硫代乙酰胺诱导的小鼠肝内胆管癌模型特点研究

目的 建立硫代乙酰胺(thioacetamide, TAA)诱导的小鼠肝内胆管癌(intrahepatic cholangiocarcinoma, ICC)模型并探讨该模型的特点及形成机制,为ICC的病理机制和治疗药物的研究提供实验基础。方法 C57BL/6J小鼠分为正常对照组和TAA组,正常对照组小鼠饮用灭菌水,模型组小鼠饮用600 mg·L^-1的TAA溶液,连续饮用32周。眼球取血,检测血清中ALT、AST、DBIL和TBIL的水平;观察两组小鼠肝脏形态;HE、天狼猩红、Masson和普鲁士蓝染色观察肝脏组织病理改变;免疫组化检测CK7、CK19、Ki67、CD68、TNF-α和α-SMA的表达水平;RT-qPCR和Western blot检测ICC相关标志物mRNA和蛋白的水平;免疫荧光双标记检测肝脏组织中HNF4α⁺CK19⁺双阳性细胞。结果 与正常对照组比较,TAA组小鼠肝脏表面呈细颗粒状、质硬,肝内呈肿块性病变;病理检查结果显示,肝组织有炎症细胞浸润,肿瘤细胞排列成管状,肝组织有明显的纤维化;血清中ALT、A...     

秦皮素通过调节JAK1/STAT3信号通路抑制肝纤维化

目的探讨秦皮素对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化的防治作用及其机制。方法将48只成年雄性SD大鼠随机均分为4组,即正常对照组、模型组、秦皮素低剂量组和秦皮素高剂量组。除正常对照组外,其余3组大鼠给予50%CCl4花生油混合液(2 mL·kg-1)灌胃,每周2次,建立肝纤维化模型,持续8周。给药组造模的同时每日给予秦皮素干预,剂量分别为25 mg·kg-1和50 mg·kg-1。正常对照组给予等量的生理盐水。8周后处死各组大鼠,称量体重和肝重;全自动生化分析仪检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和总胆红素(TBIL);放射性免疫法测定血清透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(CⅣ)和Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)。HE和Masson染色考察肝组织病理学改变,免疫组织化学染色检测肝组织α-SMA的表达;Western blot检测肝脏组织中α-SMA和JAK1/STAT3信号通路关键蛋白的表达水平;Q-PCR检测肝窦毛细血管化调控因子(VEGF、β-FGF和PD-ECGF)基因的表达水平。结果与模型组相比,秦皮素给药组中肝纤维化大鼠肝功能指标(ALT、AST、TBIL)和纤维化指标(HA、LN、CⅣ、PⅢNP)血清水平明显减低。HE和Masson染色结果显示秦皮素能显著改善肝纤维化大鼠肝脏组织病理学结构和胶原沉积程度。与此同时,秦皮素能够抑制肝星状细胞激活标志物(α-SMA)以及肝窦毛细血管化调控因子(VEGF、β-FGF、PD-ECGF)的表达。与模型组相比,秦皮素给药组大鼠肝脏中p-JAk1和p-STAT3蛋白的表达水平显著降低。结论秦皮素可改善大鼠肝纤维化,其机制可能与抑制JAK1/STAT3信号通路有关。     

白杨素调控AMPK-NLRP3通路介导细胞焦亡对肝纤维化的保护作用

本研究探讨白杨素(chrysin)调控AMP活化激酶(AMP-activated kinase, AMPK)-NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3, NLRP3)通路介导的细胞焦亡途径对肝纤维化的保护作用。体内实验采用腹腔注射硫代乙酰胺(thioacetamide, TAA)建立小鼠肝纤维化模型,除对照组和单独给药白杨素组外,其余组第1周腹腔注射TAA (100 mg·kg-1) 3次,第2～5周腹腔注射TAA (200 mg·kg-1),每周3次。白杨素各给药组每天灌胃给药直至第5周。采用HE及Masson染色观察肝脏病理学变化,测量小鼠血清中天冬氨酸转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸转移酶(alanine aminotransferase, ALT)水平。所有动物实验均经大连大学附属中山医院伦理委员会批准(DWLL2019060)。体外细胞实验采用转化生长因子-β (transforming growth factor-β, TGF-β)诱导人肝星状细胞LX-2活化。Western blot法检测小鼠...     

肝纤维化模型中小鼠肝脏的病理变化及软肝冲剂的治疗作用

目的观察肝纤维化模型中小鼠肝脏的病理改变以及软肝冲剂对小鼠肝纤维化模型的治疗作用。方法将60只雄性SPF级C57B/L小鼠随机分为空白对照组、模型组、护肝片对照组、软肝冲剂低剂量组和软肝冲剂高剂量组,每组12只。空白对照组给予100%花生油1 mL/kg腹腔注射,每周2次,共10周;模型组给予含20% CCl_4的花生油1 mL/kg腹腔注射,每周2次,共10周;护肝片对照组给予含20% CCl_4的花生油1 mL/kg腹腔注射,每周2次,共10周,并从第3周起给予护肝片0.1 mg/(kg·d)灌胃至第10周;软肝冲剂低剂量组给予含20% CCl_4的花生油1 mL/kg腹腔注射,每周2次,共10周,并从第3周起给予软肝冲剂1 g/(kg·d)灌胃至第10周;软肝冲剂高剂量组给药剂量为5 g/(kg·d),造模及给药方法与低剂量组相同。在第10周通过摘除眼球取血,检测小鼠血清中的透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、三型前胶原(PCⅢ)、四型胶原(Ⅳ-C)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST);检测肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量;计算肝脏指数;观察小鼠肝脏的HE染色和MASSON染色病理组织学改变。结果模型组与空白对照组比较,小鼠血清中HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C、ALT和AST水平显著升高(P<0.05),肝脏组织中SOD显著降低(P<0.05),MDA显著升高(P<0.05),肝脏指数增加(P<0.05),病理切片显示肝细胞坏死并出现脂肪空泡、纤维组织增生和炎细胞浸润,MASSON染色显示肝组织内出现明显脂肪空泡和纤维组织增生;软肝冲剂组与模型组比较,小鼠血清中HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C、ALT和AST的水平显著降低(P<0.05),肝脏组织中SOD显著升高(P<0.05),MDA水平显著降低(P<0.05),肝脏指数降低(P<0.05),病理检查显示肝脏组织中无炎性浸润、脂肪空泡和纤维组织沉积,MASSON染色显示肝组织内出现明显脂肪空泡和纤维组织增生。结论 CCl_4腹腔注射可以形成小鼠肝硬化模型,病理改变以脂肪空泡出现和纤维化为主;软肝冲剂可以改善肝脏功能,减轻CCl_4诱导小鼠肝纤维化程度     

丹参素通过MEK/ERK信号通路抑制肝纤维化

目的探讨丹参素对大鼠肝纤维化的防治作用及其作用机制。方法将48只雄性成年SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、丹参素给药组(低剂量组20 mg·kg-1和高剂量组40 mg·kg-1),每组各12只。除正常对照组外,其余3组每周2次50%CCl4/橄榄油溶液(1 m L·kg-1)灌胃建立肝纤维化模型,同时治疗组大鼠分别每日1次腹腔注射丹参素20、40 mg·kg-1。8周后处死所有实验大鼠,观察其肝脏形态和肝脏指数的变化,HE和VG染色检测肝组织病理学的变化,全自动生化分析仪检测肝功能(AST、ALT)和肝纤维化指标(PⅢNP、collagenⅣ、HA、LN),Western blot测定肝组织中MEK/ERK信号通路相关蛋白,同时结合免疫组化、免疫荧光实验结果,探究丹参素抗肝纤维化作用的机制。实时定量PCR检测肝脏细胞外基质的降解(MMP-13、MMP-1、TIMP-1、collagenⅠ和collagenⅢ)、血管生成及调控因子(VEGF、β-FGF、PD-ECGF)及肝脏星状细胞激活因子(α-SMA,TGF-β,Desmin,Vimentin)m RNA的表达,检测Bcl-2、Bax、cleaved caspase 3、caspase-3蛋白表达量的变化,研究丹参素对肝星状细胞激活与凋亡的影响。结果与模型组相比,丹参素给药组显著提高大鼠肝功能指标,并降低其肝纤维化程度,同时大鼠肝组织病理学形态也获得了改善(P<0.05);丹参素增强Bax、cleaved caspase 3蛋白表达水平时的同时能降低Bcl-2及总caspase 3表达。实验结果表明丹参素能促进肝脏星状细胞的凋亡,有效调节细胞外基质的降解并降低血管生成调控因子的表达,抑制肝脏星状细胞的激活。同时丹参素能够降低肝组织中p-MEK、p-ERK蛋白的表达水平。结论丹参素可通过调节MEK/ERK信号途径发挥抗肝纤维化的作用。     

硫化氢对肥胖小鼠肝脂质蓄积的影响

目的探讨硫化氢对肥胖小鼠肝脏脂质蓄积的影响。方法 C57BL/6J小鼠,随机分为对照组、模型组、硫化氢干预组。对照组喂普通饲料,模型组和硫化氢干预组喂高脂饲料。从第13周开始,硫化氢干预组注射硫氢化钠,剂量为50μmol·kg-1·d-1,模型组注射等量生理盐水,16周末处死动物。肝脏组织匀浆,取上清,做生化检测,测量各组小鼠肝组织中甘油三酯、胆固醇含量;肝脏石蜡切片做H&E染色观察肝组织一般形态;冷冻切片,油红染色观察肝组织脂质蓄积情况;肝脏新鲜冰冻组织提取RNA,PCR检测小鼠肝脏中CPT-1、FAS的基因表达情况,并用ELISA法检测CPT-1、FAS的活性。结果模型组、硫化氢干预组小鼠体重明显高于对照组。与模型组相比,硫化氢干预组小鼠体重减轻;肝组织内甘油三酯、胆固醇含量明显下降;肝组织病理变化程度减轻,脂质蓄积减少;肝脏CPT-1表达及活性增高,FAS表达及活性降低。结论硫化氢可以降低肥胖小鼠肝组织脂肪含量,减轻肝脂肪变性程度,其机制可能与肝组织CPT-1表达增加、FAS表达下降有关。     

桦褐孔菌提取物介导LXRs信号通路调控肝纤维化

目的 探究桦褐孔菌提取物(Inonotus obliquus extract, IOE)介导肝X受体(liver X receptors, LXRs)信号通路调控肝纤维化。方法 采用腹腔注射硫代乙酰胺(thioacetamide, TAA)建立小鼠肝纤维化模型。同时,通过口服灌胃给予不同浓度IOE及水飞蓟素连续干预4周。末次给药后,小鼠安乐死收集肝脏和血清。检测不同浓度IOE对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells, HSCs)存活率的影响。转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)10μg·L^-1刺激HSCs 2 h,给予IOE(0、5、10、25μmol·L^-1)处理6 h。测定小鼠血清谷氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平,观察肝脏组织病理学改变,并通过Western blot和RT-PCR法检测小鼠肝脏和活化HSCs中α-SMA、collagenⅠ、炎症因子以及LXRα/β的蛋白和mRNA表达。结果 IOE可以明显降低TAA诱导的肝纤维化小鼠血清转氨酶水...     

根皮苷对血吸虫病肝纤维化小鼠肝脏中TGF-β1和PDGF-BB表达的影响

目的 探讨根皮苷对血吸虫病肝纤维化小鼠肝组织中转化生长因子β1(TGF-β1)和人血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)表达的影响.方法 用腹部贴片法感染昆明小鼠,建立血吸虫病肝纤维化模型,第6周末,肝纤维化模型建立;用吡喹酮杀虫两天后,用低、中、高剂量根皮苷(10、20、40 mg·kg-1·d-1)治疗,同时设病理模型组、空白对照和阳性对照(INF-γ)组;给药8周后,采用免疫组织化学检测各组大鼠肝脏组织中TGF-β1和PDGF-BB的表达,做HE染色测量血吸虫的虫卵结节.结果 TGF-β1和PDGF-BB含量在用药第4周到第8周呈降低趋势,且高剂量根皮苷组的各项指标最接近空白组,抑制血吸虫病肝纤维化作用明显;HE染色显示高剂量根皮苷组的肝脏变性坏死减轻明显,小叶结构完整;高剂量根皮苷组的TGF-β1和PDGF-BB含量与模型组、吡喹酮组、低剂量根皮苷组和中剂量根皮苷组的都有显著性差异(P＜0.01);与IFN-γ组比较无显著性差异(P＞0.05);根皮苷各剂量组和IFN-γ组的计分较模型组显著降低(P＜0.01),根皮苷低、中量组的计分与IFN-γ组的比较有显著性差异(P＜0.05),根皮苷各剂量组之间比较有显著性差异(P＜0.05).结果表明:根皮苷剂量呈量效增强关系.结论 根皮苷能降低血吸虫病肝纤维化小鼠肝脏中TGF-β1和PDGF-BB的表达,使血吸虫虫卵结节减小,使血吸虫病肝纤维化程度减轻.     

血管紧张素Ⅱ1型受体阻断剂--氯沙坦抑制CCl4诱导的大鼠肝纤维化

目的探讨血管紧张素Ⅱ1型受体阻断剂--氯沙坦对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的作用.方法SD大鼠按1 ml·kg-1体重皮下注射50?l4植物油溶液,用分光光度法测定血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)活性和肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量,并采用放免方法测定血清PCⅢ和HA含量.给药12周后取肝组织进行HE染色.结果氯沙坦剂量组(2.5,5,10 mg·kg-1,ig)、卡托普利组(100mg·kg-1,ig)明显降低肝纤维化大鼠血清转氨酶(ALT、AST)、PCⅢ、HA水平和肝组织中Hyp含量.组织病理学检查显示氯沙坦有减轻肝纤维化作用.结论氯沙坦对大鼠肝纤维化有抑制作用.     

丹酚酸A通过调节NF-κB/IκBα信号通路抑制肝纤维化

目的探索丹酚酸A抗四氯化碳(CCl_4)诱导的大鼠肝纤维化的防治及作用机制。方法将48只SD大鼠随机分为空白对照组、CCl_4模型组、丹酚酸A低剂量给药组和丹酚酸A高剂量给药组。除空白对照组外,其他3组每周2次给予50%CCl_4/花生油溶液(1 m L·kg-1)灌胃诱导建立肝纤维化模型,丹酚酸A低剂量和高剂量给药组大鼠同时每日1次给予腹腔注射丹酚酸A(分别为5 mg·kg-1与15 mg·kg-1)。6周后处死大鼠,HE和Masson染色法进行肝组织病理学观察;全自动生化分析仪检测血清肝功能指标(谷丙转氨酶及谷草转氨酶);放射免疫法测定血清肝纤维化指标(透明质酸、Ⅳ型胶原、层黏蛋白和Ⅲ型前胶原肽);Western blot检测肝脏组织中NF-κB和IκBα蛋白的表达;Q-PCR检测炎症因子以及肝星状细胞激活因子基因水平的表达。结果与CCl_4模型组相比,丹酚酸A给药组能够显著改善大鼠肝功能,降低大鼠肝纤维化程度(P<0.05)。与此同时,丹酚酸A给药组能够提高肝细胞浆中NF-κB、IκBα蛋白的表达,并降低细胞核NF-κB蛋白的表达,且能够抑制炎症因子与肝星状细胞激活因子基因水平的表达。结论丹酚酸A可通过调节NF-κB/IκBα信号通路发挥抗肝纤维化作用。     

六胺银套染马松三色染色在肾小球肾炎和肾小球病诊断中的应用

目的更好显示免疫复合物在肾小球肾炎和肾小球病中的形态和定位。方法采用六胺银套染马松三色染色。结果能更精确显示肾小球肾炎和肾小球病中各种免疫复合物的形态与定位,并可对肾小球内增生胶原成分区分为Ⅲ型和Ⅳ型。结论有利于病理医师观察,对提高肾小球病理诊断及科研工作具一定实用价值。     

脑膜炎双球菌对心肌肌膜损伤的研究

目的:研究脑膜炎双球菌(MC)感染家兔后,肿瘤坏死因子(TNF-α)在心肌肌膜损伤的作用。方法:脑膜炎双球菌—A群菌液,按1×10~(11)菌体/kg剂量,给清醒家兔静脉内注射制成模型(模型组),并以家兔静脉生理盐水为对照(对照组)。120分钟后处死动物,取心脏组织做TNF-α免疫细胞组化、碱性磷酸酶(ALP)细胞组织化学,常规电镜观察血浆TNF-α变化。结果:MC攻击家兔后,血浆TNF-α水平增高;TNF-α位于心脏血管外、间质内及心肌细胞膜外,正常心肌细胞内外未检测出TNF-α反应。心肌肌膜上ALP活性下降,心肌细胞损伤。结论:家兔经血行感染MC后,巨噬细胞释放TNF-α,TNF-α附着心肌细胞膜,引起膜损伤,导致心肌病变。     

Fast protein staining in sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel using counter ion-dyes,Coomassie brilliant blue R-250 and neutral red

A fast and sensitive protein staining method in sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) using both an acidic dye, Coomassie Brilliant Blue R-250 (CBBR) and a basic dye, Neutral Red (NR) is described. It is based on a counter ion-dye staining technique that employs oppositely charged two dyes to form an ion-pair complex. The selective binding of the free dye molecules to proteins in an acidic solution enhances the staining effect of CBBR on protein bands, and also reduces gel background. It is a rapid staining procedure, involving fixing and staining steps with short destaining that are completed in about 1 h. As the result, it showed two to fourfold increase in sensitivity comparing with CBBR staining. The stained protein bands can be visualized at the same time of staining.     

良恶性胃溃疡旁粘膜肠化生的观察

采用粘液组织化学染色方法，对５４例胃良恶性溃疡旁粘膜肠化生进行观察，发现胃癌癌旁粘膜不完全性结肠型肠化生的检出率明显高于胃溃疡病组。不完全性结肠型肠化生在组织学上有经异型增生向胃癌过渡的形态学特征，表示与胃癌关系密切，应视为癌前病变。提示临床对不完全性结肠型肠化生病例应追踪随访与复查，可及时发现早期胃癌。     

妇科白带3种检查方法效果分析

目的比较白带涂片多功能染色技术(BTR法)、生理盐水镜检法及革兰染色法在女性生殖道感染检查中的敏感性。方法感染症状明显患者200例作为研究对象,同一份标本同时做盐水涂片法和革兰染色法、BTR法检查,比较3种方法滴虫、真菌、线索细胞检出率。结果 3种检查方法的滴虫、真菌检出率差异无统计学意义(P>0.05)。BTR法线索细胞检出率高于盐水涂片法,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BTR法简便、快速、阳性率高,比盐水涂片法和革兰染色更适用于妇科普查。     

实时荧光定量PCR在肺结核诊断中的临床应用

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR荧光定量)对肺结核诊断的临床应用价值。方法用直接涂片检测抗酸菌法和FQ-PCR法对我院临床诊断为肺结核和疑似肺结核病人的168例痰和57例支刷物中的结核分枝杆菌菌体和基因分别同时检测,对两方法检出率进行统计学比较分析。结果痰直接涂片法阳性率为16.7%,FQ-PCR荧光法阳性率为30.4%,二者比较有显著性差异(P<0.01);支刷物涂片阳性率15.8%,TB-PCR荧光量阳性率31.6%,二者比较有差异(P<0.05)。结论FQ-PCR荧光定量法的检出率显著高于涂片法,提示FQ-PCR荧光定量法特异较强、敏感性较高,可提高诊断的阳性率,在结核的诊治中具有较好的应用价值。     

肥大细胞在血管瘤及血管畸形中的表达

目的：了解肥大细胞与血管瘤及血管畸形的关系。方法：采用甲苯胺蓝染色法,对72例血管瘤和20例血管畸形组织切片的肥大细胞进行测定。结果：肥大细胞在血管瘤组织中高表达,而在血管畸形组织中低表达（P＜0．01）,在血管瘤增殖期,退化早期和退化完成期三者之间,肥大细胞的表达存在着差异。血管内皮细胞增生程度越高,肥大细胞的数目越多（P＜0．05）。结论：提示肥大细胞与血管瘤的增生及退化有关,而与血管畸形无明显关系。     

不同的脱钙液在骨组织制片中的比较应用

目的比较不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力的差异,探讨其对HE染色的影响。方法选取50例手术切除的新鲜骨标本,运用4种常用的脱钙液(14%硝酸、10%盐酸、20%甲盐酸和EDTA脱钙液)进行脱钙,比较其脱钙效果和对HE染色的影响。结果不同的脱钙液对骨组织的脱钙能力、HE染色效果影响有显著区别。结论 14%硝酸脱钙能力最强,用时间最短,染色的效果最差;10%盐酸对骨组织的损伤小,HE染色的效果最好,但用时较长;20%甲盐酸脱钙能力和HE染色效果都介于10%盐酸和EDTA脱钙液之间;EDTA脱钙液脱钙用时最长,对骨组织的损伤最小。     

前列腺上皮内瘤病理形态特征及临床意义

前列腺上皮内瘤(PIN)与前列腺癌关系密切,尤其是高级别PIN(HGPIN)已被公认为唯一前列腺癌癌前病变[1]。HGPIN在临床上不易确诊,容易与前列腺不典型小腺泡增生(ASAP)、前列腺导管内癌(IDC-P)和前列腺非典型腺瘤性增生(AAH)相混淆。本文从病理学角度探讨良性前列腺增生(BPH)及前列腺癌中HGPIN病理学特征和免疫表型,以期提高对PIN的早期诊断。     

西洛他唑对脑缺血后神经元损伤的保护作用

目的：观察西洛他唑对小鼠持续性局灶性脑缺血后神经元损伤的剂量依赖性保护作用。方法：以大脑中动脉阻塞诱导小鼠持续性局灶性脑缺血。缺血前30min腹腔注射西洛他唑（3～30mg/kg）和普鲁司特（0.1mg/kg）。观察药物对缺血后神经元形态、密度的影响。结果：脑缺血损伤后,神经元密度降低,变性神经元密度增加。西洛他唑（3～10mg/kg）和普鲁司特能明显增加缺血侧存活神经元密度,减少变性神经元密度。结论：西洛他唑对小鼠持续性局灶性脑缺血后神经元损伤有保护作用。