Rho GTP酶信号在胶质瘤细胞侵袭进程中的作用研究进展

<正>胶质瘤是最常见的原发性脑肿瘤,约占脑肿瘤的40%~50%。近十年来,人们对胶质瘤的研究,特别是分子水平研究有了较多的发现,然而,采用积极的外科手术,辅以放疗,以及以烷化剂替莫唑胺(temozolomide,TMZ)为代表的治疗方法,患者5年存活率却没有显著提高。特别是恶性胶质母细胞瘤(glioblastoma,GB),平均生存时间还不超过1年,究其原因是这些治疗方法虽然在很大程度上抑制了肿     

Rho GTP酶通过树突棘介导阿尔茨海默病认知功能障碍的研究进展

<正>阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease, AD)是一种进行性神经系统退行性疾病,其临床表现为记忆、注意等认知功能障碍和行为改变[1],AD是最常见的老年痴呆类型。随着人口老龄化的深化,AD发病率不断增加,给人们的生活和社会运转造成了严重负担[2]。目前AD尚无治愈方法,公认的治疗方法包括胆碱酯酶抑制剂和N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂的应用,但这些药物均局限于缓解症状[3]。     

肌球蛋白轻链激酶和肌球蛋白轻链9基因在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的研究肌球蛋白轻链激酶（MYLK）及肌球蛋白轻链9（MYL9）在非小细胞肺癌（NSCLC）的表达情况及其与NSCLC临床特征的关系。方法采用荧光定量PCR方法检测60例NSCLC组织、癌旁组织和60例正常肺组织中MYLK mRNA和MYL9 mRNA的表达情况,并分析癌组织MYLK mRNA及MYL9 mRNA表达值与临床分期的相关性。结果 MYLK mRNA、MYL9 mRNA在癌组织中的表达量明显低于癌旁组织及正常肺组织（P均〈0.05）,癌旁组织和正常肺组织中MYLK mRNA、MYL9 mRNA表达量无统计学差异（P均〉0.05）。在癌症患者中,淋巴结转移组MYLK mRNA及MYL9 mRNA的相对表达量比无淋巴结转移组高（P〈0.05）。腺癌组织与鳞癌组织MYLK mRNA及MYL9 mRNA的相对表达量无统计学差异（P〈0.05）。MYLK mRNA与MYL9 mRNA的表达呈正相关（P〈0.001）,MYLK mRNA及MYL9 mRNA表达与肿瘤临床分期呈正相关（P〈0.05）。结论 NSCLC组织中MYLK mRNA和MYL9 mRNA表达均明显低于癌旁组织及正常组织,MYLK mRNA及MYL9 mRNA的表达与临床分期呈正相关。     

机械应力相关调控蛋白在小鼠磨牙发育中的时空表达

  目的  通过检测机械应力相关调控蛋白〔肌动蛋白纤维（F-actin）、非肌肉肌球蛋白ⅡB（non-muscle myosin ⅡB,NMⅡB）和细胞黏着斑蛋白Vinculin〕在牙发育过程的时空性表达,探究机械应力与牙早期发育之间可能的联系。  方法  以小鼠磨牙为研究模型,通过免疫荧光染色,检测构成化学机械系统的重要分子F-actin、NMⅡB和Vinculin在牙发育蕾状期、帽状期、钟状早期和钟状末期的表达。  结果  染色结果显示F-actin、NMⅡB和Vinculin均在牙发育各阶段广泛或局限性表达于牙上皮,其中F-actin亦稳定表达于间充质细胞中。荧光表达强度定量分析显示,F-actin和NMⅡB的表达均在牙发育早期阶段有明显上升,但分别于钟状早期和钟状末期回落,相邻发育阶段间的表达变化差异均有统计学意义（P<0.05）,而Vinculin的表达相对稳定,仅钟状末期较钟状早期有所升高（P<0.05）。  结论  机械应力参与牙早期发育过程。其中,F-actin可能在分散和传导机械应力的方面发挥重要作用,NMⅡB作用于牙发育中的牙上皮内陷及牙尖形成,Vinculin可响应力学刺激并与细胞黏附分子相互作用影响牙发育过程,而由肌动蛋白与肌球蛋白结合形成的肌动球蛋白复合体和细胞黏附分子在牙发育中的联系及具体作用机制依然有待进一步探究。     

肌球蛋白轻链激酶在烧伤大鼠血清引起的内皮细胞骨架改变过程中的作用

目的 观察烧伤大鼠血清刺激人脐静脉内皮细胞株ECV-304引起的纤维状肌动蛋白在细胞内分布变化的时间效应以及肌球蛋白轻链激酶在其中的作用。方法 用烧伤大鼠血清分别孵育细胞30min、1h、2h、4h和6h。或在烧伤血清作用30min之前或之后使用5μmol／L的ML-7作用30min。使用罗丹明标记的鬼笔环肽探针特异性结合并显示细胞内的纤维状肌动蛋白．并在Nikon TE-300荧光显微镜下观察照相。结果 正常情况下，纤维状肌动蛋白主要分布在内皮细胞内的外周膜部位。使用烧伤大鼠血清进行30min～12h的刺激后，内皮细胞内可观察到明显的应力纤维形成，并且随着刺激时间的延长而增强。可以通过使用肌球蛋白轻链激酶特异性抑制剂ML-7预处理细胞30min来抑制这种效应。此外，ML-7还能够改善烧伤大鼠血清引起的内皮细胞内肌动蛋白重排。结论 本研究表明，大鼠烧伤血清能够通过激活肌球蛋白轻链激酶引起明显的细胞内肌动蛋白排列的改变。在烧伤血清刺激细胞后．抑制肌球蛋白轻链激酶可以改善烧伤大鼠血清引起的内皮细胞骨架重排。     

Rho/ROCK信号通路在阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征大鼠急性缺血性卒中发生中的作用

目的:研究小GTP结合蛋白(Rho)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路在阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)大鼠急性缺血性卒中发生中的作用,为OSAHS后急性缺血性卒中病变的防治提供参考.方法:50只SD大鼠随机分为假手术组、OSAHS组、卒中组、OSAHS后卒中组和Rho抑制剂组(C3转移酶...     

鸡肌球蛋白轻链激酶在大肠杆菌中的表达

目的建立鸡肌球蛋白轻链激酶（ｍｙｏｓｉｎｌｉｇｈｔｃｈａｉｎｋｉｎａｓｅ，ＭＬＣＫ）ｃＤＮＡ表达克隆。方法将ＭＬＣＫ功能区（自动抑制区、钙调蛋白识别区和活性催化区）的ｃＤＮＡ插入质粒ｐＢＫｒｓｖ中，重组质粒（ｐＢＫｒｓｖ－ＭＬＣＫ）转化入大肠杆菌中并获得表达。结果Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹试验表明表达产物的分子量与插入片段ｃＤＮＡ所含信息相一致。结论所获重组克隆在体外表达，表达蛋白具有使多肽底物磷酸化的活性     

Rho/Rho激酶信号通路介导新生大鼠神经元缺氧缺血损伤的作用机制研究

目的：探讨Rho/Rho激酶（ROCK）信号通路在缺氧缺血性脑损伤（HIBD）中的作用,为新生儿HIBD的治疗提供实验依据。方法：以体外培养的新生SD大鼠皮质神经元作为研究对象,观察缺氧复氧（H/R）损伤后神经元突起长度、神经元Rho A和ROCK等蛋白的表达量、神经元细胞骨架等指标。结果：缺氧缺血损伤后神经元突起长度明显缩短（P〈0.05）,法舒地尔处理后神经元长度较H/R组明显延长（P〈0.05）。缺氧缺血损伤后神经元Rho A和ROCKII等蛋白的表达量显著增加（P〈0.05）,法舒地尔干预后蛋白表达呈低水平且35μmol组作用最显著。缺氧缺血损伤后细胞骨架F-actin的表达减少且分布丧失规律性,fasudil干预后可部分逆转细胞骨架的分布且表达量显著增加。结论：缺血缺氧损伤通过激活Rho/ROCK信号通路引起神经元突起回缩、细胞骨架降解进而引起细胞凋亡,抑制Rho/ROCK信号通路则可促进神经元突起延长、细胞骨架重构,从而发挥保护作用。     

肌球蛋白轻链的调节及其对肿瘤细胞增殖、转移的影响

肌球蛋白作为一种超家族蛋白质,是细胞骨架的重要组成部分,通过各种调节因子对其轻链磷酸化和去磷酸化的调节,参与了几乎所有的细胞生理、病理过程,尤其在肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移中发挥重要作用。到目前为止,肿瘤的发生、发展机制还不是十分清晰,对肌球蛋白轻链的调节及其与肿瘤相关性的研究,将有助于阐明肿瘤的发生、发展机制,为肿瘤的靶向治疗提供依据。     

洛伐他汀对乳腺癌细胞Rho GTPases活性及细胞骨架形成的影响

目的 探讨胆固醇合成抑制剂洛伐他汀对MCF-7乳腺癌细胞Rho GTPases活性及细胞骨架形成的影响。方法 采用逆转录-PCR检测Rho、Rac2和RhoGDI mRNA的表达水平,放射自显影方法分析Rho GTPases活性,激光共聚焦和透射电镜观察微丝和中间丝的形成。结果 4-16μmol／L的LOV处理MCF-7细胞48—72h后,RhoA mRNA表达均无明显变化,而Rac2 mRNA和RhoGDI mRNA随洛伐他汀的处理,各剂量组mRNA表达均呈增加趋势;放射自显影结果发现,LOV处理细胞72h后,各处理组Rho GTPases结合的GTP量明显低于对照组;此外,LOV能明显促进MCF-7细胞微丝和中间丝的形成,该作用有一定剂量．效应和时间依赖关系。结论 洛伐他汀处理MCF-7乳腺癌细胞,因妨碍Rho GTPases蛋白转录后的香叶酯焦磷酸活化修饰而导致Rho GTPases活性降低,但它却能明显促进MCF-7细胞骨架的形成。     

SHR不同脏器肌球蛋白轻链磷酸酶水平的研究

目的 通过对肌球蛋白轻链磷酸酶(MLCP)的130kDa、38kDa、21kDa 3个亚单位的检测,分析其在SHR和WKY的大动脉、心脏、肾脏、脑等4个重要脏器的分布规律,对比高血压发生后SHR这3个亚单位的变化规律,探讨MLCP 3个亚单位在高血压的病理生理的过程中的衍变和可能的机制.方法 在4℃的环境下,取SHR与WKY大鼠各10只断头处死,迅速取其大动脉、心脏、肾脏、脑称重速冻后磨成匀浆,置于缓冲液中并通过离心提取蛋白质,校正两组总蛋白的浓度后,分别应用SDS-PAGE、Western印迹杂交和化学发光的方法测定SHR与WKY大动脉、心脏、肾脏、脑MLCP的130kDa、38kDa、21kDa 3个亚单位的含量,对显影结果进一步进行吸光度扫描分析.采用t检验和方差分析,进行两组间和多组间的比较.结果 SHR的ML-CPl30kDa亚单位在大动脉中含量最高;38kDa亚单位在肾脏中含量高;21 kD亚单位在大动脉中含量高.结论 SHR和WKY大鼠不同器官组织MLCP的130kDa、38kDa、21kDa 3个亚单位含量有着明显的差异,提示MLCP含量或功能的异常可能与SHR高血压的病理机制有关.     

肺血栓栓塞症患者血小板RhoGTP酶相关mRNA差异性表达特征

目的检测分析肺血栓栓塞症（PTE）患者血小板RhoGTP酶相关mRNA表达水平,分析其差异表达的意义。方法随机取选20例PTE患者为PTE组;20例年龄、性别与之匹配的非PTE患者为对照组,提取外周血单个核细胞总RNA。采用人类全基因组表达谱芯片比较两组PTE患者血小板RhoGTP酶mRNA表达的差异,并进行FQ—PCR验证芯片的可靠性。结果检测出血小板RhoGTP酶相关基因mRNA11条,两组比较,PTE组mRNA表达有3条（RhoGTP酶Racl蛋白及其鸟嘌呤核苷酸交换因子Vavl、Vav3）高于对照组,差异具有高度统计学意义（P〈0．01）。结论PTE组中部分血小板RhoGTP酶相关基因mRNA表达显著上调,提示血小板功能部分活化。     

凝血酶影响血管内皮细胞通透性的实验研究

目的 :评价凝血酶对血管内皮细胞通透性的影响及其机制。方法 :在体外培养血管内皮单细胞层 ,并测定凝血酶引起的血管内皮单细胞层电阻变化。结果 :凝血酶能够迅速降低血管内皮单细胞层的电阻 ;而肌球蛋白轻链激酶抑制剂 ML- 7能够抑制凝血酶引起的血管内皮单细胞层电阻变化。结论 :凝血酶可以升高血管内皮细胞肌球蛋白轻链的磷酸化水平 ,从而导致血管内皮细胞通透性增高。     

膈下逐瘀汤对实验小鼠免疫功能的影响

为阐述活血化瘀理论与免疫学的关系,探讨活血化瘀药物对免疫系统的影响,以膈下逐瘀肠为代表,观察其对正常小鼠淋巴细胞的影响。结果表明膈下逐瘀汤对正常小鼠细胞免疫和体液免疫具有全面抑制作用,但不破坏机体的免疫平衡。     

灵芪颗粒对小鼠免疫功能的影响

目的 观察灵芪颗粒对环磷酰胺致免疫功能低下小鼠和正常小鼠免疫功能的影响。方法 小鼠腹腔注射环磷酰胺,复制免疫功能低下模型,观察灵芪颗粒对小鼠血白细胞数、淋巴细胞数、T淋巴细胞转化率、NK细胞活性、碳粒廓清和免疫器官脏器系数的影响;观察灵芪颗粒对正常小鼠溶血素、溶血空斑数和2,4-二硝基氟苯介导的皮肤迟发性超敏反应的影响。结果 灵芪颗粒能明显提高环磷酰胺致免疫功能低下小鼠的脾T淋巴细胞转化能力、NK细胞活性和碳粒廓清能力,增加外周血白细胞数和淋巴细胞数,并减轻免疫器官（脾、胸腺）的萎缩。灵芪颗粒能明显增加正常小鼠的半数溶血值和溶血空斑数,并增强2,4-二硝基氟苯介导的小鼠迟发性超敏反应。结论 灵芪颗粒能增强小鼠的特异性免疫和非特异性免疫。     

金属铬离子及抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸对人成骨样细胞MG63形态学的影响

目的 研究金属铬离子(Cr6 )对人成骨样细胞MG63形态学的影响以及抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)对Cr6 作用的拮抗效应.方法 分别用含5μmol/L Cr6 、10μmol/L Cr6 、20μmol/L Cr6 、2mmol/L NAC以及2mmol/L NAC 10μmol/L Cr6 的F12培养基培养人成骨样细胞MG63 24h.其中,2mmol/L NAC 10μmol/L Cr6 组为2mmol/L NAC预处理细胞30min后再用含10μmol/L Cr6 的F12培养基继续培养24 h.另设空白对照组,即用不含Cr6 和NAC的F12培养基培养MG63细胞.倒置相差显微镜和透射电镜分别观察各组细胞形态和细胞超微结构的改变.结果 低浓度Cr6 处理组(5μmol/L Cr6 )MG63细胞伪足回缩,细胞间隙增大,细胞线粒体肿胀,粗面内质网扩张,胞浆出现少量空泡;随着Cr6 浓度的增高(10μmol/L Cr6 ),细胞逐渐变圆,脱壁,细胞内出现大量空泡,细胞核异形性大,染色质固缩,出现假包涵体;高浓度Cr6 处理组(20μmol/L Cr6 )MG63细胞大部分脱壁,细胞超微结构改变更明显,胞膜不完整,细胞出现崩解,可见细胞碎片;NAC单独处理组与NAC Cr6 处理组细胞形态结构与对照组相比均无明显改变.结论 Cr6 对人成骨样细胞MG63形态结构有明显的破坏,且随着Cr6 浓度的增高,破坏程度加剧;NAC可抑制Cr6 引起的MG63细胞形态学改变.     

脾多肽注射液联合化疗对中晚期宫颈癌的细胞免疫功能影响及临床疗效观察

目的：探讨脾多肽注射液联合化疗对中晚期宫颈癌患者的细胞免疫功能影响及临床疗效。方法方便选取并回顾性该院2014年4月—2016年4月收治的62例宫颈癌患者,将其中行脾多肽注射液联合化疗31例患者设为联合用药组,其余行静脉化疗31例患者设为单纯化疗组。两组患者均接受相同TP方案化疗,观察组在此基础上加用脾多肽注射液治疗,比较两组患者治疗后疗效及不良反应情况,对患者免疫功能指标进行检测。结果联合用药组总有效率为83.87%,高于单纯化疗组总有效率58.06%,差异有统计学意义(P<0.05)。联合用药组不良反应发生率为29.03%,低于单纯化疗组不良反应发生率48.39%,差异有统计学意义(P<0.05)。联合用药组CD45＋CD3＋、CD3＋CD8＋、CD3＋CD4＋、CD3-CD16＋CD56＋、CD3＋CD4＋/CD3＋CD8水平与单纯化疗组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。结论脾多肽注射液联合化疗治疗中晚期宫颈癌患者可有效维持机体的免疫机能,减少不良反应,提高患者生活质量,值得进一步推广。