三种贝母的鳞茎与地上部分总生物碱产量研究

贝母有效成分为生物碱。通过对3种贝母鳞茎与地上部分总生物碱产量的研究，旨在为贝母地上部分的开发利用提供一定的科学依据。1仪器、试药721型分光光度计，贝母素乙（peininine）对照品购自中国药品生物制品检定所。所用试剂均AR级。2实验材料新疆贝母FritillariawalujewiiRegel、托里贝母F.torifoliaX.Z.DuanexX.J.Cheng.、平贝母F.ussuriensisMaxim.采自黑龙江中医学院药用植物园，栽培。分别采收鳞茎和地上部分，60℃烘干，称重，计算株均鳞茎重和株均地上部分重，粉碎，过60目筛，干燥器中保存备用。3实验部分3．1总生物碱含量…     

皖贝的原植物调查和生药鉴定

本文介绍了皖贝的植物来源,对其主要品种安徽贝母(Fritillaria anhuiensis)和湖北贝母(F. hupchensis)进行了原植物的调查、药材特征、色谱鉴定和贝母总生物碱含量测定的研究。并列出主要特征比较表。全文附有药材外形、组织、粉末及薄层层析色谱扫描图。     

川贝母与其他贝母类药材总生物碱和总皂苷的含量测定与比较

目的 :通过测定和比较川贝母与其他贝母类药材在总生物碱和总皂苷的含量上的区别 ,探讨建立合理的川贝母有效成分含量测定标准的途径。方法 :用两相滴定法测定各种贝母的总生物碱含量 ;用重量法测定各种贝母的总皂苷含量。结果 :测定了 4种川贝母 (2000年版《中国药典》收载品种)各3个样品和浙贝母、伊贝母和平贝母各 2个样品中总生物碱含量和总皂苷含量。结论 :川贝母的总生物碱含量在 0.05 %～0.1% ,总皂苷含量在2.0%～4.0% ;浙贝母、伊贝母和平贝母的总生物碱含量在0.1%～0.2% ,总皂苷含量在 1.0%～2.0%。这种主要成分含量的差异为解释川贝母的独特药理活性和制定合理的质量标准提供了新的思路。     

基于多指标成分含量结合化学计量学评价不同产地浙贝母质量

目的 评价不同产地浙贝母质量。方法 采用UV-Vis、HPLC-ELSD、HPLC-DAD法测定总生物碱含量,贝母素甲、贝母素乙总含量,水溶性成分(尿嘧啶、胞苷、尿苷、2-脱氧尿苷、肌苷、腺嘌呤、胸苷、腺苷、2-脱氧腺苷)总含量,主成分分析(PCA)、偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)评价质量。结果 浙江产浙贝母中总生物碱含量,贝母素甲、贝母素乙总含量,9种水溶性成分总含量均高于湖南安化、湖北宜昌产,其中舟山产样品中9种水溶性成分总含量、总生物碱含量,象山产样品中贝母素甲、贝母素乙总含量显著高于其他浙江产地样品中。结论 浙江产浙贝母质量较好,以舟山、象山产更明显。本实验可为该药材采购产地选择及优良新品种选育提供参考。     

浓蜜贝母的组织培养条件及不同时期生物碱积累的研究

目的对浓蜜贝母Fritillaria mellea原种鳞茎进行组织培养,比较浓蜜贝母愈伤组织生长过程中不同时期的总生物碱含量.方法采用不同激素、温度、光照等方法,探索浓蜜贝母愈伤组织的最佳诱导率条件,并对其总生物碱含量进行测定.结果浓蜜贝母的最佳诱导条件为激素及浓度NAA 1 mg/L+6BA 6 mg/L;温度(22±1)℃;散射光照;愈伤组织形成后20 d左右时的总生物碱含量最高.结论浓蜜贝母愈伤组织的总生物碱含量高于原种鳞茎.     

西藏林芝地区川贝母(瓦布贝母)总生物碱含量研究

目的以总生物碱含量为指标,考察西藏林芝地区不同产地野生川贝母(瓦布贝母)的品质情况,为今后林芝地区川贝母人工种植种质选育奠定实验基础。方法以西贝母碱为对照品,紫外分光光度法测定川贝母(瓦布贝母)总生物碱的含量。结果所测林芝地区川贝母(瓦布贝母)中总生物碱的含量均高于《中国药典》要求,是其规定含量的1.26~3.44倍。结论林芝地区的野生川贝母(瓦布贝母)可作为人工种植育种的种质来源。     

贝母类药材生物碱及生物碱苷含量测定方法学研究

 目的建立酸水解-酸性染料比色法同时测定贝母类药材中生物碱及生物碱苷含量的方法。方法用氯仿-甲醇(4∶1)混合溶剂提取总碱，酸性染料比色法测定水解前及水解后提取物中生物碱含量，计算出生物碱、生物碱苷及总生物碱的含量。结果生物碱、生物碱苷及总生物碱的加样回收率分别为100.5%，102.2%，101.1%，RSD分别为1.1%，3.3%，1.7%(n=5)，并对药典收载的9种贝母类药材进行了测定。结论本法不需要复杂仪器，可用于贝母类药材生物碱及生物碱苷的含量测定。     

不同生长年限太白贝母中贝母辛和总生物碱的含量测定

目的:测定不同生长年限太白贝母鳞茎中贝母辛和总生物碱的含量,为建立和完善中药材太白贝母的质量控制体系和适宜采收时间提供实验依据。方法:采用HPLC-ELSD法测定贝母辛,色谱柱为Agilent Extend C18(250 mm×4.0 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%二乙胺水溶液(10∶90),流速为1.0 mL/min,Alltech 2000蒸发光散射检测器;采用紫外分光光度法测定总生物碱。结果:生长2～3年的太白贝母贝母辛的含量随着生长年限的增加而增加,生长4～6年的太白贝母贝母辛的含量随着生长年限的增加而降低;生长2～4年太白贝母的总生物碱含量逐年增加,生长5～6年总生物碱含量逐年下降。结论:综合药用有效成分贝母辛和总生物碱的含量、贝母药材的产量以及土地利用率3个因素考虑,以4年生的太白贝母采收比较合适。     

不同生长年限野生和移栽彭泽贝母中3个生物碱含量的比较

目的:建立HPLC-ELSD同时测定彭泽贝母中贝母素甲、贝母素乙、贝母辛3个生物碱类成分含量的方法,并测定不同生长年限野生和移栽品种3个化合物的含量,观察其动态变化规律。方法:采用Hypersil ODS2色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.03%二乙胺(B)梯度洗脱,流速:1.0 m L/min,漂移管温度:99.5℃,载气流速:2.2 L/min。结果:建立了HPLC-ELSD同时测定彭泽贝母中贝母素甲、贝母素乙、贝母辛3个生物碱类成分含量的方法,3个成分均达到基线分离,线性关系良好(r0.9991);平均加样回收率(n=6)分别为96.6%、98.9%、96.2%。野生彭泽贝母中贝母素甲、贝母素乙、贝母辛的含量较移栽的略高,在一定年限内,随着生长年限的增加,这3个生物碱的含量逐渐增大。结论:该方法操作简单、快速、重复性好,为彭泽贝母药材的质量控制奠定了基础。3个生物碱总含量随生长年限的不同而异,野生4~5年生达到最高。     

浙贝母迁移至丽水庆元后的品质比较研究及其指纹图谱研究

目的:(1)通过比较对道地产区和庆元产区浙贝母饮片中主要有效成分的差异,揭示不同产地对浙贝母有效成分的影响。(2)通过构建庆元浙贝母总生物碱的化学指纹图谱,确定指纹图谱共有模式,为庆元地区浙贝母质量控制提供参考。方法:(1)道地药材浙贝母迁移至庆元产地后对其品质的影响。(1)采用HPLCELSD法,以贝母素甲、贝母素乙、贝母辛作为对照品,研究迁移至庆元产地后对浙贝母生物碱类成分的影响。(2)采用HPLC-ELSD法测定庆元和宁波等地浙贝母饮片中贝母素甲和贝母素乙,和贝母辛的含量。(2)道地产区和迁移地庆元的浙贝母总生物碱指纹图谱的研究。以贝母素甲、贝母素乙和贝母辛为参照物,采用HPLC-ELSD方法建立并研究庆元产区浙贝母饮片总生物碱的指纹图谱,对20批次样品的色谱进行相似度分析。结果:(1)通过对道地产区和迁移产区浙贝母饮片的HPLC-ELSD指纹图谱,有效成分含量,浸出物含量进行比较,实验结果显示两个产地的浙贝母饮片质量的差异很大,浙贝母迁至庆元,不仅对浙贝母主要有效成分组成产生影响,而且对贝母素甲、贝母素乙和贝母辛的含量也产生了巨大影响。(2)建立了18批庆元浙贝母饮片总生物碱的化学指纹图谱,确定了指纹图谱的共有模式。方法稳定可靠,具有较好的重复性。结论:(1)浙贝迁至母庆元对浙贝母有效成分的组分及含量产生了影响。(2)本实验构建18批庆元地区浙贝母总生物碱的化学指纹图谱,确定了指纹图谱共有模式。     

不同品种川贝母生物碱镇咳、抗炎作用比较研究

目的比较太白贝母(野生、栽培)与松贝、青贝、炉贝生物碱大孔树脂纯化物的镇咳、抗炎药效学差异,为其临床应用和进一步开发利用提供依据。方法通过回流法提取,大孔吸附树脂纯化不同品种川贝母总生物碱;紫外分光光度法测定川贝母总生物碱含量。比较5种不同品种川贝母生物碱(2.3 mg·kg-1)对氨水致小鼠咳嗽及二甲苯致小鼠耳肿胀的镇咳、抗炎药效学差异。对不同品种川贝母生物碱镇咳、抗炎实验结果进行聚类分析。结果经大孔吸附树脂纯化后,各川贝母样品生物碱含量在51.93%~68.38%之间。太白贝母(野生)、太白贝母(栽培)、松贝、青贝、炉贝生物碱均可明显延长小鼠咳嗽潜伏期;太白贝母(野生)、松贝、青贝、炉贝生物碱可明显降低小鼠2 min咳嗽次数。青贝、炉贝生物碱可使二甲苯致小鼠耳肿胀率明显降低,而太白贝母(野生、栽培)抗炎效果不明显。聚类分析表明,松贝、青贝、炉贝数据聚为一类,再与太白贝母(野生)聚集,而与太白贝母(栽培)分离。结论太白贝母与松贝、青贝、炉贝生物碱一样具有镇咳作用,但抗炎效果不明显,其生物碱组成可能与松贝、青贝、炉贝有一定差异。     

无紫外吸收的贝母总生物碱定量分析方法研究

目的 建立无紫外吸收的贝母总生物碱的定量分析方法。方法 以HPLC－ELSD（高效液相色谱－蒸发光散射检测器）的定量结果为依据，比较研究了贝母总生物碱的3种定量分析方法，即：两相滴定法，酸性染料比色法和非水滴定法。结果 对于总生物碱的应量分析，特别是当总生物碱中含有生物碱苷时，两相滴定法和酸性染料比色法的定量结果均偏低，只有非水滴定法的定量结果与实际值接近。结论 贝母中总生物碱的含量测定以非水滴定法为宜。     

喷施农药对贝母成分的影响

本文对经复方多菌灵,甲基托布津、多菌灵农药浸种处理后播种的贝母,进行了总生物碱及氨基酸成分分析,结果表明:总生物碱的薄层分析及薄层扫描图谱,四个处理(含对照)的斑点、Rf值,峰数和峰型一致。测定氨基酸17种的含量总和,虽比对照略微降低,但人体必需的8种氨基酸含量(%)却稍有提高。试验说明以上处理,对贝母产品总生物碱及氨基酸的含量虽有细微影响,但无明显差异,可以推广使用。     

几种贝母中总生物碱和西贝素的含量测定

贝母系止咳化痰药,生物碱是其主要成分。伊贝母类的总生物碱以西贝索含量为最高。本文对原产于新疆而栽培于太白县的不同品种的贝母及野生太白贝母,用两相滴定法测定了总生物碱的含量,用薄层扫描法测定了西贝素的含量,对考察贝母的内在质量建立了分析方法。实验部分仪器及材料岛津 CS—930型双波长薄层扫描仪;微量定量毛细管(Drummond 科学公司,USA);西贝素(Sipeimine)对照品,新疆药物研究所李芳桂同志赠送。栽培贝母样品:伊贝母(Fritillaria pallidiflora     

不同产地和品种对浙贝母主成分与生理生化特性的影响

目的:研究不同产地和品种对浙贝母生物碱含量与内在生理生化特性如苯丙氨酸解氨酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)的活性及叶绿素含量等的影响。方法:分别采用超声波法和常规生理生化技术提取浙贝母总生物碱和PAL、PPO、CAT、POD及叶绿素,并采用分光光度法进行含量与活性测定。结果:不同产地对浙贝母生物碱含量的影响较大,其中狭叶浙贝母鳞茎以金华磐安种植的最高,为0.0158%,其他产地的含量比较接近。不同品种生物碱含量测定结果表明不同组织部位的含量不尽相同,其中鳞茎和地上茎的生物碱含量以狭叶贝母最高,其次为宽叶、多籽、大个和小个;而叶中生物碱含量以多籽贝母为最高,其次为宽叶、狭叶、小个和大个。生理生化检测结果表明5个品种中狭叶贝母的各项酶活性和叶绿素含量最高;其他品种酶活性和叶绿素含量各有差异,且不同部位活性也各不相同。从不同产地来看,磐安、章水、南通的贝母在不同酶活性和叶绿素含量上各有差异,其中在PAL、CAT、POD的活性上,章水贝母均要高于金华和南通贝母,而从PPO的活性和叶绿素的含量来看,则是金华贝母要高于章水和南通贝母。结论:不同产地和品种对浙母主成分生物碱含量...     

大孔吸附树脂分离纯化湖北贝母总生物碱的研究

目的:研究湖北贝母总生物碱的纯化方法。方法:采用50%乙醇提取,D101型大孔吸附树脂分离纯化的方法。结果:提取物中的湖北贝母总生物碱含量达到74%。结论:D101型大孔吸附树脂适合分离纯化湖北贝母总生物碱。     

裕民贝母生物碱的含量测定及薄层层析

裕民贝母为新近用于临床的贝母新种,为了解裕民贝母与其它贝母的异同,本文对其生物碱做了初步分析。结果,裕民贝母的生物碱组分与新疆贝母、黄花贝母和砂贝母等相似;总生物碱含量低于浙贝、东贝、川贝中的板贝和新疆的伊贝,但略高于塔城产的新疆贝母、平贝母、黄花贝母和砂贝母。     

不同规格浙贝母饮片中贝母辛、贝母素甲、贝母素乙体外溶出度比较

目的 对比浙贝母超微粉、粗粉和饮片中贝母辛、贝母素甲、贝母素乙3种生物碱的体外溶出度。方法 采取高效液相色谱-蒸发光散射检测(HPLC-ELSD)法测定不同状态下的浙贝母人工胃液中贝母辛、贝母素甲、贝母素乙3种生物碱在不同时间节点的溶出量,并对其溶出特征进行比较。结果 超微粉、粗粉和饮片在人工胃液中贝母辛、贝母素甲、贝母素乙3种生物碱的累计体外溶出度分别为90.25%、82.29%、33.65%,超微粉明显高于粗粉和饮片,且达平衡浓度仅需5 min。结论 浙贝母中贝母辛、贝母素甲、贝母素乙3种生物碱的体外溶出度能明显被超微粉技术提高。     

卷叶贝母环阿屯醇合成酶基因的克隆及表达分析

目的对卷叶贝母Fritillaria cirrhosa中参与生物碱合成的关键酶环阿屯醇合成酶(cycloartenol synthase,CAS)基因进行克隆,并对其进行生物信息学和表达分析。方法基于转录组测序结果,通过PCR技术克隆卷叶贝母CAS基因(FcCAS)开放阅读框(open reading frame,ORF)序列,并基于在线工具对cDNA序列进行生物信息学分析。通过荧光定量(q RT-PCR)手段检测FcCAS在野生鳞茎与愈伤组织(通过激素组合刺激获得的组织培养物)中的表达情况并测定总生物碱的含量。结果 FcCAS编码区ORF长为2 271 bp,编码756个氨基酸,并与NCBI上公布的天门冬、芭蕉、油棕等植物CAS蛋白的相似性达80%以上;qRT-PCR与总生物碱含量测定实验表明FcCAS的表达水平与总生物碱含量的变化趋势一致,都是愈伤组织高于野生鳞茎。结论 FcCAS在不同组织状态下表达量差异较大,FcCAS是一个有生物学功能的蛋白质,受激素组合诱导表达,为进一步研究CAS对卷叶贝母生物碱含量的影响和表达调控奠定基础。     

湖北贝母总生物碱平喘作用及其机理的研究

目的 研究湖北贝母总生物碱对豚鼠的平喘作用及其机理.方法 采用豚鼠整体动物引喘和豚鼠离体气管螺旋条的实验方法,分别研究湖北贝母总生物碱对乙酰胆碱-组胺(Ach-Histamine)整体动物的平喘作用、对离体气管平滑肌基础张力的影响及对各种致痉剂收缩气管平滑肌的抑制作用.结果 湖北贝母总生物碱在4 mg/kg剂量下灌胃给药1 h后,能明显延长Ach-Histamine所致豚鼠哮喘的引喘潜伏期,表现出良好的平喘效应;对豚鼠离体气管平滑肌的基础张力无显著影响;对Histamine和5-HT引起的收缩也无明显的抑制作用;但对于Ach引起的收缩,湖北贝母总生物碱在2.5 mg/L的浓度时即呈现出显著的抑制作用(P<0.01),对20 μmol/ L Ach的IC50为13.130 4 mg /L;湖北贝母总生物碱可使Ach量效累积曲线向右平移,而最大效应不降低.结论 湖北贝母总生物碱对豚鼠具有较强的平喘作用,其机理可能与竞争性拮抗气管平滑肌M受体从而扩张气管平滑肌作用有关.