髓鞘碱性蛋白徽基因修饰雪旺细胞移植对大鼠脊髓损伤后生长相关蛋白—43表达的影响

目的：研究pSVPoMcat微基因修饰雪旺细胞（Schwann cell,SC)对大鼠脊髓损伤（spinal cord injury,SCI)后神经生长相关蛋白－43（growth associated protein-43,GAP-43)表达的影响。方法：采用120只大鼠脊髓半横切损伤模型，随机分为三组：pSVPoMcat微基因修饰SC移植组（A组），单纯SC移植组（B）组，损伤对照组（C组）。应用免疫细胞化学方法动态观察SCI后GAP－43的表达，同时采用联合行为记分（CBS）观察大鼠神经功能恢复情况。结果：SCI损伤后1周，A，B，C三组间GAP－43表达差异无显著性意义；SCI后2，4，8周，三组间表达顺序为A＞B＞C，差异有显著性意义（P＜0．05）。其间A组在2周时达到最高峰，此后逐渐下降，12周时A，B，C三组间差异无显著性意义。A组大鼠神经功能恢复最好。结论；pWVPoMcat微基因修饰SC移植有促进SCI后GAP－43表达和大鼠神经功能恢复的作用。     

pSVPoMcat微基因修饰雪旺氏细胞移植对脊髓损伤c-fos、bcl-2基因表达的影响

目的探讨pSVPoMcat微基因修饰雪旺氏细胞(SC)移植对脊髓损伤(SCI)后c-fos,bcl-2基因表达的影响.方法用切割法制备大鼠SCI模型,将实验动物分为pSVPoMcat微基因修饰SC组(A组),SC移植组(B组),损伤组(C组),正常对照组(D组),不致伤.用地高辛(DIG)标记的c-fos、bcl-2探针行原位杂交.结果SCI后A、B、C、D四组脊髓c-fos基因表达顺序为C＞B＞A=D;bcl-2基因表达顺序为D=A＞B＞C.结论SCI后C-fos基因表达显著增多,而bcl-2基因表达显著减少,pSVPoMcat微基因修饰SC移植能部分抑制SCI后c-fos基因的表达和促进bcl-2基因的表达.     

pSVPoMcat微基因修饰雪旺细胞移植对脊髓损伤的修复作用

为观察pSVPoMcat微基因修饰雪旺细胞（SC）移植对脊髓损伤的修复作用，采用切割法制备脊髓半模断损伤模型（T8平面）。实验动物随机植入pSVPoMcat微基因修饰的SC（A组）、SC组（B组）和损伤对照组（C组），每组40只。术后应用联合行为记分（CBS）和皮层体感诱发电位（CSEP）动态观察大鼠功能恢复情况，应用原位杂交和免疫细胞化学方法观察胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。术后3月行MRI观察，并用免疫组化对神经轴突进行神经中丝（NF）染色。结果显示，A组能抑制大学损伤后的GFAP表达；MRI发现，A组大鼠脊髓损伤（SCI）区脊髓信号已基本恢复正常，B组未恢复正常，而C组SCI有软化灶形成。与NF染色发现一致。A、B两组潜伏时波幅呈恢复的趋势，与A组接近正常，与CBS结果一致。提示，pSVPoMcat微基因修饰SC移植能抑制SCI后GFAP的表达，促进神经轴突的生长并对神经功能恢复有明显的促进作用。     

pSVPoMcat微基因修饰雪旺氏细胞移植对损伤脊髓前角神经元的保护作用研究

目的：探讨pSVPoMcat微基因修饰雪旺氏细胞移植对损伤脊髓前角神经元的保护作用。方法：采用大鼠脊髓半横切损伤模型，将实验动物分为3组：pSVPoMcat微基因修饰雪旺细胞移植组（A组），单纯雪旺氏细胞移植组（B组），损伤对照组（C组）。对脊髓切片行Nissl染色，酸性磷酸酶（ACP）组织化学染色及原位末端标记（TUNEL）法染色，并用联合行为记分（CBS）观察大鼠神经功能恢复情况。结果：A、B、C三组前角神经元存活率呈显著性差异（A＞B＞C，P＜0．01）；A组ACP变化幅度明显降低（A＜B＜C）；细胞凋亡率为C＞B＞A。大鼠神经功能恢复也出现了相同的变化趋势。结论：pSVPoMcat微基因修饰雪旺氏细胞移植对脊髓损伤前角神经元有保护作用并促进大鼠损伤脊髓功能的恢复。     

移植pSVPoMcat微基因修饰雪旺细胞在鼠脊髓内长期存活及其基因表达

目的：观察人Po-5,flanking介导的21．5ku髓鞘碱性蛋白（myelin basic protiein,MBP)微基因（暂命名为pSVPoMcat)修饰雪旺细胞（SC）在鼠脊髓内存活及其基因表达。方法：120只大鼠分为3组,A组为pSVPoMcat微基因修饰SC移植组;B组为高纯化SC移植组;C组为脊髓损伤（SCI）＿对照组,伤后各组分别于2,4,8,12周（每组每次10只）,取移植区脊髓切片,进行S－100蛋白,MBP免疫细胞化学染色及地高辛(DIG)标记的hMBPF2 cDNA探针的原位杂交（ISH）测定。结果：伤后2,4,8,12周,A组S－100,MBP染色细胞和ISH细胞差异无统计学意义（P＜0．05）,其中ISH阳性细胞可见髓鞘形成,B组的S－100染色细胞逐步递减,差异有非常显著性意义（P＜0．01）,未发现MBP染色细胞以及ISH细胞,C组未发现任何阳性细胞,结论：pSVPoMcat微基因修饰SC在鼠损伤脊髓内能长期存活并表达外源基因,且有助于受伤脊髓的髓鞘形成。     

移植pSVPoMcat微基因修饰雪旺氏细胞对脊髓损伤早期作用的实验研究

目的 探讨移植pSVPoMcat微基因修饰雪旺细胞(SC)对损伤早期脊髓组织的作用。方法 切割击造成脊髓半横断损伤(T8平面)模型。术后将实骚动物分为pSVPoMeat微基因修饰SC组(A组)，SC移植组(B组)，损伤对照组(C组)和正常对照组(D)。术后8h，取脊髓伤段标本，用地高辛(DIG)标记的C-fos探针行原位杂交，并分别用干湿法，原子吸收光谱法测量水、钙含量和比色法测量丙二醛(MDA)含量。结果1．脊髓损伤(SCI)后，伤段脊髓组织C-fos基因在各试验中表达顺序为，C＞B＞A＞D，P＜0．05。2．损伤脊髓段组织钙旮量，MDA含量明显增多，组织水肿严重，在各实验组中，水、钙受MDA含量为C＞B＞A＞D，结论移植pSVPoMcat擞基因修饰SC对损伤脊髓早期有明显的保护作用，其保护作用与押音；C-fos基因表达，稳定钙离子水平受降低MDA含量有关。     

移植pSVPoMcat微基因修饰雪旺氏细胞对脊髓损伤早期作用的实验研究

目的 探讨移植pSVPoMcat微基因修饰雪旺细胞(SC)对损伤早期脊髓组织的作用。方法 切割法造成脊髓半横断损伤(T8平面)模型。术后将实验动物分为pSVPoMcat微基因修饰SC组(A组),SC移植组(B组),损伤对照组(C组)和正常对照组(D)。术后8h,取脊髓伤段标本,用地高辛(DIG)标记的C-fos探针行原位杂交,并分别用干湿法,原子吸收光谱法测量水、钙含量和比色法测量雨二醛(MDA)含量。结果 1.脊髓损伤(SCI)后,伤段脊髓组织C-fos基因在各试验中表达顺序为,C>B>A>D,P<0.05。2.损伤脊髓段组织钙含量,MDA含量明显增多,组织水肿严重,在各实验组中,水、钙及MDA含量为C>B>A>D,结论 移植pSVPoMcat微基因修饰SC对损伤脊髓早期有明显的保护作用,其保护作用与抑制C-fos基因表达,稳定钙离子水平及降低MDA含量有关。     

转入pSVPoMcat微基因的雪旺氏细胞在鼠脊髓内存活及基因表达

目的 探讨pSVPoMcat微基因修饰的雪旺氏细胞在鼠脊髓内存活及基因表达。方法 将3～4月龄的胎儿雪旺氏细胞(Schwann.cell,SC)以1×10~6密度在培养皿中培养24～48h,用阳离子脂质体介导技术将带有人Po-5’-flanking介导的髓鞘碱性蛋白微基因(pSVPoMcat)的质粒DNA导入这些培养的SC。3～5天后,将经转基因的SC(2.5×10~5 cells/ul)移植到半横断损伤的成鼠脊髓中。术后12周,对实验3组动物进行S-100蛋白,MBP免疫细胞化学染色及DIG标记的hMBPE_2cRNA探针的原位杂交测定。结果 采用脂质体对体外培养的SC的基因转染率可达68％;3月后,pSVPoMcat修饰的SC在宿主体内仍存活并表达外源基因。结论 SC是表达外源性基因的良好载体细胞,而阳离子脂质体是转基因的有效介导物,pSVPoMcat微基因表达产物对SC的生长有促进作用。它们为脊髓损伤的基因治疗提供了可行途径。     

局部持续分泌神经生长因子促周围神经再生作用的研究

目的探讨以微囊化基因修饰细胞为载体,在局部持续分泌神经生长因子(nerve growth factor,NGF)促周围神经再生的作用。方法NGF基因修饰3T3细胞(3T3-NGF),采用微胶囊制备技术制备微囊化的3T3-NGF细胞;体外培养后分别检测活性和生物活性。选取SD大鼠制备坐骨神经横断损伤模型后,随机分微囊化3T3-NGF细胞移植组(A组)、裸3T3-NGF细胞移植组(B组)、空胶囊移植组(C组)和阴性对照组(D组)。术后不同的时间采用组织形态学检查分别观察各组坐骨神经恢复情况。结果3T3-NGF细胞在微胶囊内保持正常活性和增殖能力,可以持续分泌NGF。移植术后A组的患肢恢复情况好于B,C和D组。移植术后4,8及12周时,各组动物行组织形态学检查,显示A组的损伤远端神经纤维密度、轴突直径和髓鞘厚度等评价神经再生的指标均优于B,C和D组(P<0.05),而B,C和D三组之间差异无显著性(P>0.05)。结论体外培养的3T3-NGF细胞,在微胶囊内可保持正常的增殖能力和生物活性;微囊化3T3-NGF细胞移植到大鼠周围神经损伤的局部,在微胶囊的免疫保护下,可持续分泌NGF,有促进周围神经再生修复的作用。     

静脉移植骨髓间充质干细胞治疗大鼠脊髓损伤

目的 研究静脉移植骨髓间充质干细胞(bone martow stromal cells,BMSCs)对大鼠脊髓损伤后功能恢复的影响.方法 对10只同种异体SD大鼠的BMSCs进行体外分离、培养、扩增、纯化后用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxyuridine,BrdU)进行标记;重物打击致瘫痪造模法制成完全性截瘫的同种大鼠脊髓损伤动物模型,制模后7 d完全随机分为A、B、C三组:A组22只,作为BMSCs移植组,经鼠尾静脉注射2×106/ml的BMSCs细胞悬液1 ml;B组22只,作为对照组,注射1 ml培养液;C组22只,作为空白手术对照组.注射后2,3,6周,免疫组织化学检测BMSCs在损伤段脊髓的存活、分布、分化并计数,观察损伤段脊髓内生长相关蛋白-43(growth associated protein-43,GAP-43)、神经丝蛋白200(neurofilament 200,NF200)和巢蛋白的表达,注射后1,2,3,4,5,6周Basso-Beattie-Bresnaban(BBB)评分评估各组后肢运动功能.结果 移植后2,3,6周BrdU阳性的BMSCs主要分布于损伤段及邻近节段脊髓内.计数发现,移植后2周BrdU阳性的BMSCs约占移植细胞数的4.9%,3周占4.4%,6周占2.9%;移植后2周,BMSCs形态大多变为圆形或椭圆形,部分阳性标记的细胞长出神经元样突起,约12.6%表达胶质纤维酸性蛋白(glial fribrillary acidic protein,GAFP),约5.4%表达神经元特异性核蛋白(neuronal nuclear antigen,NeuN);移植后2,3,6周,A组GAP-43、NF200、巢蛋白的表达明显高于B、C组(P<0.05);移植后3周开始,A组的BBB评分在各观察时相点明显高于B、C组(P<0.05).结论 通过静脉注射的BMSCs能向脊髓损伤灶内迁徙、存活,表现出对损伤灶的趋化性,并向神经元和星形胶质细胞分化,上调GAP-43、NF200和巢蛋白的表达,改善神经功能,可用于脊髓损伤的细胞移植治疗.     

移植pSVPoMcat微基因修饰雪旺氏细胞对脊髓损伤后细胞凋亡的影响

目的探讨ｐＳＶＰｏＭｃａｔ微基因修饰雪旺氏细胞（ＳＣ）移植对脊髓损伤（ＳＣＩ）后细胞凋亡的作用。方法将实验动物分为ｐＳＶＰｏＭｃａｔ微基因修饰ＳＣ组（Ａ组），ＳＣ移植组（Ｂ组），损伤对照组（Ｃ组）。移植后１２周，对ＳＣＩ区的脊髓组织切片进行细胞凋亡的检测（甲基绿－派诺宁染色法和荧光原位标记法）以及Ｂｃ１～２和Ｆａｓ蛋白表达的测定（免疫组化法）。结果在Ａ、Ｂ、Ｃ组中，均发现凋亡细胞及Ｂｃ１～２和Ｆａｓ蛋白阳性表达。体视学计量发现，细胞凋亡率为Ｃ＞Ｂ＞Ａ；Ｂｃ１～２蛋白阳性表达顺序为Ａ＞Ｂ＞Ｃ；Ｆａｓ蛋白阳性表达顺序为Ｃ＞Ｂ＞Ａ。结论ｐＳＶＰｏＭｃａｔ微基因修饰ＳＣ移植能抑制ＳＣＩ后的细胞凋亡，而创伤则可诱发细胞凋亡     

不同功率半导体激光照射与大鼠脊髓生长相关蛋白表达的关系

目的 研究不同功率半导体激光照射损伤的大鼠从骨神经后脊髓中生长相关蛋白（GAP－43）的表达与激光功率和照射时间的关系。方法 172只雄性SD大鼠制成从骨神经损伤模型,随机分为1个对照组和3个激光照射组,每组42只。分别以功率为5、10和15mW、波长810nm的半导体激光照射激光组大鼠神经损伤部位,第天1次,连续照射10天。照射后1、3、7、14、28、42和56天取恨鼠脊髓用于免疫组化方法观察脊髓内GAP－43表达的变化。结果 半导体激光照射后第7天内各激光照射组和对照组无明显差异。第14天和第28天时15mW激光照射组脊髓内GAP－43表达高于对照组。第56天时激光照射组较对照射组脊髓内GAP－43表达稍低,5mW和10mW激光照射组与对照组比较无明显差异。结论 15mW半导体激光照射可引起损伤神经后大鼠脊髓中GAP－43表达的变化,对神经再生过程有一定的影响,5mW和10mW半导体激光照射对损伤神经的鼠中GAP－43表达作用不明显。     

细胞外三磷酸腺苷对大鼠脊髓损伤后微管相关蛋白-2表达及运动功能恢复的影响

目的 研究细胞外三磷酸腺苷（ATP）对大鼠脊髓损伤后微管相关蛋白-2（MAP-2）表达运动功能恢复的影响。方法 健康成年Wistar大鼠66只，随机取6只作为正常对照组，余60只制作成脊髓打击伤动物模型，随机分为两组：A组（ATP组）和B组（对照组），每组30只大鼠。伤后1，3，7，14，28d取材，应用免疫组织化学方法观察MAP-2的表达，采用计算机图像分析系统，进行定量分析；并用改良的Tarlov评分观察大鼠脊髓损伤后运动功能的恢复情况。结果脊髓损伤后14d和28d，A组大鼠MAP-2的表达明显强于B组（P＜0．05）；损伤后14d和28d，A组大鼠改良Tarlov评分明显大于B组（P＜0．05）．结论细胞外ATP能促进大鼠损伤脊髓表达MAP-2，并能促进大鼠脊髓损伤后运动功能的恢复。     

胚胎脊髓移植对大鼠损伤脊髓胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的 研究大鼠脊髓损伤后胚胎脊髓（ＦＳＣ）移植是否能够影响胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）的表达和伤后大鼠后肢功能的恢复情况。方法 将６０只大鼠分为脊髓半脊髓半切洞损伤＿胚胎脊髓移植组（Ａ组）和单纯脊髓半切洞损伤组（Ｂ组）。伤后１,３,,７,１４,２８天,应用行为学和电生理检查观察大鼠功能恢复情况,应用原位杂我和免疫细胞化学方法观察ＧＦＡＰ的表达,并采用计算机图像分析技术,进行定量分析。结果 大鼠脊髓     

胚胎脊髓移植联合应用bFGF对脊髓损伤后神经再生的影响

目的 探讨胚胎脊髓（Fetal spinal cord,FSC）移植联合外源性碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）的应用对脊髓损伤后脊髓神经再生的影响。方法 采用大鼠胸段（T8～T11）脊髓左侧半横切损伤模型。移植供体为同种异体妊娠14天的孕鼠,将实验动物分为3组：A组为损伤——FSC移植组;B组为损伤＋FSC移植＋bFGF组;C组为单纯损伤组。术后1～8周每周行综合行为评分（combined behavioral score,CBS）,评定大鼠功能,并取术后8周损伤区脊髓组织0.5cm作嗜银梁色及NF200免疫组织化学检查,分别标记轴突和胶质细胞,进行定量分析,观察神经纤维再生情况。结果 胚胎脊髓移植和外源性bFGF可以防止成鼠脊髓损伤后神经元的萎缩,图像分析发现其作用A、B组组优于C组,可以较好地恢复神经元形态。CBS评分提示大鼠神经功能的恢复也有同样趋势,治疗组统计学分析与对照组间有显著性差异。免疫组织化学检查,术后8周A、B组神经中丝（neurofilament,NF）着色点较C组密集,且没有明显的胶质增生。结论 脊髓损伤后联合应用胚胎脊髓移植和bFGF可以防止神经元的萎缩,并且对神经纤维再生及功能的恢复有促进作用。