促性腺激素释放激素类似物对大鼠睾丸间质细胞膜联蛋白5和3β-羟类固醇脱氢酶mRNA表达的影响

目的:观察促性腺激素释放激素(GnRH)类似物对大鼠睾丸间质细胞annexin 5和3β-HSD mRNA表达的影响. 方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48h后,分别用不同终浓度的GnRH激动剂(GnRH-agonist, GnRHa)(10-5mol/L、10-6 mol/L、10-7 mol/L)和GnRH 拮抗剂(GnRH-antagonists, GnRHant)(10-6 mol/L、10-7 mol/L、10-8 mol/L)处理细胞,提取细胞总RNA,反转录,设计特异性引物和Tagman探针,荧光定量PCR检测膜联蛋白5(annexin 5)和3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD) mRNA表达的改变. 结果:荧光定量PCR结果显示,与未加GnRH类似物的对照组相比,当GnRHa的终浓度为10-5mol/L、10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA 分别升高了38.89%和35.29%,均具有统计学意义(P<0.05);当GnRHa的浓度为10-5mol/L时,3β-HSD mRNA也显著升高了46.43%(P<0.01).同样,与对照组相比,当GnRHant的浓度为10-6mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞annexin 5 mRNA下降了45.45% (p<0.05),当GnRHant的浓度为10-6mol/L,10-7mol/L时,实验组大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA也分别显著地降低了63.64%(P<0.01)和50%(P<0.05),其余各组与对照组相比,差异无统计学意义. 结论:GnRH类似物能够调控大鼠睾丸间质细胞annexin5和3β-HSD mRNA表达,GnRH类似物可能与睾丸间质细胞上GnRH受体结合后,通过特定的生理机制,进而影响annexin5和3β-HSD mRNA表达,为揭示GnRH类似物调控间质细胞分泌睾酮的作用机制提供了一定的依据,其内在的机制还有待进一步研究.     

Annexin5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌过程中StarD7表达的影响

目的先前研究发现annexin 5刺激大鼠睾丸间质细胞后,3β-羟类固醇脱氢酶(3βbeta-hydroxysteroid dehydro-genase,3β-HSD)及睾酮水平都增加,推测annexin 5和睾酮之间可能存在某种内在联系。文中旨在研究annexin 5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌过程中的StarD7(START domain containing 7)表达的影响,探讨annexin 5影响睾酮分泌的机制。方法原代培养大鼠睾丸间质细胞,1nmol/L的annexin 5处理间质细胞24h,分别提取细胞总mRNA和总蛋白。RT-PCR检测StarD7的mRNA表达改变。Western blotting方法分析睾丸间质细胞中StarD7的蛋白表达变化。收取细胞爬片,利用免疫细胞化学的方法对StarD7在睾丸间质细胞中进行定位。结果与对照组相比,在mRNA水平上,加药组StarD7 mRNA的表达增加了44.5%(1.10±0.02 vs 1.59±0.09,P<0.05)。在蛋白水平上,加药组StarD7蛋白的表达增加了44.3%(1.49±0.10 vs 2.15±0.16,P<0.05)。StarD7主要定位在大鼠睾丸间质细胞的胞浆内,加药组的染色强度明显强于对照组。结论 StarD7在基因和蛋白水平均受annexin 5的调控,结合先前发现annexin 5可调控睾丸间质细胞睾酮合成的结果,提示annexin 5调控睾酮合成可能是通过调控StarD7的表达来实现的。     

大鼠睾丸间质细胞中促性腺激素释放激素激动剂调控睾酮合成的机制

目的:研究促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞睾酮合成的调控机制?方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞,GnRHa (10-7 mol/L)分别处理间质细胞6?12?24?36?48 h后,Western blot方法分析3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)蛋白的变化;MEK1/2抑制剂PD98059 (50 μmol/L) 和GnRHa共作用于间质细胞后,分析3β-HSD蛋白表达和睾酮水平的变化?结果:GnRHa处理间质细胞不同时间后,结果显示3β-HSD蛋白的表达对GnRHa的刺激具有时间依赖性?GnRHa处理12 h后,3β-HSD蛋白表达与对照组相比显著上升45% (P < 0.05),24 h达到最高水平,升高1.0倍(P < 0.05);48 h后3β-HSD恢复至正常水平?加入PD98059后,显著抑制了GnRHa对3β-HSD的刺激作用,3β-HSD水平下降了61% (与GnRHa组相比,P < 0.05),睾酮水平也随之显著下降45% (与GnRHa组相比,P < 0.05)?结论:GnRHa可能通过细胞外信号调节激酶(ERK1/2)途径调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD的表达,进而促进睾酮的合成?     

膜联蛋白5对大鼠睾丸间质细胞中类固醇急性调节蛋白和睾酮合成相关酶表达的影响

目的：研究膜联蛋白5（annexin 5）对大鼠睾丸间质细胞（Leydig细胞）睾酮合成相关蛋白和酶表达的影响。 方法：原代培养大鼠睾丸间质细胞24 h后,用10^-9 mol/L的annexin 5处理间质细胞12 h和24 h,分别提取细胞总RNA和总蛋白;反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测类固醇急性调节蛋白（steroidogenic acute regulatory,StAR）、胆固醇侧链裂解酶（P450scc）、3β-羟基类固醇脱氢酶（3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD）、17α-羟化酶（17α-hydroxylase,CYP17A）、17β-羟基类固醇脱氢酶Ⅹ型（17β-HSD₁₀）mRNA表达的改变,并用蛋白免疫印迹方法（Western blotting）检测蛋白表达水平的变化。 结果：与对照组相比,在mRNA水平上, annexin 5处理细胞12 h后,只有17β-HSD₁₀的表达升高了26%（P<0.05）,其他差异均无统计学意义,而处理24 h后,StAR、P450scc和3β-HSD的表达分别升高55%、69%和59%（P<0.05）,17β- HSD₁₀升高了104%（P<0.01）,17α-hydroxylase表达则无显著差异;在蛋白水平上, annexin 5处理细胞12 h后,17β-HSD的表达升高了39%（P<0.05）,而处理24 h后发现,除StAR表达无显著变化外, P450scc、3β-HSD和17β-HSD的表达分别升高了35%、88%（P<0.05）和47%（P<0.01）。 结论：Annexin 5对睾酮合成具有调节作用,这种作用是通过在基因水平和蛋白水平上影响P450scc、3β-HSD和17β-HSD的表达而实现的。     

促性腺激素释放激素激动剂对大鼠睾丸间质细胞annexin5和3β-HSD的表达影响

目的：探讨阿拉瑞林（GnRHa）对大鼠睾丸间质细胞中膜联蛋白V（annexin5）和3β-羟类固醇脱氢酶（3β-HSD）的表达的影响。方法：建立体外分离、纯化和培养大鼠睾丸间质细胞原代培养技术,采用3β-HSD免疫细胞化学方法对间质细胞进行鉴定,同时用不同终浓度的GnRHa（分别为1×10^,1×10^-6,1×10^-1moL／L）作用于间质细胞24h后,通过Western Blot检测间质细胞中annexig 5和3β-HSD的表达变化情况．结果：间质细胞经GnRHa处理后,Western Blot结果显示,与对照组相比,当GnRHa终浓度为1×10^-5 moL／L时,anenxin5的表达量显著升高了69．2％（P〈0．01）,3B—HSD的表达量也升高了25．2％（P〈0．05）;当GnRHa的终浓度为1×10^-6mol／L和1×10mol／L时,anenxin5的表达量分别升高了61．5％（P〈0．05）和16．64％（P〉0．05）,3β-HSD的表达量则无显著性变化,分别升高了7．7％（P〉0．05）和2．22％（P〉0．05）．结论：GnRHa在原代培养的睾丸问质细胞中,对annexin5,3β-HSD的表达具有调节作用。     

邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯对原代培养小鼠胚胎睾丸Leydig细胞功能影响研究

目的探讨邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[Di(2-ethylhexyl)phthalate, DEHP]对体外培养的小鼠胚胎睾丸间质细胞(Leydig细胞)3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)活性及睾酮合成的影响.方法小鼠胚胎Leydig细胞原代培养.DEHP染毒剂量分别为25、50、100、200 mg/L,通过检测睾酮合成关键酶3β-HSD活性、放免法测定培养液中睾酮浓度,研究DEHP对Leydig细胞功能影响.结果小鼠胚胎Leydig细胞分离培养后,纯度和存活率分别达(81.17±2.32)%、(80.88±2.80)%.DEHP(25 mg/L)处理12 h,或DEHP(50 mg/L)处理6 h后,实验组与对照组比较3β-HSD酶活性明显降低(P《0.05),随着时间延长和药物浓度增加差异更显著(P《0.01).DEHP50、100 mg/L实验组,在12、24 h的睾酮水平明显低于对照组(P《0.05)或(P《0.01),存在时间-效应关系;DEHP 200 mg/L实验组在6、12、24 h与对照组比较均有非常显著差异(P《0.01),并可观察到Leydig细胞明显的形态学改变.结论 DEHP能影响原代培养小鼠胚胎Leydig细胞3β-羟基类固醇脱氢酶活性,并抑制睾酮合成,存在时间-效应和剂量-效应关系.     

促性腺激素释放激素激动剂通过ERK MAPK途径调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA表达

目的:促性腺激素释放激素(GnRH)是下丘脑分泌的10肽激素,通过刺激促性腺激素释放激素的合成和分泌,调节性激素的合成.GnRH对睾丸间质细胞也具有直接的刺激作用.文中研究GnRH激动剂(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞ERK MAPK信号通路和3β-HSD mRNA表达的影响. 方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞48 h后,血清饥饿2 h.GnRHa(10-7 mol/L)和ERK抑制剂PD98059(50 μmol/L)刺激细胞后Western blot检测磷酸化ERK(p-ERK)、总ERK(t-ERK)的蛋白表达,荧光实时定量PCR检测3β-HSD mRNA表达. 结果:结果显示GnRHa刺激间质细胞0、5、10、30、60和90min后,p-ERK水平在5min时达到最高,与对照组比较升高了约3.5倍(P<0.05);10min时开始下降,但与对照组相比较仍显著升高2.2倍(P<0.05);90min时恢复到正常水平.加入ERK选择性抑制剂PD98059后,p-ERK水平显著下降50%(P<0.05);再用GnRHa刺激细胞5min,p-ERK水平仍无法恢复正常水平.用PD98059处理细胞后,再加入GnRHa培养24h,3β-HSD mRNA水平也显著下降(与GnRHa组相比,P<0.05). 结论:GnRH激动剂可能通过ERK MAPK信号通路来调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD mRNA的表达,进而调控睾酮的分泌.     

睾酮的快速非基因组效应对3T3-L1脂肪细胞胰岛素敏感性的影响

目的 探讨睾酮的快速非基因组效应对3T3-L1成熟脂肪细胞胰岛素敏感性的影响及分子机制.方法 将3T3-L1前脂肪细胞诱导成熟,用10-9～10-5moL/L睾酮分别预处理0～30 min及24 h,[3H]-2-脱氧葡萄糖掺入法检测葡萄糖摄取率;通过免疫印迹检测胰岛素受体(InsR)/蛋白激酶(Akt)/糖原合成激酶(GSK3B)的活性及表达.结果 有胰岛素刺激时,睾酮预处理30 min的胰岛素促葡萄糖摄取率随睾酮浓度增高而下降,10-5moL/L睾酮组的摄取率的升高倍数(4.2±0.4)显著低于无睾酮组(5.5±0.4),P<0.05;10-6mol/L睾酮预处理3～30 min的InsR/Akt/GSK3β的磷酸化水平较无睾酮组均明显下降(均P<0.05).有胰岛索刺激时,睾酮预处理24 h的胰岛素促葡萄糖摄取率也随睾酮浓度增高而下降,10-5moL/L睾舀耐组的摄取率的升高倍数(4.0±1.0)显著低于无睾酮组(4.5±1.O),P<0.05;10-7～10-6mol/L睾酮预处理24 h的InsR/Akt/GSK3β的活性均明显下降(均P<0.05),但InsR/Akt/GSK3β的表达水平均不受睾酮影响(均P>0.05).结论 高浓度睾酮的快速非基因组效应可能通过抑制胰岛素信号分子InsR/Akt/GSK3β的活性从而在诱导成熟脂肪细胞产生胰岛素抵抗中起重要作用.     

壁面马赫数分布规律可控的新型内收缩基准流场设计方法

目的探讨睾丸体外培养模型下邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)暴露对小鼠睾丸睾酮合成及基因表达的影响。方法用浸浴式一次性通气旋转装置体外培养小鼠睾丸组织。实验分为二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组和4个DEHP剂量染毒组(终浓度0.1、1.0、10.0、100.0μmol/L)。分别培养24、48、72h,每24h通气一次。放射免疫法测定收集培养基中睾酮水平;Elisa法测定收集培养基中抑制素基因β_B基因(INHBβ)水平;实时荧光定量(QT)-PCR检测睾丸组织相关基因表达水平;HE染色观察睾丸组织病理学变化;免疫组化法检测睾丸组织相关蛋白表达。结果与DMSO溶剂对照组相比,DEHP一定浓度范围内,可使睾酮合成增加,但在DEHP100.0μmol/L染毒48、72h,睾酮合成开始减少。Elisa测定INHBβ在DEHP 0.1μmol/L、1.0μmol/L染毒组合成增加,从DEHP 10.0μmol/L开始合成减少。QT-PCR检测结果显示,与DMSO溶剂对照组相比,3β羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)、抗细胞色素P450 17α羟化酶(P450c17)、细胞色素P450侧链裂解酶(P450Scc)、波形蛋白(vimentin)mRNA表达下降,尤其是DEHP 100.0μmol/L剂量组(P<0.05),INHBβmRNA表达无显著变化。HE染色,各组睾丸组织未观察到明显病理学改变。免疫组化检测结果显示,与DMSO溶剂对照组相比,蛋白3β-HSD、P450c17、P450Scc表达增强,vimentin表达减弱,尤其是DEHP 10.0μmol/L、100.0μmol/L两个剂量染毒组。结论 DEHP暴露对体外培养睾丸的睾酮合成有影响,其机制可能由于其影响了相关功能基因表达,进而对睾酮合成产生正负调控两种作用。     

小鼠睾丸体外培养模型研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对睾酮合成及机制的影响

目的 探讨睾丸体外培养模型下邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)暴露对小鼠睾丸睾酮合成及基因表达的影响。 方法 用浸浴式一次性通气旋转装置体外培养小鼠睾丸组织。实验分为二甲基亚砜(DMSO)溶剂对照组和4个DEHP剂量染毒组(终浓度0.1、1.0、10.0、100.0 μmol/L)。分别培养24、48、72 h,每24 h通气一次。放射免疫法测定收集培养基中睾酮水平;Elisa法测定收集培养基中抑制素基因β_B基因(INHBβ)水平;实时荧光定量(QT)-PCR检测睾丸组织相关基因表达水平;HE染色观察睾丸组织病理学变化;免疫组化法检测睾丸组织相关蛋白表达。 结果 与DMSO溶剂对照组相比,DEHP一定浓度范围内,可使睾酮合成增加,但在DEHP 100.0 μmol/L染毒48、72 h,睾酮合成开始减少。Elisa测定INHBβ在DEHP 0.1 μmol/L、1.0 μmol/L染毒组合成增加,从DEHP 10.0 μmol/L开始合成减少。QT-PCR检测结果显示,与DMSO溶剂对照组相比,3β羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)、抗细胞色素P450 17α羟化酶(P450c17)、细胞色素P450侧链裂解酶(P450Scc)、波形蛋白(vimentin)mRNA表达下降,尤其是DEHP 100.0 μmol/L剂量组(P<0.05),INHBβ mRNA表达无显著变化。HE染色,各组睾丸组织未观察到明显病理学改变。免疫组化检测结果显示,与DMSO溶剂对照组相比,蛋白3β-HSD、P450c17、P450Scc表达增强,vimentin表达减弱,尤其是DEHP 10.0 μmol/L、100.0 μmol/L两个剂量染毒组。 结论 DEHP暴露对体外培养睾丸的睾酮合成有影响,其机制可能由于其影响了相关功能基因表达,进而对睾酮合成产生正负调控两种作用。     

镉对小鼠睾丸间质细胞睾酮合成的影响

目的 探讨镉对小鼠睾丸间质细胞睾酮合成的影响.方法 镉处理组采用20 μmol/L CdCl2处理TM3细胞,分别在加入CdCl2 4 h和8 h后收集细胞上清液,对照组TM3细胞给予等容积磷酸盐缓冲液(DPBS).采用ELISA法测定细胞上清液中睾酮含量,采用RT-PCR和Western blot技术检测睾酮合成关键酶mRNA和蛋白表达水平.结果 镉处理组细胞上清液中睾酮含量明显降低(P＜0. 01).与对照组相比,镉显著下调TM3细胞类固醇激素合成急性调控蛋白(StAR)、细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)与 17β-羟类固醇脱氢酶(17β-HSD) mRNA表达(P＜0.01),镉处理组TM3细胞StAR、P450SCC、细胞色素P45017α-羟化酶(P45017α)、3β-HSD与17β-HSD的蛋白表达水平也明显降低,与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜ 0.05,P＜0.01).结论 镉抑制小鼠睾丸间质细胞睾酮的分泌,其原因可能与镉抑制间质细胞部分睾酮合成关键酶mRNA和蛋白表达水平有关.     

膜联蛋白5对雄性SD大鼠睾酮合成相关蛋白和酶表达的影响

目的 研究注射膜联蛋白5后雄性SD大鼠睾丸类固醇急性调节蛋白(Steroidogenic acute regulatory protein,StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450 cholesterol side-chain cleavage enzyme,P450scc)和3β-羟类固醇脱氢酶(3 beta-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)表达的改变,初步探讨膜联蛋白5影响睾酮分泌的机制.方法 将20只SD大鼠随机分为对照组和实验组,实验组又分为7.5μg/kg组、15μg/kg组和30μg/kg组,每组5只.对照组大鼠腹腔注射等量的pH 8.0Tris-HCl,实验组腹腔注射不同剂量的膜联蛋白5,1次/d,连续20d.用RT-PCR方法分别检测对照组和各实验组SD大鼠睾丸组织中睾酮合成相关的StAR、P450scc和3β-HSD mRNA的表达变化,并用Western blot方法检测以上3种物质蛋白质水平的变化.结果 与对照组相比,在mRNA水平上,7.5μg/kg组和15μg/kg组大鼠睾丸组织P450scc mRNA表达分别增加了25.9%[(0.68±0.04) vs (0.54±0.03),P<0.01]和27.8%[(0.69±0.04) vs (0.54±0.03),P<0.01];3β-HSD mRNA表达分别升高了32.9%[(1.05±0.07) vs (0.79±0.10),P<0.01]和53.2%[(1.21±0.07) vs (0.79±0.10),P<0.01];而30μg/kg组表达差异无统计学意义;在蛋白水平上,15μg/kg组大鼠睾丸组织P450scc蛋白表达提高了34.2%[(0.37±0.04) vs (0.28±0.02),P<0.01],7.5μg/kg组和15μg/kg组的3β-HSD表达也分别增加了14.7%[(1.53±0.10) vs (1.34±0.05),P<0.01]和24.4%[(1.67±0.14) vs (1.34±0.05),P<0.01];而StAR的表达无论在转录水平还是在蛋白水平上,较对照组差异均无统计学意义.结论 膜联蛋白5可通过调节P450scc与3β-HSD的表达来调节睾酮合成.     

大鼠肾脏细胞17β-HSD1的表达及参与性激素合成的能力

目的通过研究合成性激素的关键酶17β-HSD1在肾脏中的表达,探讨肾脏是否具备合成性激素的作用。方法基于无促
卵泡生成素（FSH）、黄体生成素（LH）培养基和有FSH、LH培养基两种条件下,Western blotting、放射免疫分析法分别检测培
养24、48 h 后肾脏细胞中17β-HSD1 的表达和性激素的分泌情况。结果培养24 h 后,大鼠肾脏细胞能够表达少量的
17β-HSD1 蛋白（0.1843±0.076）,同时能够分泌少量的雌二醇、孕酮和睾酮（分别为3.30±3.78 nmol/L,62.60±12.33 pmol/L 和
22.12±3.36 nmol/L）,而在FSH和LH的共同刺激下,大鼠肾脏细胞17β-HSD1蛋白的表达量明显升高（1.6651±0.044,P<0.01）,
同时分泌雌二醇、孕酮和睾酮的量也显著增加（分别为8.50±2.64 nmol/L,117.80±9.79 pmol/L和45.04±4.39 nmol/L,均P<0.05）,
培养24 h和48 h上述指标均无明显差异（P>0.05）。结论大鼠肾脏细胞中有17β-HSD1的表达,并且在FSH和LH的共刺激下
能够稳定分泌性激素,提示肾脏组织具备合成性激素的能力,丰富了肾脏的内分泌功能。
     

氯化锰对大鼠睾丸间质细胞睾酮合成及去势大鼠生殖内分泌的影响

目的:观察氯化锰对大鼠睾丸间质细胞睾酮合成及去势大鼠生殖内分泌的影响,探讨氯化锰的抗雄激素样作用.方法:①Percoll梯度离心分离、纯化大鼠睾丸间质细胞,根据氯化锰染毒剂量分为对照(0 mol/L氯化锰)和1.0 × 10-6、2.5 × 10-6、5.0 × 10-6、1.0 × 10-5、2.5 × 10-5、5.0 × 10-5 及1.0 × 10-4 mol/L氯化锰组,培养24 h后,采用台盼蓝染色法测定大鼠睾丸间质细胞存活率.②同法分组,观察氯化锰对基础状态和人绒毛膜促性腺激素(HCG)刺激下睾丸间质细胞睾酮合成的影响.③将行睾丸摘除术的大鼠随机分为6组(n=10):溶剂对照组皮下注射玉米油0.2 mL,阴性对照组皮下注射丙酸睾酮(TP)1.0 μs,氯化锰低、中、高剂量组皮下注射1.0μg TP后分别注射氯化锰7.5、15.0和30.0 mg/kg,阳性对照组皮下注射1.0 μg TP后注射氟他胺(100.0 mg/kg),1次/d,连续7 d.7 d后,用放射免疫法测定各组去势大鼠血清睾酮水平和前列腺特异抗原(PSA)含量,分离雄激素依赖组织,称量,计算脏器系数.结果:①随氯化锰染毒剂量的升高,大鼠睾丸间质细胞存活率逐渐下降(F=15.297,P=0.023).②基础状态和HCG刺激下各组大鼠睾丸间质细胞睾酮水平差异均有统计学意义(F=32.639和25.187,P均<0.001);基础状态下氯化锰剂量≥5.0 × 10-6 mol/L时睾酮水平均低于对照组(P<0.05),HCG刺激状态下氯化锰剂量≥1.0×10-5 mol/L时睾酮水平低于对照组(P<0.05).③各组去势大鼠血清睾酮、PSA含量、腹侧前列腺及精囊腺脏器系数相比,差异均有统计学意义(F=39.920,25.403,15.562和9.476,P均<0.05),但氯化锰低、中和高剂量组去势大鼠血清睾酮和PSA水平与阴性对照组比较,差异均无统计学意义(P均>0.05).氯化锰高剂量组腹侧前列腺和精囊腺脏器系数均低于阴性对照组(P<0.05).结论:氯化锰可能有抗雄激素样作用.     

精浆AMH水平对非梗阻性无精症的临床预测价值

目的探讨抗缪勒管激素(AMH)水平对非梗阻性无精子症(NOA)的临床预测价值。方法釆用酶联免疫法和电化学发光免疫分析法检测NOA患者精浆AMH、血清促卵泡激素(FSH)以及睾酮(T)的浓度;B超检测其睾丸体积;通过睾丸显微取精术(M-TESE)检获精子;同时设置对照组,并进行统计学分析。结果 NOA组的AMH浓度分别低于OA组[(19.53±9.13)pmol/L,(52.34±15.13)pmol/L,P0.05]及NF组[(158.53±37.45)pmol/L,P0.05];NOA组的FSH浓度分别高于OA组[(18.36±8.95)U/L,(5.51±3.32)U/L,P0.05]及NF组[(6.12±3.02)U/L,P0.05];NOA患者的睾酮浓度[(15.32±5.43)nmol/L]分别与OA组[(15.63±6.23)nmol/L]、NF组[(15.81±5.73)nmol/L]比较无显著性差异(P0.05,P0.05);NOA组左右睾丸体积TV[(9.58±3.83)mL,(7.46±3.57)mL]分别与OA组[(16.97±2.56)mL,(15.32±3.63)mL]、NF组[(16.23±3.53)mL,(16.84±2.83)mL]存在显著性差异(P0.05,P0.05)。NOA组有10人检获精子,OA组19人检获精子(P0.05)。Logistic回归分析检验发现AMH预测NOA患者睾丸内是否存在精子的拟合优度最佳(Wald χ~2=26.198,P0.01);ROC曲线图显示精浆AMH的AUC值最大;精浆AMH的阳性似然比为7.36[81.82%/(1-88.89%)],阴性似然比为0.20[(1-81.82%)/88.89%]。结论精浆AMH浓度对于预测NOA患者M-TESE成功与否具有重要的意义。     

缺血预处理改善心肌钙超载后胰岛素抵抗

目的步探讨缺血预处理对心肌细胞钙超载后胰岛素敏感性的影响。方法采用Langendorff灌流装置逆行主动脉插管灌注,胶原酶消化法分离获取成年大鼠心肌细胞。将心肌细胞分5个组:正常对照组,实验组1(ionomycin0.5μmol/L),实验组2(ionomycin0.5μmol/L+IP),实验组3(ionomycin1.0μmol/L),实验组4(ionomycin1.0μmol/L+IP),应用同位素示踪技术观察胰岛素刺激大鼠心肌细胞的葡萄糖摄取效应,评价心肌细胞的胰岛素敏感性。结果各组心肌细胞活性比率无明显降低(P0.05)。对照组心肌细胞静息[Ca2+]i为(117.80±22.41)nmol/L,实验1,2组心肌细胞经过(ionomycin0.5μmol/L)处理1h后,[Ca2+]i明显高于对照组,但两组间无统计学差异(260.49±33.06)nmol/L,(278.03±23.46)nmol/Lvs(117.80±22.41)nmol/L;实验3,4组心肌细胞经过(ionomycin1.0μmol/L)处理1h后,实验3,4组心肌细胞[Ca2+]i明显高于实验1,2组和对照组,但两组间无统计学差异(391.91±20.01)nmol/L,(379.91±23.92)nmol/Lvs(260.49±33.06)nmol/L,(278.03±23.46)nmol/Lvs(117.80±22.41)nmol/L,(P0.05)。胰岛素(20IU/L)能促进各组心肌细胞的葡萄糖摄取,分别为(56.86±6.89)μmol/105cells/10min,(31.10±7.62)μmol/105cells/10min,(40.12±6.90)μmol/105cells/10min,(22.26±5.92)μmol/105cells/10min,(32.33±6.06)μmol/105cells/10min。胰岛素刺激各实验组心肌细胞葡萄糖摄取较对照组心肌细胞葡萄糖摄取降低(P0.05),胰岛素刺激实验组2,4心肌细胞的葡萄糖摄取虽较对照组降低,但是与无缺血预处理相比葡萄糖摄取有所增加(P0.05)。结论缺血预处理对ionomycin导致的心肌细胞的钙超载没有影响,但是能改善钙超载心肌细胞的胰岛素抵抗。     

节气变化对大鼠肾上腺及睾丸3β-羟基类固醇脱氢酶活性的影响

以大鼠肾上腺皮质及皋丸间质细胞的3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)活性为指标,研究24节气变化对动物机体反应的影响。每一节气用清洁级雄大鼠5只,在节气后2±1d从上海西普尔-必凯实验动物公司的清洁级实验动物设施取动物至本单位立即(上午9:00～11:00)处死,取同侧肾上腺及睾丸,做冰冻切片(10μm),用组织化学法测定3β-HSD活性。结果表明,肾上腺皮质和睾丸间质中3β-HSD活性,随24节气的变化,基本平行。肾上腺弓状带的3β-HSD峰值在立冬、春分,束状带和网状带的峰值在芒种、小满和春分,三者的低谷均在冬至和大暑。睾丸间质中的3β-HSD峰值在立春、芒种,低谷在清明、立冬和大雪;而在夏至、小暑和大暑,其组织化学反应为阴性。     

二甲磺酸乙烷对大鼠睾丸胚胎型Leydig细胞的作用

目的:评价细胞毒性药物二甲磺酸乙烷对新生大鼠睾丸胚胎型Leydig细胞的作用效应及安全使用剂量。方法:选取出生后3 d的雄性SD幼鼠共40只,分为对照组(二甲基亚砜溶剂组)、二甲磺酸乙烷75 mg/kg组、二甲磺酸乙烷100 mg/kg组和二甲磺酸乙烷125 mg/kg组,每组10只。予腹腔内注射不同实验剂量的二甲磺酸乙烷,注射后4 d分别处死幼鼠;测量动物体重及睾丸重量,放射免疫法检测血清中睾酮水平,睾丸组织冰冻切片行3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)染色,实时荧光定量PCR技术及Western blot技术检测睾丸组织中Leydig细胞相关特异基因及蛋白的表达水平。结果:药物注射后4 d,与对照组相比较,在血清睾酮水平方面[(0.542±0.117)μg/L,(0.124±0.021)μg/L,(0.113±0.015)μg/L,vs.(0.834±0.172)μg/L,P<0.05],75 mg/kg剂量组轻度下降,而100 mg/kg剂量组和125 mg/kg剂量组则明显降低;睾丸组织3β-HSD染色显示:75 mg/kg剂量组仍可见少量的3β-HSD染色呈阳性的胚胎型Leydig细胞(fetal leydig cell,FLC),100 mg/kg剂量组和125 mg/kg剂量组无3β-HSD染色呈阳性的FLC存在,但125 mg/kg剂量组睾丸曲细精管细胞排列严重紊乱;RT-PCR及Western blot检测显示:100 mg/kg剂量组睾丸组织Hsd3b1和Cyp17a1的mRNA表达水平及其相应蛋白表达水平明显降低(P<0.001)。结论:二甲磺酸乙烷能够特异性地破坏新生雄性SD大鼠睾丸组织中的胚胎型Leydig细胞,腹腔注射100 mg/kg二甲磺酸乙烷可建立起稳定、可靠的大鼠睾丸去胚胎型Leydig细胞模型。     

睾酮对3T3-L1脂肪细胞炎症因子生成的影响及其机制研究

目的 探讨睾酮对3T3-L1成熟脂肪细胞炎症因子生成的影响及分子机制.方法 3T3-L1前脂肪细胞诱导成熟,采用不同浓度睾酮(10-9、10-7、10-5mol/L)分别处理10～30 min及12、24及48 h后,提取上清液用ELISA法检测炎症因子白介素6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的浓度;RT-PCR检测细胞内IL-6、MCP-1mRNA的生成;免疫印迹检测核因子-κB(NF-κBp65)的磷酸化及表达.随后再用10-4mol/L NF-κB的抑制剂吡咯二烷二硫氨基甲酸(PDTC)预处理2 h,再加入睾酮,再观察上述结果的变化.结果 (1)与无睾酮组相比,睾酮3种浓度处理组3T3-L1脂肪细胞上清液IL-6、MCP-1的含量均明显增多(P<0.05),以10-5moL/L睾酮处理24 h时上清液两种因子含量较其他处理组明显增多(P<0.05).与无睾酮组相比,睾酮3种浓度处理组3T3-LI脂肪细胞12 h时,IL-6、MCP-1 mRNA的水平明显增加(P<0.05),以10-5moL/L睾酮处理12 h时两种因子的mRNA水平较其他组明显增加(P<0.05);(2)睾酮3种浓度短时间(10～30 min)处理3T3-L1脂肪细胞时,与无睾酮组相比,均可使NF-κBp65的磷酸化增加(P<0.05),其中以10-5mol/L的作用最明显(P<0.05);睾酮处理3T3-LI脂肪细胞12 h时,NF-κB p65的磷酸化明显增加(P<0.05),其中以10-9和10-5mol/L组较其他组作用明显(均P<0.05);(3)用NF-κB的抑制剂PDTC预处理2 h后,再用睾酮处理,上清液两种因子含量及其mRNA水平明显降低(均P<0.05).结论 睾酮可通过NF-κB途径促进成熟脂肪细胞炎症因子的分泌.     

雌激素对内皮细胞释放一氧化氮的作用

目的：探讨雌激素对血管保护作用的机制,为绝经后妇女应用激素替代治疗提供参考。方法：观察10^-9～10^-5mol/L17β－雌二醇（17β－E2）、睾酮（T）、10^-4及10^-3mol/L同型半胱氨酸（Hcy)单独应用和10^-9～10^-5mol/L17β-E2分别与1010^-9～10^-5mol/L T、10^-9～10^-5mol/L17β－E2分别与10^-4及10^-3mol/LHcy联合应用对原代培养脐静脉内皮细胞释放一氧化氮（NO）的影响。结果：10^-9mol/L17β－E2刺激内皮细胞8－48h,NO释放明显增多;10^-9mol/LT刺激内皮细胞2－48h,NO无明显增多。10^-9～10^-7mol/LT刺激内皮细胞24h,培养液中NO水平无明显改变,10^-6及10^-5mol/LT使培养液中的NO明显减少。当10^-9～10^-5mol/LE2与10^-9～10^-5mol/LT分别联合应用刺激内皮细胞时,10^-9～10^-8mol/LT不影响17β-E2的促进NO释放作用,而10^-7～10^-5mol/LT抑制17β－E2,10^-9～10^-7mol/L17β－E2能改善Hcy对内皮细胞的损伤作用,10^-5mol/L17β－E2则无此作用。结论：T不能促进人脐静脉内皮细胞释放NO。T具有抑制17β－E2促进内皮细胞释放NO的作用,尤其在17β-E2、T浓度较高时作用更明显。高浓度Hcy对内皮细胞释放NO产生抑制作用,但加入17β-E2可减轻Hcy的抑制作用。