不同氮素形态和浓度对大青叶生物量与生物碱类成分的影响

目的:分析不同氮素形态及不同浓度氮素施肥对大青叶生物量与生物碱类成分的影响,为研究提高菘蓝对氮素的利用效率提供理论依据。方法:采用大棚砂培种植菘蓝,正交设计L₂₅(5),以大青叶的生物量及靛蓝、靛玉红含量为指标,分析3因素硝态氮(N0₃-N)、铵态氮(NH₄-N)和酰胺态氮 [CO(NH₂)₂]和5种不同氮素浓度对菘蓝的影响。结果:不同的氮素形态和浓度对大青叶生物量与生物碱类成分含量的影响存在较大差异,酰胺态氮对大青叶生物量的影响最大,铵态氮对靛玉红影响更大;综合考虑其生物量与生物碱成分含量,优选出1个最佳的施氮组合,即17号组合(NH₄)₂SO₄浓度为7.5 mmol·L, KNO₃浓度为2.5 mmol·L,CO(NH₂)₂浓度为5 mmol·L。结论:菘蓝前期以促生长为主,经济有效的平衡施氮组合能合理促进菘蓝植株生长,提高大青叶的活性成分的含量和单株生物量。     

不同含氮化合物对鸡骨草生长和结瘤的效应

目的:研究不同类型含氮化合物对鸡骨草生长和结瘤的效应。方法:在盆栽鸡骨草幼苗接种根瘤菌后,分别用KNO₃,NH₄NO₃,(NH₄)₂SO₄作为氮源配制不同氮浓度的营养液补充水分和营养。培养70 d后,测定植株生长和结瘤情况。结果:含氮化合物对鸡骨草的营养生长有不同程度的促进作用,其中以(NH₄)₂SO₄和NH₄NO₃的效果最好;它们对鸡骨草结瘤固氮的抑制效应也是明显的,其抑制效应的大小顺序为:NH₄NO₃>(NH₄)₂SO₄>KNO₃;KNO₃处理以及低浓度的(NH₄)₂SO₄和NH₄NO₃不影响鸡骨草植株正常结瘤,高浓度的(NH₄)₂SO₄和NH₄NO₃处理严重抑制结瘤或不能结瘤。结论:铵态氮对鸡骨草结瘤固氮的抑制能力较强,减少铵态氮肥的使用有利于充分发挥生物固氮的作用来提高原料药材的质量。     

同时测定乌梅中8种有机酸含量

目的：建立RP-HPLC同时测定乌梅中8种有机酸成分：草酸、酒石酸、苹果酸、抗坏血酸、乳酸、醋酸、柠檬酸和琥珀酸。方法：在C₁₈柱上,用（NH₄）H₂PO₄-H₃PO₄水溶液(pH 2.8)作流动相,紫外检测器检测（214 nm）,流动相流速为0.5 mL·min^-1。结果：分别建立了8种有机酸成分的回归方程。草酸、酒石酸、苹果酸、抗坏血酸、乳酸、醋酸、柠檬酸和琥珀酸的含量分别为1.29%,0.36%,1.82%,1.82%,2.09%,1.65%,16.0%,3.09%。结论：该方法操作简便,准确,快速,一次测定不超过10 min；不但可以作为中药乌梅有机酸成分的质量分析,也可用作为其他植物中有机酸的定量分析。     

高效液相色谱法测定人血清中的特布他林

 目的 用HPLC检测人血清中的特布他林浓度。方法 样品用硅胶萃取小柱纯化浓集后用C₈柱(5 μm,250 mm×4.6 mm)作分析柱,用硫酸沙丁胺醇作内标,以pH2.8,0.03 mol·L^-1NH₄H₂PO₄缓冲液-CH₃OH-CH₃CN(90∶3∶7)为流动相,在波长为224 nm处紫外检测。结果 标准曲线在0.5～32 μg·L^-1范围内有良好线性关系(r=0.9998),最低检测浓度为0.2 μg·L^-1,平均方法回收率为(100.7±3.1)%,日内 RSD 小于3.7%,日间 RSD 小于7.5%。结论 方法简便,快速准确,适宜血清中特布他林的测定。     

外源H2O2预处理对垂盆草抗寒性及药材产量和品质的影响

目的 探索外源过氧化氢（hydrogen peroxide,H₂O₂）预处理对垂盆草Sedum sarmentosum抗逆性及药材产量和品质的影响,为逆境信号物质诱导药材高产优质的栽培模式提供依据。方法 垂盆草叶面喷施不同浓度（0、1、10、100 mmol/L） H₂O₂后经历自然低温,收获时测定生长指标、生物量、多种黄酮类成分含量及多种体外抗氧化能力。结果 在低温条件下,喷施H₂O₂均显著提高垂盆草最大分枝长、叶片层数、分枝数、生物量、多种黄酮类成分含量以及体外抗氧化能力。随外源H₂O₂浓度提高,垂盆草叶片层数、分枝数、新生芽数、生物量及过氧化物酶（peroxidase,POD）酶活性呈下降趋势,而超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、过氧化氢酶（catalase,CAT）酶活性及丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量呈上升趋势。1、10 mmol/L H₂O₂处理的生物量分别比对照提高209.38%和87.50%。总黄酮、总酚酸含量以及槲皮素、山柰酚、异鼠李素含量均以10 mmol/L H₂O₂处理最高,比对照提高16.67%~37.84%,1 mmol/L H₂O₂处理次之。1 mmol/L H₂O₂处理垂盆草1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）和2,2''-联氮-双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐[2,2''-azino-bis （3-ehtylbenzothiazolin-6-sulfnic acid）,ABTS]自由基清除能力最强,而羟基自由基清除能力和抗脂质过氧化能力以10 mmol/L H₂O₂处理最强。结论 在低温条件下H₂O₂预处理有利于提高垂盆草抗寒性及药材产量和品质;综合比较生物量及活性成分含量,1或10 mmol/L H₂O₂预处理利于提高垂盆草抗寒性,高产优质兼得。     

头花蓼重复片段多态性分析-多聚酶链式反应体系建立与正交优化

目的: 建立头花蓼ISSR的反应体系。 方法: 通过正交试验,研究了Mg²⁺浓度、dNTP 浓度、Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度这4个因素在3个水平上对ISSR-PCR的影响。 结果: 确立了适合于头花蓼ISSR PCR的优化体系:25 μL PCR反应体系中含有1×buffer 缓冲液(10 mmol ·L^-1 KC1,8 mmol ·L^-1 (NH₄)₂SO₄,10 mmol ·L^-1 Tris ·HC1,pH 8.0),3.0 mmol ·L^-1 MgC1₂,d NTP 200 μmol ·L^-1,2.0 U ·25 μL^-1 Taq酶,0.25 mmol ·L^-1引物,40 ng ·L^-1模板DNA。利用温度梯度PCR,确定了最适宜的退火温度为48 ℃。 结论: 该优化体系的建立为进一步对头花蓼进行种质资源的遗传多样性分析奠定了基础。     

健脾补血口服液的质量标准

 目的:制定健脾补血口服液的质量标准。方法:应用ＴＬＣ法对健脾补血口服液中大枣、黄芪两种药材进行了鉴别，并用分光光度法对硫酸亚铁（FeSO₄·7H₂O）进行了含量测定。结果:本法稳定性、重现性、回收率、精密度均较理想，测定结果准确。结论:本法能有效控制健脾补血口服液的质量。     

Carb/NH2-SPE-GC-MS法快速监测飞龙掌血中4大类农药残留

 目的 建立一种Carb/NH₂-SPE-GC-MS方法快速监测飞龙掌血根皮中4大类40种农药残留。方法 采用Carb/NH₂固相萃取小柱同时处理4类农药样品,采用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)进行40种农药残留痕量测定。结果 Carb/NH₂-SPE-GC-MS法与《中国药典》收录的农药残留前处理方法比较,都不具有统计学差异(P>0.05),在处理飞龙掌血多种农药残留时更为简便可行。4大类40种农药在10～200 ng·mL^-1内线性关系良好(r>0.998 2),检测限LODs均在2.5 ng·mL^-1左右,40种农药的精密度、稳定性和加样回收率基本满足方法学考察要求。结论 本实验建立的Carb/NH₂-SPE-GC-MS方法操作简单、快速、灵敏度高,能够对飞龙掌血药材中多组分农药残留进行准确的定性和定量分析。     

反相高效液相色谱法测定血浆中文拉法辛浓度

 目的：建立高效液相色谱法检测人血浆中文拉法辛浓度。方法：血浆样品经石油醚-乙醚（2∶1）提取后，有机相再用50 mmol·L^-1盐酸反萃取并浓缩进样。色谱柱为氰基柱（250×4.6 mm，5 μm），乙腈-0.1 mol·L^-1NH₄H₂PO₄ (25∶75) 为流动相，UV检测波长229 nm。结果：文拉法辛血浆最低检测浓度10 μg·L^-1，线性范围25～800 μg·L^-1，萃取回收率75.5%～79.3%，加样回收率97.4%～101.2%, 日内RSD 4.87%～6.39%，日间RSD 7.55%～10.80%。结论：该法准确可靠，已用于临床患者文拉法辛血药浓度测定。     

回心草对脐静脉内皮细胞的保护作用及对分泌一氧化氮和一氧化氮合酶的影响

目的:研究回心草水提取液及其含药血清对人脐静脉内皮活细胞数、内皮细胞一氧化氮(NO)及一氧化氮合酶(NO合酶)的影响,探讨回心草抗动脉硬化的药理作用机制。方法:采用H₂O₂建立体外培养的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)损伤模型。采用MTT法测定回心草提液对H₂O₂损伤的内皮细胞的吸光度(OD);采用经典Griess Reagent检测各剂量组细胞上清液中NO浓度,采用一氧化氮荧光检测探针DAF-FMDA(3-amino,4-aminomethyl-2′,7′-difluorescein,diacetate)检测细胞内NOS的活性。结果:H₂O₂12.5mmol·L^-1为最合适的细胞刺激浓度;回心草药液与H2O2损伤的血管内皮细胞共同孵育24h后,2.50mg·mL^-1、3.33mg·mL^-1浓度组与模型组比较有显著差异(P<0.05,P<0.01);回心草水提液作用于内皮细胞,进行NO,NOS含量的测定,其中回心草2.50mg·mL^-1剂量组有显著作用(P<0.05)。结论:12.5mmol·L^-1的H₂O₂作用24h,可成功建立内皮细胞氧化应激损伤模型;回心草水提液直接作用于H₂O₂损伤的内皮细胞,2.50,3.33mg·mL^-1两个浓度组可以减轻内皮细胞的损伤;回心草2.50mg·mL^-1可增加NOS活性,促进NO的分泌。     

杠柳细胞悬浮培养体系中蔗糖浓度与氮源的考察

 目的 考察MS培养基中蔗糖浓度和氨态氮与硝态氮的比例（NH⁺₄∶NO^-₃以及初始总氮量对杠柳悬浮细胞生长和杠柳毒苷与4-甲氧基水杨醛积累的影响。方法 以3%蔗糖浓度为对照,设置1%、2%、4%、5%浓度梯度;设置NH⁺₄-NO^-₃分别为0∶1、1∶0、2∶1、1∶1、1∶2共5个处理;总氮含量以MS基本培养基（总氮含量60 mmol·L^-1为对照,实验组总氮含量分别为对照组的1/4、1/2和2倍。结果 4%的蔗糖最有利于杠柳细胞生长,5%的蔗糖有助于杠柳毒苷的合成,3%的蔗糖有利于4-甲氧基水杨醛的合成,4%的蔗糖最有利于杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛产量的提高。NH⁺₄-NO^-₃ 为1∶2有助于细胞生长和杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛的合成。总氮含量为N（60 mmol·L^-1时细胞生长最好;总氮含量为1/2N（30 mmol·L^-1时杠柳毒苷和4-甲氧基水杨醛含量最高,且产量也最高。结论 蔗糖浓度、氮源中氨态氮与硝态氮比例以及总氮含量的改变均可显著影响杠柳细胞生长和杠柳毒苷与4-甲氧基水杨醛的积累。     

反相高效液相色谱法测定骆驼蓬总碱片中去氢骆驼蓬碱和骆驼蓬碱的含量

 目的：建立RP-HPLC法测定骆驼蓬总生物碱片中去氢骆驼蓬碱和骆驼蓬碱含量的方法。方法：以甲醇-0.01 mol·L-1硫酸铵溶液-二乙铵(60∶40∶0.4,用磷酸调pH至(3.8±0.1)为流动相，进样量20 μl，分别在320，372 nm处用RP-HPLC法测定去氢骆驼蓬碱和骆驼蓬碱的含量。结果：去氢骆驼蓬碱和骆驼蓬碱分别在浓度为2～25 μg·ml-1的范围内与峰面积成良好的线性关系。方法的回收率分别为(101.8±1.8)%和(101.3±1.4)%。结论：该法简便，准确，可靠。     

桃叶鸦葱鞣质的提取及体外抗氧化作用

目的:测定桃叶鸦葱根及地上部分中鞣质的含量,考察鞣质抗氧化活性.方法:采用正交设计优化鞣质提取工艺,采用络合滴定法测定鞣质含量.采用碘量法测定0.01～0.05 g·mL-1鞣质对过氧化氢(H2O2)的作用,采用分光光度法测定其对羟自由基(·OH)的作用.结果:桃叶鸦葱根及地上部分中鞣质含量分别为8.18％和9.27％.桃叶鸦葱鞣质的体外抗氧化具一定的剂量依赖性,质量浓度为0.05 g·mL-1时对H202及·OH的平均清除率分别达到8.89％,88.24％.结论:桃叶鸦葱鞣质有一定抗氧化作用.     

RP-HPLC测定硝酸益康唑不同给药途径的血药浓度

 目的采用RP-HPLC测定硝酸益康唑口服和阴道给药后比格犬不同时刻体内的血药浓度。方法采用RP-HPLC以乙腈-0.05 mol·L^-1磷酸二氢铵溶液(70∶44)为流动相,ODS色谱柱(4.6 mm×200 mm,5μm),紫外检测波长为230 nm。结果硝酸益康唑在0.04～20 mg·L^-1内呈良好线性关系(r=0.998 3)。结论本分析方法简单,结果准确。     

半夏刺激性成分的研究

目的:研究半夏的刺激性成分。方法:采用溶剂提取法,X衍射,电镜扫描,氧化还原滴定,紫外分光光度法等。结果:各种实验表明半夏中含有的草酸钙针晶为半夏的刺激性成分之一,其晶形、含量与半夏的刺激性有关。经炮制后,晶形发生变化,含量急剧下降,刺激性明显减弱。结论:半夏中所含的草酸钙针晶为半夏的刺激性成分之一。     

H2O2对远志愈伤组织中总酚总黄酮含量及相关酶活性的影响

目的:研究远志愈伤组织在加有不同浓度H_2O_2的MS培养基上总酚总黄酮含量变化及抗氧化酶活性变化,从细胞水平探讨其适应H_2O_2环境胁迫的生理机制。方法:以远志愈伤组织为实验材料,H_2O_2浓度设置为0,5,10,15,20 mmol·L~(-1)5个梯度加至MS培养基中,分别在培养5,10,15,20,25 d后取样测定愈伤组织总酚、总黄酮含量及抗氧化酶活性。结果:H_2O_2浓度在5 mmol·L~(-1)下远志愈伤组织15 d时总酚、总黄酮含量最高。当远志愈伤组织培养5 d,外源H_2O_2浓度为5 mmol·L~(-1)时的超氧化物歧化酶(SOD)活性最高。培养25 d,外源H_2O_2浓度为5 mmol·L~(-1)时的过氧化物酶(POD)活性最高。培养25 d,外源H_2O_2浓度为15 mmol·L~(-1)时的过氧化氢酶(CAT)活性最高。结论:远志愈伤组织具有适应一定浓度H_2O_2环境胁迫的能力,在其受到H_2O_2环境胁迫时,远志愈伤组织能通过调节自身的次生代谢物、保护酶系统来缓解带来的伤害。对次生代谢物总酚、总黄酮的含量在5～10 mmol·L~(-1)时有显著促进作用;在5 d,外源H_2O_2浓度为5 mmol·L~(-1)时可显著提高SOD活性;在25 d,外源H_2O_2浓度为5 mmol·L~(-1)时可显著提高POD活性;在25 d,外源H_2O_2浓度为15 mmol·L~(-1)时可显著提高CAT活性。     

麻杏石甘汤对枸橼酸致豚鼠咳嗽的影响

目的:探讨麻杏石甘汤防治枸橼酸所致豚鼠咳嗽的作用及初步机制。方法:豚鼠随机分成正常组、模型组、可待因组、麻杏石甘汤低、中、高剂量组(2.3,6.5,14.6 g.kg-1),分别连续ig给药7 d,最后1次给药后1 h,采用枸椽酸致豚鼠咳嗽模型,以生物信息采集系统记录咳嗽信号、录音和人工计数等方法统计咳嗽次数和咳嗽潜伏期,对支气管进行病理切片观察,并检测血清过氧化氢酶活力和过氧化氢的含量。结果:模型组咳嗽次数为(53.6±10.7)次,支气管组织有炎性细胞浸润现象,血清过氧化氢含量增加(71.3±18.8)mol.L-1。而麻杏石甘汤高、中、低剂量组均能明显降低枸橼酸所致咳嗽次数,分别为(30.9±9.9),(39.8±8.6),(36.4±2.8)次(P<0.05),减少支气管黏膜下层细胞炎性细胞浸润,降低血清中过氧化氢含量,分别为(60.6±7.3),(44.7±10.1),(33.8±7.5)mol.L-1(P<0.05),但只有高剂量组才延长咳嗽潜伏期(P<0.05)。结论:麻杏石甘汤能防治枸橼酸所致豚鼠咳嗽,引起过氧化氢的改变可能是其作用机制之一。     

豚鼠肺膜LTD4受体结合特征及二苯乙烯低聚体(Gn-3)的LTD4受体拮抗作用

 目的 采用LTD₄放射受体结合实验方法,在分析LTD₄受体的有关特征的基础上,观察比较二苯乙烯低聚体(Gn-3)对LTD₄受体的拮抗作用。方法 以豚鼠肺膜为实验材料,采用³H-LTD₄为放射配体,以FPL₅₅₇₁₂作阳性对照药物,Gn-3为实验药物,进行药物竞争结合实验。采用离体器官生物检测法鉴定Gn-3对LTD₄受体的拮抗作用。结果³H-LTD₄与其相应受体呈现单一结合位点,其Kd和B_max值分别为19.9×10^-11mol·L^-1和232.9 fmol·mg^-1蛋白。Gn-3可明显取代³H-LTD₄与其受体结合,IC₅₀值为5.71×10^-7 mol·L^-1,Ki值为2.54×10^-7 mol·L^-1。生物学鉴定法证实Gn-3可抑制LTD-4引起的生物学效应。结论 豚鼠肺膜LTD₄受体为单一结合位点受体,Gn-3为高活性的LTD4受体拮抗剂。     

天南星(虎掌南星)炮制工艺改进研究

采用《药典》规定的天南星质量鉴别标准,并结合对小鼠的毒性反应为指标,优选出消除天南星毒副作用最佳辅料为白矾。通过比较提出了两种炮制合理的新工艺。中试证明新工艺用于大生产是可行的。