大鼠足跖容积简易测定法

本文介绍一种简单的大白鼠足跖容积测定方法。测定大白鼠足跖容积,是研究抗炎免疫药物的重要方法,本实验采用普通生理记录仪和自制的设备,方便、准确地记录大白鼠的足跖容积。     

离体肺气体容积和肺密度在肺气肿小鼠模型中的变化

目的研究以猪胰弹性蛋白酶(PPE)诱导小鼠肺气肿模型的离体肺气体容积(ELGV)和肺组织的密度变化规律,探讨ELGV和肺密度与肺气肿的相关性。方法30只雄性C57BL/6小鼠随机均分为对照组、PPE 3d组和PPE 7d组,气管内滴注PPE,建立肺气肿模型。以密度测量仪测量ELGV和肺组织密度,同时进行肺组织病理学观察及图像半定量分析。结果与对照组相比,PPE 3d组和PPE 7d组肺湿重的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。对照组、PPE 3d组和PPE 7d组的ELGV分别为(0.217±0.011)、(0.271±0.016)和(0.420±0.034)cm~3,PPE 3d和PPE 7d组显著高于对照组(P值均<0.01),PPE 7d组又显著高于PPE 3d组(P<0.01)。对照组、PPE 3d组和PPE 7d组的肺组织密度分别为(0.606±0.016)、(0.541±0.033)和(0.368±0.032)g/cm~3,PPE 3d和PPE 7d组显著低于对照组(P值均<0.01),PPE 7d组又显著低于PPE 3d组(P<0.01)。结论ELGV和肺组织密度与肺气肿的形态学改变密切相关,可以作为监测和评价肺气肿形态学改变的可行性指标。     

小鼠肾脏足细胞的原代培养和鉴定

目的：建立可操作性好、简单易行且效率较高的小鼠肾脏足细胞分离及原代培养模式,为其进一步研究奠定基础。方法：取C57/BL6J小鼠肾脏,通过差异过筛法获取300目筛的肾小球,用制备好的KI-3T3培养基重悬肾小球后静置于铺被鼠尾胶原的培养皿中,4 d后开始换液,7 d后开始胰蛋白酶消化肾小球,并开始足细胞传代培养。5~7d传代1次,传代2~3次后收集细胞鉴定。采用倒置扭转显微镜观察小鼠肾脏足细胞形态表现,采用PCR法检测小鼠肾脏足细胞中nephrin,podocin和P-cadherin的表达。结果：肾小球种植3 d后可见足细胞从组织中爬出,足细胞传代培养7 d后在倒置相差显微镜下可观察到细胞胞体有突起生长。PCR法检测,分离培养的足细胞表达nephrin、podocin和P-cadherin。结论：差异过筛结合消化酶技术能够成功分离培养C57/BL6J小鼠肾脏足细胞。     

促癌剂TPA对小鼠全身性延迟型过敏反应的影响

本文试图证明在小鼠皮肤癌发生中免疫机制的作用．应用不同次数促癌剂ＴＰＡ后，用Ｓ．Ｄ大鼠脾细胞免疫昆明种雌性小鼠，２周后在小鼠足部进行免疫攻击引出全身性延迟型过敏反应（ＳｙｓｔｅｍｉｃＤｅｌａｙｅｄＴｙｐｅＨｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，ＳＤＴＨ）．以攻击前后足容积差和足伊文思兰提取物光密度值大小为指标，观察ＤＴＨ强度的改变．结果表明，随着ＴＰＡ促癌次数的增加，足容积差和光密度值均减少，显示促癌剂ＴＰＡ对ＳＤＴＨ的抑制作用并表现出一定的量效关系，促癌剂应用４周（３μｇ／０．２ｍＬ，８次）后所出现的免疫抑制与实验小鼠第５周开始出现乳头瘤密切相关，此外本文还证明应用不同次数促癌剂ＴＰＡ后，免疫器官脾的相对重量呈现下降趋势     

伽玛刀剂量计划系统照射容积和靶区容积的相关性比较

目的：通过对伽玛刀剂量计划系统中照射容积和靶区容积的差异比较,进行剂量计划的优选,以准确设定照射范围,减少治疗后的并发症。方法：将860例病人的靶区容积、照射容积及靶区（照射）容积直方图进行比较和统计分析。结果：中位数百分比合格率最高为脑膜瘤,其次为垂体瘤,听神经瘤和AVM,最低为淋巴瘤。结论：进一步缩小靶区容积和照射容积和照射容积差异,对提高伽玛刀剂量计划设计的最优化,减少并发症有较大意义。     

黄芩提取物对小鼠耳肿胀和足肿胀的抗炎作用研究

目的研究黄芩提取物(SBE)的抗炎作用,为黄芩的开发应用提供参考依据。方法灌胃给予黄芩提取物及吲哚美辛,每天1次,连续5 d,末次给药后,采用小鼠二甲苯致炎耳廓肿胀法、角叉菜胶致炎足肿法复制急性炎症模型,观察各组小鼠耳廓肿胀度、肿胀率及足肿胀度。结果与模型对照组比较,SBE大、小剂量组(10 g/kg、5 g/kg)可以显著抑制二甲苯致小鼠的耳廓肿胀、角叉菜胶致小鼠的足肿胀(P0.05或P0.01)。结论黄芩提取物具有一定的抗炎作用。     

山东肿足蕨化学成分研究(Ⅵ)肿足蕨碱的分离和鉴定

从金星蕨科植物山东肿足蕨(Hypodematium Sinense Iwatsuki)的全草分得一种新化合物,通过紫外光谱、红外光谱、高分辨质谱和二维核磁共振新技术确定其结构是一种具有苯基取代苯并氮杂环辛四烯新型骨架的生物碱,命名为肿足蕨碱(Hypodematine),又用原子吸收分光光度法和荧光分光光度法测定了该生药中有重要生理功能的硒、铬、钴,镍4种微量元素的含量。     

野生型和突变型小鼠动力蛋白激活蛋白1真核表达载体的构建及其在小鼠足细胞中的表达

目的 构建野生型和突变型小鼠动力蛋白激活蛋白1(dynactin-1)真核表达载体,并观察其在小鼠足细胞中表达。方法 以总RNA反转录合成的cDNA为模板,通过PCR扩增得到小鼠dynactin-1的全长cDNA,将该片段克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+)-FLAG和pEGFP-N1;利用部位特异性突变插入方法构建突变型表达载体,经酶切和测序鉴定;各载体转染小鼠足细胞MPC5后,用蛋白质印迹分析法和免疫荧光显微镜法检测dynactin-1蛋白表达。结果 PCR扩增得到大小为3.8 kb的小鼠dynactin-1片段,连接到载体后,酶切鉴定电泳结果分别显示pcDNA3.1(+)-FLAG(5.4 kb)、pEGFP-N1(4.7 kb)以及小鼠dynactin-1(3.8 kb)片段,测序分析结果 显示克隆的野生型和突变型小鼠dynactin-1序列与数据库序列相同;蛋白质印迹分析法检测到重组dynactin-1的蛋白条带;免疫荧光显微镜观察到dynactin-1主要表达在小鼠足细胞的细胞质。 结论 成功构建了野生型和突变型小鼠dynactin-1真核表达载体,并在足细胞中表达,为进一步开展细胞生物学研究奠定了实验基础。     

高糖对小鼠足细胞TRPC6表达的影响

【摘要】 目的 研究高糖对小鼠足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6（TRPC6）表达的影响。方法 体外培养条件永生化小鼠足细胞,分为高渗对照组(甘露醇30mmol/L+葡萄糖5mmol/L),正常对照组(葡萄糖5mmol/L)、实验组(葡萄糖浓度分别为15mmol/L、25mmol/L和35mmol/L);高糖(葡萄糖25mmol/L)刺激足细胞,以刺激后0、12、24、48 h为时间观察点,光镜下观察足细胞形态变化,免疫细胞化学检测小鼠足细胞TRPC6表达及分布,RT PCR和Western Blot分别检测小鼠足细胞TRPC6 mRNA和蛋白的表达。结果 随着葡萄糖浓度的增加,光镜下足细胞胞体明显缩小,足突明显减少或消失,免疫细胞化学检测可见TRPC6主要表达于足细胞胞膜,沿足突分布明显增多,RT PCR和WB检测到TRPC6表达逐渐增加,以25mmol/L变化最明显。糖刺激足细胞后,与0h相比,随着刺激时间的延长,足细胞TRPC6蛋白和mRNA表达量明显增加（P＜005）,在48h达到高峰,呈一定的时间依赖性。结论 高糖可导致足细胞形态学明显改变,引起细胞损伤,随着葡萄糖浓度增加和时间延长,均可导致足细胞TRPC6表达增加,呈一定的剂量依赖性和时间依赖性。     

肺腺癌细胞调节性容积减小过程及其离子通道机制

目的 观察人肺腺癌细胞调节性细胞容积减小(RVD)的过程,探讨其离子通道机制.方法 用细胞体积测量系统分析人肺腺癌细胞(A549)在细胞外低渗刺激下细胞容积改变;用通道阻断剂和全细胞膜片钳方法 阐明容积敏感性氯通道在RVD中的作用.结果 细胞外低渗刺激使人肺腺癌细胞系A549细胞膨胀并诱发RVD,该RVD过程可被氯通道阻断剂NPPB(100 μmol/L)和钾通道阻断剂CsCl(5 mmoL/L)所阻抑;全细胞膜片钳方法 记录A549细胞容积敏感性氯通道电流呈外向整流特性,电流可被NPPB、DIDS(100 μmol/L)阻抑.结论 人肺腺癌A549细胞具有RVD功能,RVD过程的完成有赖于氯通道和钾通道的平行激活,容积敏感性氯通道参与该RVD过程.     

蟾蜍灵对小鼠足细胞阿霉素模型nephrin和p38表达的影响

目的:探讨蟾蜍灵(bufalin)对阿霉素损伤足细胞nephrin和p38表达的影响。方法:体外培养正常足细胞并进行分组:对照组、蟾蜍灵组、阿霉素诱导组和阿霉素诱导+蟾蜍灵组。制备阿霉素损伤足细胞模型,蟾蜍灵按一定梯度浓度范围干预足细胞,MTT法确定其作用于足细胞的安全、有效剂量。倒置显微镜观察足细胞形态,实时荧光定量PCR检测足细胞nephrin和p38基因相对表达水平。结果:MTT法提示蟾蜍灵浓度10-8mol/L,足细胞成活率在90%以上。阿霉素诱导组、阿霉素诱导+蟾蜍灵组、蟾蜍灵组,倒置显微镜下观察足细胞形态与对照组相比无明显改变。实时荧光定量PCR检测足细胞nephrin mRNA相对表达,蟾蜍灵组较对照组无明显变化,阿霉素诱导组nephrin mRNA表达与对照组相比显著下降(P<0.05),阿霉素+蟾蜍灵组nephrin mRNA表达仍下降,但与阿霉素组比较明显升高(P<0.05)。实时荧光定量PCR检测p38 mRNA表达,各组较对照组表达均升高(P<0.05),阿霉素诱导组升高最显著,阿霉素诱导+蟾蜍灵组较阿霉素诱导组表达明显降低(P<0.05)。结论:蟾蜍灵可能通过调控足细胞nephrin的表达减缓阿霉素对足细胞的损害,此调节过程可能与足细胞p38的表达变化有关。     

体外培养小鼠足细胞表达COX-2的实验研究

目的: 研究环氧合酶-2(COX-2)在小鼠足细胞中的表达情况,为进一步研究嘌呤霉素氨基核苷(PA)诱导足细胞凋亡过程中特异性COX-2的表达,以及特异性COX-2抑制剂对足细胞的保护作用建立实验基础.方法: 将体外培养的条件永恒的足细胞复苏并传代培养,采用Western blot法分析COX-2在足细胞中的表达.结果: 在33℃增殖状态下,足细胞呈鹅卵石状,在37℃分化状态下的足细胞呈分叉状.正常足细胞在37 ℃分化14 d后,用低血清培养液培养后,随着时间延长,COX-2表达逐渐增多,24 h达最高,以后逐渐减少.结论: COX-2在足细胞上的表达呈时间依赖性.     

尿中足细胞数量和足细胞标志蛋白水平与狼疮性肾炎组织学的相关性研究

正狼疮性肾炎是系统性红斑狼疮的常见并发症,伴有双肾不同病理类型的免疫性损害,临床表现为蛋白尿、肾功能不全、血尿等,是系统性红斑狼疮主要死亡原因之一~([1-2])。随着免疫抑制等治疗方法的进步,狼疮性肾炎患者的死亡率和肾脏存活率显著改善,但仍有10%～30%患者发展为终末期肾脏疾病~([3-4])。肾穿刺活检是确诊活动性肾脏病肾组织病变类型的重要方法,但肾活检具有侵袭性,且费用昂贵,导致临床应用受限,因此寻找无创、敏感的狼疮性肾炎组织学分类标志物具有重要意义。足细胞作为过滤器在肾小球滤过功能中发挥重要作用,近年研究表明,足     

脂质对小鼠肾足细胞增生影响

目的观察脂质对体外培养小鼠肾足细胞增生的影响。方法用不同浓度的低密度脂蛋白（LDL）和氧化低密度脂蛋白（OX—LDL）对体外培养的小鼠肾足细胞进行不同时间的刺激干预,然后用四唑盐（MTT）法检测足细胞增生。结果LDL刺激足细胞24、48h后,从最低剂量6．25μg／ml组到25μg／ml组呈现剂量依赖性OD值增高（与正常组比较,P〈0．01）;24h25μg／ml组达到刺激足细胞增生的峰值、48h12．5μg／ml组达到刺激足细胞增生的峰值。OX—LDL刺激24h后,从12．5μg／ml组到100p,g／ml组呈现剂量依赖性OD值增高（与正常组比较,P〈0．01）。结论脂质LDL和OX—LDL在一定的剂量和时间条件下可以刺激足细胞增生。     

足细胞损伤机制的研究进展

足细胞是维持肾小球滤过屏障的重要部分。遗传、免疫、感染等因素常导致足细胞结构完整性破坏及细胞代谢失调,导致足细胞足突融合,足细胞从肾小球基底膜脱离,引起蛋白尿,甚至肾小球硬化等肾脏疾病。而足细胞与神经细胞、肌肉细胞等永久细胞类似,是一种没有增殖潜能的细胞。因此,足细胞损伤在肾脏疾病的发病机制中至关重要。足细胞损伤引起的生理和功能改变并不是简单的被动过程,而是构成足细胞解剖结构的蛋白质之间的复杂相互作用。文章从足细胞骨架损伤、细胞核内转录因子异常、胞浆线粒体能量代谢异常、细胞内钙离子动态稳定性改变等方面对足细胞损伤的机制进行综述。     

黄芪多糖对高糖刺激小鼠肾小球足细胞Nephrin和Desmin表达的影响

目的 模拟体外高糖病理微环境, 探讨黄芪多糖对实验鼠肾脏肾小球足细胞Nephrin及Desmin表达的影响.方法 试验 (1) :将培养的实验鼠肾脏肾小球足细胞分为5个组, 分别是D-葡萄糖30 mmol/L+黄芪多糖干预组 (0.0 g/L, 0.1 g/L, 0.2 g/L, 0.4 g/L及0.8 g/L) ;干预时间为72 h, 筛选出黄芪多糖干预的最佳浓度点0.Z g/L.试验 (2) :将培养的实验鼠肾脏肾小球的足细胞分7个组, 分别是D-葡萄糖30 mmol/L+黄芪多糖的干预 (干预浓度是0.Z g/L) , 干预的时间分别是0 h, 3 h, 6 h, 12 h, 24 h, 48 h及72 h;筛选出干预的最佳时间点Y h.试验 (3) :根据上述试验 (1) 、 (2) 结果, 将培养的小鼠肾小球足细胞分为:正常对照组、甘露醇高渗对照组、高糖组和黄芪多糖干预组 (黄芪多糖的干预浓度是0.Z g/L, 干预的时间是Y h) , 采用流式细胞术与实时聚合酶链反应 (real-Time Polymerase Chain Reaction, real-Time PCR) 分别检测七组足细胞Nephrin、Desmin蛋白与m RNA的表达.结果 随着黄芪多糖干预梯度浓度的递增, 实验鼠肾脏肾小球的足细胞Nephrin蛋白表达逐渐上调, Desmin蛋白表达逐渐下调, 呈浓度依赖性 (P<0.05) ;随着黄芪多糖干预时间的延长, 实验鼠肾脏肾小球的足细胞Nephrin的表达逐渐上调, 但肾小球的足细胞Desmin的表达逐渐下调, 呈时间依赖性.相比正常对照组和甘露醇高渗对照组, 高糖组小鼠肾小球足细胞Nephrin蛋白和m RNA表达均下降, Desmin蛋白和m RNA表达均增加 (P<<0.05) ;而相较高糖组, 黄芪多糖干预组Nephrin蛋白和m RNA表达明显上升, Desmin蛋白和m RNA表达明显降低 (P<0.05) .结论 在高糖刺激下, 黄芪多糖干预可上调肾小球足细胞Nephrin表达, 降低肾小球足细胞Desmin表达, 是黄芪治疗DN蛋白尿的可能作用靶点.