消瘀泄浊饮对糖尿病肾病肾衰竭患者 血清瘦素的影响

目的 消瘀泄浊饮对糖尿病肾病（DN）慢性肾脏病（CKD）3~5 期患者血清瘦素（LP）干预作用。 方法 按随机原则将80 例DN CKD3~5 期患者分为治疗组和对照组,每组各40 例。对照组予以西医常规治疗; 治疗组在对照组基础上采用消瘀泄浊饮治疗,1 剂/d,两组疗程均为3 个月。检测治疗前后LP 进行主要症状评 分。结果 两组治疗后LP 下降,治疗组LP 水平低于对照组（P <0.05）;治疗组治疗后主要症状、体征积分低于 对照组（P <0.05）。结论 在西医常规基础上,消瘀泄浊饮对DN CKD3~5 期患者肾功能有一定的保护作用,延 缓肾衰竭的进程。     

消瘀泄浊饮对急性马兜铃酸肾病大鼠肾损害的干预作用

[目的]观察消瘀泄浊饮对急性马兜铃酸肾病(Aristolochic Acid Nephropathy,AAN)大鼠肾小球及肾小管损伤的干预作用。[方法]将大鼠随机分为模型组、治疗组,另设正常组。造模后,模型组留取静脉血,测定血清肌酐(Serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平后直接处死,并取出肾脏组织低温保存;治疗组与正常组分别采用消瘀泄浊饮、生理盐水灌胃治疗4周后处死,同样留取静脉血及肾脏组织。观察、比较各组肾脏病理组织情况。[结果](1)比较各组Scr、BUN平均水平,模型组明显高于正常组、治疗组(P<0.05);治疗组高于正常组(P<0.05)。(2)肾脏组织病理观察:正常组肾脏组织基本正常;模型组主要表现为肾小管上皮细胞大量坏死崩解,肾间质灶性炎细胞浸润,肾小球基本无明显病理变化或有轻度系膜增生,治疗组肾脏组织受损程度与模型组比较相对较轻。[结论]消瘀泄浊饮对急性AAN的肾小球及肾小管的损伤有一定保护作用,能降低血清肌酐及尿素氮水平,修复肾小管损伤,减轻肾脏组织病理损害。     

消瘀泄浊饮对慢性环孢素肾病大鼠保护作用的机制研究

[目的]观察消瘀泄浊饮对慢性环孢素肾病大鼠肾素(renin)、血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)、转化生长因子-β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)的影响。[方法]将40只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、消瘀泄浊饮组、洛汀新(盐酸贝那普利)组各10只。采用环孢素灌胃及低盐饮食建模,治疗4周后检测大鼠血清肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、尿肌酐、24小时尿蛋白总量,并计算肌酐清除率(creatinine clearance,Ccr),用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)观察大鼠的肾脏组织病理学改变,免疫组化法观察肾脏组织IV型胶原(collagen-Ⅳ,Col-Ⅳ)表达情况;酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbentassay,ELISA)法检测血清及肾组织Renin水平,实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测肾脏组织AngII、TGF-β_1m RNA表达情况。[结果]相比于模型组,洛汀新组及消瘀泄浊饮组大鼠Scr、Bun、Ccr及24小时尿蛋白明显改善,血清肾素水平下降,肾组织AngⅡ、TGF-β_1m RNA及肾素、Col-Ⅳ表达下调,肾脏病理纤维化程度明显降低,消瘀泄浊饮组大鼠死亡率低于洛汀新组和模型组。[结论]消瘀泄浊饮可通过下调Renin、AngⅡ表达、抑制TGF-β信号转导,延缓慢性环孢素肾病的进展。     

消瘀泄浊饮治疗慢性肾脏病气虚夹瘀证临床疗效观察

[目的]观察消瘀泄浊饮治疗慢性肾脏病（chronic kidney disease,CKD）气虚夹瘀证的临床疗效。[方法]选取CKD3-4期气虚夹瘀证患者60例,按随机化方法随机分成西医组（30例）和中西医结合组（30例）,西医组予以西医基础治疗,中西医结合组在西医基础治疗上加用消瘀泄浊饮。连续治疗12周,所有患者在服药时、服药后12周检查24h尿蛋白定量、肾功能、内生肌酐清除率eGFR。评价治疗前后的中医证候积分变化,对比总结临床疗效。[结果]两组治疗12周后临床疗效及中医证候疗效比较,中西医结合组均显著优于西医组（P〈0.05）。两组治疗后主要实验室指标均有改善,治疗后两组比较,血肌酐、血尿素氮、中医证候积分,中西医结合组显著低于西医组（P〈0.05）,eGFR显著高于西医组（P〈0.05）。[结论]西医基础治疗加用消瘀泄浊饮治疗CKD气虚夹瘀证患者,可更好的改善患者的肾功能及临床症状。     

消瘀泄浊饮对糖尿病肾病小鼠肾脏足细胞凋亡及HIF1α表达的调控作用

[目的]探讨消瘀泄浊饮对糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)小鼠肾脏足细胞凋亡的保护作用及对低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF1α)的影响。[方法]选用6只db/m小鼠为阴性对照组,18只db/db小鼠随机分为DKD模型组、低剂量消瘀泄浊饮组、高剂量消瘀泄浊饮组,每组6只。灌胃12周后,检测尿液中尿蛋白、β₂-微球蛋白(β₂-microglobulin,β₂-MG)、尿白蛋白/肌酐(albumin/creatinine ratio,Acr)、尿β₂-微球蛋白/肌酐(β₂-microglobulin/creatinine ratio,β₂-MG/Ucr)及血清甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、白蛋白(albumin,Alb)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum cre...     

消瘀泄浊饮中活性成分鉴定以及HPLC法测定其中5种关键成分

目的 利用高效液相色谱联合质谱技术鉴定消瘀泄浊饮中的活性成分,并利用HPLC法测定毛蕊异黄酮葡萄糖苷、大黄素、芦荟大黄素、杯苋甾酮、苦杏仁苷这5种成分的含量。方法 采用液质联用技术测定消瘀泄浊饮中的生物活性成分,色谱柱：Waters HSS T3(100 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为0.1%甲酸-水溶液→0.1%甲酸-乙腈-异丙醇,梯度洗脱;流速：0.3 mL/min;柱温：40℃。高分辨质谱：鞘气40 Arb;辅助气10 Arb;离子喷雾电压3000 V/-2800 V;温度350℃;离子传输管温度320℃;扫描模式为Full-scan MS2模式。采用Progenesis QI进行基线过滤、峰识别、积分、保留时间校正、峰对齐,对比公共数据库和实验室自建数据库后得到消瘀泄浊饮中的生物活性成分。选择Sharpsil-U C18色谱柱;流动相为甲醇→超纯水;梯度洗脱;流速：1.0 mL/min;柱温：30℃;进样量：10μL;检测波长：210 nm（苦杏仁苷、杯苋甾酮）,260 nm（毛蕊异黄酮葡萄糖苷、大黄素、芦荟大黄素）。结果 从消瘀泄浊饮中共找到276种生物活性成分,...     

消瘀泄浊饮对慢性环孢素肾病大鼠ACE2-Ang(1-7)-MAS轴相关组分表达的影响

[目的]观察消瘀泄浊饮对慢性环孢素肾病大鼠血管紧张素转化酶2-血管紧张素(1-7)[angiotensin converting enzyme 2-angiotensin(1-7),ACE2-Ang(1-7)]-MAS轴相关组分表达的影响。[方法] 40只雄性SD大鼠按随机数字表法分为空白对照组、模型组、消瘀泄浊饮组和贝那普利组,每组各10只。采用3mg·mL-1的环孢素A溶液灌胃及低盐饮食建模,灌胃4周后检测大鼠血肌酐(serum creatinine,Scr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平,并计算内生肌酐清除率(creatinine clearance rate,Ccr);以苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、Masson染色观察大鼠肾组织病理学改变,免疫组化法检测肾组织ACE2、Ang(1-7)和Ⅳ型胶原(collagenⅣ,ColⅣ)的表达;以酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清及肾组织ACE2、Ang(1-7)和肾素含量。[结果]与空白对照组比较,模型组大鼠BUN、Scr水平明显升高,Ccr明显下降(均P0.01);与模型组比较,消瘀泄浊饮组和贝那普利组大鼠BUN、Scr水平和Ccr明显改善(P0.01,P0.05,P0.05)。与空白对照组比较,模型组肾组织ColⅣ阳性染色面积、总光密度明显升高(均P0.01),而ACE2、Ang(1-7)阳性染色面积、总光密度均升高(P0.01,P0.05);与模型组比较,消瘀泄浊饮组和贝那普利组肾组织ColⅣ阳性染色面积、总光密度下降(均P0.01),肾组织ACE2、Ang(1-7)阳性染色面积、总光密度明显升高(均P0.05)。ELISA检测显示,与空白对照组比较,模型组肾组织和血清中肾素含量均显著升高(P0.01,P0.01),肾组织中ACE2含量显著升高(P0.05),Ang(1-7)含量显著下降(P0.05);血清ACE2、Ang(1-7)含量显著升高(均P0.01)。与模型组比较,贝那普利组肾组织中肾素含量降低(P0.05),而消瘀泄浊饮组和贝那普利组血清中肾素含量也降低(均P0.05);两组肾组织ACE2含量升高(P0.05),血清ACE2含量下降(P0.01);而肾组织和血清Ang(1-7)含量均升高(均P0.05);肾组织炎性细胞浸润及纤维化程度明显降低。消瘀泄浊饮组和贝那普利组数据差异无统计学意义(P0.05),两组肾组织炎性细胞浸润及纤维化程度也无明显差异。[结论]消瘀泄浊饮通过激活ACE2-Ang(1-7)-MAS轴,减少肾组织ColⅣ的沉积,从而延缓慢性环孢素肾病进展。     

消脂合剂调节PI3K/Akt/mTOR信号通路对肥胖小鼠糖脂代谢的影响

目的 探讨消脂合剂调节磷脂酰肌醇3激酶（phosphoinositide 3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）信号通路对肥胖小鼠糖脂代谢的影响。方法 将造模成功的肥胖小鼠50只随机分为5组,即模型组（蒸馏水）、低剂量组（3.5ml/kg消脂合剂）、中剂量组（7ml/kg消脂合剂）、高剂量组（14ml/kg消脂合剂）、阳性药组（30mg/kg吡格列）,每组各10只;未经高脂造模的小鼠10只纳入正常组（蒸馏水）,干预6周。观察各组小鼠干预后的Lee’s指数、体质量、腹围、糖脂代谢水平[空腹血糖（fasting blood glucose,FBG）、空腹胰岛素（fasting insulin,FINS）、三酰甘油（triglyceride,TG）、总胆固醇（total cholesterol,TC）、游离脂肪酸（free fatty acids,FFA）]、肝脏组织病理学,检测各组织中过氧化物酶体增殖物激活受体（peroxisome proliferator-activated receptor,PPARγ）、mTOR、PI3K、Akt蛋白及mRNA表达。结果 与模型组比较,消脂合剂呈剂量依赖性降低小鼠的Lee’s指数、体质量、腹围、FBG、FINS、TC、TG、FFA（P<0.05）;阳性药组具有相同作用（P<0.05）。肝脏组织病理结果显示,与模型组比较,各给药组小鼠肝细胞脂肪变性和空泡化明显减少。与模型组比较,消脂合剂呈剂量依赖性升高PPARγ、mTOR、PI3K、Akt的蛋白和mRNA表达水平（P<0.05）,阳性药组具有相同作用（P<0.05）。消脂合剂各剂量组之间以高剂量组疗效最佳,低剂量组最差（P<0.05）。结论 消脂合剂可调节肥胖小鼠的糖脂代谢,呈剂量递增效果,其机制可能与调节PI3K/Akt/mTOR信号通路上调PPARγ水平有关。     

川芎嗪对大鼠心肌再灌注损伤保护机制的实验研究

目的:观察川芎嗪对大鼠心肌缺血再灌注(IR)损伤的保护作用以及其作用机制。方法:建立在体大鼠心肌IR模型,随机分为假手术组,IR组,川芎嗪低、中、高剂量组以及川芎嗪+渥曼青霉素组。测定血浆肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,心肌梗死面积,缺血心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,Western blotting法检测心肌磷酸化蛋白激酶B(Akt)、磷酸化内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达。结果:与IR组相比,川芎嗪中、高剂量组的血浆CK-MB和LDH水平降低,心肌组织MDA含量减少,SOD活性增加,心肌梗死面积减小,Akt磷酸化水平增高,川芎嗪各组eNOS磷酸化水平均增高。渥曼青霉素显著抑制川芎嗪所致的Akt和eNOS磷酸化,并能消除川芎嗪的心肌保护作用。结论:川芎嗪预处理能减少大鼠心肌缺血再灌注损伤且与剂量相关,其通过磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/Akt-eNOS信号通路保护在体大鼠再灌注损伤心肌。     

消瘀泄浊饮对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮-间质转分化及PAR-3表达的影响

[目的] 通过检测极性蛋白-3(partitioning defective-3,PAR-3)在单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)所导致的肾间质纤维化大鼠中的表达,探讨消瘀泄浊饮对肾小管上皮-间质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。[方法] 将40只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型(UUO)组、西药(贝那普利)组和中药(消瘀泄浊饮)组。从术后1 d起,每天分别给予消瘀泄浊饮药液10.4 g/(kg·d)和盐酸贝那普利溶液1 mg/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组以等体积0.9%氯化钠注射液灌胃4周。给药结束后分别检测白蛋白(albumin,ALB)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,Scr)、尿酸(uric acid,UA)水平;取手术侧肾组织分别采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色及Masson染色进行相关病理检测;采用免疫荧光和免疫印迹法分别检测肾组织PAR-3的表达;采用免疫组化检测肾组织E-钙黏蛋白(E-cadherin)及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白的表达。[结果] 与假手术组比较,模型组、西药组、中药组BUN、Scr、UA水平均增高,差异有统计学意义(均P＜0.05);与模型组比较,中药组BUN、Scr、UA水平均降低,差异有统计学意义(均P＜0.05);与西药组比较,中药组Scr、UA水平均降低,差异有统计学意义(均P＜0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠肾小管间质损伤指数和肾间质纤维化相对面积均升高(均P＜0.05);与模型组比较,西药组、中药组肾小管间质损伤指数和肾间质纤维化相对面积均降低(均P＜0.05)。与假手术组比较,其余各组大鼠肾组织PAR-3水平均下降(均P＜0.05);与模型组比较,中药组肾组织PAR-3表达升高(P＜0.05)。与假手术组比较,其余各组大鼠肾组织α-SMA表达增加,E-cadherin表达减少(均P＜0.05);与模型组比较,西药组、中药组大鼠肾组织α-SMA表达减少,E-cadherin表达增加(均P＜0.05)。[结论] UUO大鼠肾组织PAR-3表达减少,消瘀泄浊饮能通过上调肾组织PAR-3表达、阻止肾小管上皮细胞向间充质细胞转分化,起到改善肾间质纤维化的作用。     

E6相关蛋白与前列腺癌细胞迁移浸润的实验研究

目的：研究E6相关蛋白与前列腺癌细胞迁移浸润的相关性，为探讨前列腺癌的浸润转移机制提供实验依据。方法：应用电穿孔方法将线性化的PrevTet—off-in调控质粒和PrevTRE2-flag—E6AP重组质粒导入前列腺癌细胞（Lncap），建立稳定表达E6-AP的前列腺癌细胞。应用MTT实验检测细胞的增殖；应用Matrigel Invasion Chamber检测肿瘤细胞迁移浸润特性。结果：MTT结果显示，稳定转染表达E6-AP的前列腺癌细胞比未转染的细胞具有较强的增殖活性；在细胞的迁移浸润试验中，表达E6-AP的稳定转染细胞具有较强的爬行与附着能力。结论：E6相关蛋白与前列腺癌细胞迁移浸润性密切相关。     

LY294002抑制PI3K/Akt信号通路阻断地塞米松降尿蛋白的作用

目的通过活体阿霉素（ADR）大鼠肾病模型探讨受地塞米松及LY294002影响的PI3K/Akt信号通路以及下游分子Bad的 表达、尿蛋白变化相关性及其意义。方法应用随机数表法将SD大鼠分为正常对照组（NC组）,阿霉素肾病组（ADR组）,阿霉 素+地塞米松治疗组（DEX组）,阿霉素+地塞米松+LY294002干预组（LY294002组）。分别于第7、14、28天进行24 h尿蛋白定 量检测;Western Blot检测肾皮质p-Akt、Akt和Bad蛋白表达水平,Q-PCR检测肾皮质Bad mRNA表达水平。结果ADR组蛋白 尿持续增加,p-AKT/AKT比值下降和Bad蛋白表达上调、Bad-mRNA表达增加,较正常NC组有统计学差异（P<0.05）;DEX组 尿蛋白明显减少,p-AKT/AKT 比值升高和Bad 蛋白表达下调、Bad mRNA 表达减少,与NC 组无统计学差异（P>0.05）; LY294002组的尿蛋白无减少,p-AKT/AkT比值下降和Bad蛋白表达上调、Bad mRNA表达增加,与DEX组有显著性统计学差 异（P<0.05）。结论地塞米松通过激活PI3K/Akt信号通路,下调其下游分子Bad的表达,减少阿霉素肾病大鼠尿蛋白;LY294002 干预后可抑制该信号通路,阻断地塞米松减少尿蛋白的作用。这些结果表明PI3K/Akt信号通路是激素减少尿蛋白的信号传导 机制之一。     

PI3K/Akt通路在内吗啡肽-1后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨内吗啡肽-1对心肌缺血再灌注损伤中PI3K/Akt信号通路的作用以及对细胞凋亡的影响。方法 将50只SD雄性大鼠随机分为5组：假手术组（S组）、缺血再灌注组（IR组）、内吗啡肽-1后处理组（EM50组）、内吗啡肽-1+渥曼青霉素后处理组（EM50+Wort组）和PI3K/Akt信号通路抑制剂渥曼青霉素后处理组（Wort组）。采用结扎大鼠心脏左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min复制心肌缺血再灌注模型,实验期间动态监测大鼠心率、平均动脉压;再灌注结束后检测大鼠血浆乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α、氧化应激指标超氧化物歧化酶和丙二醛等生化指标,RT-PCR检测Bax和Bcl-2基因的表达情况,Western blot检测心肌组织中凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、磷酸化Akt蛋白和总Akt蛋白的表达。结果 与S组比较,IR组心率和血压降低（P<0.05）;与IR组比较,EM50组心率和血压有所增高（339.94±26.65 vs 284.01±34.99;75.02±14.45 vs 55.83±20.98,P<0.05）;血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α和丙二醛含量或活性下降（P<0.05）,氧化应激指标超氧化物歧化酶活性增加（132.77±8.25 vs 84.10±12.42,P<0.05）;p-Akt蛋白表达水平较高（0.61± 0.06 vs 0.38±0.04,P<0.05）,Bax基因和cleaved caspase-3蛋白表达量降低（1.70±0.39 vs 3.78±0.71;0.30±0.08 vs 0.53±0.07,P< 0.05）,Bcl-2基因的表达量升高（1.20±0.44 vs 0.55±0.25,P<0.05）;与EM50组比较,EM50+Wort组心率和血压降低（P<0.05）;血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α和丙二醛含量或活性增加（P<0.05）,氧化应激指标超氧化物歧化酶活性降低（P<0.05）;p-Akt蛋白表达水平较低（P<0.05）,Bax基因和cleaved caspase-3蛋白表达量升高（P<0.05）,Bcl-2基因表达量降低（P<0.05）。结论 EM-1后处理可调节细胞凋亡,减轻心肌缺血再灌注损伤。PI3K/Akt信号通路可能对EM-1后处理产生的心肌保护效应发挥一定的介导作用。     

碳酸氢钠水化对对比剂肾病的预防作用研究

目的探讨对于行冠脉造影,介入患者,应用生理盐水和碳酸氢钠两种不同干预方法后对比剂肾病contrastinduced nephropathy,CIN）的发生率,验证并比较两种预防方法的有效性。方法将拟行冠脉造影／介入的患者210例,随机分为碳酸氢钠组（实验组,n=110例）和生理盐水组（对照组,n=100例）。两组分别给予1．25％碳酸氢钠注射液或0．9％氯化钠注射液,并测定造影前和造影后24h、48h的血清肌酐（Scr）,比较两组患者CIN的发生率。结果两组患者共发生造影剂肾病17例（8．1％）,其中碳酸氢钠组5例（4．5％）,生理盐水组11例（12．0％）;两组造影剂肾病的发生率具有显著性差异（P〈0．05）。结论对于造影剂引发的急性肾损伤,在造影前采用碳酸氢钠进行水化预防比采用氯化钠水化预防更为有效。     

阿托伐他汀对对比剂肾病大鼠肾脏细胞凋亡及FAS/FASL表达的影响

目的研究阿托伐他汀对对比剂肾病大鼠肾脏细胞凋亡及FAS/FASL表达的影响。方法清洁级雄性SD大鼠32只随机分为A(正常组)、B(实验对照组)、C(造模组)、D(他汀组)4组,每组8只。他汀组于造模前3 d至造模后3 d给予阿托伐他汀30 mg/(kg.d)灌胃,其余组给予等体积的生理盐水灌胃。建立对比剂肾病大鼠模型,其中C、D组注射吲哚美辛、N-硝基-L-精氨酸甲酯、泛影葡胺,B组以生理盐水代替泛影葡胺,A组只注射等体积的生理盐水。采集各组大鼠造模前、造模后48 h的血液,用全自动生化分析仪检测血肌酐(SCr)值;造模72 h后处死大鼠摘取右肾,采用原位末端标记法(TUNEL)检测肾脏细胞凋亡情况;免疫组化法检测肾脏FAS、FASL表达变化。结果①C组造模前血SCr较造模后升高>25%(P<0.05),且造模后C组血SCr较A、B、D各组有所升高(P<0.05);②C组较A、B组肾脏凋亡细胞数明显增多,FAS和FASL的表达亦显著增强(P<0.05),D组较C组凋亡细胞数减少,FAS和FASL的表达减弱(P<0.05)。结论阿托伐他汀可能通过减弱凋亡相关蛋白FAS和FASL的表达而抑制肾脏细胞凋亡,从而发挥其预防保护作用。     

紫草素对肺腺癌A549细胞的生长抑制作用及其机制研究

目的观察紫草素抑制人肺腺癌A549细胞的增殖及其机制。方法用不同浓度紫草素处理A549细胞,CCK-8方法检测紫草素对A549细胞生长增殖的抑制作用;细胞周期检测试剂盒测定细胞周期的变化;Western blot法检测磷酸化Akt蛋白（pAkt）的表达。结果紫草素能够抑制人肺腺癌A549细胞的增殖;诱导A549细胞凋亡;阻滞细胞G1期向S期的发展。pAkt蛋白表达量在紫草素处理48 h后明显减少。结论紫草素可以抑制肺腺癌A549细胞的增殖,诱导凋亡,机制可能与紫草素抑制PI3K/Akt信号途径有关。     

苦杏仁苷调控PI3K/Akt/mTOR通路对子宫内膜癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

目的研究苦杏仁苷对子宫内膜癌细胞RL95-2及HEC-1B增殖、侵袭及凋亡的影响。方法使用8、16、32、64和128mg/L浓度苦杏仁苷处理RL95-2、HEC-1B细胞24、48和72h后,采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力并计算苦杏仁苷的半数抑制浓度(IC50);Transwell试验检测苦杏仁苷对细胞侵袭能力的影响;流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;Western blot试验检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白以及PI3K/Akt/m TOR信号通路相关蛋白表达情况。结果苦杏仁苷呈浓度及时间依赖性抑制子宫内膜癌RL95-2、HEC-1B细胞生长活性,48h时半数抑制浓度(IC50)约为40mg/L;苦杏仁苷能抑制RL95-2、HEC-1B细胞穿膜细胞数[(227.67±11.06)个比(459.33±24.75)个,(188.67±11.14)个比(412.33±14)个,P均0.01];经苦杏仁苷处理后RL95-2、HEC-1B细胞凋亡率升高[(7.85±0.71)%比(1.49±0.08)%、(8.55±0.69)%比(1.61±0.13)%,P均0.01],凋亡蛋白Bcl-2表达下降[(0.19±0.03)比(0.36±0.04)、(0.25±0.04)比(0.39±0.05),P均0.01],Bax表达升高[(0.37±0.06)比(0.18±0.04)、(0.41±0.06)比(0.21±0.03),P均0.01];苦杏仁苷能显著下调RL95-2、HEC-1B细胞的PI3K[(0.42±0.04)比(0.78±0.05)、(0.36±0.05)比(0.63±0.03),P均0.01]、Akt[(0.73±0.05)比(0.92±0.05)、(0.65±0.03)比(0.86±0.04),P均0.01]及m TOR[(0.25±0.04)比(0.93±0.06)、(0.34±0.05)比(0.88±0.04),P均0.01]磷酸化水平,抑制PI3K/Akt/m TOR通路活化。结论苦杏仁苷通过抑制PI3K/Akt/m TOR信号通路活化,促进子宫内膜癌RL95-2、HEC-1B细胞凋亡,降低其增殖活性,抑制细胞侵袭功能,从而发挥抗肿瘤作用。     

PI-103对人卵巢癌细胞株SKOV3／DDP顺铂化疗效果的影响

目的：探讨磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）双抑制剂PI-103对卵巢癌耐顺铂株SKOV3/DDP顺铂化疗效果的影响。方法：将PI-103、顺铂及两者联合分别作用于SKOV3/DDP细胞,采用CCK-8法检测细胞生长情况,流式细胞技术检测药物单独或联合作用对细胞凋亡的影响;应用Western blot检测蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）、核糖体蛋白（rpS6）、磷酸化rpS6（p-rpS6）以及凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax蛋白表达变化。结果：PI-103能够抑制SKOV3/DDP细胞增殖,且呈浓度、时间依赖性;联合用药可以明显增加对细胞生长抑制和凋亡作用。 PI-103能下调Akt和rpS6的磷酸化水平,促DDP上调Bax和下调Bcl-2的表达。结论：PI-103抑制PI3 K/Akt/mTOR信号传导通路,促DDP上调促凋亡蛋白及下调抗凋亡蛋白的表达,从而抑制癌细胞生长,诱导其凋亡,增加卵巢癌耐顺铂株SKOV3/DDP细胞对DDP的化疗效果。     

来氟米特通过 PI3K／Akt／mTOR信号通路诱导大鼠系膜细胞凋亡的作用

目的：探讨来氟米特（A771726）对大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响及可能机制。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为正常对照组（加入含5％胎牛血清的DM EM 培养液）、A771726组（在对照组基础上加入 A771726,使其终浓度为50μg／mL）、LY294002组（在正常对照组基础上加入LY294002,使其终浓度为2μg／mL）,LY294002＋A771726组（先加2μg／mL的LY294002干预系膜细胞4 h后,加入50μg／mL的A771726）,采用流式细胞术检测各组干预48 h后对大鼠肾小球系膜细胞凋亡的影响,采用免疫荧光法检测各组干预48 h对大鼠系膜细胞中mTOR蛋白表达的影响,采用免疫印迹法检测各组干预48 h后对大鼠系膜细胞中Caspase‐3表达的影响。结果与正常对照组比较,A771726、LY294002、LY294002＋ A771726组大鼠肾小球系膜细胞的凋亡率均明显升高,mTOR蛋白表达均明显降低,Caspase‐3蛋白表达均明显增加;与 A771726组比较,LY294002、LY294002＋ A771726组大鼠肾小球系膜细胞的凋亡率均明显升高,mTOR蛋白表达均明显降低,Caspase‐3蛋白表达均明显增加;与LY294002组比较,LY294002＋A771726组大鼠肾小球系膜细胞的凋亡率明显升高,mTOR蛋白表达明显降低,Caspase‐3蛋白表达明显增加。结论来氟米特可能通过下调PI3K／Akt／mTOR信号通路而诱导大鼠肾小球系膜细胞的凋亡,且来氟米特可协同LY294002共同诱导大鼠系膜细胞的凋亡。     

PI3K/Akt/mTOR信号通路在非小细胞肺癌中作用的研究进展

肺癌是当今世界上严重威胁人类健康与生命的恶性肿瘤,每年有超过100万人死于肺癌。PI3K/Akt通路在肿瘤治疗方面已经有了比较广泛的研究,活化受体酪氨酸激酶和它们下游信号递质的研究也已经为肺癌的治疗打开了一个非常有前景的领域。由于PI3K/Akt通路在下游多点活化受体酪氨酸激酶,因此被广泛地研究并开发新的抗肿瘤制剂。mTOR已经被确定是PI3K/Akt的下游靶点。雷帕霉素及其衍生物具有高度选择性,mTOR的抑制剂对于多种肿瘤的治疗效果已取得了很好的研究结果。在此我们将对肺癌中PI3K/Akt/mTOR信号通路的分子基础做一综述,并进一步讨论有关肺癌的多靶点治疗策略。