高氧暴露对早产儿血单个核细胞血红素加氧酶-1蛋白表达水平及活性的影响

目的观察高氧暴露早产儿血单个核细胞血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达水平及活性变化。方法选择2008年2月至2009年8月本科住院吸入高浓度氧的40例早产儿(高氧组)和吸入常压空气的40例早产儿(对照组),用Western Blot法检测血中单个核细胞HO-1蛋白表达水平、血清胆红素水平和血浆一氧化碳血红蛋白(COHb)百分比,并进行比较分析。结果与对照组相比,高氧组HO-1蛋白表达明显增加[(1.78±0.25)比(1.12±0.31),P<0.01],胆红素生成量(nmol.mg-1.h-1)及血浆COHb含量(μmol/L)均显著增加[(76.25±11.33)比(53.47±8.73),(6.73±0.42)比(2.47±0.34),P均<0.01]。结论高氧暴露可上调早产儿血单个核细胞HO-1的表达及活性。     

高体积分数氧暴露早产儿外周血单个核细胞血红素加氧酶-1表达水平及其活性的变化

目的 观察高体积分数氧(高氧)暴露早产儿血单个核细胞(PBMC)血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白及 mRNA的表达水平和活性变化.方法 分别用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术、Western blot方法 对60例吸入高氧的早产儿(高氧组)血中PBMC中HO-1 mRNA及蛋白表达水平进行检测,并测定血清胆红素水平代表HO-1活性及血浆一氧化碳血红蛋白(COHb)百分比,并与吸入常压空气的早产儿60例对照进行比较.结果 与空气组相比,高氧组早产儿PBMC中HO-1 mRNA及蛋白表达明显增加[(0.64±0.05) vs (0.13±0.03),(1.78±0.25) vs (1.12±0.31),Pa<0.01)],血清胆红素生成量及血浆COHb水平也显著升高[(76.25±11.33) nmol·L-1·h-1 vs (53.47±8.73) nmol·L-1·h-1,(6.73±0.42) μmol·L-1 vs (2.47±0.34) μmol·L-1,Pa<0.01].结论 高氧暴露可上调早产儿血PBMC中HO-1 mRNA及蛋白质表达水平,推测HO-1可能参与早产儿高氧肺损伤.     

高体积分数氧暴露早产大鼠肺组织血红素加氧酶-1的表达及活性变化

目的 观察血红素加氧酶-1(HO-1)在高体积分数氧(高氧)暴露早产大鼠肺组织中的表达及活性变化,探讨HO-1在早产大鼠高氧肺损伤中的作用.方法 将3日龄早产SD大鼠28只随机分为高氧组、空气组(每组14只),于实验第3、7天分别用半定量反转录-聚合酶链反应法和免疫组织化学法检测各组早产大鼠肺组织HO-1 mRNA表达水平和HO-1蛋白在肺组织的分布和表达水平,并测定HO-1的活性.采用SPSS 12.0软件进行统计学分析.结果 实验第3天,空气组早产大鼠肺组织HO-1 mRNA(0.17±0.08)、HO-1蛋白(7.23±4.63)均有微弱表达,HO-1活性为(4.32±1.57)nmol/(mg·h);高氧组早产大鼠肺组织HO-1mRNA(0.72±0.33)表达明显高于空气组(Pa<0.01),HO-1蛋白(18.54±6.55)仅在臣噬细胞表达弱阳性,HO-1活性明显增加(6.14±1.62)nmol/(mg·h),二者均明显高于空气组(Pa<0.05).实验第7天,各组早产大鼠肺组织HO-1 mRNA均未见表达,高氧组早产大鼠肺组织HO-1蛋白表达及活性均显著高于空气组[(51.24±18.32)vs(4.11±1.82),(32.38±5.46)nmol/(mg·h)vs(5.75±1.87)nmol/(mg·h) Pa<0.01].结论 HO-1可能参与了早产大鼠高氧肺损伤的过程.     

高浓度氧对新生鼠肺血红素加氧酶-1蛋白表达的影响

目的　探讨高浓度氧对新生鼠肺损伤及肺血红素加氧酶 1(HO 1)蛋白表达的影响。方法　将生后 4～ 7d新生SD大鼠 5 7只随机分为 0、2 4、4 8、72h空气对照组和 2 4、4 8、72h高氧暴露组 ,分别置于空气中和常压高氧舱 (氧浓度 92 %～ 94 % )中 ,后断头处死后取肺组织 ,对肺组织切片在光镜、电镜下进行病理组织学观察 ,对肺组织湿 /干重比值进行比较 ,采用免疫组织化学分析对HO 1蛋白表达进行半定量及定位分析。结果　高氧组与空气对照组比较 ,肺组织有明显水肿、出血和炎症 ,电镜下观察病变主要在毛细血管内皮细胞 ;高氧 72h组肺组织湿 /干重比值 (7.97± 1.18)较 72h空气对照组 (6 .4 0± 0 .37)明显升高 (P <0 .0 5 ) ;高氧 72h组肺组织HO 1蛋白表达 (0 .5 0 4± 0 .0 6 2 )较 72h空气对照组 (0 .345± 0 .0 2 4 )明显升高 (P <0 .0 1) ;高氧暴露组HO 1蛋白呈强阳性表达 ,主要分布在支气管、肺泡上皮细胞和肺泡巨噬细胞。结论　高浓度氧可引起新生鼠肺损伤 ,且高浓度氧可引起新生鼠肺HO 1蛋白表达上调 ,证明HO 1参与新生鼠高氧肺损伤的病理生理过程     

高浓度氧对新生鼠肺血红素加氧酶1与一氧化碳的影响

2002年7月-2003年1月,我们利用新生鼠高氧肺损伤模型,观察高氧对新生鼠肺血红素加氧酶1(HO-1)及血浆、肺组织匀浆一氧化碳(CO)含量的影响,以了解HO-1／CO系统在此过程中的变化。     

银杏叶制剂对高氧暴露早产鼠肺组织血红素加氧酶-1表达的影响

目的 探讨血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)在高氧暴露早产鼠肺组织中的表达及银杏叶制剂(舒血宁)对HO-1 mRNA及HO-1蛋白表达的影响,为舒血宁防治早产儿高氧肺损伤提供理论依据.方法 3日龄早产鼠随机分为高氧组、空气组和高氧 舒血宁组3组,于实验3 d及7 d时,分别用半定量反转录-聚合酶链反应法和免疫组织化学法检测各组早产鼠肺组织HO-1 mRNA的表达水平争HO-1蛋白质表达水平.结果 实验第3天,空气组HO-1 mRNA、HO-1蛋白均有微弱表达;与空气组相比,高氧组HO-1 mRNA表达明显高于空气组(P<0.01),HO-1蛋白仅在巨噬细胞表达弱阳性(P<0.05);与高氧组相比,舒血宁 高氧组HO-1 mRNA的表达明显下降(P<0.01),但仍然高于空气组(P<0.05),HO-1蛋白弱阳性表达(P>0.05).实验第7天,各组HO-1 mRNA均未见表达.空气组HO-1蛋白极微弱或无表达,高氧组HO-1蛋白在巨噬细胞呈强阳性表达,明显高于空气组(P<0.01);舒血宁 高氧组HO-1蛋白的表达较高氧组明显下降(P<0.01),但仍然高于空气组(P<0.01).结论 HO-1可能参与了早产鼠高氧肺损伤,舒血宁能够下调高氧暴露早产鼠肺组织中HO-1的表达水平.     

高氧暴露对早产鼠肺组织HO-1和GCLC表达的影响

目的探讨高浓度氧暴露对新生早产大鼠肺组织中血红素加氧酶-1（HO-1）和谷氨酰-L-半胱氨酸连接酶催化亚单位（GCLC）动态表达的影响。方法受孕21 d大鼠行剖宫产取出早产鼠80只，喂养1 d后随机分为空气组和高氧组。空气组早产鼠放置在室内常压空气中饲养，高氧组早产鼠放置在同一室内常压氧箱中（氧浓度85%~95%）饲养，分别于第1、4、7、10、14天，每组取8只大鼠，采集两组早产鼠肺组织标本。采用苏木精-伊红染色法检测两组早产鼠不同时间点肺组织结构的病理变化；采用Western blot技术和RT-qPCR检测两组早产鼠不同时间点肺组织HO-1和GCLC蛋白及mRNA的表达变化。结果与空气组相比，高氧组早产鼠体重下降显著（P < 0.05）。与空气组相比，高氧组早产鼠肺组织病理切片显示肺组织结构紊乱、肺泡间隔增宽、肺泡数目减少和肺泡简单化。高氧组早产鼠肺组织中HO-1 mRNA相对表达量在第7天时低于空气组，在第10、14天时高于空气组（P < 0.05）。高氧组早产鼠肺组织中GCLC mRNA表达量在第1、4、7天时低于空气组，在第10天时高于空气组（P < 0.05）。与空气组比较，高氧组早产鼠肺组织中HO-1蛋白表达水平在各时间点均升高；除第1天外，GCLC蛋白表达水平在其他各时间点均升高（P < 0.05）。结论高氧暴露导致早产鼠生长发育迟缓、肺发育阻滞。早产鼠肺组织HO-1和GCLC蛋白及mRNA的表达变化可能与高氧暴露导致早产鼠肺损伤发病过程相关。     

诱导血红素加氧酶-1高表达对大鼠减体积肝移植生存的影响

目的为了明确血红素加氧酶-1的高表达对大鼠减体积肝移植生存的影响,进而探索出一条有效地防止小体积移植肝缺血再灌注损伤的方法。方法利用分子生物学方法构建携带有HO-1基因的重组腺病毒Ad5-HO-1,对供体进行预处理,并观察Ad5-HO-1对大鼠小体积移植肝缺血再灌注损伤的保护作用。结果Ad5-HO-1组与对照组相比较ALT水平有显著降低(P＜0．05)；术后2 h内门静脉血流流量有明显增加(P＜0．05)；HO-1酶活性测定显示Ad5-HO-1组酶活性为(5．34±0．41)×10~(-3)mmol·mg~(-1)·mm~(-1),较对照组明显为高(P＜0．05)；RT-PCR和免疫组化检测HO-1、TNF-α、Bcl-2、Bax表达,证实Ad5-HO-1组中HO-1、Bcl-2的表达是增高的,而Bax、TNF-α表达是降低的(P＜0．05)；Ad5-HO-1组在1、7、21d的生存率分别为100%、85．7%、71．4%,而对照生理盐水组在1、7、21 d的生存率分别为66．7%、16．7%、16．7%(P＜0．05)。结论Ad5-HO-1的应用能够显著地增加术后2 h内门静脉血流,有利于受体术后肝功能的恢复,从而改善大鼠移植术后的生存结果。实验结果提示HO-1的高表达在防止和减轻小肝移植物缺血再灌注损伤的过程中扮演着重要的角色,进而为临床上防止小肝移植物缺血再灌注损伤提供了一条新的思路和方法。     

血红素加氧酶-1抑制哮喘气道炎症的研究

目的探讨血红素加氧酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）在小鼠支气管哮喘模型中的抗炎作用。方法用卵清蛋白（OVA）致敏、激发小鼠建立哮喘动物模型,并在致敏、激发过程中分别经Heroin、SnPP处理。分别测定激发后各组动物血清OVA特异性IgE（OVA-SIgE）、支气管肺泡灌洗液（bronchial alveolar lavage fluid,BALF）中细胞总数和嗜酸性粒细胞（eosinophil,EOS）,结合病理切片分析气道炎症状况。结果OVA组、Heine组、SnPP组血清OVA—SIgE和BALF中细胞总数及EOS数明显高于正常对照组,但Heine组IgE水平及BALF中细胞总数和EOS数明显低于OVA组;而OVA组和SnPP组间IgE水平及BALF中细胞总数和EOS数差异无显著性;病理切片显示OVA组、Heroin组、SnPP组气道组织均以嗜酸性粒细胞浸润为主,但Heroin组气道炎症仍明显轻于OVA组和SnPP组。结论用Heroin诱导HO-1高表达后血清OVA-SIgE明显下降,气道炎症减轻,提示HO-1在支气管哮喘中具有抗炎作用。     

血红素加氧酶-1介导Tr1细胞在哮喘动物模型中的免疫调节作用

目的 探讨血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)介导1型T调节细胞(type 1 T regulatory cells,Tr1)在哮喘动物模型中的免疫调节作用.方法 用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏、激发C5786小鼠建立哮喘模型,并在致敏、激发阶段分别经血红素(hemin)和锡-原卟啉(Sn-protoporphyrin,SnPP)干预.肺泡灌洗液细胞计数和肺脏病理组织学检测评价哮喘动物模型;real-time PCR和Western blot方法分别测定脾脏细胞内HO-1、IL-10mRNA表达和HO-1蛋白量;ELISA方法测定动物血清OVA-特异性IgE(OVA-sIgE)和IL-10水平;流式细胞计数测定脾脏细胞中CD4+CD25+IL-10+Treg、CD4+IL-10R+IFN-γR+Tr1的比例.结果 哮喘小鼠模型经hemin干预后,Tr1数量增加,脾脏细胞内HO-1和IL-10 mRNA表达上调,HO-1蛋白水平明显增加,血清IL-10水平增高,哮喘气道炎症减轻.结论 在哮喘动物模型中HO-1可能通过诱导Tr1细胞,增加IL-10的分泌,抑制哮喘气道炎症.     

高氧暴露对早产大鼠肺组织中HO-1与iNOS表达的影响

目的：探讨血红素加氧酶-1（HO-1）与诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在高氧肺损伤大鼠中的表达及作用。方法：将3日龄早产Sprague-Dawley大鼠64只随机分为高氧组、空气组（每组32只）,于实验 3 d及 7 d时,分别检测空气组和高氧组肺组织 HO-1活性、肺泡灌洗液中 NO、肺组织病理学改变及 HO-1、iNOS 在肺内的分布和表达(免疫组织化学方法)。结果：3 d、7 d高氧组存在明显急性肺炎症性改变,iNOS 在中性粒细胞的表达、灌洗液中 NO 含量明显高于空气组 (P均<0.01),且7 d高氧组高于3 d高氧组(P<0.05);3 d、7 d 时高氧组巨噬细胞 HO-1 表达高于空气组(分别P<0.05,P<0.01),且7 d高氧组显著高于3 d高氧组(P<0.01) 。结论：HO-1 与 iNOS在高氧肺损伤大鼠中的表达是增高的,HO-1 与 iNOS 均可能参与了高氧肺损伤。     

地塞米松对高氧肺损伤新生大鼠肺水通道蛋白1表达的影响

目的 探讨地塞米松对新生大鼠高氧肺损伤时水通道蛋白1(AQP1)表达的影响及其对肺损伤的可能保护机制.方法 新生Wistar大鼠32只随机分为空气组、高氧组、空气+地塞米松组、高氧+地塞米松组.第3天取肺组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学法检测AQP1的mRNA表达和分布变化;并对肺湿/干重比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)中的蛋白含量、肺通透指数及组织病理学改变进行对比分析.结果 高氧暴露第3天肺组织出现出血、炎性细胞浸润和水肿,肺W/D、BALF蛋白含量、肺通透指数明显升高;地塞米松干预组肺损伤程度减轻,测定值降低.空气组、高氧组、高氧+地塞米松组AQP1 mRNA相对吸光度比值分别为0.70±0.04、0.42±0.03、1.04±0.04,各组间差异有显著性(P<0.05);与空气组相比,高氧组AQP1 mRNA表达明显降低,高氧+地塞米松组AQP1 mRNA表达显著上调;AQP1蛋白表达与其mRNA变化一致.结论 高氧肺损伤时大鼠肺AQP1表达下调;地塞米松干预对肺损伤有保护作用,上调肺AQP1的表达可能是其作用机制之一.     

胎盘组织炎症对早产儿脑室内出血发病风险的影响

目的评价早产儿胎盘组织炎症反应程度及其病程进展对早产儿脑室内出血发病风险的影响。方法收集2008年3月至2009年9月三所医院分娩的493例早产儿临床资料,对其胎盘组织绒毛膜羊膜炎症反应进行分级分期,利用头颅B超、CT和MRI等影像学手段对脑室内出血诊断并分级。结果产妇绒毛膜羊膜炎患病率为30.0%(148/493),早产儿脑室内出血患病率为20.9%(103/493)。在校正了早产儿胎龄、性别、体重、胎膜早破以及分娩方式等因素后,胎盘Ⅱ级和Ⅲ级炎症,以及胎盘Ⅱ期和Ⅲ期炎症分别是早产儿脑室内出血的独立危险因素,其比值比分别为1.33(95%CI:1.02～1.87),2.01(95%CI:1.54～2.73),1.33(95%CI:1.02～1.87)和2.01(95%CI:1.54～2.73)。结论早产儿胎盘绒毛膜羊膜炎组织病理不同分期、分级与早产儿脑室内出血患病风险密切相关。     

早产儿脐血维生素K依赖因子水平及产前补充维生素K1对其影响的研究

目的了解早产儿是否存在维生素(Vit)K依赖因子水平低下及其与早产儿脑室周围-脑室内出血的关系,探讨产前补充维生素(Vit)K1对早产儿血浆VitK依赖因子水平的影响及对脑室周围-脑室内出血的预防作用.方法将有早产可能且至分娩时孕周不足35周的孕妇分为两组对照组133例,在产前给予地塞米松注射;对照组44例,产前给予地塞米松+VitK1.两组早产儿各30例留取脐动脉血离心零下20℃以下保存用凝固法检测Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ等凝血因子活性水平,同时留取同期出生的健康足月新生儿30例脐血标本作对照.两组早产儿生后1周内常规作头颅超声检查以明确有无脑室周围-脑室内出血及其程度.结果早产儿与足月新生儿脐血VitK依赖因子活性水平分别为Ⅱ(25.6±9.5)%对(36.7±4.9)%,Ⅶ(59.0±17.7)%对(64.5±10.6)%,Ⅸ(24.7±8.9)%对(30.2±5.7)%,Ⅹ(30.2±5.0)%对(34.3±12.6)(P<0.05).母亲产前补充VitK1后其婴儿脐血VitK依赖因子水平分别为Ⅱ(36.4±6.9)%,Ⅶ(69.6±16.6)%,Ⅸ(25.7±10.9)%和Ⅹ(39.3±8.0)%,除Ⅸ因子外,Ⅱ、Ⅶ和Ⅹ因子活性均显著升高(P<0.05).脑室周围-脑室内出血发生率在对照组为52.6%,观察组为31.8%(χ2=5.744,P=0.017);重度出血对照组为12.0%,观察组为2.3%(χ2=3.626,P=0.057).结论早产儿存在VitK依赖因子水平低下,可能为其易于发生脑室周围-脑室内出血的原因之一.分娩前母亲补充VitK1可显著提高其血浆Ⅱ、Ⅶ和Ⅹ因子水平,并对脑室周围-脑室内出血有一定的预防作用.     

通过临床评估早期诊断早产儿院内感染的初步探讨

目的　探讨用临床表现及实验室检查评分的方法判断早产低出生体重儿院内细菌感染的可能性。方法　将研究对象按现行新生儿感染的诊断标准分为感染组 (A组 )及对照组 (B组 ) ,按照临床表现的严重程度及临床常用实验室检查结果予以综合性评分 ,并以有效抗生素治疗后进行对照 ,分别对组间及组内的评分进行比较。结果　治疗前 2 4hA组评分大于B组 ,两组评分之间差异有显著性 (P <0 0 1) ,有效抗生素治疗后A组与B组评分之间差异无显著性 (P >0 0 5 )。在A组治疗前与治疗后评分差异有显著性 (P <0 0 1)。B组中≥ 11分者在抗生素治疗后评分下降 ,并与治疗前比较差异有显著性 (P <0 0 1) ;<11分者差异无显著性。提示现行诊断新生儿感染的标准 ,对早产儿及胎龄小的极低出生体重儿不敏感。结论　对早产儿及低出生体重儿进行临床综合评分 ,有利于判断患儿感染的可能性 ,并可监测抗感染治疗的有效性。     

影响早产儿行为神经测定因素的分析

目的 探讨新生儿行为神经测定(NBNA)在早产儿的应用及影响其评估指标的因素.方法 选择2006年1月至2007年6月在我院新生儿科住院治疗的123例早产儿,分别在纠正胎龄40周时进行NBNA评分,分析胎龄、出生体重、是否机械通气以及机械通气时间、围生期是否有致脑损伤的高危因素对NBNA评分的影响.结果 胎龄<30周、～32周、～34周早产儿及出生体重<1 250 g、～1 500 g、～2 000 g早产儿NBNA评分差异均具有显著性(P<0.01),胎龄越低、出生体重越低,NBNA评分越低;需机械通气的早产儿NBNA评分明显低于未上呼吸机者(P<0.01),机械通气时间＞7 d NBNA评分明显低于＜7 d者(P<0.05);围生期有出血性和缺血性脑损伤、间接胆红素≥256.5 μmol/L、血糖反复<2.6 μmol/L、发生感染者NBNA评分明显降低(P<0.01);臀位、钳产、吸引产早产儿NBNA评分明显低于剖宫产和顺产者(P<0.01);Apgar评分为0～3分者NBNA评分明显低于4～7分和≥8分者(P<0.01).结论 胎龄、出生体重、是否机械通气、机械通气时间、异常的分娩方式、合并重度窒息均影响早产儿的NBNA评分.对于早产儿,特别是胎龄<32周,出生体重<1 500 g,存在致脑损伤高危因素的早产儿,生后3～7 d内应行头颅B超检查,及早发现颅内病变,尽早干预,减少后遗症的发生.     

半胱氨酸蛋白酶3和白细胞介素8在高氧暴露下早产大鼠肺组织中的动态表达及其意义

目的 探讨半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及白细胞介素-8(IL-8)在早产大鼠高氧肺损伤中的动态表达及其意义.方法 孕21 d的SD早产大鼠生后第2天,随机分为空气组和高氧组(均n=40).高氧组大鼠予以85%高氧持续暴露,空气组大鼠置于空气中.于暴露1、4、7、14和21 d每组各处死8只大鼠,收集肺组织标本,苏木精-伊红染色观察肺组织病理形态学变化,双抗夹心ELISA法检测IL-8含量,免疫组化和Western blot检测Caspase-3表达.结果 高氧暴露后肺泡腔内可见有坏死脱落细胞、炎症细胞渗出增多、间质水肿,肺组织结构紊乱,肺泡形成明显滞后,肺泡结构简单化和囊泡化;与空气对照组比较,高氧暴露4、7和14 d肺组织Caspase-3和IL-8含量均明显增高(P＜0.01).结论 在高氧所致早产大鼠肺损伤中细胞凋亡和坏死共存,两者共同参与了早产大鼠高氧肺损伤的病理过程.     

临床及实验室评估对早产儿医院感染早期诊断的意义

目的探讨临床评估及实验室检查对早产儿医院感染早期诊断的价值。方法制定早产儿感染评分表,选择2009年1月至2010年6月在菏泽市立医院新生儿病房住院及2010年7～12月在中国医科大学绍兴医院新生儿科住院的早产儿,在抗生素使用前及治疗5天时根据临床表现进行评分,同时在应用抗生素前进行实验室检查,分为败血症组、非败血症感染组(感染组)、非感染组(对照组),对不同组别、不同评分点评分的差异、临床表现、实验室检查的特异度、敏感度、误诊率、漏诊率、正确率、阳性似然比、阴性似然比进行统计学分析。结果败血症组(27例)初始评分最高(16.2±7.2)分,感染组(39例)其次(12.4±5.3)分,对照组(52例)最低(5.3±3.2)分,3组间差异有统计学意义(P<0.05);败血症组和感染组治疗后评分明显下降(7.3±3.9)分和(6.7±3.5)分,与对照组(5.2±3.0)分比较差异无统计学意义(P>0.05)。临床表现中反应低下、喂养困难、体温异常、皮肤循环差等对诊断有重要的预测价值,其中反应低下诊断价值最高;抗生素使用前的CRP和PCT阳性似然比较高(66.8%和72.5%),诊断价值最高,PLT有一定诊断价值。结论对早产儿进行临床评估是发现医院感染的基础,常规的实验室检查有助于早产儿医院感染的早期诊断。