地黄多糖对H_2O_2诱导乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及其机制研究

目的:研究地黄多糖(rehmannia polysaccharide)对H_2O_2诱导乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及其机制研究。方法:无菌环境下分离并培养SD大鼠乳鼠心肌细胞72h后随机分为:空白对照组、H_2O_2干预组、地黄多糖(10、20和40μg/ml)+H_2O_2干预组和舒血宁注射液(SXN,100μg/ml)+H_2O_2干预组(阳性对照组),每组设10个复孔。各组细胞经药物干预6h后,通过光学纤维镜观察细胞形态并采用MTT法检测细胞存活率;检测培养液中心肌酶:谷草转氨酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)活性;测定细胞中抗氧化酶:超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;通过酶联免疫(ELISA)法测定培养液中炎症因子:肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)含量水平;通过Flow Cytometry检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,通过RT-PCR检测细胞中AKT mRNA、bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达并计算bcl-2/Bax表达比值。结果:较H_2O_2干预组,地黄多糖(20、40μg/ml)+H_2O_2干预组乳鼠心肌细胞形态明显好转,细胞存活率显著升高,培养液中AST、CPK、LDH活性显著降低,细胞中SOD、CAT活性显著升高且MDA含量显著降低,培养液中TNF-α、IL-1、IL-6含量显著降低,细胞凋亡状况明显改善、凋亡率显著降低,bcl-2 mRNA表达显著上调且Bax mRNA表达显著下调、bcl-2/Bax表达比值显著升高,其中地黄多糖40μg/ml+H_2O_2干预组AKT mRNA表达显著上调。结论:地黄多糖能够有效改善H_2O_2诱导损伤的乳鼠心肌细胞生存状态、提高细胞存活率、降低细胞凋亡率,提示地黄多糖对H_2O_2诱导损伤的乳鼠心肌细胞具有保护作用;其作用机制可能与地黄多糖能够有效改善抗氧化酶活性、抑制氧化应激损伤,调节凋亡相关基因表达,抑制炎症反应相关。     

基于AMPK-mt TFA-PINK1信号探讨参葵通脉颗粒改善慢性心衰心肌线粒体损伤的机制

目的探讨参葵通脉颗粒治疗慢性心衰的可能作用机制。方法采用腹主动脉缩窄法制备慢性心衰大鼠模型,随机分为模型组,参葵通脉低、中、高剂量组,阳性药组,另以10只不缩窄腹主动脉的大鼠为假手术组。根据分组给予相应药物,模型组和假手术组给予等容积蒸馏水灌胃,每天1次,各组均干预4周。生理多导仪检测大鼠血流动力学指标变化;电镜检测心肌超微结构的变化;分光光度法检测Ca~(2+)-ATP酶与Na~+-K~+-ATP酶活性;Western Blot检测p-AMPKα、AMPKα、NRF-1、mt TFA、PINK1、p-parkin、parkin的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠LVEDD、LVESD显著升高,LVEF、FS显著降低(P0.05);与模型组比较,参葵通脉颗粒各组LVEDD、LVESD显著降低,LVEF、FS显著升高(P0.05),提示参葵通脉颗粒对慢性心衰具有良好的改善作用。与假手术组比较,模型组大鼠心肌超微结构损伤,线粒体出现空泡等变化,给药干预组损伤明显减轻(P 0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠Ca2+-ATP酶与Na+-K+-ATP酶显著下降(P 0.05);与模型组比较,参葵通脉颗粒各组Ca~(2+)-ATP酶与Na~+-K~+-ATP酶显著上升(P 0.05)。与正常组相比,模型组NRF-1、mt TFA显著降低(P 0.05);与模型组比较,参葵通脉颗粒3个剂量组NRF-1、mt TFA显著增加(P 0.05)。与正常组相比,模型组p-AMPKα/AMPKα、PINK1、p-parkin/parkin有一定增加;与模型组比较,参葵通脉颗粒可促进p-AMPKα/AMPKα、PINK1、p-parkin/parkin的进一步增加(P 0.05)。结论参葵通脉颗粒对慢性心衰模型大鼠具有良好的治疗作用。慢性心衰模型大鼠心肌线粒体损伤明显增加,参葵通脉颗粒可以调控AMPK-mt TFA-PINK1信号轴,改善心肌细胞线粒体自噬,促进线粒体生成。     

冠心平对H2O2致乳大鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的：观察冠心平对过氧化氢（H2O2）所致乳鼠培养心肌细胞损伤的保护作用。方法：原代培养的新生SD乳大鼠,随机分为正常组、模型组、维拉帕米组、和冠心平3个剂量组。用比色法观察乳鼠心肌细胞培养液的乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌酸激酶（CK）、脂质过氧化产物丙二醛（MDA）的含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性,并用光镜观察心肌细胞形态学改变。结果：损伤组乳鼠心肌细胞培养液中LDH、CK-MB、CK和MDA含量非常显著增高,SOD活性非常显著降低（与对照组相比,P〈0.01）,心肌细胞损伤严重;冠心平保护组与H2O2损伤组相比,LDH、CK-MB、CK和MDA明显降低,SOD活性显著升高（P〈0.01,P〈0.05）,心肌细胞形态学变化减轻。结论：冠心平对H2O2诱导的乳鼠心肌细胞损伤有保护作用,其机制可能与清除氧自由基、抗脂质过氧化损伤有关。     

Pim-2减轻H_2O_2诱导乳鼠心肌细胞损伤及三七皂苷R1的干预研究

目的:研究Pim-2基因在过氧化氢(H_2O_2)诱导乳鼠心肌细胞损伤中的作用及三七皂苷R1的干预效应。方法:H_2O_2干预原代培养的乳鼠心肌细胞造成细胞损伤模型,分别以三七皂苷R1和Pim-2 RNAi干预细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术测细胞凋亡,实时定量PCR法测细胞内Pim-2 mRNA水平,Western blotting法测Pim-2、Bax及Bcl-2蛋白表达。结果:H_2O_2上调Pim-2 mRNA及蛋白水平,抑制细胞增殖与促进凋亡,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.001)。Pim-2基因沉默后,细胞活性降低,凋亡增加,LDH与MDA浓度增加,SOD活性降低,Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白水平降低,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.001)。三七皂苷R1预处理能显著增加细胞活力,抑制细胞凋亡,上调Pim-2蛋白水平,与H_2O_2组相比差异有统计学意义(P<0.001)。结论:Pim-2能减轻H_2O_2致心肌细胞损伤,可能与抗凋亡,抗氧化,调控凋亡相关蛋白Bax及Bcl-2表达有关;三七皂苷R1抗心肌细胞损伤与Pim-2有关。     

黄芪多糖对H_2O_2所致乳鼠心肌细胞损伤保护作用的研究

目的观察黄芪多糖(APS)对H_2O_2所致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用机制。方法无菌条件下分离并培养乳鼠心肌细胞72 h后分为空白对照组、H_2O_2组、APS(20、40和80μmol/L)+H_2O_2组,每组设10个复孔。给药干预24 h后,观察比较各组细胞形态、细胞存活率、细胞中抗氧化酶(SOD、GSH-Px、CAT)活性和丙二醛(MDA)含量、培养液中心肌酶(AST、CPK、LDH)活性、细胞凋亡状况及细胞凋亡率情况。结果倒置光学显微镜下,空白对照组呈单层簇状生长,且伪足多而饱满,搏动明显,节律一致;H_2O_2组细胞胞浆空泡、伪足少,细胞脱落、悬浮、溶解坏死,搏动弱且频率低、节律不齐等;APS各治疗组与H_2O_2组比较,心肌细胞形态不同程度好转,且以APS(80μmol/L)+H_2O_2组改善效果最明显。H_2O_2组心肌细胞存活率与空白对照组比较降低(P0.01);APS(40、80μmol/L)+H_2O_2组细胞存活率与H_2O_2组比较升高(P0.01)。H_2O_2组乳鼠心肌细胞SOD、GSH-Px、CAT活性与空白对照组比较降低,MDA含量则升高(P0.01);APS(40、80μmol/L)+H_2O_2组SOD、GSH-Px、CAT活性与H_2O_2组比较均升高(P0.05或P0.01),MDA含量则降低(P0.01)。H_2O_2组乳鼠心肌细胞培养液中AST、CPK、LDH活性与空白对照组比较均升高(均P0.01)。APS(40、80μmol/L)+H_2O_2组AST、CPK、LDH活性与H_2O_2组比较均降低(均P0.05或P0.01)。Flow Cytometry检测空白对照组仅存在少量凋亡细胞,H_2O_2组凋亡细胞数量较空白对照组增多;与H_2O_2干预组比较,APS干预24 h可明显改善H_2O_2诱导损伤乳鼠心肌细胞凋亡状况,其以APS(80μmol/L)+H_2O_2组效果最明显。H_2O_2组乳鼠心肌细胞凋亡率与空白对照组比较升高(P0.01);APS(40、80μmol/L)+H_2O_2组细胞凋亡率与H_2O_2组比较则降低(P0.01)。结论APS可通过有效改善细胞生存状态、提高细胞存活率、降低氧化应激损伤、抑制细胞凋亡而发挥对H_2O_2乳鼠心肌细胞损伤的保护作用。     

丹参多酚酸盐对过氧化氢所致乳鼠心肌细胞损伤保护作用的研究

目的:研究丹参多酚酸盐(Salvianolate)对过氧化氢(H_2O_2)所致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用及其机制。方法:分离并培养乳鼠心肌细胞72 h后随机分为空白对照组、H_2O_2组、丹参多酚酸盐(50、100和200 mg/L)+H_2O_2组,每组设8个复孔;给药干预24 h后,通过光学显微镜观察细胞形态,MTT法测定细胞存活率;检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量,测定培养液中谷草转氨酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)含量;ELISA法测定培养液中TNF-α、IL-1、IL-6含量;通过Flow Cytometry检测细胞凋亡状况并计算细胞凋亡率。结果:与H_2O_2组比较,丹参多酚酸盐各干预组乳鼠心肌细胞生存状态呈不同程度好转,其中以丹参多酚酸盐(200mg/L)+H_2O_2组效果最为显著;丹参多酚酸盐(100和200 mg/L)+H_2O_2组细胞存活率显著升高,SOD、CAT活性显著升高且MDA含量显著降低,培养液中AST、CPK、LDH含量显著降低,TNF-α、IL-1、IL-6水平均显著降低;丹参多酚酸盐各干预组心肌细胞凋亡状况呈不同程度改善,其中丹参多酚酸盐(100和200 mg/L)+H_2O_2组凋亡率显著降低,上述差异均具有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论:丹参多酚酸盐能够通过改善细胞生存状态、提高细胞存活率、降低氧化应激损伤、抑制炎症反应、抑制细胞凋亡而对H_2O_2所致乳鼠心肌细胞损伤起到保护作用。     

气血并治方有效组分干预H/R损伤心肌细胞AMPK相关糖脂代谢通路的分析

目的:观察气血并治方有效组分对缺氧/复氧(H/R)损伤心肌细胞一磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)相关糖脂代谢通路的作用机制。方法:分离、提取、培养出生1~2 d SD乳鼠原代心肌细胞,于常规倒置相差显微镜下观察原代心肌细胞形态及生长状态,经α-横纹肌辅肌动蛋白(α-actinin)免疫荧光染色鉴定为心肌细胞后,进行缺氧3 h复氧2 h处理制作H/R损伤模型,随机分为正常组(正常氧),模型组(缺氧/复氧),曲美他嗪组(缺氧/复氧+100μmol·L-1盐酸曲美他嗪,TMZ),气血并治方有效组分组(缺氧/复氧+1 mmol·L-1气血并治方有效组分,CWQB)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)测定AMPK代表性亚基心肌一磷酸腺苷酸活化蛋白激酶α(AMPKα),及其糖代谢通路中葡萄糖转运体4(GLUT4),磷酸果糖激酶2(PFK2),脂肪酸代谢通路中乙酰辅酶A羧化酶(ACC2),脂肪酸移位酶(FAT/CD36)的基因及蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组,TMZ组,CWQB组的AMPKα,GLUT4,PFK2基因和蛋白表达上调,ACC2,FAT/CD36基因和蛋白表达下调(P0.05);与模型组比较,TMZ组,CWQB组AMPKα,GLUT4,PFK2,ACC2,FAT/CD36基因和蛋白表达均上调(P0.05),其中TMZ组上调AMPKα,FAT/CD36基因和蛋白,上调GLUT4,PFK2基因表达的效果更为显著(P0.05)。结论:气血并治方有效组分可以激活H/R损伤心肌细胞的AMPK信号通路,增强GLUT4介导的葡萄糖转送,PFK2参与的糖酵解,同时促进FAT/CD36调控的脂肪酸转运,上调ACC2抑制脂肪酸氧化过程,进而提高缺氧/复氧条件下心肌细胞对葡萄糖、脂肪酸等产能底物的利用能力,改善H/R损伤心肌细胞的能量代谢。     

黄芪多糖对H_2O_2所致乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的影响

目的研究黄芪多糖对H_2O_2所致乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的影响,并探讨其可能作用机制。方法分离并培养乳鼠心肌细胞72 h后分为空白对照组、H_2O_2组、黄芪多糖20μmol/L+H_2O_2组、黄芪多糖40μmol/L+H_2O_2组、黄芪多糖80μmol/L+H_2O_2组,每组设10个复孔。每组给予相应干预24 h后,采用MTT法检测细胞存活率,采用紫外-可见分光光度计检测细胞中抗氧化酶[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)]活性,采用氧敏感荧光探针DCFH-DA检测氧自由基(ROS)含量,采用全自动生化分析仪检测培养液中心肌酶[谷草转氨酶(AST)、磷酸肌酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)]和丙二醛(MDA)含量,通过流式细胞仪检测细胞凋亡状况并计算凋亡率,采用免疫印迹法检测细胞核因子-κB(NF-κB)蛋白表达情况并进行半定量分析。结果与H_2O_2组比较,黄芪多糖40μmol/L+H_2O_2组和黄芪多糖80μmol/L+H_2O_2组细胞存活率及细胞中SOD、GSH-Px、CAT活性显著升高(P均0.05),ROS含量显著降低(P0.05),培养液中AST、CPK、LDH和MDA含量及细胞凋亡率、NF-k B蛋白表达量均显著降低(P均0.05);黄芪多糖80μmol/L+H_2O_2组细胞存活率及细胞中SOD、GSH-Px活性均显著高于黄芪多糖40μmol/L+H_2O_2组(P均0.05),CPK、MDA含量及细胞凋亡率、细胞中NF-κB蛋白表达量均显著低于黄芪多糖40μmol/L+H_2O_2组(P均0.05)。结论黄芪多糖可能通过提高心肌细胞存活率、改善抗氧化酶活性、提高ROS清除能力、降低心肌酶含量、抑制细胞凋亡、下调NF-k B蛋白表达而对H_2O_2诱导乳鼠心肌细胞氧化应激损伤起保护作用,且高剂量效果更好。     

冠心平对H_2O_2致乳大鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的:观察冠心平对过氧化氢(H2O2)所致乳鼠培养心肌细胞损伤的保护作用。方法:原代培养的新生SD乳大鼠,随机分为正常组、模型组、维拉帕米组、和冠心平3个剂量组。用比色法观察乳鼠心肌细胞培养液的乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌酸激酶(CK)、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性,并用光镜观察心肌细胞形态学改变。结果:损伤组乳鼠心肌细胞培养液中LDH、CK-MB、CK和MDA含量非常显著增高,SOD活性非常显著降低(与对照组相比,P0.01),心肌细胞损伤严重;冠心平保护组与H2O2损伤组相比,LDH、CK-MB、CK和MDA明显降低,SOD活性显著升高(P0.01,P0.05),心肌细胞形态学变化减轻。结论:冠心平对H2O2诱导的乳鼠心肌细胞损伤有保护作用,其机制可能与清除氧自由基、抗脂质过氧化损伤有关。     

山楂中有机酸对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用

目的:探讨山楂中有机酸对H_2O_2诱导H9C2心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法:将对数期生长的H9C2心肌细胞随机分为6组:空白对照组、模型组、NAC阳性对照组和山楂有机酸(浓度分别为6.25、25、100μg/m L)组。心肌细胞在100μg/m L H_2O_2作用2 h后,采用MTT法检测细胞增殖,利用试剂盒测定细胞外液LDH漏出量和GSH-Px活性及细胞内SOD、MDA水平。对心肌细胞进行HE染色,用光学显微镜观察细胞形态变化。结果:与模型组比较,山楂有机酸可促进H9C2心肌细胞增殖,使LDH漏出量和MDA含量显著降低,SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.05~P<0.001),并能明显抑制H_2O_2引起的心肌细胞形态改变。结论:山楂有机酸对H_2O_2诱导的H9C2心肌细胞损伤具有保护作用,作用机制可能和有效地改善细胞内抗氧化酶的活性,抑制氧化应激损伤有关。     

竹节参总皂苷对H2 O2致乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:通过建立H2O2诱导心肌细胞氧化应激损伤模型,观察竹节参总皂苷(SPJ)对心肌细胞的保护作用.方法:将原代培养的乳鼠心肌细胞随机分为正常组,模型组(H2O2),SPJ低剂量组(50 mg·L-1),SPJ高剂量组(100 mg·L-1).H2O2诱导心肌细胞氧化损伤2h后SPJ孵育24 h,显微镜下观察细胞搏动频率,MTT法测定细胞存活率,比色法测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶( LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及丙二醛( MDA)含量.结果:SPJ(50,100 mg·L-1)可明显增加心肌细胞搏动频率,降低H2O2所致乳鼠心肌细胞LDH释放量,升高SOD,CAT,GSH-Px活性,降低MDA含量(P＜0.01或P＜0.05).结论:SPJ对H2O2所致乳鼠心肌细胞氧化应激损伤有明显保护作用.     

当归红芪超滤物对氧化损伤乳鼠心肌细胞的保护作用及其机制

目的 探讨当归红芪超滤物对H_2O_2致乳鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用及其可能机制.方法 用高浓度的H_2O_2(400 μmol/L)在Wistar乳鼠原代培养的心肌细胞上建立氧化损伤模型,用不同质量浓度的当归红芪超滤物(3.75、7.5、15 mg/mL)进行干预.在倒置显微镜下观察各实验组心肌细胞的搏动频率,用MTT法检测心肌细胞的存活率,用试剂盒检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的活性及细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的活性、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)的量.RT-PCR技术检测caspase-3、hsp70基因在心肌细胞中的表达情况.结果 当归红芪超滤物显著提高氧化损伤心肌细胞的细胞活力;与损伤组比较,当归红芪超滤物各干预组心肌细胞LDH、CK、MPO、MDA量显著降低(P<0.01),SOD活性显著提高(P<0.01),caspase-3基因表达显著降低(P<0.05),hsp70基因表达显著提高(P<0.05),差异具有统计学意义;并且当归红芪超滤物的抗氧化损伤作用呈剂量依赖性.结论 当归红芪超滤物具有良好的抗氧化损伤作用,其机制可能与清除自由基、上调hsp70表达、抑制caspase-3活性有关.     

稳心颗粒对心肌细胞氧化应激及凋亡损伤的影响

目的探讨稳心颗粒对过氧化氢(H_2O_2)诱导大鼠H9c2心肌细胞损伤的影响。方法实验分为3组,对照组H9c2细胞不加药物培养,H_2O_2组H9c2细胞加H_2O_2培养2 h,稳心颗粒组H9c2细胞加稳心颗粒溶液培养24 h后再给予H_2O_2培养2 h,检测各组心肌细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)水平、DHE染色阳性细胞量、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平、细胞凋亡率及Bcl-2、Bax、Caspase-3、phosphorylated Akt(p-Akt)、phosphorylated PI3K(p-PI3K)、蛋白表达水平。结果与H_2O_2组比较,稳心颗粒组培养24 h和48 h后的细胞活力OD值明显升高(P均0.05),LDH、MDA水平和Bax、 Caspase-3蛋白表达水平均明显降低(P均0.05),SOD水平和Bcl-2、p-PI3K、p-Akt蛋白表达水平均明显升高(P均0.05),细胞内DHE染色阳性细胞数明显减少(P0.05),细胞凋亡率明显降低(P0.05)。结论稳心颗粒可能通过PI3K/Akt途径对H_2O_2诱导的大鼠H9c2心肌细胞损伤起到保护作用。     

藏药八味沉香散对Na2S2O4所致乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:研究八味沉香散(TBP)对连二亚硫酸钠(Na2S2O4)所致乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用。方法:采用SD乳鼠心肌细胞原代培养,采用Na2S2O4诱导心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,用TBP 10,30,100 mg·L-13种不同剂量预处理24 h后,检测培养液中半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)和细胞凋亡;测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、天冬氨酸转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD),和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性和丙二醛(MDA)含量。结果:与模型组比较,TBP 3个剂量组明显减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤后Caspase-3和细胞凋亡(P<0.05);降低LDH,CK,AST的活性和MDA含量(P<0.05),同时能够升高SOD,GSH-Px活性(P<0.05)。结论:八味沉香散对Na2S2O4所致乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤具有明显的保护作用。     

松果菊苷通过调节Nrf2表达减轻H_2O_2致心肌细胞损伤的实验研究

目的观察松果菊苷(ECH)对过氧化氢(H_2O_2)所致心肌细胞H9c2损伤的保护作用并探讨其机制。方法体外培养H9c2细胞系,采用MTT法检测H_2O_2对细胞存活率的影响,筛选最适作用浓度。将细胞分为5组,空白对照组、H_2O_2模型组(300μmol/L)、松果菊苷低剂量组(5 mg/L)、中剂量组(10 mg/L)、高剂量组(20 mg/L)。采用流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位(MMP);采用试剂盒检测培养基心肌激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)及丙二醛(MDA)释放量;采用蛋白免疫印记(WB)检测细胞质、细胞核中Nrf2蛋白表达水平。采用Nrf2抑制剂鸦胆苦醇预处理心肌细胞,检测细胞凋亡率和线粒体膜电位。结果 H_2O_2最适作用浓度为300μmol/L。与空白对照组相比,H_2O_2模型组心肌细胞凋亡率显著升高(P0.05),MMP显著降低(P0.05);与H_2O_2模型组比较,松果菊苷处理组心肌细胞凋亡率明显下降(P0.05),MMP显著升高(P0.05)。与空白对照组相比,H_2O_2模型组CK、LDH和MDA释放率明显升高(P0.05);松果菊苷处理后CK、LDH和MDA释放率显著降低(P0.05)。与空白对照组相比,H_2O_2模型组Nrf2蛋白核转移水平增加(P0.05),与H_2O_2模型组比较,松果菊苷处理组Nrf2蛋白核转移水平进一步显著增加(P0.05)。与松果菊苷处理组比较,鸦胆苦醇处理组心肌细胞凋亡率显著升高(P0.05),MMP显著降低(P0.05)。结论松果菊苷可以减轻H_2O_2对心肌细胞造成的损伤,推测其机制是通过促进Nrf2蛋白核移位激活Nrf2通路实现的。     

北葶苈子炮制前后对H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞损伤保护作用

目的比较北葶苈子炮制前后对H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞损伤的保护作用。方法 H_2O_2诱导H9c2细胞建立细胞损伤模型,同时加入北葶苈子生品及炮制品(400、200、100μg/mL)处理细胞6 h。MTT法检测H9c2细胞存活率,流式细胞术检测细胞ROS、线粒体膜电位、细胞凋亡率、自噬空泡,Incell-Western法检测细胞凋亡相关蛋白,并检测细胞LDH、MDA、T-SOD、GSH-PX水平。结果与模型组比较,北葶苈子炮制前后均能降低H9c2细胞凋亡率、自噬空泡、ROS水平及凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2比值(P0.01),增加线粒体膜电位(P0.01),降低细胞培养液中LDH及细胞MDA水平(P0.01),提高细胞T-SOD、GSH-PX水平(P0.05,P0.01);北葶苈子炮制品抑制caspase-3蛋白表达(P0.05)。结论北葶苈子炮制前后均可有效改善由H_2O_2诱导的心肌细胞损伤,可能与其调节氧化应激的作用有关。     

麝香及其代用品人工麝香对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞损伤保护作用比较研究

目的:研究麝香及其代用品人工麝香对H_2O_2诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用及机制。方法:将对数期生长的H9c2心肌细胞随机分为5组:正常对照组、模型组、NAC组、天然麝香组及人工麝香组。心肌细胞在H_2O_2 100μmol/L作用2 h后,采用MTS法检测细胞光密度值,利用试剂盒测定培养液LDH漏出量和GSH-Px活性,测定细胞内SOD活性和MDA含量。利用绿色荧光探针测定细胞内活性氧(ROS)水平,对心肌细胞进行伊红染色,光学显微镜观察细胞形态变化。结果:与模型组比较,50μg/mL天然麝香能显著升高细胞存活率,降低LDH漏出量和细胞内MDA含量及ROS水平,升高细胞内SOD活性及培养液GSH-Px活性(P<0.05～P<0.001),并能抑制H_2O_2对心肌细胞形态的改变。50μg/mL人工麝香对心肌细胞也有一定保护作用,但差异无统计学意义。结论:麝香对H_2O_2诱导的H9c2心肌细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与清除ROS和改善细胞内抗氧化酶活性有关。天然麝香对心肌细胞的保护作用强于人工麝香。     

红参对H_2O_2诱导H9c2大鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用

目的探讨红参有效成分对心肌细胞氧化应激损伤的保护作用。方法过氧化氢(H_2O_2)诱导H9c2大鼠心肌细胞建立体外心肌细胞氧化应激损伤模型;MTT法检测细胞存活率;试剂盒检测细胞因子LDH释放、SOD活性和MDA含量;流式细胞术检测ROS、细胞凋亡;Western Blot法检测细胞凋亡相关蛋白表达。结果与模型组相比,红参有效成分预处理后,心肌细胞存活率显著提高,LDH水平下降,SOD活性显著提高,MDA水平受到抑制,ROS水平显著降低,细胞凋亡率显著降低。同时红参干预后心肌损伤细胞促凋亡蛋白Bax下调,抗凋亡蛋白Bcl-2表达上调,Bcl-2/Bax比值升高。结论红参通过降低ROS水平和细胞凋亡保护心肌细胞氧化应激损伤。     

盐酸小檗碱对 H2O2 诱导的 H9C2 心肌细胞损伤的保护机制研究

目的:探讨盐酸小檗碱对H_2O_2诱导的H9C2心肌细胞损伤的保护作用和机制。方法:将H9C2心肌细胞随机分成对照组、模型组(200μmol/L H_2O_2处理)、盐酸小檗碱+H_2O_2组(10μmol/L盐酸小檗碱预处理+200μmol/L H2O)2和盐酸小檗碱+Tatbeclin1+H_2O_2组(10μmol/L盐酸小檗碱预处理+1μmol/L Tat-beclin1和200μmol/L H2O)2。采用MTT法测定细胞活力、乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)法测定细胞损伤、免疫荧光实验分析细胞自噬情况、Western Blot检测细胞beclin1表达。结果:与对照组比较,模型组H9C2细胞存活率显著降低、LDH释放显著增加、LC3绿色荧光增多、beclin1蛋白表达显著增加(P 0.05);与模型组比较,盐酸小檗碱+H_2O_2组H9C2细胞存活率提高,LDH释放减少、LC3绿色荧光减少、beclin1蛋白表达降低(P 0.05);与盐酸小檗碱+H_2O_2组比较,盐酸小檗碱+Tat-beclin1+H_2O_2组H9C2细胞存活率降低、LDH释放增加、LC3绿色荧光增多(P 0.05)。结论:盐酸小檗碱能有效减轻H_2O_2诱导的H9C2心肌细胞损伤和细胞自噬,其机制可能与抑制beclin1表达有关,为临床上应用盐酸小檗碱防治心肌细胞损伤提供实验基础和理论依据。     

刺五加叶皂苷对乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:探讨刺五加叶皂苷(ASS)对乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用.方法:采用过氧化氢(H_2O_2)诱导Wistar大鼠乳鼠心肌细胞氧化损伤,给予ASS 600,300 mg·L~(-1),通过细胞形态学变化、细胞存活率、培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性及细胞内丙二醛(MDA)含量来反映氧化损伤程度;同时通过检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性及还原型谷胱甘肽(GSH)含量,探讨ASS对氧化应激损伤的影响.结果:50,100,200μmol·L~(-1)的H_2O_2均能够诱导心肌细胞发生氧化应激性损伤:心肌细胞存活率显著降低(P<0.01或P<0.001),细胞培养液中LDH的活性及细胞内MDA含量明显增加(P<0.05,P<0.01或P<0.001);同时心肌细胞的形态学发生损伤性改变.而且,随着H_2O_2浓度的增加,心肌细胞的氧化损伤程度越严重.ASS 600 mg·L~(-1)能减轻H_2O_2(100 μmol·L~(-1))诱导的氧化应激损伤:LDH的活性(1 687.40±97.51)U·mL~(-1)及细胞内MDA含量(16.50±2.66)nmol·mg~(-1),差异有统计学意义(P<0.01和P<0.05).还可以增加细胞内GSH含量(8.91±1.06)μmol·mg~(-1)及GSH-Px,SOD,CAT活性(845.87±63.76)mU·mg~(-1),(89.55±6.93),(93.07±10.40)U·mg~(-1),差异显著(P<0.05).结论:ASS对100μmol·L~(-1)H_2O_2所致的氧化应激性损伤有明显的保护作用,其机制可能与其抑制脂质过氧化反应,增强心肌细胞抗氧化能力有关.