苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞超微结构的影响

目的：研究苦参碱（Matrine,Mat)对人增生性瘢痕成纤维细胞超微结构的影响。方法：将Mat作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,利用透视电镜、扫描电镜观察细胞的形态变化。结果：Mat可使增生性瘢痕成纤维细胞的超微结构的发生变化;细胞内粗面质网减少,核糖体有部分脱粒,解聚现象,溶解体酶,核染色质浓缩集聚至核膜周边,出现凋亡早期的改变,细胞外表面较用药前光滑,合成分泌的基质明显减少,结论：Mat在体外能明显抑制增生性瘢痕成纤维细胞的功能并引起其超微结构发生改变。     

苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞合成胶原的影响

目的：研究苦参碱对人瘢痕成纤维细胞合成胶原的影响。方法：将苦参碱作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,分别测定其分泌胶原、Ⅲ型前胶原、细胞内胶原含量。结果：苦参碱可减少瘢痕成纤维细胞分泌胶原、细胞内胶原和Ⅲ型前胶原的含量。结论;苦参碱在体外能明显抑制增生性瘢痕成纤维细胞胶原的合成。     

苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨苦参碱（Matrine,简称Mat）的药理活性,研究苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的抑制作用,为皮肤损伤后出现的增生性瘢痕的治疗提供理论支持及实验依据。方法：将不同浓度梯度Mat作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞,测MTT反应的A。值及LDH值,利用通过流式细胞仪检测其细胞周期、DNA相对含量,用免疫组织化学检测Mat用药前后的细胞核内增殖性抗原（pr01iferatingcell nuclear antigen,PCNA）的表达。结果：增生性瘢痕成纤维细胞在一定范围内呈剂量依赖性增殖抑制,但LDH值无明显改变;DNA相对含量无明显变化,PCNA表达逐渐减弱。结论：Mat在体外能明显抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖而不引起细胞坏死性改变,但对DNA含量无明显影响。     

三七总甙对人增生性瘢痕成纤维细胞转分化的作用

目的 观察三七总甙（PNS）对人增生性瘢痕成纤维细胞（HSF）向肌成纤维细胞转分化的作用，探讨PNS抗瘢痕纤维化的机制。方法 体外培养HSF，采用不同浓度的PNS进行干预，根据细胞培养所加PNS浓度分为400μg／ml组、800μg／ml组及空白对照组（不加PNS）。采用细胞三维培养法检测HSF凝胶收缩情况，计算其收缩指数；免疫细胞化学染色法检测HSF中“平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达；流式细胞仪检测HSF中α-SMA阳性细胞率。结果 400μg／ml、800μg／ml组各时相点的胶原凝胶块收缩程度明显减轻，其收缩指数均小于空白对照组（P〈0．05或P〈0．01）。HSF中α-SMA阳性表达颗粒在细胞质内呈弥漫性分布；空白对照组HSF中α-SMA的阳性表达明显强于400μg／ml、800μg／ml组。400μg／ml、800μg／ml组α-SMA的阳性细胞率（31．52％、24．28％）均明显低于空白对照组（45．74％，P〈0．05）。400l,Lg／ml、800μg／ml组α-SMA的阳性细胞染色强度积分均明显低于空白对照组（P〈0．05或P〈0．01）。结论 PNS能够抑制HSF向肌成纤维细胞的转分化，具有体外抗瘢痕纤维化的作用。     

大黄素对人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖及细胞周期作用的实验研究

目的观察大黄素对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及细胞周期的作用,以寻找治疗人增生性瘢痕的有效药物。方法将切取于增生性瘢痕患者的瘢痕组织标本分成A（对照组）、B、C、D四组,每组6个标本,行体外成纤维细胞培养,采用0、50、100、200μg/ml的大黄素依次对A、B、C、D组的成纤维细胞进行干预,应用MTT比色法和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期的变化。结果B、C、D组标本中成纤维细胞的增殖受到抑制,抑制于G0/G1期（P〈0.05）,与A组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。而且大黄素在50～200μg/ml的范围内,对成纤维细胞增殖的抑制有浓度的依赖性。结论大黄素具有体外抗纤维化作用,可能成为治疗人增生性瘢痕的有效药物。     

蛇床子素诱导人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡及其机制研究

目的 研究蛇床子素在体外实验中诱导人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡及其机制.方法 体外原代培养人增生性瘢痕成纤维细胞,以不同浓度的蛇床子素作用于FB,应用MTT法检测蛇床子素对细胞增殖活性的影响.Hoechst 33342荧光染色后,荧光显微镜下观察细胞核的变化.以DNA ladder和流式细胞仪进行凋亡检测.采用RT-PCR法检测蛇床子素对FB相关凋亡基因Bcl-2和Bax的mRNA表达的影响.结果 在蛇床子素作用下,人增生性瘢痕成纤维细胞的生长受到抑制,MTT法检测的IC50为(15.5±2.2)μmol/L.荧光显微镜观察到了凋亡小体;DNA ladder法检测到细胞凋亡时DNA降解形成的梯带,流式细胞仪观察到细胞周期的变化.蛇床子素作用于成纤维细胞后可上调促凋亡基因Bax的表达,同时下调抑凋亡基因Bcl-2的表达.结论 蛇床子素对人增生性瘢痕成纤维细胞有很强的生长抑制作用并可以诱导其凋亡,其作用机制可能与影响Bcl-2、Bax等凋亡调控基因的表达有关.     

肝细胞生长因子对正常皮肤和增生性瘢痕成纤维细胞的影响

目的:采用携带肝细胞生长因子(HGF)腺病毒转染正常皮肤成纤维细胞(NFB)和增生性瘢痕成纤维细胞(HFB)后,观察HGF对这两种细胞作用的差异,为HGF基因治疗病理性瘢痕提供理论基础。方法:分离培养HFB和NFB,以不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒(Ad-GFP)转染细胞,用流式细胞仪检测转染效率;以MOI为100携带HGF基因的腺病毒(Ad-HGF)转染HFB和NFB48h后,酶联免疫吸附法检测细胞上清中HGF、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达;应用免疫组织化学方法检测正常皮肤和增生性瘢痕组织中MMP-1和TGF-β1的分布。结果:NFB和HFB在腺病毒转染效率和HGF表达方面差异无显著性,但HGF能明显促进HFB分泌MMP-1,抑制HFB表达TGF-β1。结论:促进HFB分泌MMP-1和抑制HFB表达TGF-β1可能是HGF治疗病理性瘢痕的细胞和分子生物学基础。     

苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞细胞周期和DNA含量的影响

目的；研究苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞周期和DNA含量的影响。方法：将不同浓度梯度苦参碱作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞，计算其群体倍增时间，通过流式细胞仪检测其细胞周期，DNA相对含量。结果：不同浓度梯度的苦参碱作用增生性瘢痕成纤维细胞，其群体倍增时间与苦参碱浓度呈正相关；随着苦参碱作用细胞的时间逐渐延长，出现G0／G1期数量增加，S期，G2－M，细胞数量逐渐减少，DNA相对含量无显著变化。结论：苦参碱能明显抑制增生性瘢痕成纤维细胞的有丝分裂，但DNA含量无明显改变。     

转染NF-1基因对人增生性瘢痕成纤维细胞胶原表达的影响

目的探讨重组NF1基因转染人增生性瘢痕成纤维细胞的可行性,以及转染NF1基因对细胞增殖速率和Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的影响。方法体外重组NF1基因,借助真核表达载体系统,转入体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞,通过激光共聚焦显微镜观察报告基因表达,并确定细胞转染效率。应用Real time PCR法比较转染前后NF1 mRNA及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达;采用CCK-8比色法,比较转染细胞与未转染细胞增殖状况。结果基因转染后,约50%的被转染细胞表达绿色荧光;NF1 mRNA在转染组、转染空载体组、未转染组细胞中的表达分别为:7.27±1.16、2.01±0.38、1.87±0.29,转染组NF1 mRNA相对表达量较未转染组和转染空载体组明显增高(P<0.01,n=5);Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA在转染组、转染空载体组、未转染组细胞中的表达分别为:3.01±0.48和2.05±0.25、0.89±0.18和0.94±0.16、0.99±0.11和0.92±0.19;转染组Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA相对表达量较未转染组和转染空载体组均明显增高(P<0.01,n=5)。结论瘢痕成纤维细胞可作为NF1转染的靶细胞,NF1基因可能是导致...     

水蛭素抑制增生性瘢痕成纤维细胞的实验研究

Objective To study the effect of hirudin on the function of human hyperplastic scar fi-broblasts (HSFBs). Methods HSFBs were cultured in vitro. Hirudin solution in the concentration of 1, 10, and 50 kU/L was respectively added into DMEM culture medium to form 1, 10, and 50 kU/L hirudin groups, with 9 wells in each group. HSFBs cultured without hirudin were set up as control group. Cell inhi-bition rate, secretion level of TGF-β1 from cells, and expression levels of mRNA of type Ⅰ and Ⅲ precolla-gem were determined at 24, 48, and 72 h after culture. Results Inhibition rates of HSFBs growth was re-spectively ( 29.3 ± 0.9) % , ( 30.1 ± 0.3 ) % , and (45.2 ± 1.9 ) % when cultured with 10 kU/L hirudin for 24, 48, and 72 hs, which were higher than those in control group [ (0.0±0.0)% , P <0.05]. There was statistically significant difference between control group and 1 and 50 kU/L hirudin groups in the inhibition rates of HSFBs at some time points ( P <0.05). Secretion level of TGF-β1 of HSFBs in 1, 10, 50 kU/L hirudin groups was respectively (228.5±1.8), (210.5±11. 1), and (168.5±14.1) pg/mL when cul-tured for 48 hs, of which the last 2 figures were significantly lower than that of control group [ (265.0±1.5) pg/mL, P < 0.05 ]. Hirudin in the concentration of 10 and 50 kU/L could inhibit the expression of mRNA of type Ⅰ and Ⅲ precollagen in HSFBs. Conclusions Hirudin solution in the concentration of 10 and 50 kU/L can inhibit the proliferation of HSFBs and secretion of TGF-β1 and collagen in certain degree.     

5,7,4′-三羟基异黄酮对增生性瘢痕成纤维细胞增殖细胞核抗原表达及细胞周期的影响

目的 观察5,7,4′-三羟基异黄酮(genistein)对增生性瘢痕成纤维细胞增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)及细胞周期的影响,探讨5,7,4′-三羟基异黄酮抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖的机制.方法 分离培养人增生性瘢痕成纤维细胞,分别加入25、50、100 μmol/L浓度的5,7,4′-三羟基异黄酮共培养48 h,免疫细胞化学法观察成纤维细胞PCNA蛋白的表达,流式细胞术检测细胞周期的变化.结果 各组5,7,4′-三羟基异黄酮作用后细胞PCNA的表达均降低(P＜0.05),50 μmol/L及100 μmol/L浓度组的抑制作用最为显著(P＜0.01);随药物浓度的增加,G0～G1期细胞比例逐渐下降,G2～M期细胞比例增加,表明细胞分裂受到抑制;100 μmol/L组的S期细胞数量比例也有增加,并于G1期前出现亚二倍体凋亡峰.结论 5,7,4′-三羟基异黄酮可通过影响细胞分裂与DNA合成抑制瘢痕增生.     

丹皮酚对增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用

目的探讨丹皮酚对增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用。方法自2018年9月至2020年6月北部战区总医院烧伤整形科提取原代增生性瘢痕成纤维细胞后,将细胞平分为4组,分别采用0μmol/L(对照组)、50μmol/L、100μmol/L的丹皮酚及10μmol/L的5-氟尿嘧啶(5-Fu)处理;CCK-8实验检测细胞处理后第0、3、5、7天的增殖情况。处理3 d后通过ELISA实验检测增生性成纤维细胞中活性氧基团或分子、丙二醛和超氧化物歧化酶的含量;Western blot实验检测丹皮酚对于细胞中TGF-β1、Ⅰ和Ⅲ型胶原的表达情况。结果50、100μmol/L的丹皮酚和10μmol/L的5-FU分别作用于细胞3 d后与对照组相比,对于细胞增殖的抑制率分别为(32.63±3.06)%、(46.41±4.41)%和(45.32±9.26)%,组间比较差异显著,具有统计学意义(P<0.05)。丹皮酚能够显著下调增生性成纤维细胞中ROS和MDA的表达情况,上调SOD的含量,降低TGF-β1、Ⅰ和Ⅲ型胶原的表达。结论丹皮酚能够抑制增生性瘢痕成纤维细胞的生长、减轻氧化应激损伤,下调TGF-β1和胶原的表达。     

人增生性瘢痕成纤维细胞的间充质干细胞表型及多向分化潜能

目的 探讨人增生性瘢痕来源的成纤维细胞的细胞表型及分化潜能,以进一步研究其在增生性瘢痕形成中的作用.方法 从手术切除的增生性瘢痕中提取并分离培养成纤维细胞,以倒置显微镜观察其细胞形态及生长特点.待细胞培养传代至第3代,采用Vi-CELL细胞计数仪检测细胞生长情况,流式细胞仪检测成纤维细胞间充质干细胞表型标志CD73、CD44、CD105、CD90、CD34、CD45、CD14的表达情况;通过免疫细胞化学检测该细胞CK19、Oct 4、Vementin的表达情况及免疫荧光检测α-平滑肌肌动蛋白;诱导分化检测细胞向成骨、成软骨和成脂细胞方向分化能力.结果 细胞原代培养初期贴壁散在分布,生长曲线显示细胞1 ～2d生长较慢,从3～5d左右细胞生长较快,6～7d细胞进入平台期;第2代第5天细胞多为长梭形,呈放射状、漩涡状排列.细胞流式结果显示细胞表型CD90、CD44、CD105、CD73呈高表达,CD45、CD34、CD14不表达;免疫细胞化学检测间充质细胞标记物Vementin、多能干细胞标志物Oct 4均呈阳性表达,免疫荧光检测α-平滑肌肌动蛋白呈阳性表达,上皮细胞标志物CK19呈阴性表达,多向诱导分化实验该细胞可向成骨、成软骨和成脂细胞分化,具有多向分化潜能.结论 人增生性瘢痕来源成纤细胞具有间充质干细胞样生物学特性,该生物学特性可能在增生性瘢痕的形成以及创面修复中发挥至关重要的作用.     

人脂肪来源间充质干细胞条件培养基对病理性瘢痕成纤维细胞生物学行为的影响

目的探讨人脂肪间充质干细胞条件培养基(human adipose-derived mesenchymal stem cells conditioned media,hADSCs-CM)对病理性瘢痕成纤维细胞增殖、迁移能力的影响。方法分离培养hADSCs和病理性瘢痕成纤维细胞,取第3代细胞用于后续实验。于培养12、24、48 h收集hADSCs条件培养基作为实验组条件培养基(12 h-CM、24 h-CM、48 h-CM),无hADSCs的空白无血清低糖DMEM培养基置于培养箱内12、24、48 h作为对照组条件培养基(12 h-CC、24 h-CC、48 h-CC)。选取增生性瘢痕成纤维细胞(HSFs)、瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFs)以及正常皮肤成纤维细胞(NFs),分别以实验制备的培养基进行处理,每组培养基3个复孔,以CCK-8实验检测HSFs及KFs的增殖能力,以细胞划痕实验检测条件培养基处理后细胞迁移能力的变化,流式细胞仪分析细胞的周期分布、凋亡及乳酸脱氢酶(LDH)水平变化情况。实验数据以Graphpad 7.0软件进行分析,多组样本均数比较应用One-Way ANOVA,P<0.05为差异有统计学意义。结果CCK-8结果显示,24 h-CM、48 h-CM处理后24 h KFs、HSFs的增殖速度较对照组开始出现明显减慢,HSFs增殖趋势也出现了类似的变化趋势,NFs无明显的增殖趋势变化;实验组条件培养基对HSFs增殖的抑制作用在48 h达到峰值:24 h-CM KFs增殖活性为1.81±0.10,24 h-CC KFs为2.36±0.05(t=4.24,P<0.001);24 h-CM HSFs增殖活性为1.52±0.10,24 h-CC HSFs为1.96±0.15(t=8.98,P=0.001);48 h-CM KFs增殖活性为1.65±0.10,48 h-CC KFs为2.57±0.10(t=26.64,P<0.001);48 h-CM HSFs增殖活性为1.29±0.20,48 h-CC HSFs为1.94±0.10(t=11.14,P<0.001);之后抑制作用渐弱。细胞划痕实验结果表明,与对照组相比,24、48 h收集的hADSCs-CM处理后HSFs和KFs的迁移能力下降。细胞周期检测结果显示,在KFs中,12 h-CM、24 h-CM、48 h-CM组细胞处于G0/G1期的细胞比例较对照组升高,而处于S期的细胞比例则较对照组下降,在HSFs中也观察到了类似的现象。细胞凋亡检测结果显示各组NFs、KFs、HSFs未见明显凋亡。LDH漏出检测结果显示各组间无明显差异。结论hADSCs条件培养基可能通过其中含有的分泌因子抑制病理性瘢痕成纤维细胞的增殖、迁移,但不诱导其凋亡。     

褪黑素对增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的调控

目的 探讨褪黑素对增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的调控.方法 分离培养增生性瘢痕成纤维细胞,采用四氮唑复合物/硫酸酚嗪甲酯(XTT/PMS)法检测细胞增殖活性,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清液中β1转化生长因子(TGF-β1)含量和荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原Ⅰ和胶原ⅢmRNA表达,评价褪黑素和褪黑素受体拮抗剂(luzindole)对增生性瘢痕成纤维细胞生物学活性的影响.结果 褪黑素抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,抑制效果呈浓度依赖性(P＜0.05);高浓度褪黑素(10-3 mmol/L)可降低增生性瘢痕成纤维细胞产生TGF-β1 (P＜0.05)和α-SMA mRNA、胶原Ⅰ mRNA的表达(P＜0.05);褪黑素受体拮抗剂能阻断褪黑素对细胞产生TGF-β1和α-SMA、胶原Ⅰ mRNA表达的抑制作用(P＜0.05);但褪黑素对该细胞胶原ⅢmRNA表达无影响(P＞0.05).结论 褪黑素可通过与受体结合调控增生性瘢痕成纤维细胞的生物学活性.     

探讨硫酸软骨素酶在兔耳增生性瘢痕模型中的作用

目的应用兔耳模型探讨硫酸软骨素裂解酶在增生性瘢痕中的作用。方法将健康的日本大耳白兔12只,随机分成胶原酶治疗组(A组)、硫酸软骨素裂解酶与胶原酶混合治疗组(B组)、硫酸软骨素裂解酶治疗组(C组)、对照组(D组)。采用复合染色法观察组织形态学变化,并进行图像定量分析,羟脯氨酸含量测定。结果各治疗组酸性黏多糖染色变浅,数量减少,胶原纤维被破坏,排列稀疏。A、B、C、D组的羟脯氨酸含量,随着时间的变化其含量不一致(P<0.05),A、C组与B组比较在第28天差异有显著意义(P<0.05),B组与A组比较在第35天差异有显著意义(P<0.05),在用药两周后B组羟脯氨酸含量始终低于其他各组。结论硫酸软骨素裂解酶水解了硫酸软骨素,在去除了胶原纤维周围的酸性黏多糖后,促进了胶原的降解,提示可能为瘢痕的治疗提供新的途径。     

探讨硫酸软骨素酶在兔耳增生性瘢痕模型中的作用

目的应用兔耳模型探讨硫酸软骨素裂解酶在增生性瘢痕中的作用。方法将健康的日本大耳白兔12只，随机分成胶原酶治疗组（A组）、硫酸软骨素裂解酶与胶原酶混合治疗组（B组）、硫酸软骨素裂解酶治疗组（C组）、对照组（D组）。采用复合染色法观察组织形态学变化，并进行图像定量分析。羟脯氨酸含量测定。结果各治疗组酸性黏多糖染色变浅，数量减少，胶原纤维被破坏，排列稀疏。A、B、C、D组的羟脯氨酸含量，随着时间的变化其含量不一致（P〈0．05），A、C组与B组比较在第28天差异有显著意义（P〈0．05），B组与A组比较在第35天差异有显著意义（P〈0．05），在用药两周后B组羟脯氨酸含量始终低于其他各组。结论硫酸软骨素裂解酶水解了硫酸软骨素，在去除了胶原纤维周围的酸性黏多糖后，促进了胶原的降解，提示可能为瘢痕的治疗提供新的途径。     

The therapeutic effect of Interleukin-18 on hypertrophic scar through inducing Fas ligand expression

ObjectiveAmong downstream interleukin-18 (IL-18) targets, Fas ligand (FasL) in particular, has been strongly implicated in many conditions. Our study aims to explore the role of IL-18 in hypertrophic scar through enhancing FasL expression.MethodsIL-18 expression in hypertrophic scar tissues and normal tissues were explored by immunohistochemistry, qRT-PCR and Western blotting, and the expression of IL-18 in normal skin fibroblasts and hypertrophic scar fibroblasts by immunofluorescence. Hypertrophic scar fibroblasts treated with recombinant human IL-18 (rhIL-18) were assessed with MTT, Annexin V-FITC/PI, qRT-PCR, ELISA and western blotting. In the hypertrophic scar of rabbit ears, rhIL-18 was injected to determine histological changes with HE and Masson staining. Additionally, the scars were rated based on contour and overall severity using a visual analog scale scores (VAS).ResultsIL-18 was decreased in hypertrophic scar tissues and fibroblasts compared to normal skin tissues and fibroblasts, respectively. Decreased proliferation and increased apoptosis of hypertrophic scar fibroblasts were found after rhIL-18 treatment with enhanced expression of FasL, sFasL FADD, Caspase-8, Caspase-9 and Caspase-3 in a dose-dependent manner. The VAS and thickness of scars in rabbit ears was decreased as time went on after rhIL-18 treatment, with decreases in scar elevation index (SEI) and the increases in FasL expression.ConclusionIL-18 curbs proliferation and promotes apoptosis of hypertrophic scar fibroblasts by enhancing FasL expression. IL-18is a potential target for treatment of hypertrophic scar.