可以增加肿瘤细胞的药物敏感性。本研究拟构建能在哺乳动物细胞中表达XPB反义RNA的表达质粒pcDNA-XPB/AS(XPB：着色性干皮病B基因),并初步探讨其对肺癌细胞DNA损伤修复能力及抗肿瘤药物耐药性的影响。方法：采用RT-PCR技术扩增的XPB cDNA5′端一段69--520bp的序列被反向插入表达质粒pcDNA3．1／His。将该重组质粒瞬时转染肺癌A549细胞。单细胞凝胶电泳(SCGE)比较阿霉素诱导的转染前后细胞DNA损伤修复情况。MTT法检测转染前后细胞对阿霉素的敏感性。结果：酶切图谱分析和基因测序证实反义表达质粒构建成功。RT-PCR显示转染细胞XPB mRNA表达水平下降。以4．Oμg／ml阿霉素诱导细胞DNA损伤,SCGE显示转染细胞修复DNA损伤能力受到抑制。MTT显示未转染细胞与转染细胞对阿霉素的敏感性存在差别,但无统计学意义。结论：构建的反义表达质粒能下调转染细胞XPB mRNA表达,抑制细胞DNA损伤修复能力,为进一步研究XPB基因功能奠定了基础。     

人肿瘤细胞的双微体

双微体(DM)和均匀染色区(HSR)在正常细胞是少见的。在对某些抗代谢物有抗性的细胞内以及在人和鼠肿瘤细胞内发现了DM 和HSR。本文将探讨DM 在癌细胞生物学方面的作用。没有着丝粒的有丝分裂分离染色体的复制和分离:复制意味着DNA 复制的开始,染色体分离意味着存在着丝粒的DNA 序列。     

化学致癌物和抗致癌物检测技术的基础和应用研究

该课题已发表论文33篇,内容有6项: 一、非程序性DNA合成试验的改进。本改进法以~(14)C-胸苷预标记的同步化培养细胞为测试细胞,从而在测量非程序性DNA合成的~3H-胸苷掺入的比放射活性时可省略繁复的DNA定量测定,而以~3H/~(14)C放射活性比代替,大大缩短了测试周期和材料消耗。二、创建一个以ADP-核糖基转移酶介导的细胞NAD含量降低为DNA损伤检测终点的试验法。研究证明该酶活性和它的唯一底物(细胞NAD)含量由于在DNA复制过程中出现的小片段DNA的刺激而呈细胞周     

内复制及其在肿瘤发生发展中的作用

大多数的二倍体细胞通常通过G1期(DNA合成前期)、S期(DNA合成期)、G2期(DNA合成后期)和M期(分裂期)经典细胞周期完成细胞增殖。然而,在动、植物中也广泛存在着一种与有丝分裂不同的细胞周期过程,即内复制。在内复制过程中,G期和S期交替出现,细胞并不发生分裂,导致产生多倍体细胞。内复制在人体的正常发育、器官形成、创伤愈合过程中必不可少。近年来,越来越多的研究关注内复制与肿瘤发生、演进的关系。本文就内复制的生理作用做一概述,并讨论内复制在肿瘤发生、发展中的可能作用及相关分子机制。      

质粒psk100的增变和sos反应及其在检测诱变剂中的应用

uv和大多数化学物的致突变需通过umuDC基因介导的SOS修复处理。在S.typhim-urum TA1535上,质粒PKM101有增变效应,带融合基因umuC’—×~Lacz的质粒PSK1002能诱导SOS反应。然而,不清楚质粒     

苯酰甲硝唑致突变致畸性研究

本研究采用Ames试验、细胞染色体畸变和小鼠胚胎致畸试验,旨在探索新研制的苯酞甲硝唑是否具致突变性。Ames试验结果表明,药物剂量的回复突变菌落数明显高于自发回变数,与阳性对照组相近。体外培养CHO-k细胞株染色体畸变试验结果表明,药物剂量组在加活化代谢和非活化代谢条件下,细胞染色体畸变率没有增加,对细胞DNA损伤不明显。在哺乳动物胚胎致畸试验中,药物高剂量组(5.0g/kg)对胚胎产生了毒性效应,吸收胎和死胎率升高,活胎率降低,检查活鼠的生长发育和骨骼未发现明显的畸形。其余药物组对小鼠胚胎性不明显。     

WTK1细胞在tk位点突变和DNA损伤与修复中的应用

背景与目的:为WTK1细胞在遗传毒理学可同时应用于基因突变和DNA损伤的研究提供实验依据.材料与方法:分别用标准诱变剂甲基磺酸甲酯(MMS)和过氧化氢(H2O2)处理WTKl细胞,采用tk基因突变试验和单细胞凝胶电泳技术(Single Cell GelElectrophoresis,SCGE)对细胞的tk位点突变和过氧化氢诱发的DNA损伤情况进行检测.结果:甲基磺酸甲酯可诱发WTKl细胞tk位点的突变,以诱发染色体畸变为主.过氧化氢诱发了WTKl细胞DNA的损伤,并有剂量反应关系.随着修复孵育时间的延长,彗星细胞尾长和彗星细胞出现率明显下降,与对照组比较,差异有显著性(P＜0.01).结论:WTKl细胞可同时应用于tk基因突变和DNA损伤与修复的研究.采用该细胞株可对化合物进行基因突变和DNA损伤进行研究评价.     

DNA修复基因OGG1研究进展

细胞正常有氧代谢和外源性物理、化学及生物因素均可使机体产生活性氧自由基,大量研究证实:自由基可攻击DNA形成多种类型的氧化损伤.在众多的DNA氧化损伤中,8-羟基鸟嘌呤(8-oxoguanine,8-oxoG)形成频率最高、致突变性最强,可导致G:C→T:A颠换,该突变与肿瘤的发生发展、机体细胞的老化及某些退行性疾病均有密切关系.体内特异识别8-oxoG并将其切除修复的酶被称为8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(8-oxoguanine DNA glycosylase),简称OGG1,在人叫做hOGG1.本文将对OGG1的结构与功能、表达与调节、氧化损伤与肿瘤的关系及其研究进展作一概述.