野生型P53和C-Ha-ras基因在顺铂诱导膀胱癌细胞凋亡中的表达及意义

应用荧光原位杂交技术观察顺铂诱导膀胱癌细胞株ＢＩＵ８７体外细胞凋亡过程中野生型Ｐ５３和ＣＨａｒａｓ基因的表达，探讨抗癌药物诱导膀胱癌细胞凋亡过程中抗癌基因和癌基因的作用。结果显示：顺铂能够明显地诱导膀胱癌细胞凋亡，具有一定范围内的作用时间和药物浓度的依赖性。随凋亡细胞数上升，野生型Ｐ５３表达增强，而ＣＨａｒａｓ基因表达下降，提示膀胱癌细胞凋亡可能是顺铂的杀瘤效应途径之一。Ｐ５３和ＣＨａｒａｓ基因均参与了细胞凋亡的调控过程，野生型Ｐ５３基因可能是通过下调ＣＨａｒａｓ基因的表达而发挥其抑制细胞增殖活性，促进凋亡的发生。     

转Fas基因对膀胱癌细胞的作用

目的　探讨Fas基因转染对膀胱癌细胞的作用。　方法　将人FascDNA通过脂质体导入膀胱癌细胞EJ中 ,并利用Northernblot、原位杂交、流式细胞术检测细胞的FasmRNA和分子表达。用流式细胞仪、DNA梯形带和MTT法分析顺铂对转染前后的EJ细胞抑制增殖和诱导凋亡的能力。　结果　Fas基因转染可明显增强膀胱癌细胞EJ的Fas表达 ,顺铂对转染后的EJ细胞抑制细胞增殖和诱导凋亡的能力明显增强。　结论　转染的Fas基因可显著上调膀胱癌细胞EJ的Fas表达 ,促进细胞凋亡 ,联合应用Fas基因转染和顺铂可获得协同的细胞毒作用     

野生型P53和C—Ha—ras基因在顺铂诱导膀胱癌细胞凋亡中的表及意义

应用荧光原位杂交技术观察顺铂诱导膀胱癌细胞株ＢＩＵ－８７体外细胞凋亡过程中野生型Ｐ５３和Ｃ－Ｈａ－ｒｓ基因的表达，探讨抗癌诱导膀胱癌细胞凋亡过程 抗癌基因和癌基因的作用。结果显示：顺铂能吸显地诱导膀胱细胞凋亡，具有一定范围内的作用时间和药物浓度的依赖性。     

藤黄酸联合顺铂对人骨肉瘤细胞作用的实验研究

[目的]本实验主要研究藤黄酸(gambogic acid,GA)在骨肉瘤中的抗肿瘤作用,检验藤黄酸与传统的骨肉瘤化疗药物顺铂(cisplatin,CDDP)联用是否具有协同作用,探讨其作用的机制。[方法]采用CCK-8法测定不同浓度藤黄酸、顺铂单用及联合应用对人骨肉瘤细胞MG-63的增殖抑制作用,PI染色流式细胞术检测细胞周期变化,Annexin V-FITC/PI双染色检测细胞凋亡变化。[结果]藤黄酸对MG-63具有明显生长抑制作用,且具有浓度依赖性,IC 25为0.52μg/ml,藤黄酸诱导MG-63细胞产生G2/M期细胞周期阻滞和凋亡,而顺铂则诱导产生G0/G1期细胞周期阻滞和凋亡。藤黄酸与顺铂联用时增殖抑制及诱导凋亡作用比单用时明显增强。[结论]藤黄酸通过诱导MG-63细胞周期阻滞和凋亡产生抗人骨肉瘤细胞增殖作用,藤黄酸与顺铂联用具有协同作用。     

顺铂杀伤原代胃癌细胞的体内外实验研究

目的 评价顺铂对原代胃癌细胞的体内外杀伤效应。方法 采用纯化的人体新鲜胃癌细胞，用台盼蓝梁色法和四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）法检测经顺铂作用后细胞活力及代谢活性的变化；另用末端脱氧核苷酸转移酶法（ＴｄＴ法）和正常免疫小鼠肾包膜下种植法（ＳＲＣ法）分别检测顺铂体外促凋亡效应及体内抑瘤率，结果 经顺铂作用后，肿瘤细胞出现明显的形态学改变和代谢活性的下降；不同个体肿瘤细胞对顺铂敏感性不同，低分化胃癌细胞较高分化更敏感（４０．２５％比３４．２６％）；１０倍血药深度下喘铂对肿瘤细胞的抑制率高于单倍浓度（４０．１０％比３８．４５％），经顺铂作用后，原代胃癌细胞凋亡率增加，不３２．１２％，顺铂还能明显抑制体内移植瘤的生长。结论 顺铂可能通过包括诱导调亡在内的多种途径伤原代胃癌细胞，尤对低分化显示了明显的肿瘤杀伤效应。     

抗癌药物诱导人膀胱癌BIU—87和E—J细胞凋亡的作用

应用分子生物学方法，观察了丝裂霉素、喜树碱、顺铂和阿霉素对膀胱癌细胞系ＢＩＵ８７和ＥＪ体外生长和生存的影响，对抗癌药物诱导膀胱癌细胞凋亡作用进行了研究。结果：四种抗癌药均能在不同程度上抑制膀胱癌细胞生长，诱导膀胱癌细胞凋亡的能力与其生长抑制效应成正比。细胞形态学和ＤＮＡ分析显示喜树碱、顺铂处理的ＢＩＵ８７和丝裂霉素、阿霉素处理的ＥＪ细胞呈现典型的凋亡现象。揭示药物的抑癌作用是通过诱导肿瘤细胞凋亡实现的，它可能是抑制肿瘤生长的机理之一。不同膀胱癌细胞系对药物诱导凋亡的敏感性存在着差异。细胞凋亡现象为肿瘤化疗提供了新的领域。     

顺铂杀伤原代胃癌细胞的体内外实验研究

目的 评价顺铂对原代胃癌细胞的体内外杀伤效应。方法 采用纯化后的人体新鲜胃癌细胞,用台盼蓝染色法和四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法检测经顺铂作用后细胞活力及代谢活性的变化;另用末端脱氧核苷酸转移酶法 (TdT法 )和正常免疫小鼠肾包膜下种植法 (SRC法 )分别检测顺铂体外促凋亡效应及体内抑瘤率。结果 经顺铂作用后,肿瘤细胞出现明显的形态学改变和代谢活性的下降;不同个体肿瘤细胞对顺铂敏感性不同,低分化胃癌细胞较高分化者更敏感（ 40.25％比 34.26％）; 10倍血药浓度下顺铂对肿瘤细胞的抑制率高于单倍浓度（ 40.10％比 38.45％）。 经顺铂作用后,原代胃癌细胞凋亡率增加,为 32.12％。顺铂还能明显抑制体内移植瘤的生长。结论 顺铂可能通过包括诱导凋亡在内的多种途径杀伤原代胃癌细胞,尤对低分化者显示了明显的肿瘤杀伤效应。     

咖啡因、顺铂诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的 研究咖啡因，顺铂诱导骨肉瘤细胞株（OS-732）细胞凋亡的作用。探讨咖啡因在骨肉瘤顺铂化疗中增效作用的机制。方法 骨肉瘤细胞株（OS-732）经单纯细胞培养，与咖啡因，顺铂，咖啡因和顺铂联合作用各72h后，分别采用流式细胞仪（FCM）分析细胞凋亡比例，通过细胞内Rh123荧光强度的测定分析线粒体跨膜电位△ψm的变化，并应用电子显微镜观察细胞凋亡的形态变化。结果 骨肉瘤细胞株（OS-732）分别经单纯培养72h,与5.0mmol/L的咖啡因作用72h，与10.0μg/ml的顺铂作用72h，与咖啡因（5.0mmol/L）与顺铂（10.0μg/ml）共同作用72h后，FCM分析显示细胞凋亡比例分别为2.50%,10.62%,31.62%,57.44% ;后三者导致线粒体跨膜电位△ψm明显下降，分别为26.45% ,17.82%,38.26%。透射电镜观察显示典型的细胞凋亡特征性变化；细胞皱缩，胞膜结构保持完整，胞浆空泡化明显，胞核固缩，染色质浓缩并边缘化。表现为新月形胞核。结论 咖啡因，顺铂均可诱导骨肉瘤细胞凋亡，咖啡因和顺铂联合使用，可使诱导细胞凋亡的作用明显增强。咖啡因诱导骨肉瘤细胞凋亡可能是咖啡因在骨肉瘤顺铂化疗中增效作用的潜在机制之一。     

TRAIL基因与顺铂协同诱导横纹肌肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的 探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因(TRAIL)和顺铂联合应用对人RD胚胎型横纹肌肉瘤细胞的生长抑制和凋亡的诱导作用。方法 将重组腺病毒载体(Ad)介导的TRAIL基因作用于人RD胚胎型横纹肌肉瘤细胞，通过电镜、MTT比色法、RT-PCR及流式细胞仪方法，观察和分析其对RD胚胎型横纹肌肉瘤细胞作用的效果，并与联合应用顺铂的效果进行对比，分析其作用机制。结果MTY法显示顺铂浓度为1．0μg／ml、5．0μg／ml和10．0μg／ml对RD细胞生长的抑制率分别为9．8％、23．4％和43．8％；按MOI值1000转染腺病毒Ad／GT-TRAIL对RD细胞生长的抑制率为41．2％，再联合Ad/PGK-GV16后，生长抑制率上升到52．5％；Ad／GT-TRAIL联合Ad／PGK-GV16再加用顺铂后的生长抑制率为72．7％。顺铂作用3d后的凋亡率为7．41％；Ad／GT-TRAIL联合Ad／PGK-GV16作用3d后的凋亡率为12．95％；Ad／GT-TRAIL联合Ad／PGK-GV16再加用顺铂作用3d后的凋亡率为23．24％，而1640对照组的凋亡率为2．19％。顺铂作用后，细胞的cFLIP mRNA表达下调，与细胞凋亡增加的改变相一致。结论 Ad／GT-TRAIL能有效诱导横纹肌肉瘤细胞的凋亡，从而抑制横纹肌肉瘤细胞的生长，联合应用顺铂后能显著提高疗效。     

紫杉醇及其联合化疗对表浅性膀胱癌化疗敏感性的实验研究

目的探讨紫杉醇及其联合化疗对表浅性膀胱癌的应用前景。方法自１９９５年７月～１９９７年１０月采用肿瘤细胞原代培养技术和ＭＴＴ比色法测定了３０例不同个体膀胱癌细胞及膀胱癌ＥＪ细胞系的化疗敏感性。结果紫杉醇对不同个体的膀胱癌细胞的总敏感率为１６．７％,阿霉素和丝裂霉素分别为１６．７％和２６．７％,三者间差异无显著性,但优于顺铂和噻口替哌;紫杉醇与顺铂或丝裂霉素联合后的协同性最佳,总敏感率均为８３．３％;膀胱癌细胞系的抑制率与不同个体膀胱癌细胞对相同化疗方案的抑制率差异很大。结论紫杉醇联合顺铂或丝裂霉素是可选择的灌注治疗方案;临床上应针对不同病人选择最敏感化疗方案;膀胱癌细胞系的化疗药物敏感性不能代表不同个体膀胱癌细胞的敏感性。     

p53重组腺病毒联合顺铂或三氧化二砷对人膀胱癌EJ细胞的作用

目的：探讨p53重组腺病毒（Ad-p53）与顺铂（CDDP）或三氧化二砷（As2O3）联合应用提高膀胱癌疗效的可能性及其机制。方法：将Ad-p53[100感染强度（MOI）]与CDDP（0．5mg/L)或As2O3(2.0μmol/L）联合应用，通过细胞生长抑制实验、克隆形成实验、细胞周期分析、免疫组织化学分析以及裸鼠皮下移植瘤模型，观察其对膀胱癌EJ细胞的作用及机制。结果：与单独应用相比，Ad-p53与低剂量的CDDP或As2O3联合可明显抑制EJ细胞体外生长，诱导EJ细胞凋亡，EJ细胞G2／M期阻滞更明显；裸鼠体内肿瘤发生时间延迟，4周后肿瘤体积与单独应用时相比，差异有显著性（P＜0．05）。结论：基因治疗与化疗联合应用，可进一步提高膀胱癌的疗效。     

p16重组腺病毒联合顺铂或三氧化二砷对人膀胱癌EJ细胞作用的实验研究

目的　探讨 p16重组腺病毒 (Ad p16 )与顺铂 (CDDP)或三氧化二砷 (As2 O3 )联合应用对人膀胱癌EJ细胞体内外生长的抑制效应及机制。　方法　将Ad p16与CDDP或As2 O3 联合应用 ,通过细胞生长抑制实验 ,克隆形成实验 ,细胞周期分析 ,免疫组织化学分析 ,以及裸鼠皮下移植瘤模型 ,观察其对人膀胱癌EJ细胞的作用及机制。　结果　与单独应用相比 ,Ad p16与低剂量的CDDP或As2 O3 联合应用可明显抑制EJ细胞的体外生长 ,诱导EJ细胞凋亡 ,明显阻滞EJ细胞G1期 ;裸鼠体内肿瘤发生时间延迟 ,4周后肿瘤体积与单独应用时相比差别有显著性意义 (P <0 .0 5 )。　结论　Ad p16与CDDP或As2 O3 联合应用 ,有可能进一步提高膀胱癌的治疗效果     

抑制polo-like kinase-1基因表达对5-氟脲嘧啶及顺铂体外诱导胃癌细胞凋亡的影响

目的观察抑制polo-like kinase-1(Plk-1)基因对5-氟脲嘧啶(5-Fu)及顺铂(CDDP)体外诱导胃癌细胞株-MKN45凋亡的影响。方法小片断干扰RNA(siRNA)阻断MKN45细胞Plk-1 基因的表达;定量PCR及Western blot检测Plk-1表达的变化;MTT法检测MKN45细胞增殖速率;流式细胞仪检测MKN45细胞凋亡率。结果经靶向Plk-1的siRNA作用24 h、48 h及72 h后,Plk-1 mRNA水平分别下降了51．91％、89．45％、91．03％,蛋白水平在48 h及72 h分别降低了38．43％和 60．66％;联合应用5-Fu、CDDP与靶向Plk-1 siRNA组的MKN45细胞增殖速率较单用5-Fu、CDDP或靶向Plk-1 siRNA组明显减慢(P<0．05);在48 h及72 h细胞凋亡率明显上升(P<0．05)。结论 Plk-1基因表达抑制在体外可增强5-Fu及CDDP对MKN45细胞的凋亡诱导作用;联合应用靶向Plk-1 的siRNA有可能提高5-Fu及CDDP对胃癌细胞杀伤作用。     

Two hour exposure to sodium butyrate sensitizes bladder cancer to anticancer drugs

Objectives:   To investigate the inhibitory effect of sodium butyrate (NaB) on the proliferation of human bladder cancer cell lines and its synergetic effect with anticancer drugs in treating bladder cancer in vitro and in vivo .
Methods:   The inhibitory effects of NaB on human bladder cancer cell lines in vitro and the synergetic effect of NaB with mitomycin c, cisplatin (CDDP) and adriamycin were detected by the 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide assay. Hoechst staining and electron microscopy were used to observe morphology for apoptotic cells after NaB treatment. Fas, bcl-2 and caspase-3 were determined with flow cytometry. In vivo synergetic effects were detected in N-methyl-N-nitrosourea induced bladder cancer model rats.
Results:   NaB significantly inhibited the growth of bladder cancer cell lines in a concentration and time dependent manner. Better results of tumor inhibition have been achieved when NaB was combined with CDDP, mitomycin c and adriamycin, rather than used alone. Furthermore, 2 h exposure to NaB can sensitize bladder cancer to chemotherapy agents. The Bcl-2 expression in bladder cancer cells is decreased and caspase-3 expression increased after NaB treatment. Intravesical application of NaB combined with CDDP can significantly inhibit tumor growth and progression.
Conclusions:   NaB has a direct anticancer effect and can markedly enhance the action of several chemotherapy agents. 2 h expose to NaB can also sensitize bladder cancer to anticancer drugs. NaB may be an excellent candidate agent for intravesical application in treating bladder cancer.     

腺病毒介导LRIG1过表达联合顺铂对膀胱癌细胞株EJ的抑制作用

目的 观察腺病毒介导的LRIG1过表达是否能增强顺铂对膀胱癌细胞株EJ的损伤作用.方法 构建重组腺病毒载体包装pLRIG1-GFP质粒,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法鉴定其是否能在膀胱癌细胞株EJ中上调LRIG1表达,并下调表皮生长因子(EGFR)的表达水平.通过采用单细胞凝胶电泳实验、流式细胞技术、免疫细胞化学染色及Matrigel侵袭实验,对比对照组、顺铂单药组、顺铂联合腺病毒载体组和顺铂联合腺病毒介导的LRIG1过表达组间细胞DNA损伤,细胞凋亡、增殖及侵袭能力.结果与对照组比较,顺铂在联合腺病毒介导的LRIG1过表达后,能下调细胞EGFR表达水平,同时显著增强肿瘤细胞DNA损伤程度(OTM值,对照组:2.54±0.54;CDDP组:4.57±0.79;CDDP/Ad-GFP组:5.38±1.16;CDDP/Ad-LRIG1组:9.45±2.64);引起细胞周期抑制[S期抑制,对照组:(40.82±2.11)%;CDDP组:(37.31±1.12)%,CDDP/Ad-GFP组:(37.57±2.52)%,CDDP/Ad-LRIG1组:(55.04±4.28)%];诱导细胞凋亡[细胞凋亡率,对照组:(2.63±2.49)%,CDDP组(3.49±1.94)%,CDDP/Ad-GFP组:(3.96±4.68)%,CDDP/Ad-LRIG1组:(12.56±0.77)%];抑制细胞增殖[细胞计数,对照组:(371.33±16.17)个;CDDP组:(224.67±88.06)个;CDDP/Ad-GFP组:(176.33±69.79)个;CDDP/Ad-LRIG1组:(138.33±8.39)个]并逆转细胞侵袭性[细胞侵袭数量,对照组:(259.40±9.21)个;CDDP组:(175.00±25.78)个;CDDP/Ad-GFP组:(157.20±22.79)个;CDDP/Ad-LRIG1组:(114.20±25.11)个].结论 腺病毒介导LRIG1过表达能增强顺铂对膀胱肿瘤细胞株EJ的损伤作用.     

喜树碱诱导人膀胱癌细胞RT4和MGH凋亡的实验研究

目的 研究DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂喜树碱(CPT)诱导人膀胱癌细胞凋亡的作用。方法 体外培养的膀胱癌RT4和MGH细胞用CFr处理，用FACScan流式细胞仪分析细胞凋亡的发生及变化，用Western blotting的方法检测了CFT处理不同时间段，bcl-2与bax表达的变化，以及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和多聚腺苷二磷酸核糖聚合物酶(PARP)的活性的改变。结果 CPT处理膀胱癌细胞24h后，细胞凋亡率明显上升，且CPT诱导的凋亡呈时间依赖性和剂量依赖性。CFT诱导膀胱癌细胞RT4和MGH后均未见bcl-2和bax表达水平的改变，但是可以观察到凋亡执行蛋白Caspase-3和PARP的激活。结论 CPT能够诱导膀胱癌细胞RT4和MGH发生凋亡，其抑制膀胱癌细胞的作用可能与肿瘤细胞发生凋亡有关。     

MK2206 potentiates cisplatin-induced cytotoxicity and apoptosis through an interaction of inactivated Akt signaling pathway

ObjectivesTo improve conventional chemotherapeutic efficacy, it is important to detect new molecular markers for chemosensitivity and possible accelerating cell-killing mechanisms. In this study, we investigated how MK2206, an allosteric Akt inhibitor, enhances the cisplatin (CDDP)-induced cytotoxicity and apoptosis in urothelial cancer cells.Materials and methodsWe examined bladder cancer cell lines for the expression of phospho(p)-Akt and its downstream targets by Western blot. The potential antitumor effects were analyzed by MTT assay in vitro and by subcutaneous xenograft models in vivo. The cell invasion was examined by transwell invasion assay, and the activities of the Akt signaling pathway and expression of apoptosis-related proteins were measured by Western blot.ResultsThe expression of p-Akt and its downstream targets was increased in invasive bladder cancer cell lines vs. in noninvasive bladder cancer cell lines. MK2206 (500 nM) inhibited cell invasion in UMUC3 cell line and significantly increased the susceptibility of bladder cancer cell lines to CDDP. When used in combination with CDDP, MK2206 (500 nM) enhanced CDDP-induced cytotoxicity and apoptosis, with suppressed expression of p-Akt and its downstream targets. In vivo MK2206 combined with CDDP effectively suppressed tumor growth in subcutaneous xenograft models.ConclusionsThese results suggest that concomitant use of MK2206 could promote the CDDP-induced cytotoxicity and apoptosis in urothelial cancer cell lines through the inhibited expression of the Akt pathway. This combined treatment may provide a new therapeutic option to enhance chemosensitivity in bladder cancer.     

天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶活化在喜树碱诱导膀胱癌细胞凋亡中的作用

目的：探讨天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)活化,在DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂喜树碱(CPT)诱导人膀胱癌细胞凋亡中的作用。方法：将体外培养的膀胱癌RT4和MGH细胞用CPT处理,用流式细胞仪检测处理前及处理后24、36、48h等不同时段细胞凋亡的变化,用蛋白免疫印迹方法检测CPT处理后不同时间段caspase-9和caspase-3活性的改变。结果：CPT处理膀胱RT4和MGH细胞后,细胞凋亡率明显上升,且CPT诱导的膀胱癌凋亡呈时间依赖性和剂量依赖性。同时还可以观察到凋亡执行蛋白caspase-9和caspase-3的活化。结论：CPT能够诱导膀胱癌细胞RT4和MGH发生凋亡．其中caspase-9启动的凋亡内源性途径即线粒体途径可能参与了CPT诱导的膀胱癌细胞的凋亡。     

环孢素对大鼠膀胱肿瘤细胞增殖、凋亡和新生血管形成的影响

目的 探讨环孢素对N-丁基-N-(4-羟丁基)亚硝胺(BBN)诱导的大鼠膀胱肿瘤细胞增殖、凋亡及肿瘤新生血管形成的影响.方法实验组大鼠10只在用BBN诱导膀胱肿瘤的同时用环孢素进行药物干预,对照组大鼠10只仅用BBN诱导膀胱肿瘤.取2组大鼠膀胱标本免疫组化方法检测肿瘤增殖细胞核抗原(PCNA)表达情况,计算肿瘤细胞增殖指数;TUNEL方法检测肿瘤细胞凋亡情况,计算肿瘤细胞凋亡指数;免疫组化方法检测肿瘤CD31表达情况,计算肿瘤微血管密度(MVD).结果 实验组和对照组肿瘤细胞增殖指数分别为(35.3±8.6)%和(28.7±8.0)%,P＜0.05;凋亡指数分别为(2.5±0.8)%和(4.3±1.3)%,P＜0.05;微血管密度分别为32.5±8.2和26.3±8.1,P＜0.05.结论 环孢素可能通过影响肿瘤细胞增殖、凋亡和肿瘤新生血管形成等机制对膀胱肿瘤生长产生促进作用.