AFP时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制及其临床应用

目的:研制AFP时间分辨荧光免疫分析(TrFIA)试剂盒。方法:采用双抗体夹心法建立AFP-Tr-FIA试剂盒,对反应条件进行优化,并对试剂盒的各项指标进行评价。结果:抗体包被浓度确定为5μg/m l,铕标抗体最佳稀释比为1 50。试剂盒的线性范围为1ng/m l~1210ng/m l,灵敏度为0.41ng/m l,准确度高,批内和批间变异系数分别5.1%~8.8%,6.7%~11.9%。与CA199、CA125、CEA和白蛋白无交叉反应。破坏试验表明试剂在37℃可稳定7d。收集50例肝癌患者和370例健康人血清,用本试剂盒测得肝癌患者血清AFP浓度(557.3ng/m l±322.1ng/m l)显著高于健康人(6.5ng/m l±5.4ng/m l)(P<0.001)。370例正常人血清标本测试该试剂盒的正常参考范围为(0~12.0)ng/m l。本试剂盒检测结果与商用W allac AFP试剂盒检测结果相关系数为0.9988。结论:试剂盒各项指标达到规定的要求,可用于临床血清AFP检测。     

VEGF-TrFIA及其在结直肠癌中的应用

目的:研制VEGF时间分辨荧光免疫分析(TrFIA)试剂盒。方法:采用双抗体夹心法建立VEGF-TrFIA试剂盒,并对试剂盒的各项指标进行评价。结果:试剂盒的线性范围为1pg/m l~400pg/m l,灵敏度为0.21pg/m l,准确度高,批内和批间变异系数分别为1.1%~8.4%,2.97%~11.7%。与CA199,CA215,AFP,CEA和白蛋白无交叉反应。收集30例结直肠癌患者和37例健康人血清,用本试剂盒测得结直肠癌患者血清VEGF浓度(357.3±22.1)pg/m l显著高于健康人(71.5±9.1)pg/m l(P<0.0001)。本试剂盒检测结果与商用ELISA试剂盒检测结果相关系数为0.993。结论:试剂盒各项指标达到规定的要求,可用于临床血清VEGF检测。     

总PSA时间分辨免疫荧光分析法的建立

利用时间分辨免疫荧光分析(TRFIA)技术建立人血清总PSA(前列腺特异性抗原)的快速全自动检测方法及其诊断试剂研制,该法采用双抗体夹心法建立tPSA-TRFIA,对该法和研制试剂的指标评价表明:方法的线性测量范围为0.50～250μg/L,灵敏度为0.06μg/L,批内批间的精密度分别为5.58%～9.71%,6.49%～12.12%。与CEA、CA12-5、CA15-3、CA19-9、AFP无交叉反应。353份血清标本用本试剂与国外其他试剂同时检测,其相关性达到94.4%,结果表明,试剂测定各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品。     

糖类抗原CA72-4化学发光定量免疫分析方法的建立

目的 建立糖类抗原CA72-4化学发光定量免疫测定方法.方法 一株抗CA72-4单克隆抗体经微孔板固相包被与另一株酶标单克隆抗体建立双夹心反应体系,检测样品中CA72-4抗原的含量.通过与国外权威试剂盒血样测值的对比,分析该方法临床应用的可行性.结果 该分析方法线性范围为0～ 160 U/mL,灵敏度为0.55U/mL.批内CV值为:5.49％,4.53％;批间CV值为:8.12％,7.81％;回收率为:99.74％ ～ 104.11％;与CEA,CA125,CA19-9无交叉反应;与法国Cisbio analysis公司所生产的CA72-4免放药盒血清测值对比分析后,发现两者相关性较高,并确定了本分析方法的正常范围.结论 该分析方法的测定结果与参比试剂盒结果有较高符合率,可用于临床血清中CA72-4的检测.     

四种肿瘤标志物联合检测对胃癌的诊断价值

对已确诊的胃癌患者于术前测量其相关血清肿瘤标志物,分析不同的联合检测对胃癌的诊断价值,选出临床诊断胃癌敏感性最佳的组合。用电化学发光免疫分析法和酶联免疫法测定56例胃癌患者及30名健康对照组的血清CEA、CA19-9、CA72-4、MG7-Ag(胃癌抗原)。结果显示,对照组CEA为2.1±0.8μg/L,CA19-9为14.5±7.3U/mL,CA72-4为4.2±1.3mU/L,MG7-Ag为2.8±1.0μg/L。胃癌患者术前CEA为28.4±91.2μg/L,CA19-9为35.9±71.9U/mL,CA72-4为9.8±40.8U/mL,MG7-Ag为3.6±4.4μg/L。胃癌患者术前血清4项肿瘤标志物中的CEA和CA72-4较对照组有明显增高,有显著性差异(P<0.05)。经分析,4项血清肿瘤标志物的组合中,第11、9、8组合(见正文表3)的敏感性分别是69.6%、63.9%、63.6%。结论是CEA、CA72-4联合检测对胃癌诊断有意义,CEA与CA72-4、MG7-Ag的组合为首选。     

神经元特异性烯醇化酶光激化学发光免疫分析法的建立

研制检测人血清神经元特异性烯醇化酶(NSE)的光激化学发光免疫分析(AlphaLISA)快速检测试剂盒。采用受体微球用一株NSE单克隆抗体包被,用生物素标记一株单克隆抗体,与链霉亲和素的供体微球共同组成检测试剂盒,优化反应体系并对试剂盒的各项性能指标进行评价。结果显示:自制NSE试剂盒灵敏度为0.149 ng/ml,线性范围为0.149~600ng/ml,分析内、分析间的精密度分别为3.7%~4.3%、3.9%~5.2%,与细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、非神经元性烯醇化酶(NNE)均无交叉反应,154份临床血清样本用本试剂盒与罗氏化学发光试剂盒检测,其相关系数为0.979。发现自制NSE-AlphaLISA试剂盒的各项性能指标均能达到临床检测要求,可用于临床血清样本NSE浓度的测定。     

癌胚抗原光激化学发光免疫分析法的建立

目的:利用光激化学发光免疫分析技术(Al-phaLISA)建立人血清癌胚抗原(CEA)的快速检测试剂。方法:1株CEA单克隆抗体(mAb)包被受体微球,另1株(mAb)用生物素标记,与链霉亲和素的供体微球共同组成检测试剂,优化反应体系并对试剂的各项性能指标进行评价。结果:自制CEA试剂分析灵敏度为0.11 ng/mL,线性测量范围为0.11～500 ng/mL,分析内和分析间的精密度分别为3.3%～6.8%、5.5%～8.1%,与AFP、CA12-5、CA19-9和人血清白蛋白均无交叉反应,100份临床血清样本用本试剂与罗氏化学发光试剂检测,其相关系数为0.976。结论:自制CEA Al-phaLISA试剂的各项性能指标均能达到临床检测要求,有望替代国外同类试剂应用于临床血清样本CEA浓度的测定。     

人血清CYFRA21-1化学发光免疫分析方法的初步建立及应用

目的:建立人血清CYFRA21-1化学发光免疫分析方法并在临床检测中的应用。方法:使用CY-FRA21-1定量测定试剂盒（化学发光法）检测308例临床血清标本,并与CYFRA21-1电化学发光全自动免疫分析方法进行对比。结果:灵敏度0.04μg/L,线性范围（1.5～100）μg/L,与NSE及CEA无交叉反应,样本中抗凝剂量的柠檬酸钠、肝素、EDTA-Na₂对测定结果没有影响。添加回收率和稀释回收率为90%～110%,分析内和分析间变异系数均<10.0%。该方法正常参考值为（0～3.4）μg/L（95%可信限）。ECLA测定结果与本法相比,临床总符合率为96.65%。结论:该方法灵敏度高、特异性好、稳定性强,检测范围宽,有良好的准确性和重复性,完全可替代进口化学发光试剂用于临床样本的检测。     

抗磺胺嘧啶单克隆抗体的制备及其ELISA检测试剂盒的建立

目的 :制备抗磺胺嘧啶 (SD)的单克隆抗体 (mAb) ,并研制SD快速检测试剂盒。方法 :以SD BSA的偶联物作为抗原免疫BALB/c小鼠 ,采用杂交瘤技术制备抗SD的mAb。并用抗SDmAb和SD HRP酶标抗原 ,建立一种可检测样品中的游离SD分子的竞争法ELISA。结果 :获得 5株可分泌抗SDmAb的杂交瘤细胞 1A1、1B8、1E4、2C1和 3D9。其中 1A1、1B8和 1E4为IgG1,2C1和 3D9为IgG2。试剂盒的半数抑制率 (I5 0 )为 9.3μg/L ,理论最低检出量达到 0 .6μg/L ,对于不同样品中SD的回收率均高于 60 %。除与SD反应以外 ,该试剂盒对其他磺胺类药物检测的交叉反应均小于 3 %。结论 :成功地制备了抗SD的mAb ,并建立了一种可快速检测各种样品中SD的竞争ELISA试剂盒     

血清肿瘤标志物CEA、CA724、CA242、CA19-9联合检测诊断肺癌的临床价值分析

目的 分析血清肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、糖类抗原724(CA724)、糖类抗原242(CA242)、糖类抗原19-9(CA19-9)联合检测与肺癌诊断及预后的相关性.方法 选取2014年5月至2017年1月我院收治的肺癌患者120例为研究对象,并纳入观察组,以同期入院体检的良性肺疾病患者55例为对照组,测定两组血清CEA、CA724、CA242、CA19-9水平,对比四种肿瘤标志物在不同病理类型肺癌中表达水平,分析CEA、CA724、CA242、CA19-9联合检测与单项、2联、3联检测诊断肺癌的灵敏度、特异度、准确度、阳性预测值、阴性预测值,比较CEA、CA724、CA242、CA19-9阳性或阴性患者在预后随访中无复发生存率、远处转移率.结果 观察组血清CEA(30.24±1.75)μg/L、CA724(14.85±1.11)kU/L、CA242(38.18±1.05)kU/L、CA19-9(41.24±1.57)kU/L均较对照组高(P<0.05);CEA、CA242在腺癌中表达水平最高,CA724、CA19-9在腺癌与鳞癌中表达水平差异无统计学意义(P>0.05);CEA、CA724、CA242、CA19-9联合检测诊断肺癌的灵敏度98.18%、准确度80.00%、阴性预测值80.00%,均高于上述指标单项或2联、3联检测(P<0.05);CEA、CA724、CA242、CA19-9阳性患者与阴性患者比较,无复发生存率明显较低,远处转移率显著较高(P<0.05).结论 血清肿瘤标志物CEA、CA724、CA242、CA19-9联合检测诊断肺癌的灵敏度、准确度较单项、2联及3联检测明显提高,且上述指标可用于预测预后,值得在临床推广应用.     

血清铁蛋白时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制

目的 血清铁蛋白(sFER)时间分辨荧光免疫(TRFIA)分析试剂盒的研制.方法 采用双抗体夹心法建立sFER-TRFIA试剂盒,并对试剂盒的各项指标进行评价.结果 试剂盒的线性测量范围为2.2～1 070 ng/mL,灵敏度为0.22 ng/mL,批内、批间的精密度分别为4.6%～7.2%、5.4%～8.9%,与癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)和人白蛋白无交叉反应.86份血清样本用本试剂盒与国外其他试剂盒同时检测,其相关系数为0.994.结论 试剂盒各项指标均达到临床检测要求,可替代国外同类产品试剂盒.     

Flow injection immunoassay for carcinoembryonic antigen combined with time-resolved fluorometric detection

Time-resolved fluorescence has been developed for immunoassay to obtain higher sensitivity than usual immunoassays. In this paper, a simple, sensitive and specific method was developed for immunoassay of serum carcinoembryonic antigen (CEA) by combining time-resolved fluoroimmunoassay (TRFIA) and flow injection analysis. Based on a sandwich immunoassay format, a monoclonal antibody immobilized immunoaffinity column inserted in a flow system was used for immunoreactions. The cleaved solution was collected after the reaction between the immunocomplex in the immunoaffinity column and the enhancement solution that was used to cleave the Eu-labels from the immunocomplex, and then detected by time-resolved fluorescence. Serum CEA could be detected in the linear range from 2.5 to 100 ng/ml with a correlation coefficient of 0.997 and the detection limit of 1.0 ng/ml. Twenty human serum samples detected by this method were in good agreement with the results obtained by the electrochemiluminescence immunoassay. This method could be further developed for fast practical clinical detection of serum CEA levels.     

一种快捷、定量检测烟曲霉GM抗原双mAb夹心ELISA的方法

目的 :建立一种快速诊断烟曲霉病的双mAb夹心ELISA法。方法 :应用 4株抗烟曲霉GM单克隆抗体 (mAb) ,分别包被和制备HRP mAb ,用双mAb夹心ELISA法配对试验 ,选择捕获及检测mAb。结果 :经筛选得到捕获及检测mAb的最佳组合 ,并建立了双mAb夹心ELISA法。该法检测GM抗原的灵敏度为 0 .1μg/L ,测出范围在 0 .1～ 10 μg/L之间。连续 6d用ELISA法检测同一份样品 ,所获CV的平均值为 ( 7.2± 3.8) %。结论 :建立了一种可快速、定量检测烟曲霉GM抗原的双mAb夹心ELISA法 ,灵敏度高、重复性好 ,对研制试剂盒应用于烟曲霉病早期诊断和防治 ,具有重要的临床应用价值     

CA19-9时间分辨荧光免疫分析方法的建立及应用

以CA19－9单抗192＃包被板条,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu^3 及标记241＃单抗,发光增强系统为以β-二酮体为主的增强液,采用平衡饱和法建立了CA19－9时间分辨荧光免疫分析。采用Log-Logit函数和四参数Logistic函数两种程序处理数据。结果表明方法的批内和批间CV分别显3．26％和5．74％,平均回收率为99．61％,灵敏度为1．66U/mL,可测范围为18．69－967U／mL,ED20、ED50t ED80分别为40．55U／mL、114．2U/mL和396．9U/mL。本方法与CEA有6％交叉反应,与CA125、CA153和AFP均无交叉反应,Eu^3 标记抗体于－30℃,保存六个月免疫反应性基本无损失,连续5个月应用同批试剂,分析结果稳定。78份血清样品的检测结果与化学发光吻合,本文提示,采用CA19－9时间分辨荧光免疫分析,可以高效灵敏地检测出血清中的CA19－9的含量,值得临床推广。     

人血红蛋白时间分辨荧光免疫分析试剂的研制及初步应用

目的建立人血红蛋白（Hb）时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）试剂,探讨在大便潜血（FOB）检测中的应用。方法采用固相双抗体夹心法建立检测Hb的TRFIA方法,并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果自制试剂盒的最低检测量为0．8ng／mL或32ng（Hb）／g（粪便）,线性范围为0．8—1000ng／mL或32—40000ng（Hb）／g（粪便）。分析内和分析间变异系数分别为3．4％-8．9％和5．2％-13．4％。与羊、鸡、牛、猪、兔、狗Hb不发生交叉反应。90份临床确诊标本用本试剂盒和胶体金免疫层析（GICA）试剂同时测试,TRFIA法的敏感性和特异性均为100％．GICA法的灵敏度和特异性分别为95．6％、100％。结论Hb—TRFIA试剂盒各项指标均达到临床检测要求,适用于临床上大便潜血Hb的检测。     

检测可溶型CD226双mAb夹心ELISA的建立及初步应用

目的 :建立一种检测可溶型CD2 2 6 (sCD2 2 6 )的双mAb夹心ELISA ,并用于临床标本的检测。方法 :确定包被mAbLeoA1和HRP mAbFMU3的最佳工作浓度及最佳稀释液后 ,建立双mAb夹心ELISA ,并对方法的特异性、敏感性和稳定性进行鉴定。再以建立的方法检测临床标本。结果 :包被mAbLeoA1的最佳工作浓度为 2 .5mg/L ,HRP mAbFMU3的最佳工作浓度 1∶4 0 0 ,标准品及HRP mAb的最佳稀释液分别为 1g/LBSA 1mL/LTween2 0 PBS和 30 g/LPEG PBS .建立的双mAb夹心ELISA ,其特异性 (与人IgG无交叉反应 ,阻断实验中阻断效应呈剂量依赖性 )、敏感性 (检出下限为 110ng/L标准品CD2 2 6 /Fc融合蛋白 )及稳定性 (CV <10 .2 % )均较良好。对部分临床标本的检测中 ,发现 6例类风湿关节炎(RA)患者血清sCD2 2 6的水平升高 ,与正常人血清sCD2 2 6水平相比差异显著 (P <0 .0 1)。结论 :建立一种特异性高、重复性好、较敏感的检测sCD2 2 6的双mAb夹心ELISA ,初步证明可用于临床标本的检测     

游离雌三醇时间分辨免疫荧光分析法的建立

目的建立游离雌三醇（uE3）时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）方法。方法采用竞争抑制一步法建立检测uE3的TRFIA分析方法，并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果该方法的灵敏度为0．14nmol／L，线性范围为0．14—120nmol／L，回收率为97．7％。分析内和分析间变异系数分别为1．6％-4．1％和4．4％-8．8％。与E2、孕酮和睾酮的交叉反应率分别为0．24％、0．36％和0．40％。149份血样用本试剂与进口的同类试剂同时检测，其相关系数为0．925。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求，可替代国外同类产品试剂盒。     

NSE时间分辨荧光免疫分析法的建立

采用夹心法建立神经元特异烯醇化酶（NSE）时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）来测定血清中NSE的含量。以NSE单克隆抗体E1包被板,双功能螯合剂异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸络合Eu3＋及标记NSE单克隆抗体E7,发光增强系统为以β-二酮体为主的增强液。采用平衡饱和法建立NSE-TRFIA,数据采用双对数函数数据处理程序处理。本方法的连续批内和批间CV分别为2.4%和4.8%,平均回收率为102.6%,灵敏度为0.31ng/mL,可测范围为0.31～320ng/mL,ED20、ED50和ED80分别为20.72ng/mL、57.23ng/mL和157.25ng/mL。本方法与AFP、CEA均无交叉反应。Eu3＋标记抗体-20℃保存8个月免疫反应基本无损失,同批试剂连续8个月应用分析结果稳定。临床应用检测结果与E170所测值高度相关。实验结果表明,本文所建立的NSE-TRFIA的灵敏度、特异性、准确度等均符合临床应用要求。     

双抗体夹心ELISA检测SEB方法的建立及在不同基质中检测的应用

目的:建立检测SEB的双单克隆抗体(mAb)夹心ELISA,并检测在多种基质中SEB的敏感性。方法:制备、纯化抗SEBmAbB4和D6。D6mAb标记辣根过氧化物酶(HRP)作为检测抗体,B4mAb作为包被抗体。结果:成功建立了敏感、特异检测SEB的ELISA方法,检测抗体稀释液和小牛血清中SEB,检测灵感度0.2μg/L,定量线性范围0.78～12.5μg/L,r2=0.992,批间变异系数(CV)<10%,回收率80%～110%。检测50g/L脱脂牛奶、尿液和自来水中的SEB,灵敏度0.39μg/L,定量线性范围0.78～25μg/L,r2=0.997。与SEA和SECl无交叉反应。结论:本方法测量准确,灵敏度高,特异性好,在食品工业和临床标本检测中有广阔的应用前景。