β-细辛醚对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤的保护作用研究

目的探讨β-细辛醚对Aβ25-35所致PC12细胞凋亡的抑制作用。方法以Aβ25-35建造体外PC12细胞损伤模型,观察β-细辛醚对其细胞存活率、细胞形态、乳酸脱氢酶(LDH)的含量和Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达的影响。结果 10μmol/L的Aβ25-35与PC12细胞共培养24 h出现明显损伤,细胞活力下降,培养液中LDH含量增多,Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达水平增高。15 mg/L、30 mg/L、60 mg/Lβ-细辛醚可有效改善Aβ25-35引起的PC12细胞形态改变,提高细胞存活力,减少LDH渗漏,明显降低Aβ25-35引起的PC12细胞Caspase-3、Caspase-6、Caspase-9 mRNA表达水平。结论β-细辛醚对Aβ25-35所致PC12细胞损伤有保护作用。     

开心散含药血清对Aβ诱发的PC12细胞损伤的改善作用

目的:观察开心散含药血清对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的影响。方法:用Aβ25-35诱导PC12细胞损伤制造体外AD细胞模型;采集开心散含药血清;MTT法检测开心散对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的影响。结果:开心散含药血清可显著改善Aβ25-35诱导PC12细胞生存活力的下降。结论:开心散含药血清通过提高PC12细胞生存活力而显示了神经保护作用。     

引火汤含药血清对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的抑制作用

目的：观察引火汤含药血清对Aβ25-35诱导PCI2细胞损伤的抑制作用,并探讨其对抗Aβ毒性的机制。方法：添加Aβ于培养基以诱导PCI2细胞损伤,采集去势及非去势雌性大鼠灌服引火汤后的含药血清添加于PCI2细胞培养液中,MTT法检测引火汤含药血清对Aβ25-35州诱导PCI2细胞损伤的影响。结果：Aβ25-35,埘呈浓度依赖性的引起PCI2细胞活力下降,大鼠引火汤含药血清能抑制Aβ25-35诱导的PCI2细胞损伤,这种抑制Aβ毒性的效果在大鼠卵巢摘除后部分降低,但并未消失。结论：Aβ25-35可引起培养PCI2细胞损伤,引火汤含药血清可抑制Aβ的毒性作用,其部分机制是通过刺激卵巢增加雌激素的产生,可能是提高靶细胞的雌激素敏感性或是血行移行成分的直接作用。     

阿魏酸对Aβ25-35诱导PC12细胞的保护机制研究

目的:观察阿魏酸对β-淀粉样蛋白25-35(βamyloid peptide25-35,Aβ25-35)诱导的阿尔兹海默病(Alzheimer disease,AD)模型细胞的抗氧化能力的影响,探讨当归防治AD的作用及机制。方法:用Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡,以不同浓度阿魏酸对抗干预,以MTT比色法观测阿魏酸对AD模型细胞增殖的保护作用,以比色法检测阿魏酸对AD模型细胞培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)的影响。用RT-PCR法检测Apbb1,乙酰胆碱酯酶(Ache)基因的表达。结果:阿魏酸对损伤的PC12细胞的存活率有提高作用,阿魏酸在2 mmol/L时可明显降低模型细胞培养液中MDA、LDH含量,提高SOD活力,差异有统计学意义(P<0.01)。阿魏酸可下调Apbb1和Ache的mRNA表达,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:阿魏酸对Aβ25-35损伤的PC12细胞有保护作用,机制可能与提高细胞抗氧化能力相关,与下调Apbb1、Ache的mRNA表达量相关。     

山茱萸水提物对Aβ_(25-35)诱导阿尔茨海默病小鼠脑损伤和神经炎症的作用北大核心CSCD

探究山茱萸水提物对β-淀粉样蛋白片段_(25-35)(β-amyloid protein_(25-35),Aβ_(25-35))诱导阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)小鼠脑损伤和神经炎症的作用,为山茱萸治疗AD提供实验依据。将60只C57BL/6J雄性小鼠随机分为假手术组、模型组、阳性药石杉碱甲组(0.2 mg·kg^(-1))以及山茱萸水提物低(1.3 g·kg^(-1))、中(2.6 g·kg^(-1))、高(5.2 g·kg^(-1))剂量组,除假手术组外,其他组采用Aβ_(25-35)侧脑室注射的方法构建AD动物模型,之后灌胃给药24 d。在动物解剖前1周进行行为学检测;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察海马区神经元形态;流式细胞术检测小鼠原代海马细胞凋亡水平;ELISA试剂盒检测小鼠脑组织中β-淀粉样蛋白1-42(β-amyloid protein 1-42,Aβ1-42)及磷酸化微管相关蛋白Tau(phosphorylated microtubule-associated protein Tau,p-Tau)的水平;免疫荧光及Western blot检测小鼠脑组织中相关蛋白的表达;MTT法检测山茱萸中化合物对Aβ_(25-35)诱导N9细胞损伤的作用;分子对接分析咖啡酸、反式对羟基桂皮酸、异落叶松树脂醇-9′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、马栗树皮素和(+)-南烛木树脂酚与Aβ前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)之间的相互作用。山茱萸水提物通过增加Aβ_(25-35)诱导小鼠自主活动时间、自主交替率、偏好系数和辨别系数改善了其学习记忆能力,并通过升高脑组织中白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白表达水平,降低Aβ1-42、p-Tau、IL-6、TNF-α、胱天蛋白酶3(cysteine aspartate-specific protease 3,caspase-3)、胱天蛋白酶9(cysteine aspartate-specific protease 9,caspase-9)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的表达水平,减少胶质细胞活化数量,显著减轻了Aβ_(25-35)诱导小鼠脑损伤和神经炎症。细胞实验结果显示马栗树皮素和(+)-南烛木树脂酚可改善Aβ_(25-35)诱导N9细胞损伤,分子对接结果表明咖啡酸、反式对羟基桂皮酸、异落叶松树脂醇-9′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、马栗树皮素和(+)-南烛木树脂酚与APP有较好的结合活性,与IL-6、TNF-α结合较弱。山茱萸水提物通过减少脑内细胞凋亡和胶质细胞活化数量,降低炎症因子表达水平来改善Aβ_(25-35)诱导小鼠的认知功能障碍和脑损伤。其中咖啡酸、反式对羟基桂皮酸、异落叶松树脂醇-9′-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、马栗树皮素和(+)-南烛木树脂酚可能是山茱萸发挥抗AD作用的物质基础。     

复方益智颗粒对Aβ_(25-35)致PC12细胞损伤的神经保护作用研究

目的:探讨复方益智颗粒对Aβ_(25-35)导致PC12细胞损伤的保护作用,为进一步研究该产品改善阿尔茨海默症记忆功能障碍的作用机制奠定基础。方法:取经不同处理的PC12细胞分为正常对照组、Aβ_(25-35)模型组、Aβ_(25-35)+正常血清组、Aβ_(25-35)+CYZG含药血清组(不同浓度)。正常对照组:DMEM培养基培养48 h,Aβ_(25-35)模型组:DMEM培养基培养24 h后换含20μM Aβ_(25-35)的DMEM培养基继续培养24 h,Aβ_(25-35)+正常血清组:正常血清预处理24 h后加入20μM Aβ_(25-35)的DMEM培养基继续培养24 h,Aβ_(25-35)+CYZG含药血清组:不同浓度CYZG含药血清预处理24 h后,加入20μM Aβ_(25-35)的DMEM培养基继续培养24 h。分别采用MTT法检测细胞增殖情况、流式细胞仪检测PC12神经细胞凋亡情况。结果:Aβ_(25-35)时间依赖性地抑制PC12细胞的生长,不同浓度CYZG含药血清对其造成的细胞损伤有保护作用,随着含药血清剂量的增加,细胞的存活率增加,生长抑制率减少。Aβ_(25-35)能显著引起PC12细胞凋亡,不同浓度CYZG含药血清对其造成的细胞凋亡有抑制作用。结论:复方益智颗粒对Aβ_(25-35)引起的PC12细胞损伤具有一定的保护作用,其神经保护作用可能与抑制Aβ_(25-35)引起的PC12细胞凋亡有关。     

黄连解毒汤及其含药血清的化学成分及抗肿瘤作用对比研究

目的:对比黄连解毒汤及其含药血清的抗肿瘤作用及其化学成分的异同。方法:采用HPLC梯度洗脱对比分析黄连解毒汤及其含药血清化学成分的异同。并用MTT方法比较黄连解毒汤及其含药血清对人肝癌Bel-7402、人小细胞肺癌NC I-H446 2种瘤株的抑制作用。结果:发现10个来源于复方的原型成分,几个代谢产物,同时一些原方剂中的主要成分并未在血清中出现。黄连解毒汤及其含药血清对2种瘤株都有显著的抑制增殖作用,并呈量效依赖关系,但抑制程度不同。黄连解毒汤对人肝癌Bel-7402相对更敏感(Bel-7402的IC₅₀为185.34 mg.L^-1,NC I-H446的IC₅₀为264.68 mg.L-1),黄连解毒汤含药血清各剂量组对2种瘤株的抑制程度非常相似。结论:黄连解毒汤及其含药血清对2种瘤株抑制程度变化的原因可能是黄连解毒汤中各主要成分吸收入血后含量变化造成的。对其进行深入的研究,将有助于阐明黄连解毒汤抗肿瘤的有效成分及作用机制。     

原花青素对β-淀粉样肽25-35诱导PC12细胞par-4和bcl-2基因表达的影响

目的探讨原花青素(PC)对β-淀粉样肽(Aβ25-35)诱导凋亡PC12细胞par-4和bcl-2基因mRNA和蛋白表达的影响。方法采用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst33258-PI荧光染色法检测细胞凋亡,RT-PCR方法检测PC12细胞par-4和bcl-2基因mRNA的表达,Westernblotting检测PC12细胞Par-4和Bcl-2蛋白表达。结果不同剂量(5、10、20、30mg/L)PC预处理PC12细胞1h可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的细胞凋亡,提高PC12细胞的存活率,减少Aβ25-35引起的PC12细胞核固缩、凝聚和碎裂,降低par-4基因mRNA表达及蛋白表达,增加bcl-2基因mRNA表达及蛋白表达。结论PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用,其机制可能与下调凋亡基因par-4和上调抗凋亡基因bcl-2表达有关。     

黄连解毒汤含药血清对LPSTNF-α诱导的人中性粒细胞与血管内皮细胞间粘附的影响

以体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为模型,应用蛋白染料染色法,观察HLJDT含药血清及其与LPS／TNF－α共同处理HUVEC4h、12h、24h后,对中性粒细胞与血管内皮细胞粘附的影响。结果显示,HLJDT含药血清不仅能抑制非致炎状态下中性粒细胞与血管内皮细胞的粘附,而且能抑制致炎因子所诱导的中性粒细胞与血管内皮细胞粘附作用增强,这可能是黄连解毒汤抗炎作用的机制之一。     

黄连解毒汤含药血清对血管内皮细胞增殖及粘附中性粒细胞能力的影响

以体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为模型,应用MTT和蛋白染料染色法,观察给药一次及连续给药3d后5,1,1．5,2,2．5h所取黄连解毒汤（HLJDT）含药血清对HUVEC增殖及粘附中性粒细胞（PMN）能力的影响,以探讨HLJDT含药血清制备的最佳取血时间点及其抗炎作用机制,结果：（1）与对照血清相比,40％及20％浓度的含药血清HUVEC产有不同程度的抑制增殖作用,而10％浓度时无明显抑制作用;（2）各点的HLJDT含药血清均有一定的抑制HUVEC－PMN粘附的作用,且与取血时间点存在一定的时效关系。其抑制细胞粘附的最佳时间点为连续给药3d组的1．5h左右。结论：HLJDT含药血清能抑制HUVEC－PMN粘附,可能是HLJDT抗炎作用的机制之一。     

电针对Aβ_(25-35)所致AD大鼠海马NOS活性的影响

观察电针对β淀粉样蛋白25-35片段(Aβ25-35)所致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆能力及海马一氧化氮合酶(NOS)活性的影响.方法:12月龄雄性SD大鼠40只,按随机数字表分为4组,即正常组、假手术组、模型组、电针组,各10只.采用双侧海马一次性注射凝聚态Aβ25-35制备AD大鼠模型,电针组选取双侧"肾俞"穴、"内关"穴和"大椎"穴,接G6805-II型电针治疗仪治疗.采用Morris水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力的变化;采用分光光度法检测各组大鼠海马NOS活性的变化.结果:与模型组相比,电针能显著提高大鼠的学习记忆能力(P<0.05),抑制海马NOS活性(P<0.05).结论:电针改善AD大鼠学习记忆能力的机制之一可能是通过抑制NOS活性,减轻大鼠海马神经元的损伤实现的.     

当归含药血清对阿尔兹海默病细胞模型损伤的保护作用

目的:观察当归含药血清对Aβ25-35与H2O2分别诱导的阿尔兹海默病(AD)细胞模型的抗氧化能力的影响,探讨当归防治AD的作用及机制。方法:用Aβ25-35与H2O2分别诱导PC12细胞损伤,以不同浓度当归含药血清对抗干预,以MTT比色法观测当归含药血清对两种AD细胞模型增殖的保护作用,以比色法检测当归含药血清对AD细胞模型培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、总超氧物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)含量的影响,分析当归治疗AD机制。结果:10%当归含药血清对损伤的PC12细胞的存活率有明显提高作用,可显著降低细胞模型培养液中LDH活力、MDA含量,提高T-SOD活力(P<0.05)。讨论:当归含药血清对H2O2及Aβ25-35损伤的PC12细胞有保护作用,机制与当归阿魏酸提高细胞抗氧化能力有关。     

清心开窍方对Aβ25-35所致大鼠原代神经元细胞损伤的保护作用

目的：了解清心开窍方对Aβ25-35所致大鼠原代神经细胞损伤的保护作用及其机制。方法：制备17d胎龄大鼠胚胎皮层神经细胞,分为正常对照组、模型组、清心开窍方低、中、高剂量组（6.25、12.5、25 mg·mL-1）。支持培养7 d,除正常组、模型组外,用不同剂量清心开窍方预处理24 h后,连同模型组和终浓度10 umol·L-1的Aβ25-35共同培养,造成神经细胞损伤模型。作用24 h后,以MTT值、培养液乳酸脱氢酶（LDH）水平作为细胞的损伤指标,以线粒体膜电位改变作为凋亡早期指标。结果：清心开窍方可以明显减少LDH漏出,增加MTT值,使低线粒体膜电位细胞的比例减少,抑制细胞凋亡,与模型组比较差异显著（P〈0.05）。结论：清心开窍方对Aβ25-35损伤的大鼠原代神经细胞具有保护作用,其机制可能与清心开窍方干预Aβ25-35诱导的细胞线粒体膜电位下降有关。     

清心开窍方含药脑脊液对Aβ25-35所致PC12细胞损伤的保护作用

目的:从细胞水平研究清心开窍方含药脑脊液对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)损伤的PC12细胞的保护作用,为该方剂的临床应用提供依据.方法:SD大鼠灌胃给予清心开窍方水煎液(7.9 g·kg-1),每日2次,连续3.5d,制备清心开窍方含药脑脊液.采用PC12细胞和终浓度10 μmol·L-1的β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)共培养,造成神经细胞损伤模型.RT-PCR方法检测Bax,Bcl-2,Caspase-3 mRNA表达水平,MTT法检测清心开窍方含药脑脊液对PC12细胞活性的影响.结果:清心开窍方含药脑脊液组PC12细胞活性明显高于模型组,Bax,Caspase-3 mRNA表达水平降低,Bcl-2 mRNA表达增高,与模型组比较差异显著(P＜0.05,P＜0.01).结论:清心开窍方对Aβ25-35损伤的PC12细胞有明显的保护作用.     

TEA及其同源类似物TPeA拮抗β淀粉样蛋白25—35引起皮层神经元细胞活力降低

目的探讨TEA及其同源类似物TPeA对Aβ25-35所致的培养皮层神经元细胞毒性作用的影响。方法利用细胞毒性检测技术，如细胞活力检测cck-8、乳酸脱氢酶（LDH）释放检测和Calcein-AM染色，观察TEA及其同源类似物TPeA对Aβ025—35所致的培养皮层神经元细胞活力的影响。结果TEA及其同源类似物TPeA能够拮抗Aβ引起神经元死亡，包括Aβ引起细胞活力降低，LDH的释放增多，以及活细胞数目的减少。结论钾通道在Aβ引起神经元毒性作用中发挥重要作用，电压依赖性钾通道参与了Aβ引起的神经元死亡，钾通道可能成为防治神经退行性疾病的重要靶点。     

西洋参水提物对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的:探究在以SH-SY5Y细胞作为神经元代表,β淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导凋亡的阿尔茨海默症(Alzheimer′s Disease,AD)体外细胞模型中,西洋参水提物(water extracts of American Ginseng,WEAG)对神经元的保护作用.方法:流式细胞仪(FCM)检测确定Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡的最佳浓度和时间,以及WEAG抗凋亡的浓度,MTT法检测细胞存活率,Hoechst33258染色观察细胞形态的变化.结果:50 μmol/L Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞72 h后,细胞变圆,聚集,Hoechst33258染色可见明显的颗粒状和固缩状荧光,FCM检测凋亡率达(37.30±0.69)%,与对照组(1.56±0.80)%比较,差异具有显著性意义(P<0.05).而Aβ25-35和不同浓度的WEAG(0.5、1、5 mg/ml)同时孵育后,细胞形态明显改善,MTT值显著高于Aβ25-35处理组(P<0.01),凋亡率分别降低到(16.71±1.08)%、(10.52±2.11)%和(3.39±1.65)%,与Aβ25-35损伤组(37.30±0.69)%相比,差异具有统计学意义(p<0.05),并呈现出剂量依赖关系.结论:西洋参水提物对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡有显著的保护作用.     

脑还丹对大鼠Aβ_(25-35)抗体和PC12细胞的凋亡及其炎性因子的影响

目的:探讨脑还丹对由Aβ25-35诱导的实验大鼠Aβ25-35抗体和PC12细胞的凋亡及其炎性因子的影响。方法:将SD大鼠分为对照组、Aβ组、脑还丹高剂量组、脑还丹低剂量组,除对照组外,其余各组分别于实验第1天、第15天和第45天接种Aβ25-35,接种完毕后,中药组予相应药物治疗105d,各组分别在每次接种后第7天取血检测Aβ25-35抗体滴度。另外,培养PC12细胞,分组同上,除对照组外,各组分别加入Aβ25-35,同时中药组加入相对应含药血清,培养72h后检测bcl-x L mRNA和IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白含量。结果:各组抗体量均高于对照组(P0.01),脑还丹高剂量组产生抗体量高于Aβ组与脑还丹低剂量组(P0.05);Aβ组IL-1β、IL-6、TNF-α分泌量均显著高于对照组(P0.01),脑还丹低剂量组、Aβ组的IL-1β、IL-6、TNF-α分泌量均高于脑还丹高剂量组(P0.01);Aβ组与脑还丹低剂量组bcl-x L mRNA的表达较对照组和脑还丹高剂量组低(P0.01)。结论:脑还丹具有促进特异性Aβ25-35抗体产生的作用,同时其抗凋亡作用可能是通过降低IL-1β、IL-6、TNF-α炎性因子的水平实现的,并呈剂量依赖性。     

独活香豆素对Aβ25-35损伤神经元的保护作用及机制研究

目的:研究独活香豆素对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)损伤神经元的保护作用及可能机制。方法:从新生乳鼠大脑皮层中分离纯化神经元,与Aβ25-35、不同浓度独活香豆素和丹酚酸B共同孵育24 h,用噻唑蓝(MTT)法和乳酸脱氢酶(LDH)测定法检测细胞存活率与LDH释放量,用Hoechst 33258染色检测Aβ25-35诱导的神经元凋亡,用RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2、Caspase-3 mRNA的表达量。结果:独活香豆素(10、50、100、150μg/ml)能明显提高Aβ25-35(30μM)损伤神经元的存活率,降低LDH释放量,抑制神经元凋亡,以浓度为100μg/ml时作用最显著,作用强度与丹酚酸B相当;独活香豆素能提高神经元Bcl-2 mR-NA、降低Caspase-3 mRNA的表达量。结论:独活香豆素对Aβ25-35损伤神经元具有保护作用,其机制可能与抑制促凋亡基因Caspase-3、促进抗凋亡基因Bcl-2 mRNA表达有关。     

人参皂苷Rg1对Aβ25-35诱导的BT325细胞株脑啡肽酶表达的影响

目的 :本研究拟探讨人参皂苷Rg1对Aβ2 5 - 35诱导的BT32 5细胞株脑啡肽酶表达的影响。方法 :应用MTT比色法检测一定剂量Aβ2 5 - 35 (2 5 μmol/L)和不同浓度人参皂苷Rg1(5、 10、 2 0 μmol/L)对BT32 5细胞存活率的影响 ,应用RT -PCR观察细胞中NEP基因表达的变化。结果 :2 5 μmol/L的Aβ2 5 - 35作用于BT32 5细胞株 ,BT32 5细胞存活率下降 ,细胞内NEP的表达降低。人参皂苷Rg1能提高Aβ2 5 - 35处理的BT32 5细胞存活率 ,使细胞内NEP表达增高。结论 :一定剂量的Aβ2 5 - 35能造成细胞损伤和细胞内NEP表达降低的模型 ,人参皂苷Rg1对Aβ2 5 - 35造成的细胞毒性具有拮抗作用 ,增高细胞内NEP的表达。     

黄精地龙方对体外培养分化的SH-SY5Y细胞Aβ25-35损伤中的保护作用研究

目的探讨黄精地龙方(RPEWM)对体外培养分化的SH-SY5Y细胞Aβ25-35损伤的影响。方法 SH-SY5Y细胞经维甲酸诱导分化,再经Aβ25-35造成细胞老年痴呆(AD)损伤,观察不同浓度RPEWM提取液对损伤后的细胞形态学、细胞增殖情况及培养液中MDA、LDH含量,细胞中SOD、GSH-Px活性和细胞内游离钙含量、Caspase-3酶活性的影响。结果 RPEWM提取液在10~125 mg/L浓度范围内能明显抗细胞AD损伤,促进细胞增殖;RPEWM提取液30,60,90 mg/L均能明显降低MDA、LDH含量及细胞内钙离子、Caspase-3酶活性,升高细胞内SOD、GSH-Px酶活性,且呈剂量依赖性。结论 RPEWM对分化的SHSY5Y细胞Aβ25-35损伤有良好的保护作用,对AD有一定治疗作用。