斑蝥素酸镁通过ERK1/2信号通路对肝癌细胞增殖的抑制作用

目的 探讨斑蝥素酸镁抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖及其裸鼠皮下移植瘤生长的作用。方法 体内外实验随机分为空白对照组、斑蝥素酸镁组、ERK1/2激动剂组(EGF组)、ERK1/2抑制剂组(SCH772984组)、斑蝥素酸镁+EGF组、斑蝥素酸镁+SCH772984组。CCK-8法、流式细胞术分别检测各组细胞增殖、周期及凋亡变化,Western blot法检测各组细胞周期蛋白(Cdc25C、Cdc2、p-Cdc2)、ERK1/2蛋白磷酸化表达及凋亡蛋白(Bad、cleaved caspase-3和Bcl-2)表达;观察各组裸鼠皮下移植瘤的生长及质量变化,Western blot法检测裸鼠移植瘤组织中增殖细胞核抗原(PCNA)表达及裸鼠移植瘤组织ERK1/2蛋白磷酸化表达。结果 斑蝥素酸镁+EGF组、斑蝥素酸镁+SCH772984组SMMC-7721细胞增殖率、p-ERK1/2、Cdc25C、Cdc2、Bcl-2蛋白表达分别低于EGF组、SCH772984组(P<0.01),而G₂/M期细胞比例、凋亡率、p-Cdc2、Bad、cleaved caspase-...     

小白菊内酯诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡的实验研究

小白菊内酯属于倍半萜内酯,是墨西哥、印度药用植物的活性成分,也是欧洲小白菊这一常用草药的活性成分[1],主要用于治疗偏头痛、炎症和各种肿瘤。20世纪90年代末,中国学者从中国特有药用植物观光木树皮中分离得到这一抗肿瘤活性物质,并且经过体外抑瘤实验证实,小白菊内酯(10.0μg/mL)对人肝癌细胞的体外抑制率为67.17%,可见其对人肝癌细胞抑制作用比较明显[2]。近年来,随着医学技术和分子生物学技术的发展及各种检测手段的出现,发现小白菊内酯可抑制NF-κB的激活[3,4],诱导细胞凋亡[1],产生细胞毒作用[5,6]。但有关从分子生物学水平研究小…     

温阳散结中药诱导BEL-7402细胞凋亡的初步研究

目的 :探讨温阳散结中药的抗肿瘤机制 ,研究温阳散结中药诱导BEL-7402细胞凋亡作用。方法 :采用细胞形态学、原位末端标记和流式细胞技术 ,观察温阳散结中药对BEL-7402细胞的影响。结果 :BEL-740 2细胞经中药处理后 ,光镜下可见凋亡细胞的形态学特征性改变 ,TUNEL标记阳性 ,流式细胞仪分析DNA含量 ,在非凋亡细胞二倍体峰 (G1)之前细胞出现典型的凋亡细胞峰 (Ap峰 )。 0005g·ml-1中药组和001g·ml^-1中药组发生凋亡的细胞数分别为139%和 216%。结论 :温阳散结中药可诱导BEL-740 2细胞发生凋亡 ,并有随浓度升高作用增强的趋势 ,实验结果表明 ,诱导肿瘤细胞凋亡可能是温阳散结中药治疗肝癌的作用机理之一。     

秦皮乙素对人肝癌BEL-7402细胞体外增殖的影响

目的:探讨秦皮乙素对人肝癌BEL-7402细胞体外增殖的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:MTT法观察药物对细胞的抑制率;流式细胞仪分析细胞凋亡率和周期;JC-1染色法检测线粒体膜电位;酶标仪检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性;免疫印迹法检测Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:秦皮乙素能显著的抑制人肝癌BEL-7402细胞的体外增殖,随着秦皮乙素浓度增加(0.025、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8μg/ml),抑制率分别为15.74%、28.25%、41.81%、51.01%、58.13%、71.51%。随秦皮乙素浓度上升(0.2、0.4、0.8μg/ml)细胞凋亡率为11.50%、20.96%、58.60%,并使细胞阻滞于S期,线粒体膜电位下降,Caspase-3、Caspase-9的活性上升,均呈剂量依赖性;而Caspase-8的活性没明显变化。Bax蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下降,均呈剂量依赖性。结论:秦皮乙素能抑制人肝癌BEL-7402细胞的体外增殖,可能通过线粒体途径诱导细胞的凋亡。     

长梗秦艽酮通过调节Akt和ERK1/2通路抑制人肝癌BEL-7402细胞生长

目的:研究长梗秦艽酮抑制人肝癌BEL-7402细胞生长与Akt和ERK1/2通路的关系.方法:采用MTT法观察BEL-7402细胞活性,Western blot蛋白质印记法检测Akt和ERK1/2磷酸化水平,流式细胞术分析细胞周期.结果:长梗秦艽酮能够抑制人肝癌BEL-7402细胞生长,诱导S期细胞周期阻滞,激活Akt和ERK1/2磷酸化,并凡Akt和ERK1/2抑制剂能够拮抗长梗秦艽酮对BEL-7402细胞的生长抑制和S期阻滞诱导作用.结论:长梗秦艽酮可以通过调节Akt和ERK1/2通路诱导肿瘤细胞周期阻滞,从而抑制肿瘤细胞生长.     

吴茱萸碱通过Hippo-YAP通路诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡的实验研究

目的探讨吴茱萸碱对人肝癌细胞株BEL-7402凋亡的影响并阐明其发挥作用的可能机制。方法 CCK-8法检测吴茱萸碱对BEL-7402细胞增殖的影响;Hoechst 33258染色观察吴茱萸碱对BEL-7402细胞凋亡现象的影响;流式细胞术观察吴茱萸碱对BEL-7402细胞凋亡和周期的影响;实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和Western blotting实验检测Hippo-YAP通路中哺乳动物STE20样蛋白激酶1(MST1)、MST2、大肿瘤抑制因子1(LATS1)和Yes相关蛋白(YAP)在正常人肝细胞株HL-7702与BEL-7402细胞中的表达差异及吴茱萸碱对BEL-7402细胞这些关键基因表达水平的影响;免疫荧光实验观察吴茱萸碱对BEL-7402细胞中YAP表达水平的影响。结果吴茱萸碱对BEL-7402细胞增殖活力具有明显的抑制作用(P0.05),呈浓度和时间依赖性;Hoechst 33258染色显示吴茱萸碱能够引起BEL-7402细胞出现核固缩、核边集等凋亡的典型形态学改变。流式细胞术结果提示吴茱萸碱能够诱导BEL-7402细胞出现凋亡数目增多和G2/M期阻滞(P0.01);q RT-PCR和Western blotting检测结果提示,与HL-7702细胞相比,MST2和LATS1在BEL-7402细胞中的表达明显下调(P0.05),YAP则明显升高(P0.05);吴茱萸碱能够激活Hippo信号通路,分别上调MST2、LATS1和抑制YAP在BEL-7402细胞中的表达水平(P0.05)。免疫荧光结果显示吴茱萸碱能够显著抑制BEL-7402细胞中过表达的YAP荧光强度(P0.01)。结论吴茱萸碱能诱导BEL-7402细胞的凋亡,其机制可能是通过激活Hippo信号通路,进而抑制下游关键基因YAP的表达。     

人参皂苷肠道代谢物诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡

目的探讨一种新的人参稀有皂苷20-O-(β-D-吡喃葡萄糖)-20(S)-原人参二醇皂苷(IH-901)对人肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制效果和诱导凋亡作用。方法以0、6.25、12.5、25、50、75、100μmol/L的IH-901作用于体外培养的BEL-7402细胞,通过MTT法检测IH-901对细胞生长的抑制作用,相差显微镜观察细胞形态变化,AO/EB的荧光核染色观察凋亡细胞形态,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果MTT实验显示IH-901抑制BEL-7402细胞的生长,呈时间及浓度依赖的方式;显微镜下观察到典型的凋亡形态变化和生化特征:细胞固缩,核染色质凝聚,出现凋亡小体;AO/EB的荧光核染色后,观察到典型的凋亡细胞;流式细胞仪可以检测到凋亡峰,且细胞被阻滞在G0/G1期。结论IH-901能通过诱导细胞凋亡的方式有效地抑制人肝癌BEL-7402细胞的生长,稀有人参皂苷IH-901可能成为一种潜在的抗肝癌药物。     

斑蝥素酸镁对人肝癌细胞SMMC-7721 ERK1/2通路和G_2/M期调控蛋白的影响

目的探讨斑蝥素酸镁对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)通路和周期相关蛋白的影响。方法将不同浓度的斑蝥素酸镁作用于人肝癌细胞SMMC-7721,免疫印迹法检测ERK1/2通路和周期相关蛋白表达的变化。结果与对照组比较,0.895、1.79μmol/L浓度组的ERK1/2蛋白磷酸化水平明显下降,同时周期相关蛋白Cdc25C、Cdc2表达显著下调。结论推测斑蝥素酸镁可能是通过抑制ERK1/2通路,进而调控Cdc25C、Cdc2的表达下调,使细胞发生G_2/M期阻滞,最终诱导细胞凋亡。     

秦皮乙素诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的机制研究

目的探讨秦皮乙素诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的分子机制。方法不同浓度秦皮乙素(1.12、2.24、4.48 mmol/L)处理人肝癌细胞SMMC-7721,流式细胞仪检测线粒体膜电位,分光光度法检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性,蛋白印迹法和免疫荧光法检测Bax、Bcl-2、Caspase-9蛋白的表达。结果秦皮乙素显著降低SMMC-7721细胞线粒体膜电位,提高Caspase-3、Caspase-9的活性,而对Caspase-8的活性无显著影响;升高Bax/Bcl-2比例,进而活化Caspase-9,并呈良好的剂量依赖关系。结论秦皮乙素可通过线粒体途径,启动下游的效应Caspase,诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡。     

苦参碱诱导人肝癌细胞BEL-7402自吞噬性死亡

目的研究苦参碱诱导人肝癌BEL-7402细胞自吞噬和自吞噬性死亡作用。方法体外培养人肝癌BEL-7402细胞,应用MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术测定细胞凋亡,自噬体标记物LC3免疫荧光定量检测自吞噬,透射电镜分析细胞自吞噬死亡超微结构改变。结果苦参碱抑制细胞增殖呈质量浓度依赖性,作用48h的IC50值为1.1mg/mL;0.6～1.6mg/mL苦参碱作用12h可诱导BEL-7402细胞凋亡逐渐增多,1.2mg/mL作用12h时细胞凋亡率达(44.88±0.78)%;1.2mg/mL苦参碱持续作用可以诱导自吞噬阳性细胞逐渐增多,作用12h时自吞噬阳性细胞达(63.16±0.29)%;超微结构显示细胞凋亡呈现自噬性细胞死亡特点。结论苦参碱体外能诱导BEL-7402细胞自吞噬和自噬性死亡。     

雷公藤甲素对人肝癌Bel-7402细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究雷公藤甲素影响人肝癌Bel-7402细胞增殖及凋亡的作用及机制。方法:采用细胞药理学实验方法,人肝癌细胞株Bel-7402与雷公藤甲素(10μg/mL、5μg/mL及0.25μg/mL)共培养,MTT法检测其对Bel-7402细胞增殖的影响,TUNEL技术检测其对Bel-7402细胞凋亡的影响,免疫组织化学(SABC)染色法检测Bax及Bcl-2蛋白表达。结果:作用48h后雷公藤甲素(10μg/mL、5μg/mL、0.25μg/mL)3个剂量对Bel-7402细胞增殖均有显著抑制作用,P<0.01,抑制作用随药物浓度增高而有加强趋势,最高抑制率可达38.67%,且呈量效关系,3个剂量组间有显著性差异,P<0.01。雷公藤甲素(10μg/mL、5μg/mL、0.25μg/mL)能有效诱导Bel-7402细胞凋亡,作用显著,P<0.01,且呈显著的量效关系。雷公藤甲素(10μg/mL、5μg/mL、0.25μg/mL)用药组Bax、Bcl-2表达与对照组比较,无显著性差异,P>0.05。结论:雷公藤甲素能抑制人肝癌Bel-7402细胞增殖和诱导其凋亡,其诱导Bel-7402细胞凋亡的作用机制可能不是通过Bax、Bcl-2途径。     

半夏蛋白对人肝癌细胞Bel-7402的诱导凋亡作用

目的观察并比较半夏蛋白对体外培养的人肝癌细胞Bel-7402的生长抑制作用。方法应用流式细胞技术,检测半夏蛋白对人肝癌细胞Bel-7402的诱导凋亡作用,并观察了其诱导凋亡作用的量-效关系。结果60%硫酸铵沉淀蛋白没有明显诱导Bel-7402细胞凋亡的作用,而30%硫酸铵沉淀蛋白有诱导Bel-7402细胞凋亡的作用。30%沉淀进一步分离结果显示,只有0.1 mol/L NaCl洗脱峰有一定诱导Bel-7402细胞凋亡的作用。结论半夏蛋白有一定的诱导Bel-7402细胞凋亡作用,其主要成分可能存在于总有机酸部位。     

高良姜素诱导肝癌BEL-7402细胞凋亡的研究

目的:研究高良姜素诱导肝癌细胞系BEL-7402细胞凋亡.方法:MTT法测定BEL-7402细胞毒性及细胞生长,荧光显微镜观察细胞形态学的变化,流式细胞仪分析细胞周期和线粒体膜电位的变化.发色底物法检测Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9活性变化.结果:高良姜素对BEL-7402细胞IC50为30.15 mg/L,BEL-7402细胞生长曲线表明,高良姜素浓度增高,生长率明显下降.细胞凋亡可在20～80 mg/L高良姜素处理后24 h出现.凋亡细胞主要表现为核染色质固缩,荧光染色增强.高良姜素阻断细胞于G.期,线粒体膜电位降低.Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9被激活,呈时间依赖性改变.高良姜素处理BEL-7402细胞6 h时Caspase-9活性最高,而Caspase-6活性在12 h达峰值,Caspase-3活性峰值时间在18 h.结论:高良姜素可以诱导BEL-7402细胞发生凋亡,其途径可能是通过线粒体旁路.     

蛇毒复合酶对人肝癌细胞BEL-7402的抑瘤研究

观察蛇毒复合酶对人肝癌细胞 BEL - 74 0 2体外生长的抑制作用。经体外细胞培养 ,采用台盼兰染法、细胞形态观察和流式细胞术 ,检测人肝癌细胞的生长抑制率 ,以及细胞形态和细胞周期的变化。结果 ,蛇毒复合酶对人肝癌细胞有极强的抑瘤作用 ,8h和 12 0 h抑瘤率分别达 79.5%和 94 .5%。镜检及涂片染色发现癌细胞胞膜破裂、胞质外溢。流式细胞术分析显示蛇毒复合酶主要杀伤 G0 / G1期人肝癌细胞 ,同时 ,阻滞 S期细胞进入 G2 / M期。说明 :蛇毒复合酶对人肝癌细胞具有一定体外抑瘤作用 ,其作用机理与破坏细胞胞膜和干扰细胞生长周期有关。     

黄芪总苷对肝癌BEL-7402细胞株的抑制作用

目的研究黄芪总苷对肝癌BEL-7402细胞增殖的抑制作用及探讨作用机理。方法肝癌BEL-7402细胞与不同浓度的黄芪总苷培养12,24,48 h,应用MTT和流式细胞术分析黄芪总苷对细胞的作用。结果黄芪总苷对肝癌BEL-7402细胞增殖具有明显的抑制作用并呈剂量、时间依赖性。黄芪总苷对肝癌BEL-7402细胞具有促进凋亡作用,并且上调p53基因表达。结论黄芪总苷可抑制肝癌BEL-7402的增殖,其抑制肝癌BEL-7402作用与其促进肿瘤细胞凋亡、上调p53基因表达有关。     

40种香豆素类化合物对人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402细胞生长抑制活性的筛选

目的:寻找中药中抗肿瘤活性化合物和先导化合物,为开发新药奠定基础。方法:采用人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402体外培养法,鉴定受试的40种香豆素类化合物对其生长的抑制作用。结果:伞形花内酯刘寄奴酸酯、木桔素、环氧酸橙皮油素、酸橙皮油素、前胡酮、芸香苦素、牛防风素和异香柑内酯对人胃癌细胞株BGC细胞的生长有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系;伞形花内酯刘寄奴酸酯、异虎耳草素、前胡素和二氢山芹醇当归酸酯对人肝癌细胞株BEL-7402细胞的生长有一定程度的抑制作用,且呈浓度-效应关系。结论:香豆素类化合物是潜在的抗肿瘤药物。     

冬凌草甲素抑制人肝癌BEL-7402细胞生长及诱导细胞凋亡的机制研究

目的探讨冬凌草甲素体外对肝癌BEL-7402细胞生长抑制作用及诱导细胞凋亡作用机制。方法以8、16、24、32μmol/L冬凌草甲素作用于体外培养的BEL-7402细胞,MTT法检测细胞生长抑制率,应用流式细胞仪检测细胞凋亡,Hoechst33258荧光染色法和DNA凝胶电泳观察细胞凋亡时的形态学变化。应用Westernblotting观察caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白表达变化。结果冬凌草甲素可显著地抑制BEL-7402细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,并呈现出明显的量-效与时-效关系。冬凌草甲素作用60h后,在Hoechst33258荧光染色图片上可见核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征,同时Westernblotting显示32000的caspase-3酶原蛋白的激活,出现20000的亚单位,凋亡过程中伴有Bcl-2蛋白表达的降低和Bax蛋白上调。结论冬凌草甲素能通过降低Bcl-2蛋白表达和上调Bax蛋白诱导细胞发生凋亡,抑制BEL-7402细胞的生长;冬凌草甲素可能成为一种潜在的抗肝癌药物。     

44种生物碱类化合物对人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402细胞增殖抑制活性的筛选

目的：从中药中筛选有抗肿瘤活性的化合物。方法：应用人胃癌细胞株BGC和人肝癌细胞株BEL-7402筛选44种生物碱类化合物对其增殖的抑制作用。结果：伊波加因、哈尔明碱、黄连碱、小檗碱、延胡索碱、小檗胺、吐根碱、马兜铃酸Ⅰ、番茄碱苷、澳洲茄次碱、茄次碱、金鸡宁、罂粟碱和酒石酸麦角胺对人胃癌细胞株BGC细胞的增殖有一定程度的抑制作用。且呈浓度一效应关系；最强者为黄连碱、延胡索碱、小檗胺、吐根碱、番茄碱苷、澳洲茄次碱和金鸡宁，其次为伊波加因、哈尔明碱、小檗碱、马兜铃酸Ⅰ、茄次碱、罂粟碱和酒石酸麦角胺。蛇根精、γ-崖椒碱、黄连碱、小檗碱、延胡索碱、吐根碱、马兜铃酸Ⅰ、茄次碱和喜树碱对人肝癌细胞株BEL-7402细胞的增殖有一定程度的抑制作用，且呈浓度-效应关系；最强者为吐根碱、小檗碱、延胡索碱和喜树碱，其次为黄连碱、马兜铃酸Ⅰ和茄次碱。结论：上述生物碱类化合物可能是含有该生物碱、有抗肿瘤活性中药的有效成分，亦可能成为开发抗肿瘤新药的候选药物。     

去甲斑蝥素对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的：探讨去甲斑蝥素对HepG2细胞凋亡的影响。方法：采用形态学观察和流式细胞分析技术。结果：去甲斑蝥素作用HepG2细胞后,凋亡小体形成,凋亡率增加。结论：去甲斑蝥素诱导HepG2细胞凋亡。     

去甲斑蝥素诱导人肝癌Huh7细胞凋亡和周期阻滞的机制研究

目的 研究去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对人肝癌Huh7细胞毒性及作用机制.方法 10～100μmol/L去甲斑蝥素干预人肝癌Huh7细胞后,甲基噻唑蓝法检测去甲斑蝥素对Huh7的细胞毒性;46μmol/L去甲斑蝥素干预人肝癌Huh7细胞后,倒置显微镜下观察Huh7细胞的形态学变化,流式PI染色法...