坤泰胶囊对环磷酰胺致卵巢储备功能低下大鼠卵巢GDF-9、Egr-1的影响

目的:观察预防性应用坤泰胶囊对环磷酰胺致卵巢储备功能低下大鼠血清性激素FSH、LH、E2、AMH水平的影响以及对卵巢GDF-9(生长分化因子9)、Egr-1(早期生长反应基因)基因及蛋白表达的影响,探讨坤泰胶囊对环磷酰胺致卵巢储备功能低下大鼠的治疗作用及作用机制。方法:将60只12周龄SD雌性大鼠随机分为空白组、环磷酰胺模型组(模型组)、坤泰胶囊组(分设高中低剂量)、结合雌激素组。空白组正常喂养;模型组用环磷酰胺腹腔注射法建立卵巢储备功能低下大鼠模型~([1]);各给药组于造模同时分别给予不同剂量的坤泰胶囊及结合雌激素片灌胃。实验期间观察大鼠行为学改变,行阴道涂片观察大鼠动情周期的变化;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清性激素AMH及FSH、LH、E2水平变化;光镜下观察卵巢形态与卵泡数;实时荧光定量(RT-PCR)检测大鼠卵巢GDF-9、Egr-1m RNA表达水平的变化;免疫组化法检测大鼠卵巢GDF-9、Egr-1蛋白表达水平的变化。结果:坤泰胶囊能够降低模型大鼠体内性激素FSH、LH的水平,升高E2及AMH水平,并且能够增加大鼠卵巢中GDF-9、EGR-1蛋白及m RNA表达,修复大鼠受损的卵巢组织结构,改善卵巢血供,减少卵泡闭锁,提高成熟卵泡存在数量,改善大鼠动情周期及行为学变化。结论:预防性应用坤泰胶囊,可有效提升卵巢敏感性,治疗效果与西药结合雌激素片无明显差异。     

坤泰胶囊对VCD所致POI模型大鼠的疗效探究

目的探究坤泰胶囊(黄连、黄芩、阿胶,等)对去氧乙烯基环乙烯(VCD)所致卵巢功能不全(POI)模型大鼠的疗效。方法 75只21日龄离乳大鼠,随机均分为佐剂对照组,模型组,坤泰胶囊低、中、高剂量组。除佐剂对照组腹腔注射芝麻油外,其余4组均给予腹腔注射VCD溶液。灌胃给药45 d。每组选取8只持续处于动情间期或持续动情周期紊乱的大鼠,进行检测大鼠血清促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E_2)、抗苗勒管激素(AMH);剖腹取出卵巢、子宫称重并进行形态学观察。结果与佐剂对照组相比,模型组大鼠血清FSH明显增高且AMH、E_2显著降低,LH有所增高;经坤泰中、高剂量干预后,FSH水平显著降低,AMH水平明显增加;模型组大鼠卵巢湿重较佐剂对照组减轻,坤泰胶囊干预后,低剂量组卵巢湿重增加明显;模型组大鼠各级卵泡及黄体计数均明显减少,坤泰胶囊干预后,各级卵泡计数明显增加,黄体计数有所增加;光镜下,模型组子宫内膜变薄,管壁子宫腺体数量明显减少。经坤泰胶囊干预后,内膜有所增厚,腺体数量明显增加。结论坤泰胶囊可以减缓模型大鼠卵巢功能衰减的速度。     

坤泰胶囊对卵巢储备功能下降大鼠卵巢凋亡调控蛋白Bcl-2,Bax表达的影响

目的:探讨坤泰胶囊对去氧乙烯基环己烯(4-vinylcyclohexene diepoxide,VCD)所致卵巢储备功能下降(decreasing ovarian reserve,DOR)大鼠凋亡调控蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2原癌基因(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达的影响,研究该药的作用机制。方法:SD雌性大鼠连续腹腔注射VCD(80 mg·kg~(-1))15 d,建立与人类相似的生理性卵巢储备功能下降模型。将动物分为正常组,模型组,坤泰胶囊高、中、低剂量组(1.89,0.63,0.21 g·kg-1),补佳乐(戊酸雌二醇,0.13 mg·kg~(-1))组,于造模第1天开始灌胃给药,每天1次,连续45 d。酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠血清激素卵泡刺激素(FSH),黄体生成素(LH)及雌二醇(E2)水平,苏木素-伊红(HE)染色观察卵巢、子宫的病理组织变化,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测卵巢组织Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组FSH与LH明显升高,E_2明显降低(P0.05);模型组卵巢、子宫体积明显缩小,原始卵泡与初级卵泡数目明显减少,子宫内膜变薄,腺体数目减少;模型组大鼠卵巢Bcl-2蛋白表达明显减少,Bax蛋白表达明显增加(P0.05),Bcl-2/Bax显著下降(P0.01)。与模型组比较,坤泰胶囊高、中、低剂量组FSH明显降低,E_2明显升高(P0.05);补佳乐组FSH,LH明显降低,E2明显升高(P0.05)。各给药组卵巢、子宫体积增大,原始卵泡与初级卵泡数目增多,子宫内膜变厚,腺体数目增加,改善程度顺序依次为坤泰胶囊低、中、高剂量组、补佳乐组。坤泰胶囊高、中、低剂剂量组及补佳乐组大鼠卵巢Bcl-2蛋白表达明显增加(P0.05,P0.01);坤泰胶囊高、中、低剂量组及补佳乐药组大鼠卵巢Bax蛋白表达减少(P0.05);坤泰胶囊高、中、低剂量组及补佳乐组大鼠卵巢Bcl-2/Bax升高(P0.05,P0.01)。结论:坤泰胶囊可能通过上调卵巢Bcl-2蛋白表达及下调Bax蛋白表达,抑制卵泡的凋亡,从而改善卵巢功能。     

坤泰胶囊在卵巢储备功能降低的不孕症患者中的应用

目的探讨中药坤泰胶囊在卵巢储备功能降低的不孕症患者中的应用。方法选择自2013年10月31日至2015年10月31日在我院生殖医学科门诊就诊的不孕症患者中,根据入选标准以及用药记录,分为3组,芬吗通组55例,月经第3天测定卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E_2)、基础窦卵泡数(AFC)、抗苗勒管激素(AMH),开始口服芬吗通1片qd,连用3个月,月经第3天再次测定FSH、LH、E_2、AFC、AMH;坤泰组(芬吗通+坤泰组)58例,月经第3天测定FSH、LH、E_2、AFC、AMH,开始口服芬吗通1片qd加坤泰胶囊4粒tid,连用3个月,月经第3天再次测定FSH、LH、E_2、AFC、AMH;空白对照组(未用药,自然周期试孕)60例,月经第3天测定FSH、LH、E_2、AFC、AMH,3个月后再次测量FSH、LH、E_2、AFC、AMH;比较前后两次FSH、LH、FSH/LH、E_2、AFC、AMH水平。结果组内比较:芬吗通组FSH、LH降低,FSH/LH升高,有统计学意义(P0.05),AMH、AFC呈升高趋势,无统计学意义(P0.05);坤泰组FSH、LH降低、FSH/LH升高,有统计学意义(P0.05),AMH、AFC呈升高趋势,无统计学意义(P0.05);空白对照组FSH、LH、FSH/LH升高,有统计学意义(P0.05),AFC、AMH降低,有统计学意义(P0.05)。组间比较:空白对照组FSH、LH、FSH/LH升高,有统计学意义(P0.05);AFC、AMH降低,有统计学意义(P0.05);芬吗通组、坤泰组FSH、LH、FSH/LH、AFC、AMH组间比较无统计学意义(P0.05)。结论坤泰胶囊能够改善卵巢储备功能,并有助于妊娠。     

克龄蒙联合坤泰胶囊治疗卵巢储备功能下降的临床观察

目的观察克龄蒙配合坤泰胶囊治疗卵巢储备功能下降的临床疗效,为中西医治疗卵巢储备功能下降提供安全有效的临床用药。方法将80例卵巢储备功能下降的患者随机分为两组,每组各40例。对照组单独给予克龄蒙治疗,治疗组在对照组治疗的基础上加用中成药坤泰胶囊治疗,治疗3个月,检测患者治疗前后月经情况、卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E_2)、抗苗勒管激素(AMH)和窦卵泡数。结果经3个月治疗后,治疗组月经改善有效率(90%)优于对照组(70%)(0.05);两组患者LH、FSH值较治疗前降低,AMH、E_2、窦卵泡数较治疗前升高,差异均有统计学意义(0.05);并且治疗组在改善FSH、E_2、AMH、窦卵泡数方面均优于对照组,差异均有统计学意义(0.05)。结论克龄蒙结合中成药坤泰胶囊治疗卵巢储备功能下降疗效显著,可有效改善卵巢储备,对临床治疗具有参考价值。     

补肾调周法联合西药治疗卵巢储备功能低下的临床观察

目的观察补肾调理月经周期的方法（简称补肾调周法）联合西药治疗卵巢储备功能低下的临床疗效。方法78例卵巢储备功能低下的患者,按随机数字表法分为中西药组（40例）和西药组（38例）,西药组采用激素替代疗法,中西药组在西药治疗基础上,加用中药补肾调周法治疗,连续治疗3个月。观察两组临床疗效,比较两组治疗前后血清促卵泡激素 （follicle stimulating hormone, FSH）、FSH/LH（黄体生成素luteinizing hormone,LH）、雌二醇（estradiol, E 2）水平和窦卵泡发育情况。结果治疗后中西药组临床有效率（92.5%）,高于西药组临床有效率（73.68%, P〈0.05）;与治疗前比较,治疗后两组血清FSH、FSH/LH和E2水平均降低（P〈0.05）,窦卵泡数量增多（P〈0.05）,而且在FSH、FSH/LH和窦卵泡数量方面中西药组优于西药组（P〈0.05）。结论补肾调周法联合西药治疗卵巢储备功能低下优于西药组,而且在降低血清FSH、FSH/LH水平和增加窦卵泡数量方面更明显。     

加减归肾丸对卵巢储备功能减退模型小鼠卵巢组织PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响

目的探讨加减归肾丸治疗卵巢储备功能减退的可能作用机制。方法将90只ICR雌性小鼠随机分为空白对照组、模型组、雌二醇组和加减归肾丸低、中、高剂量组,每组15只。除空白对照组外,其余小鼠腹腔注射二氧化乙烯环己烯溶液160mg/(kg·d)连续15天建立卵巢储备功能减退小鼠模型。造模成功后加减归肾丸高、中、低剂量组分别灌服加减归肾丸混悬液57.0、28.5、14.3g/(kg·d),雌二醇组灌服戊酸雌二醇0.15mg/(kg·d),空白对照组和模型组每日灌服0.1ml/10g生理盐水,共干预30天。HE染色观察卵巢组织病理形态学变化,酶联免疫法检测血清促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E_2)、抗缪勒管激素(AMH)水平,Western Blot法检测小鼠卵巢组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白表达。结果病理结果显示,模型组较空白对照组始基卵泡、窦前卵泡、窦状卵泡数量明显减少,闭锁卵泡明显增多,黄体数量稀少。雌二醇组和加减归肾丸高剂量组卵泡数量较为丰富,可见到较多黄体。加减归肾丸中、低剂量组主要以闭锁卵泡为主,可见少量黄体。与空白对照组比较,模型组小鼠血清FSH、LH显著升高,AMH、E_2显著降低,卵巢组织PI3K、AKT、mTOR蛋白含量均降低(P0.05或P0.01)。与模型组比较,加减归肾丸中、高剂量组和雌二醇组血清FSH、LH显著降低,AMH显著升高,卵巢组织PI3K、AKT蛋白升高(P0.05或P0.01)。加减归肾丸高剂量组各指标与雌二醇组差异均无统计学意义(P0.05)。结论加减归肾丸可能通过影响卵巢组织PI3K/AKT/mTOR信号通路,从而改善卵巢功能,并且以高剂量效果更佳。     

安坤种子丸对卵巢储备功能下降闭经FSH、LH、E_2、AMH的影响

目的观察安坤种子丸对卵巢储备功能下降闭经(肾虚证)卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E_2)、抗苗勒氏管激素(AMH)的影响。方法将62例患者随机分为治疗组和对照组,对照组服戊酸雌二醇、黄体酮胶囊,治疗组在对照组基础上加服安坤种子丸。观察FSH、LH、E_2、AMH变化及伴随症状改善、停药后月经恢复等情况。结果 2组FSH均降低(P0.05);雌二醇、AMH升高,治疗组优于对照组(P0.05)。LH呈下降趋势,变化小,2组对比差异无明显统计学意义(P0.05),症状改善、停药后月经恢复情况治疗组较对照组明显好转。结论安坤种子丸降低卵巢储备功能下降闭经(肾虚证)患者FSH水平,提高E_2、AMH水平,具有提高卵巢储备功能的影响。     

养精种玉汤对卵巢储备功能减退模型大鼠RNA-m6A修饰的影响

目的 观察养精种玉汤对卵巢储备功能减退(DOR)模型大鼠RNA-m⁶A修饰的影响,探讨其改善卵巢储备功能的机制。方法 选取60只动情周期正常的SD雌性大鼠,采用雷公藤甲素诱导DOR模型,将大鼠分为空白组、模型组、脱氢表雄酮(DHEA)组和养精种玉汤低、中、高剂量组(中药低、中、高剂量组),每组10只,给药组分别灌胃相应药液,连续2周。HE染色观察卵巢组织形态,ELISA检测血清雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)、黄体生成素(LH)、抗米勒管激素(AMH)含量,Western blot、qPCR测定卵巢组织METTL3、FTO、YTHDC2蛋白和基因表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠卵巢组织皮质区损伤,颗粒细胞脱落,各级卵泡数量明显减少,闭锁卵泡及黄体数量增加(P<0.05);血清E2、AMH含量减少,FSH、LH含量增加(P<0.05),卵巢组织METTL3、FTO、YTHDC2蛋白及m RNA表达降低(P<0.05)。与模型组比较,中药高剂量组大鼠卵巢组织损伤明显改善,各级卵泡数量增加,闭锁卵泡及黄体数量减少(P<0.05);血清E2...     

针药联合对卵巢储备功能不足大鼠卵巢细胞凋亡因子和生殖激素的影响

目的:观察针药结合对卵巢储备功能不足(decreased ovarian reserve,DOR)大鼠卵巢细胞凋亡因子和生殖激素的影响,探讨其作用机理。方法:将72只SD大鼠随机分为对照组、中药组、针刺组、模型组、西药组和针药组,每组12只。除对照组采用等量生理盐水灌胃外,其余五组均采用雷公藤多苷药液灌胃,建立符合实验要求的DOR大鼠模型。针药组、中药组予护卵汤灌胃,针刺组和模型组采用等量生理盐水灌胃,西药组采用克龄蒙药液灌胃,同时对针药组、针刺组进行针刺,以上操作持续16 d。采用ElISA法检测血清雌二醇(estradiol,E2)、促卵泡生成素(follicle-stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)及抗缪勒氏管激素(Anti-Mullerian Hormone,AMH)水平,PCR检测卵巢组织中细胞凋亡因子Bax、Caspase-3、Bcl-2的表达。结果:与对照组比较,模型组FSH、LH、Bax、Caspase-3表达明显升高,E2、AMH、Bcl-2明显降低(P 0. 05);与模型组比较,针刺组、中药组、针药组及西药组FSH、Bax、Caspase-3明显降低,E2、AMH、Bcl-2明显升高(P 0. 05)。结论:针刺联合护卵汤可调节性激素和凋亡因子,促进卵泡生长,抑制卵泡闭锁,从而改善卵巢功能。     

基于PI3K/AKT/mTOR通路研究杜仲总黄酮对多囊卵巢综合征大鼠性激素水平及卵巢组织自噬的影响

目的:探讨杜仲总黄酮基于磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠性激素水平及卵巢组织自噬的影响。方法:55只SD大鼠随机取10只作为正常对照组,其余建立PCOS大鼠模型,40只大鼠建模成功,随机分为模型对照组、PI3K抑制剂BKM120 40 mg/kg组、BKM120 40 mg/kg+杜仲总黄酮200 mg/kg组、杜仲总黄酮200 mg/kg组,各组灌胃生理盐水或相应药物,连续干预3 w。Elisa法检测血清促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、抗苗勒氏管激素(AMH)水平;HE染色观察卵巢病理学变化;流式细胞术检测卵巢组织颗粒细胞自噬率;Western blot检测卵巢组织中PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白及微管相关蛋白1轻链3 II(LC3 II)表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠AMH、LH、T含量显著升高,FSH含量显著降低P<0.01);大鼠卵巢组织颗粒细胞自噬率显著升高(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值显著降低,LC3 II/LC3 I比值显著升高(P<0.01);与模型对照组比较,抑制剂组大鼠AMH、LH、T含量显著升高,FSH含量显著降低(P<0.01),卵巢组织颗粒细胞自噬率显著升高,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值显著降低,LC3 II/LC3 I比值显著升高(P<0.01);杜仲总黄酮+抑制剂组、杜仲总黄酮组大鼠AMH、LH、T含量明显降低,FSH含量明显升高(P<0.05或P<0.01),卵巢组织颗粒细胞自噬率显著降低(P<0.01),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值显著升高,LC3 II/LC3 I比值显著降低(P<0.01)。模型对照组卵巢表面苍白,黄体减少,出现多个囊状扩张卵泡;杜仲总黄酮+抑制剂组、杜仲总黄酮组卵巢体积减小,表面色泽较红,黄体有所增加,囊状扩张卵泡减少;抑制剂组卵巢体积更大、黄体更少,囊状扩张卵泡更多。结论:杜仲总黄酮可能通过激活PI3K/AKT/mTOR通路降低PCOS大鼠卵巢组织自噬水平,改善其性激素水平。     

滋肾育胎丸对DOR大鼠内分泌的影响

目的研究滋肾育胎丸(党参、续断、巴戟天等)对卵巢储备功能低下(DOR)大鼠内分泌的影响。方法灌胃55 mg/(kg·d)雷公藤多苷诱导正常动情周期雌性SD大鼠14 d以建立DOR模型,再分为滋肾育胎丸高、低剂量组,补佳乐组,模型对照组,阴性对照组。给药35 d后,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、孕酮(P)水平,免疫组化法检测卵巢组织雌激素受体(ER)、卵泡刺激素受体(FSHR)、黄体生成素受体(LHR)表达。结果与阴性对照组比较,模型对照组E2、FSH、LH、P水平,ER、FSHR、LHR表达有显著变化(P0.05),但两组体质量、卵巢指数、子宫指数、血清FSH/LH水平无显著性差异(P0.05)。与模型对照组比较,滋肾育胎丸高、低剂量组,补佳乐组E2水平升高,FSH、LH水平降低,并且它们也促进ER表达,抑制FSHR、LHR过度表达,差异有统计学意义(P0.05)。不同剂量组P水平显著升高(P0.05),高剂量组FSH/LH显著下降(P0.05),各干预组体质量、卵巢指数和子宫指数无显著性差异(P0.05)。结论滋肾育胎丸可通过影响卵巢组织激素受体表达、调节内分泌功能来改善DOR大鼠卵巢储备功能。     

补肾健脾疏肝法治疗高龄卵巢储备功能低下临床观察

目的:观察补肾健脾疏肝法对高龄卵巢储备功能低下(DOR)患者卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E_2)及抗苗勒氏管激素(AMH)水平的影响。方法:将70例高龄DOR患者按随机数字表法分成中药组和西药组各35例。中药组予补肾健脾疏肝法治疗,西药组予激素替代疗法治疗,2组均治疗6月。观察2组治疗前后FSH、LH、E_2及AMH水平的变化。结果:治疗后,2组FSH、LH及西药组的AMH水平均较治疗前降低(P0.05,P0.01),2组E_2水平均较治疗前升高(P0.05,P0.01);中药组的E_2水平高于西药组(P0.05)。结论:补肾健脾疏肝法能有效降低高龄DOR患者的FSH、LH水平,提高E_2水平及延缓AMH的下降速度。在延缓AMH下降速度方面,效果优于西药组,且无明显不良反应,值得在临床推广。     

丹归胶囊对大鼠卵巢储备功能低下的改善作用及机制研究

目的:评价丹归胶囊对大鼠卵巢储备功能低下(DOR)的改善作用,并初步探讨其机制。方法: 48只12周龄健康SPF级SD雌性大鼠适应性喂养3 d后,随机分为模型组、坤泰胶囊组、丹归胶囊(高、中、低)剂量组、空白组。除空白组外,其余组均腹腔注射75 mg/kg的环磷酰胺1次,建立大鼠卵巢储备功能低下的模型。连续灌胃给药36 d后,观察大鼠行为学变化,动情周期,血清性激素水平、卵巢组织病理学改变及卵巢 GDF-9、Egr-1蛋白表达和TNF-α mRNA、INF-γ mRNA转录水平的变化情况。 结果:丹归胶囊可使 DOR 大鼠 FSH、LH 水平明显降低,E₂、AMH 明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。丹归胶囊可使模型大鼠卵巢存在成熟卵泡,卵泡腔内卵子生长良好。丹归胶囊可使模型大鼠 GDF-9、Egr-1蛋白表达均升高,差异具有统计学意义(P<0.05),且TNF-α mRNA、INF-γ mRNA表达有不同程度的降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。 结论:丹归胶囊具有改善卵巢储备功能低下的作用,其机制可能跟调节各种性激素水平及卵巢相关蛋白表达有关。     

归肾丸对卵巢储备功能减退小鼠模型卵巢自噬的影响

目的：探讨归肾丸对卵巢储备功能减退(DOR)小鼠卵巢功能和自噬的影响。方法：将C57BL/6小鼠随机分为5组：正常组、模型组、归肾丸低、中、高剂量组。除正常组外，各组小鼠采用腹腔注射环磷酰胺(CTX)法建立DOR小鼠模型并给予相应药物。ELISA法检测血清抗苗勒管激素(AMH)、促卵泡生成素(FSH)、雌二醇(E₂)、促黄体生成素(LH)水平；HE染色观察卵巢组织形态；Western blot、qRT-PCR检测卵巢组织微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin 1、p62蛋白和mRNA水平。结果：与正常组相比，模型组小鼠血清FSH、LH水平升高(P<0.05),AMH、E₂水平降低(P<0.05);卵巢中生长卵泡和原始卵泡的数量减少，闭锁卵泡增加；卵巢组织LC3和Beclin 1蛋白和mRNA水平增高，p62蛋白和mRNA水平降低。经归肾丸干预后，DOR小鼠血清中FSH和LH激素水平降低(P<0.05),AMH和E₂激素水平增高(P<0.05);卵巢形态改善，原始卵泡和生长卵泡增多，闭锁卵泡减...     

补肾疏肝针药结合对卵巢早衰大鼠卵巢储备力的影响研究

目的:观察补肾疏肝针药结合对卵巢早衰(POF)模型大鼠卵巢储备力的影响。方法:将60只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、电针组、中药组、针药组、西药组,除空白组外其余各组大鼠采用雷公藤多苷片50mg/kg灌胃联合束缚建立卵巢早衰动物模型。造模成功后,中药组予具有补肾疏肝作用的中药复方灌胃,电针组予电针三阴交、关元、太冲穴,针药组同时予中药灌胃及电针治疗,西药组予戊酸雌二醇溶液灌胃,疗程均为30d。造模前与治疗后称重大鼠计算体质量增量,处死后摘取卵巢称湿重,计算卵巢指数,酶联免疫吸附法测定大鼠血清雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)、抗苗勒氏激素(AMH)水平,HE染色观察卵巢组织形态学变化,光镜下计数各级卵泡数目。结果:模型组大鼠体质量增量、卵巢质量和卵巢指数均明显低于空白组(P0.01),西药组、中药组和针药组大鼠治疗后上述指标均明显高于模型组(P0.05,P0.01),电针组大鼠卵巢质量明显高于模型组(P0.05),电针组体质量增量、卵巢质量明显低于针药组(P0.05,P0.01)。模型组大鼠卵巢体积缩小,生长卵泡数减少,还可见大量闭锁卵泡和间质腺,黄体纤维化;各治疗组大鼠卵巢情况明显改善。模型组大鼠卵巢生长卵泡、成熟卵泡、黄体数目均明显低于空白组(P0.01),闭锁卵泡数目明显高于空白组(P0.01);各治疗组上述指标均较模型组有不同程度的改善;针药组较其他治疗组改善程度更有优势,其中生长卵泡、成熟卵泡数目明显高于西药组(P0.05),闭锁卵泡与黄体数目与西药组相当。模型组大鼠血清E2、AMH含量显著低于空白组(P0.01),FSH含量显著高于空白组(P0.01);与模型组相比,各治疗组大鼠性激素水平均有不同程度的改善,针药组FSH、AMH含量与西药组相当。结论:补肾疏肝针药结合治疗POF模型大鼠疗效显著,可改善大鼠低雌激素高促性腺激素状态,促进卵泡生长发育及成熟,抑制卵泡过度闭锁,提高卵巢储备力。     

电针不同穴位对多囊卵巢综合征大鼠卵泡发育及相关因素的影响

目的:观察电针不同穴位对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵泡发育、促性腺激素、促性腺激素相关受体表达及卵巢抗苗勒氏管激素(AMH)、抑制素B(INHB)水平的影响,探讨电针治疗PCOS的可能机制。方法:雌性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、足三里组、关元组、三阴交组、综合组,每组10只。除对照组外,其余各组大鼠用来曲唑连续灌胃21 d诱导PCOS模型,足三里组、关元组、三阴交组分别选取"足三里""关元""三阴交"进行电针干预,综合组3穴同时进行电针干预,均干预14 d。干预结束后用HE染色法进行大鼠卵泡计数,用酶联免疫吸附法检测血清促黄体生成素(LH)、促卵泡生成素(FSH)、INHB、AMH水平,用免疫组织化学法检测卵巢FSH受体(FSHR)和LH受体(LHR)的表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠的生长期卵泡数及血清LH、LH/FSH、AMH、INHB水平均明显升高(P<0. 05,P<0. 01),而FSH水平、早期卵泡中FSHR和LHR表达明显降低(P<0. 01,P<0. 05)。与模型组比较,三阴交、关元和综合组的生长期卵泡数明显下降(P<0. 05,P<0. 01),关元、足三里和综合组INHB水平明显下降(P<0. 01),4个电针组的LH、LH/FSH、AMH水平均明显下降(P<0. 01),而4个电针组的FSH均明显升高(P<0. 01),足三里组大鼠早期卵泡FSHR阳性表达明显升高(P<0. 05),足三里组和关元组大鼠早期和晚期卵泡LHR阳性表达均明显升高(P<0. 01,P<0. 05)。结论:电针"关元""三阴交""足三里"及电针3穴均可减少PCOS大鼠生长期的卵泡数量并调节大鼠性腺激素的表达水平。在上调血清FSH和下调LH/FSH比值、AMH、INHB及改善促性腺激素受体表达方面,电针"关元"和电针"足三里"的作用明显优于电针"三阴交";而在下调LH水平方面,电针"三阴交"的作用明显优于电针"关元";但3个穴位之间没有协同作用。     

隔药脐疗对卵巢早衰大鼠VEGF和AMH表达的影响

目的:探讨隔药脐疗法对卵巢早衰(POF)大鼠血管内皮生长因子(VEGF)及抗苗勒氏管激素(AMH)的作用机制。方法:50只Wistar雌性大鼠随机分成正常组、隔药脐疗组、模型组、西药组,采用腹腔注射环磷酰胺制作大鼠卵巢早衰模型。隔药脐疗组采用自制灸膏做脐疗,西药组采用补佳乐灌胃。治疗2周后,采用放射性免疫法检测大鼠血清雌二醇(E2)、促黄体生成素(LH)及促卵泡激素(FSH)水平,应用酶联免疫吸附法检测血清VEGF及AMH的含量。结果:与正常组相比,模型组E2水平降低(P<0.05),与模型组比较,隔药脐疗组和西药组均升高(P<0.05)。与正常组比较,模型组大鼠血清中VEGF及AMH含量明显下降(P<0.05);与模型组比较,隔药脐疗组及西药组血清VEGF及AMH水平显著升高(P<0.05);隔药脐疗组与西药组之间VEGF和AMH水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:隔药脐疗法对卵巢早衰大鼠的卵泡数量及卵巢储备功能均有明显的促进作用,可能与其对血清E2、VEGF和AMH的表达调节有关。     

育麟方对卵巢储备功能降低大鼠颗粒细胞分泌功能的影响

目的: 研究育麟方影响环磷酰胺致卵巢储备功能降低大鼠模型卵巢颗粒细胞的分泌功能的机制。 方法: 性成熟雌性SD大鼠参考文献制备卵巢储备功能降低大鼠模型,分为育麟方高、中、低剂量组,补佳乐组,模型组,正常组。正常组,模型组予蒸馏水20 mL ·kg^-1,补佳乐组予戊酸雌二醇片0.21 mg ·kg^-1,育麟方低、中、高组分别予育麟方生药15.2,30.4,60.8 g ·kg^-1 ig 21 d后,予动情前期处死,放射免疫法测定大鼠血清卵泡刺激素(FSH),黄体生成素(LH)水平及抗苗勒管激素(AMH)表达水平,光镜下观察卵巢组织形态学变化,卵泡数目及黄体数目。 结果: 与正常组比较,模型组FSH,LH含量明显升高(P<0.05),AMH含量明显降低(P<0.05),各级卵泡数目,黄体数目明显减少(P<0.05);与模型组比较,育麟方治疗组大鼠血清FSH,LH水平明显减少(P<0.05),育麟方中剂量组及补佳乐组血清AMH水平明显增高(P<0.05),育麟方中、高剂量组的各级卵泡及黄体数量明显增多(P<0.05)。 结论: 育麟方可能通过影响卵巢储备功能降低模型鼠的颗粒细胞内分泌功能而改善其卵巢储备功能。     

抗苗勒氏管激素在免疫性卵巢早衰中的发病意义及左归丸的作用机制

目的:研究抗苗勒氏管激素(AMH)在免疫性卵巢早衰(POF)中的发病意义及左归丸对POF小鼠AMH及其信号转导通路[AMH/活化素蛋白激酶2(ALK2)/Smad1]的影响,探讨左归丸的作用机制。方法:8周龄Balb/c雌性小鼠随机分为正常组、模型组、戊酸雌二醇组、左归丸组。以小鼠透明带3多肽建立POF动物模型,予左归丸及戊酸雌二醇进行治疗。电化学发光法检测小鼠血清AMH,卵泡刺激素(FSH)的水平,光学显微镜检测小鼠生长卵泡比率,免疫组化法及蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测小鼠卵巢AMH及其信号转导蛋白ALK2,Smad1蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清AMH水平明显降低,FSH水平明显升高(P0.05);与模型组比较,左归丸组明显升高小鼠血清AMH水平,明显降低FSH水平(P0.05)。与正常组比较,模型组小鼠卵巢生长卵泡比率明显减少(P0.01),与模型组比较,左归丸组生长卵泡比率明显增高(P0.05)。AMH,ALK2,Smad1蛋白均在卵泡颗粒细胞胞浆表达。与正常组比较,模型组小鼠卵巢AMH,ALK2,Smad1蛋白表达明显下降(P0.05);与模型组比较,左归丸组小鼠卵巢AMH蛋白表达明显升高(P0.05),免疫组化检测显示ALK2,Smad1表达均有上升,但无统计学差异,Western blot检测显示ALK2,Smad1表达也均明显升高(P0.05)。结论:POF的发生与AMH分泌不足、卵巢AMH蛋白表达低下有关,其通过影响AMH/ALK2/Smad1信号转导,影响始基卵泡的募集,从而使卵泡消耗过快,卵巢功能过早衰竭,卵巢处于衰老状态。左归丸可促进POF小鼠AMH分泌,上调卵巢AMH蛋白的表达,并通过影响AMH/ALK2/Smad1信号转导,抑制始基卵泡的过快募集和消耗,改善卵巢功能。