双配体修饰脂质聚合物杂化纳米粒的制备及细胞摄取研究

目的制备双修饰的主动心肌靶向的载荧光探针香豆素-6(C-6)的脂质-聚合物杂化纳米粒(LPHNs),并考察其细胞摄取。方法通过巯基化反应,合成导向化合物心肌细胞靶向肽-聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺(PCM-PEG-DSPE)。选取C-6为荧光探针,采用自动组装法制备包载C-6的LPHNs,再通过插入法,用PCM和细胞穿膜肽(TAT)对C-6-LPHNs进行修饰。以心肌细胞(H9C2)为模型做体外细胞摄取实验。结果双修饰的C-6-LPHNs的平均粒径为74.5±4.2 nm,分散系数(PDI)为0.051±0.013,Zeta电位为-32.8±1.2 mV,包封率为87.04%±3.19%。双修饰的C-6-LPHNs对H9C2心肌细胞的摄取率明显高于未修饰的C-6-LPHNs。结论 LPHNs经双修饰后可促进H9C2心肌细胞的摄取。     

穿膜肽TAT和脑肿瘤靶向肽T7双修饰脂质体的制备和体外靶向性评价

本文旨在制备T7肽和穿膜肽TAT双修饰的脂质体(T7 and TAT dual modified liposomes,T7-TAT-LIP)用于血脑屏障和脑肿瘤细胞双级靶向药物递送。研究以CFPE为荧光探针,T7修饰的PEG-DSPE、TAT修饰的PEG-DSPE、卵磷脂、PEG-DSPE和胆固醇为材料,采用成膜水化法制备脂质体,对T7浓度、TAT浓度、连接T7和TAT的PEG长度进行优化,表征其粒径、zeta电位、形态和稳定性。以b End.3细胞和C6细胞为模型,考察T7-TAT-LIP的细胞摄取能力,表征其穿过血脑屏障和脑肿瘤细胞靶向能力。结果表明,T7用量为脂质的6%、修饰T7所用PEG链长为2000、TAT用量为脂质的0.5%、修饰TAT所用PEG链长为1000时所得到的双修饰脂质体被C6细胞摄取能力最强。优化后T7-TAT-LIP粒径为118 nm,zeta电位为-6.32 m V,透射电镜下形态圆整。脂质体在PBS中较为稳定,37℃放置24 h,浊度和粒径无明显变化;4~8℃放置1个月,粒径和PDI无明显变化。在不同时间点,b End.3和C6细胞摄取T7-TAT-LIP的强度均高于单配体修饰脂质体,且随着孵育时间提高,摄取浓度逐渐提高。这些结果说明,双修饰脂质体具有血脑屏障和脑肿瘤细胞双级靶向能力,且效果优于单配体修饰脂质体。     

脒修饰的包载荧光探针香豆素-6脂质体的制备

目的研究3,5-二-十五烷氧基苯甲脒(DBH)修饰的香豆素-6脂质体的制备工艺,并初步考察该脂质体的体外释放性能和肾小球靶向性。方法首先合成DBH。再以其为配基,胆固醇、大豆磷脂为载体材料,采用薄膜分散-超声法制备脒修饰的载香豆素-6荧光探针脂质体,考察其粒径分布、Zeta电位、包封率及体外累积释药率。结果脒基修饰的香豆素-6脂质体形态圆整,粒径分布为120.7±2.4 nm,Zeta电位为12.6±1.6 m V,包封率为99.7%±1.8%,体外的48 h累积释药量小于2%。结论脒基修饰的香豆素-6脂质体的制备工艺简便易操作,包封率高,性质稳定。     

膜修饰脂质体的制备及对心肌细胞的靶向作用

目的制备 3- {4 - [2- 羟基 (1- 甲基乙胺基 )丙氧基 ]辛基 }丙酸十六醇酯 (PAC)膜修饰脂质体 ,并对其体外心肌细胞靶向性进行研究。方法合成 β1 受体配体亲脂性化合物 (PAC)并制备PAC膜修饰的脂质体 (PAC- L) ;将荧光标记的脂质体加入体外培养的心肌细胞中 ,分别在常氧及缺氧条件下共同培养一定时间后 ,用荧光分光光度计测定心肌细胞摄取荧光脂质体的量。结果体外心肌靶向性研究表明PAC- L与心肌细胞有较强的亲和力 ,在常氧状态下心肌细胞对PAC L的摄取较Plain -L高约 3. 2倍 ,而在缺氧状态下心肌细胞对PAC- L的摄取较Plain- L高达 5 1倍。结论可初步判断PAC膜修饰脂质体具有较强的缺血心肌靶向性     

葡萄糖修饰的不同PEG作为桥联脂质体的体外特性研究

目的 制备用葡萄糖修饰以不同聚合度的PEG作为桥联的脂质体,并考察其体外特性.方法 以香豆素6为荧光探针,用薄膜分散法制备葡萄糖修饰的以PFG400、PEG800、PEG2000作为桥联的载香豆素6脂质体,用激发光散射粒度测定仪测定其粒径;用凝胶柱层析法测定其包封率;在含10%胎牛血清的磷酸盐缓冲液（PBS）中考察其稳定性;以大鼠脑毛细血管内皮细胞（BCECs）为受试细胞,对载香豆素6的不同类型脂质体进行细胞摄取的定量分析.结果 葡萄糖修饰的以PEG400、PEG800、PEG2000作为桥联的脂质体的粒径分别为（81.5±6.3）、（100.0±5.0）、（104.9±8.7）nm,多分散系数（PDI）分别为（0.252±0.016）、（0.265±0.032）、（0.289±0.013）;其包封率均〉80%;在含10%胎牛血清的PBS中具有较好的稳定性;葡萄糖修饰的以PEG800、PEG2000作为桥联的脂质体在BCECs中的细胞摄取率均高于普通脂质体.结论 本研究成功制备了葡萄糖修饰的以PEG400、PEG800、PEG2000作为桥联的脂质体,研究初步显示以PEG800、PEG2000为桥联的脂质体有一定脑靶向潜力.     

RGD肽修饰重组高密度脂蛋白载药纳米粒的制备和表征以及肿瘤细胞对其摄取作用

目的：制备和表征RGD肽修饰的重组高密度脂蛋白（RGD—rHDL）载药纳米粒,考察肿瘤细胞对其摄取作用。方法：合成RGD与载脂蛋白AI（ApoAI）的偶联物（RGD—ApoAI）,并以藤黄酸（GA）作为模型药物,采用薄膜分散法制得GA脂质体（LP—GA）,再将RGD—ApoAI与LP—GA共孵育,制备载有GA的RGD—rHDL纳米粒（RGD—rHDL—GA）;随后,对RGD—rHDL—GA进行表征,且采用荧光标记示踪法,通过RGD—rHDL-香豆素-6来考察人肝癌细胞HepG2对载药RGD—rHDL纳米粒的摄取作用。结果：制备的RGD—rHDL—GA呈现规则圆整的类球形,粒径分布均一[（110,70±3．25）nm],Zeta电位为（-39．21±0．10）mV,包封率为（92．20±0．28）％,载药量为（9．03±0．75）％,且其体外释药缓慢,稳定性良好;RGD—rHDL-香豆素-6的肿瘤细胞摄取率明显高于rHDL-香豆素-6。结论：rHDL经RGD修饰后可有效促进所载药物进入肿瘤细胞,提高其肿瘤靶向性。     

冰片-葛根素脂质体的制备及其脑靶向性研究

目的:制备冰片-葛根素脂质体,并考察其脑靶向性。方法:采用薄膜分散超声法制备冰片-葛根素脂质体,透射电子显微镜观察脂质体形态,激光粒度仪测定其粒径和Zeta电位,葡聚糖凝胶过滤法测定包封率。以葛根素注射液为参照,以相对摄取率和峰浓度比考察小鼠尾iv葛根素脂质体、冰片-葛根素脂质体的脑靶向性。结果:制备的冰片-葛根素脂质体呈圆形或类圆形,平均粒径为226 nm,多分散指数为0.263,Zeta电位为-21.3 m V,包封率为(65.32±2.13)%。以葛根素注射液为参照,葛根素脂质体和冰片-葛根素脂质体的相对摄取率分别为1.68、2.58,峰浓度比分别为1.15、1.42。结论:成功制得具有较好脑靶向性的冰片-葛根素脂质体。     

基于胆固醇上不同连接方式修饰的穿膜肽脂质体的对比研究

目的对比研究胆固醇上以酯键、醚键的不同连接方式修饰穿膜肽TAT(源于Tat蛋白碱性结构域的短肽)脂质体的体内外特性。方法以Rho-PE为荧光标记物,制备在胆固醇上以酯键、醚键的不同连接方式修饰穿膜肽TAT的脂质体,用激发光散射粒度仪测定其粒径;在小鼠血清中考察两种衍生物材料72 h稳定性;以HUVEC、C6、C26细胞为受试细胞,对标记Rho-PE的两种脂质体进行细胞摄取的定量分析;以DID为荧光标记物,以荷瘤小鼠(C26)为受试动物,考察肿瘤部位定量摄取。结果以酯键、醚键不同连接方式的胆固醇上修饰/未修饰有穿膜肽TAT的脂质体的粒径分别为114.50±12.31、113.80±6.74、103.10±1.91、105.10±2.06 nm;多分散系数(PDI)分别为0.227±0.029、0.207±0.039、0.203±0.009、0.216±0.016;小鼠血清中以醚键连接的胆固醇衍生物材料具有良好的稳定性。胆固醇上以不同连接方式修饰的TAT脂质体中,以醚键连接方式制备的脂质体的体外细胞摄取以及体内肿瘤摄取均优于酯键连接方式制备的脂质体。结论醚键修饰的胆固醇衍生物材料所制备的连接TAT的脂质体相较于酯键连接者,有较好的体内外摄取效果。     

心肌细胞靶向脂质体的制备及体外靶向性研究

目的制备心肌细胞靶向脂质体，并对其体外心肌细胞靶向性进行研究。方法选用与β₁-受体阻滞剂艾司洛尔结构类似的亲脂性化合物PAC修饰脂质体(PAC-L)；将荧光标记的普通脂质体(Plain-L)与PAC-L加入体外培养的心肌细胞中，在特定实验条件下共同培养一定时间后，用荧光分光光度计测定心肌细胞摄取荧光脂质体的量。结果PAC-L与心肌细胞有较强的亲和力，且心肌细胞对PAC-L的摄取显著高于非心肌细胞(P<0.001)；常氧条件下2 h心肌细胞对PAC-L的摄取较Plain-L高约2.9倍，而在缺氧条件下则高出5.2倍；心肌细胞对Plain-L的摄取约11%是以内吞方式摄取的，而对PAC-L则约有56%是以内吞方式进行的。结论本文制备的PAC-L具有较强的心肌细胞特异靶向性，有可能成为一种有效的缺血心肌靶向性药物载体。     

八聚精氨酸修饰的载紫杉醇脂质体的制备工艺研究

目的 研究八聚精氨酸(R8)修饰的载紫杉醇脂质体的制备工艺.方法 采用有机相反应法,将R8修饰到脂质体表面,并以薄膜分散-探头超声法制备载紫杉醇脂质体,以细胞摄取、粒径、PDI、包封率为主要指标对磷脂/胆固醇、药脂比、水化液种类、R8密度、DSPE-PEG2000密度进行筛选,进一步优化处方.结果 最优处方为磷脂-胆固醇2∶1、药脂比1∶40、水化液为PBS(pH6.5)、R8密度5％、DSPE-PEG2000密度3％,所制脂质体的粒径为156 ±2 nm,PDI＝ 0.25,包封率为80.87％±8.9％.结论 成功制备了八聚精氨酸(R8)修饰的载紫杉醇脂质体.     

成骨细胞的功能与损伤和骨质疏松的防治

骨质疏松是一种全身性骨骼疾病,导致骨折风险增加。成人的骨量通过破骨细胞的骨吸收和成骨细胞的骨形成作用来维持动态平衡,治疗骨质疏松症的理想策略是抑制破骨细胞的骨吸收和/或增强成骨细胞的骨形成功能。目前针对保护成骨细胞及增强其功能的骨质疏松疗法相对较少。因此,本文针对成骨细胞相关功能蛋白、各种细胞损伤机制（内质网应激、氧化应激、机械过载、微小RNA和长链非编码RNA的影响等）及骨质疏松的治疗与预防作一综述,以期为针对增强成骨细胞功能的骨质疏松治疗策略提供新思路。     

PTEN和DNA含量与非小细胞肺癌侵袭转移的关系探讨

目的 研究非小细胞肺癌(NSCLC)组织中抑癌基因PTEN的表达和DNA含量与NSCLC侵袭、转移的关系.方法 采用免疫组织化学SP方法检测PTEN在78例肺癌标本中的表达,并用流式细胞术检测30例肺癌标本中DNA含量.结果:肺癌标本中PTEN蛋白总缺失率为42.3%,有淋巴结转移组和无淋巴结转移组肺癌表达缺失率分别为52.1%和26.7%(P＜0.05),其表达缺失率随TNM分期增加而上升,分期越晚表达缺失率越高.PTEN缺失率高者生存时间短.DNA指数(DI)的分布范围在1.04～1.93.异倍体肿瘤24例,DI值随TNM分期增加而增加(P＜0.05),与淋巴结转移呈正相关.结论 肺癌组织中PTEN的表达与肺癌淋巴结转移有显著相关性,肺癌细胞DNA含量与肺癌TNM分期及淋巴结转移密切相关.检测PTEN蛋白表达和DNA含量将有助于判断肺癌的转移及预后.     

阿立哌唑与利培酮治疗自闭症谱系障碍与注意缺陷多动障碍共病患儿的疗效与安全性评价

目的：评价阿立哌唑与利培酮治疗自闭症谱系障碍（ASD）与注意缺陷多动障碍（ADHD）共病患儿的疗效与安全性。方法：选取在某院精神科治疗的ASD和ADHD共病患儿68例,根据随机数字表法将患儿分为阿立哌唑组（n=34）和利培酮组（n=34）。阿立哌唑组患儿接受起始剂量为5 mg·d^-1的阿立哌唑片口服治疗,最终剂量增加至15 mg·d^-1。利培酮组患儿接受起始剂量为1 mg·d^-1的利培酮片口服治疗,最终剂量增加至2 mg·d^-1;2组患儿均治疗12周。在基线（T₀）、治疗6周（T₁）与12周（T₂）时,采用注意缺陷/多动评定量表（ADHD-RS）评价患儿总体ADHD症状变化情况;采用康纳斯行为评定量表（CRSR）教师用量表多动因子（CRSR-I）评价患儿多动症的改善情况;采用CRSR不注意缺陷-冲动因子（CRSR-H）评价患儿注意力缺陷的改善情况;采用临床整体印象-严重程度量表（CGI-S）及儿童总体评估量表（C-GAS）评分评价患儿整体功能。对患儿的相关临床指标进行常规监测,比较2组患儿药物不良事件与安全性。结果：与T₀时比较,阿立哌唑组患儿T₁与T₂时,ADHD-RS、CRSR-I、CRSR-H与CGI-S评分均显著降低（均P<0.05）,C-GAS评分显著提高（P<0.05）。利培酮组患儿T₂时,ADHD-RS、CRSR-I、CRSR-H与CGI-S评分均显著降低（均P<0.05）,C-GAS评分显著提高（P<0.05）。2组患儿的ADHD症状显著改善,多动症状与不注意缺陷-冲动症状显著改善,患儿的整体功能也显著改善。2组患儿主要的不良事件是食欲增加、体质量增加与嗜睡,但均没有发生严重的不良事件。T₂时,利培酮组患儿催乳素水平显著提高（t=9.619,P<0.001）,其他临床指标没有显著性差异（均P>0.05）。结论：阿立哌唑和利培酮能够通过减少ASD和ADHD共病患儿的注意力涣散和多动症症状来改善患儿整体功能,具有较高的疗效、安全性,值得临床推广应用。     

Comparison of formation of thiolactones and active metabolites of prasugrel and clopidogrel in rats and dogs

1. Prasugrel and clopidogrel are antiplatelet prodrugs that are converted to their respective active metabolites through thiolactone intermediates. Prasugrel is rapidly hydrolysed by esterases to its thiolactone intermediate, while clopidogrel is oxidized by cytochrome P450 (CYP) isoforms to its thiolactone. The conversion of both thiolactones to the active metabolites is CYP mediated. This study compared the efficiency, in vivo, of the formation of prasugrel and clopidogrel thiolactones and their active metabolites.

2. The areas under the plasma concentration versus time curve (AUC) of the thiolactone intermediates in the portal vein plasma after an oral dose of prasugrel (1 mg kg^?1) and clopidogrel (0.77 mg kg^?1) were 15.8 ± 15.9 ng h ml^?1 and 0.113 ± 0.226 ng h ml^?1, respectively, in rats, and 454 ± 104 ng h ml^?1 and 23.3 ± 4.3 ng h ml^?1, respectively, in dogs, indicating efficient hydrolysis of prasugrel and little metabolism of clopidogrel to their thiolactones in the intestine.

3. The relative bioavailability of the active metabolites of prasugrel and clopidogrel calculated by the ratio of active metabolite AUC (prodrug oral administration/active metabolite intravenous administration) were 25% and 7%, respectively, in rats, and 25% and 10%, respectively, in dogs.

4. Single intraduodenal administration of prasugrel showed complete conversion of prasugrel, resulting in high concentrations of the thiolactone and active metabolite of prasugrel in rat portal vein plasma, which demonstrates that these products are generated in the intestine during the absorption process.

5. In conclusion, the extent of in vivo formation of the thiolactone and the active metabolite of prasugrel was greater than for clopidogrel’s thiolactone and active metabolite.

     

Whole-body retention of mercury and selenium and histopathological and morphological studies of kidneys and liver of rats exposed repeatedly to mercuric chloride and sodium selenite

Distribution and retention of mercury and selenium was studied in rats exposed repeatedly to HgCl₂ injections (0.5 mg Hg/kg to the tail vein every other day) and intragastrically to Na₂SeO₃ (0.5 mg Se/kg every day), applying combined and separate administration of these metals for 2 weeks. Whole-body retention of mercury in the presence of selenium was augmented by 20% and that of selenium in the presence of mercury by 4% with respect to the administered dose. Combined administration of mercuric chloride and sodium selenite brought about damage to the epithelial cells of renal proximal convolutions and formation of protein casts in their lumen. These changes had the same pattern as those induced by administration of mercuric chloride alone, but the intensity was lower. Submicroscopic studies revealed that repeated combined administration of sodium selenite and mercuric chloride did not completely abolish the mercury-induced mitochondrial swelling and contributed to chromatin destruction in the hepatocyte nuclei.This work was supported by the Section of Medical Sciences of the Polish Academy of Sciences (Agreement 537/VI)     

军地药品招标模式利弊分析及对军队药品招标的启示

目的分析现阶段全军统筹药材网上集中采购和地方基本药物招标采购实施情况,探索建立具有军队特色的药品招标模式。方法通过文献收集、实地调研和资料分析等方法,对军队和地方省市药品招标模式利弊进行分析。结果全军统筹药材网上集中采购在运行中存在一定问题,各省市基本药物招标有一定借鉴价值。结论建议总部组织专家,建立统一规范的药品质量评分指标体系和相关落实措施。     

阿立哌唑与利培酮治疗痴呆精神行为症状的疗效及安全性比较

目的观察阿立哌唑和利培酮治疗老年痴呆精神行为症状的疗效及安全性。方法采用随机对照研究,将具有精神行为症状的痴呆患者68例完全随机分为阿立哌唑组及利培酮组,各34例。阿立哌唑组患者服用阿立哌唑,起始剂量2．5mg／d,最大剂量不超过15mg／d;利培酮组患者口服利培酮,起始剂量0．5mg／d,最大剂量不超过3mg／d。疗程均为8周。治疗前和治疗第2、4、8周末采用痴呆病理分析评定量表（BEHAVE—AD）评定疗效,用副反应量表（TESS）评定不良反应,并于入组时和治疗第8周末分别检测2组患者空腹血糖、餐后2h血糖、TC、TG、LDL—C、HDL—C及体重。结果阿立哌唑组和利培酮组患者治疗2、4、8周后BEHAVE—AD评分均明显低于治疗前[阿立哌唑组：（14．8±4．2）、（10．2±3．6）、（6．8±2．8）分比（16．4±4．6）分;利培酮组：（15．2±3．9）、（11．8±3．8）、（7．2±3．0）分比（17．2±5．O）分,P〈0．05或P〈0．01]。2组患者间治疗前及治疗后BEHAVE—AD评分比较,差异均无统计学意义（P〉0．05）。2组不良反应发生率均为8．8％（3／34）,差异无统计学意义（P〉0．05）。利培酮组治疗8周末体重较治疗前增加明显[（71±6）kg比（66±6）kg,P〈0．05],TG及LDL—C升高[分别为（1．62±0．46）mmol／L比（0．96±0．29）mmol／L．（3．82±0．86）mmol／L比（3．08±0．74）mmol／L,而阿立哌唑组则改变不明显（均P〉0．05）。结论阿立哌唑治疗老年痴呆精神行为症状总体疗效、安全性与利培酮相当,但阿立哌唑对患者血糖、血脂及体重影响小于利培酮。     

痛经及其药物治疗的研究进展

痛经是妇科常见疾病,在临床上的表现也是轻重不同。在我国古代医学以及现代医学对这一临床病症的分类特点、发病机理、防治措施等多有研究,并且在实践中积累了丰富的药物诊治经验,本文就以上方面近年来的研究进展进行综述。