荧光光谱法研究葛根素与牛血清白蛋白的相互作用

目的:研究葛根素(puerarin,PR)与牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)的相互结合反应。方法:以 BSA 为荧光剂,PR 为荧光猝灭剂,在激发波长225 nm、发射波长340 nm 下测定荧光强度;分别测相同浓度的 BSA 和 PR 的荧光发射光谱和紫外吸收光谱。结果:随着 PR 浓度的增加,BSA 的荧光强度有规律地降低且呈良好的线性关系。结论:PR 与 BSA 的相互作用为静态猝灭过程。结合常数 K_R=1.37×10~6L·mol~(-1),供体(BSA)与受体(PR)间距离 r=3.44 nm,能量转移效率 E=0.670。根据热力学参数推测了 PR 与 BSA 的作用力类型。     

曲克芦丁与牛血清白蛋白的相互作用研究

目的采用荧光光谱法和紫外吸收光谱法研究曲克芦丁与牛血清白蛋白(BSA)结合反应的特征。方法将曲克芦丁对BSA内源性荧光的猝灭数据分别应用Stern-Volmer方程和Lineweaver-Burk双倒数方程计算反应的荧光猝灭常数和结合常数,应用双对数方程计算结合位点数,热力学公式计算二者结合主要作用力类型,在此基础上应用Frster非辐射能量转移理论,计算曲克芦丁与BSA相互结合时给体-受体间的距离和能量转移效率。结果结果表明曲克芦丁能够有效降低BSA的内源性荧光,其猝灭机制属于静态猝灭,二者之间的结合力为疏水作用力,二者的结合常数为106数量级,结合位点数为1,作用距离为1.97nm,能量转移效率为0.529。结论曲克芦丁可与BSA通过疏水作用结合为复合物,经静态猝灭机制引起BSA内源性荧光的猝灭。     

荧光法研究3种甲基黄嘌呤类生物碱与牛血清白蛋白的相互作用

目的:研究咖啡因、茶碱、可可碱3种甲基黄嘌呤类生物碱与牛血清白蛋白(BSA)结合反应的荧光光谱行为,了解其与蛋白质结合的信息。方法:采用荧光光谱法研究25℃和37℃时3种生物碱不同浓度对BSA的荧光猝灭作用,通过Stern-Volmer曲线和Perrin曲线线性拟合计算得到动态猝灭常数和静态猝灭常数,判断猝灭机制;计算结合常数、结合位点数及热力学函数ΔH、ΔS、ΔG,判断其结合作用力模型。结果:随着3种生物碱浓度升高,BSA内源荧光强度有规律地降低;随温度的升高,静态猝灭常数和结合常数均降低,而3种生物碱与BSA的结合常数差别较大,但结合位点数均接近1;ΔG<0,ΔH<0,ΔS>0。结论:3种生物碱能较显著猝灭BSA的荧光,且机制均为静态猝灭,与白蛋白之间均存在以疏水相互作用为主的结合作用;3种结构相近的生物碱与BSA的相互作用存在差异。     

荧光光谱法和分子对接研究拉米夫定、依非韦伦、替诺福韦与牛血清白蛋白的相互作用及机制

目的:研究拉米夫定、依非韦伦、替诺福韦与牛血清白蛋白(BSA)的相互作用及其机制。方法:通过荧光光谱法研究不同温度下不同浓度的拉米夫定、依非韦伦、替诺福韦与BSA的结合反应,分别测定其荧光强度,根据Stern-Volmer方程等公式计算动态猝灭常数(KSV)、表观猝灭常数(Kq)、结合常数(KA)、结合位点(n)和热力学焓变(ΔH)、自由能变(ΔG)、熵变(ΔS),并运用Sybyl6.7 Flex X模块建立这3种药物与BSA的分子对接模型。结果:3种药物与BSA相互作用的Kq均大于2.0×1010L/(mol·s),且随温度的升高而降低,n均接近于1,其热力学函数ΔG<0、ΔS<0、ΔH<0。分子对接模型显示,3种药物主要与BSA的Sudlow部位Ⅰ亚结构域发生结合。结论:3种药物与BSA之间存在相互作用,荧光猝灭方式以静态猝灭为主,结合反应为自发分子作用过程,结合作用力均以氢键和范德华力为主。荧光试验和分子对接研究结果一致,两者可相互补充。     

光谱法研究头孢丙烯与牛血清白蛋白的相互作用

目的:研究头孢丙烯(CE)与牛血清白蛋白(BSA)之间的相互作用。方法:采用荧光猝灭光谱法、紫外光谱法和同步荧光光谱法,研究289、299、309 K温度下作用50 min时CE与BSA的相互作用。根据Stern-Volmer方程计算动态猝灭常数(KSV)和动态猝灭速率常数(Kq),Lineweaver-Burk方程计算静态猝灭结合常数(KLB)和紫外吸收光谱图判断猝灭类型;根据双对数方程计算结合常数(Kb)和结合位点数(n);根据热力学公式计算焓变(ΔH)熵变(ΔS)和吉布斯自由能变(ΔG);根据Hill方程计算Hill系数(nH)。结果:3个温度下的BSA荧光强度随着CE浓度升高而有规律地降低;KSV、Kq、KLB、Kb、n和nH均随着温度升高而降低;ΔG<0,ΔH<0,ΔS<0;n约等于1;nH小于1。结论:CE对BSA荧光产生静态猝灭,二者间具有一定的结合作用;其反应是一个自发的放热过程,主要结合力为氢键和范德华力,结合位点主要位于亚螺旋域ⅡA;CE对结合反应产生负协同作用,对BSA构象不产生影响;结合位点更接近于酪氨酸。     

硫酸阿托品拮抗次乌头碱毒性的荧光光谱研究

目的研究次乌头碱(HA)与牛血清白蛋白(BSA)非共价结合特征,并进一步探讨硫酸阿托品(AT)对HA与BSA结合的影响。方法模拟人体生理pH条件,应用荧光光谱及紫外光谱技术,确定HA与BSA作用方式、作用力类型及AT对它们结合的影响。结果 HA通过动态猝灭机制导致BSA荧光猝灭。HA与BSA表观结合常数K2b98K=1.10×102、K3b10K=3.18×105L.mol-1,结合位点数n298K=0.59、n310K=1.24;结合距离4.64 nm;主要作用力为疏水力;HA与BSA的结合反应是一个高温自发过程;HA与BSA结合后色氨酸残基所处微环境疏水性增强。AT使HA与BSA的Kb和n均减小。结论 HA与BSA作用形成一种超分子。AT能降低二者的结合程度,通过减少HA在生物体内的积累,加快代谢,发挥解毒作用。     

荧光光谱法研究卡铂与牛血清白蛋白的相互作用

目的研究卡铂与牛血清白蛋白(BSA)在人体生理条件下的相互作用。方法采用荧光光谱法研究卡铂与BSA的荧光猝灭机制、结合位点数、结合常数;利用热力学参数考察其作用力类型;采用同步荧光光谱法探讨卡铂对BSA构象的影响。结果卡铂与BSA形成1∶1的复合物引起BSA的荧光猝灭,其猝灭类型为静态猝灭。卡铂与BSA结合位点数为9.81×103 mol/L,两者以疏水作用为主。卡铂与BSA相互作用使色氨酸残基所处的微环境发生改变。结论卡铂与BSA相互作用形成复合物,并改变BSA的构象。     

2,3,4-三羟基苯甲醛缩4-氨基水杨酸希夫碱的合成表征和性质研究

目的以2,3,4-三羟基苯甲醛和4-氨基水杨酸为前体,合成2,3,4-三羟基苯甲醛缩4-氨基水杨酸希夫碱。方法采用回流方法得到产物,对产物进行紫外、红外和核磁的表征和使用荧光光谱进行性质研究。结果通过荧光光谱法研究HL与牛血清蛋白(BSA)之间存在的相互作用,研究它的猝灭机制,以及HL与BSA在不同温度下相互作用的结合常数Ka,结合位点数n以及热力学参数,以及HL与BSA之间作用的主要作用力。结论 HL与BSA的猝灭机制为静态猝灭,结合位点为1,范德华力和氢键是HL与BSA之间作用的主要作用力。     

结晶紫与牛血清蛋白相互作用研究

运用荧光光谱和紫外-可见吸收光谱研究了在缓冲溶液中不同温度下结晶紫(CV)与牛血清白蛋白(BSA)之间的相互作用。实验结果表明,CV对BSA的内源荧光猝灭为静态猝灭过程。测定了该反应在不同温度下的结合常数KA,KA分别为1.49×105L.mol-1(25℃)、1.15×105L.mol-1(35℃)和1.01×105L.mol-1(45℃),CV与BSA以摩尔比1∶1结合。根据Forster非辐射能量转移理论,求出了37℃时给体(CV)和受体(BSA)之间结合距离为r=6.48nm。计算出的热力学参数表明,CV和BSA之间的作用力主要是通过疏水作用力相互作用。     

光谱法研究洛索洛芬钠与牛血清白蛋白的相互作用及共存金属离子的影响

目的研究洛索洛芬钠(LS)和牛血清白蛋白(BSA)的相互作用及共存金属(Mn2+、Cu2+、Cr3+、Mg2+、Fe3+)离子对LS与BSA相互作用的影响。方法在模拟人体生理条件下,用紫外-可见吸收光谱法和荧光光谱法研究LS与BSA的相互作用。298.5、308.5、318.5 K温度下,根据S-V方程计算出猝灭常数(KSV)和速率常数(Kq);根据L-B双倒数方程,计算出静态猝灭结合常数(KLB);根据双对数方程,计算出结合常数(Kb)和结合位点数(n);根据热力学公式,计算出焓变(ΔH)、熵变(ΔS)和吉布斯自由能变(ΔG);根据Hill方程计算出Hill系数(nH)。结果 3个温度下的BSA荧光强度随着LS浓度升高,有规律地降低;KSV、Kq、KLB和nH值随着温度升高而降低;ΔG<0,ΔH<0,ΔS>0;n约等于1;nH小于1。结论 LS对BSA的荧光有猝灭作用,其猝灭过程属于静态猝灭。其相互作用主要靠静电作用力。LS可以被BSA运输,结合位置位于BSA的亚螺旋域ⅡA中,结合位点偏向于酪氨酸。Mg2+、Cu2+、Mn2+和Fe3+对LS与BSA结合产生竞争作用,可提高药效;Cr3+对LS与BSA结合产生促进作用,可减弱药物毒性。     

荧光光谱法研究灯盏花素与牛血清白蛋白相互作用

目的采用荧光光谱法研究灯盏花素与牛血清白蛋白(BSA)在生理条件下(pH 7.4)的相互作用机制。方法固定BSA浓度,依次加入不同浓度的灯盏花素溶液,在激发波长为280 nm下,290~500 nm的波长范围内进行荧光猝灭光谱、同步荧光光谱扫描。结果灯盏花素对BSA的荧光猝灭类型是静态猝灭;在温度288 K和310 K时,二者的结合常数KA分别为8.295×105和3.302×105L.mol 1;二者的结合位点数n分别为1.239 3和1.177 0。由热力学参数焓变(H=31.080kJ.mol 1)小于零和熵变(S=5.392 J.mol 1.K 1)大于零,确定灯盏花素与BSA之间的作用力类型为静电作用力;生成自由能变(G)为负值,表明灯盏花素与BSA的作用过程是一个自发过程。此外,应用同步荧光光谱考察了灯盏花素对BSA构象的影响。结论经过荧光光谱分析,可以确定灯盏花素与白蛋白的作用机制,为其开发成治疗心血管疾病新药提供理论依据。     

注射用益气复脉（冻干）体外抗氧化研究

目的 建立注射用益气复脉（冻干）（YQFM）体外抗氧化活性测定方法,并对30批样品体外抗氧化活性进行测定。方法 一定浓度的YQFM溶液与等体积的DPPH溶液混合均匀并放置一定时间后,采用紫外可见分光光度法,测定其吸收值相对于DPPH控制液（由DPPH溶液与等体积溶剂混合）的变化情况（DPPH自由基清除情况）,考察波长为517 nm,并进行空白吸收考察、专属性考察、反应平衡时间的确定、DPPH线性考察、YQFM线性考察、精密度试验、重复性试验、耐用性试验等方法学验证;以YQFM随行样品作为对照,以YQFM清除DPPH自由基的半数抑制浓度（IC₅₀）和相对抗氧化强度作为衡量其抗氧化活性的指标。结果 方法学验证结果表明,建立的体外抗氧化研究方法符合要求;30批YQFM样品IC₅₀均值为4.07 mg/mL。结论 建立的方法适用于YQFM体外抗氧化活性测定,YQFM具有较强的抗氧化活性。     

Toxicity of ZnO nanoparticles (NPs) with or without hydrophobic surface coating to THP-1 macrophages: interactions with BSA or oleate-BSA

It is recently shown that biological macromolecules in food could interact with nanoparticles (NPs) and consequently change the biological effects of NPs. In this study, the interactions between ZnO NPs with or without hydrophobic surface coating and bovine serum albumin (BSA) or oleate (OA) complexed to BSA (OA-BSA) were assessed. Atomic force microscope (AFM) showed topographic changes of both types of NPs by BSA or OA-BSA, which could indicate the formation of protein corona. ZnO NPs showed negative Zeta potential, which was slightly decreased by BSA or OA-BSA, with OA-BSA being more effective. The UV–Vis was increased, whereas the fluorescence and synchronous fluorescence was decreased by the presence of ZnO NPs. Exposure to both types of ZnO NPs was associated with cytotoxicity to THP-1 macrophages, which was equally mitigated by BSA or OA-BSA associated with decreased cellular Zn elements. Exposure to ZnO NPs was associated with decreased release of cytokines, which was not affected by BSA or OA-BSA. In combination, the results from this study suggested that both BSA and OA-BSA could be adsorbed to ZnO NPs regardless of hydrophobic surface coating, which reduced the cytotoxicity of NPs to macrophages probably due to reduced association between NPs and cells. BSA and OA-BSA equally protected THP-1 macrophages from ZnO NP exposure, which might indicate that complexation to OA did not compromise the cytoprotective effects of BSA. These data might also indicate the complex interaction between NPs and biological macromolecules as food components, which should be considered for future nanotoxicological studies.     

Study of the interaction between mercury (II) and bovine serum albumin by spectroscopic methods

Mercury is a significant environmental pollutant that originates from industry. Mercury will bind with albumin and destroy biological functions in humans if it enters the blood. In this paper, the interaction between mercury (II) and bovine serum albumin (BSA) was investigated in vitro by fluorescence, UV–Vis absorption and circular dichroism (CD) under simulated physiological conditions. This study proves that the probable quenching mechanism of BSA by mercury (II) was mainly static quenching due to the formation of a mercury (II)–BSA complex. The quenching constant K_a and the corresponding thermodynamic parameters (ΔH, ΔS and ΔG) at four different temperatures were calculated by a modified Stern–Volmer equation and the van’t Hoff equation, respectively. The results revealed that the interaction between mercury (II) and BSA was mainly enthalpy-driven and that hydrogen bonding and van der Waals forces played a major role in the reaction. The obtained data for binding sites of n approximately equal to 1 indicated that there was a single class of binding site for the BSA with mercury (II). The value of the distance r (3.55 nm), determined by Föster's non-radioactive energy transfer theory, suggested that the energy transfer from BSA to mercury (II) occurred with a high probability. The conformational investigation from synchronous fluorescence, CD spectroscopy and three-dimensional fluorescence showed that the presence of mercury (II) resulted in micro-environmental and conformational changes of the BSA molecules, which may be responsible for the toxicity of mercury (II) in vivo.     

锦灯笼提取物对DPPH自由基清除作用的探讨

目的:探讨锦灯笼提取物对DPPH自由基的清除作用。方法:电子自旋共振法(ESR)。结果:锦灯笼乙醇和甲醇提取物对DPPH自由基的清除作用随浓度的增加而增大。结论:初步确定了中药锦灯笼具有一定的抗氧化活性。     

Bovine serum albumin modified the intracellular distribution and improved the antiviral activity of an oligonucleotide

In the present work, we describe the ability of bovine serum albumin (BSA) to improve the cytoplasmatic delivery of a phosphodiester oligonucleotide (PO), whose phosphorotioate analogue is ISIS 2922 (Vitravene). The changes in intensity and lambda(max) in fluorescence spectroscopy and the increase in fluorescence anisotropy upon complex formation between the oligonucleotide and the protein (PO-BSA) were used to determine the dissociation constant, Km=6.3 x 10(-8) M. The stoichiometry of the complex is mainly 1:1, although 2 PO per BSA have been detected at high PO/BSA ratios. The complexation did not protect PO against enzymatic degradation by snake venom phosphodiesterase (0.1 mg/mL). Fluorescence microscopy revealed that PO-BSA complexes showed a decreased uptake and modified pattern of intracellular distribution with a rapid nuclear accumulation (rather than vesicular localization in the cytoplasm observed for free oligonucleotide). The effect was only observed over a certain threshold of BSA concentration (higher than found in media supplemented with 10% serum). By this way, the interaction with albumin increased the antiviral activity of the oligonucleotide, tested by a plaque reduction assay in MRC-5 fibroblasts infected with human cytomegalovirus (strain RC 256) at a MOI of 0.0035. At 10 microM PO concentration, free PO decreased virus plaques to 85% of the control, while PO-BSA complexes reduced to 60%, in the same order than ISIS 2922. The phosphorotioate analogue complexed by BSA (ISIS 2922-BSA) showed the highest activity with 45% of the control plaques.     

环丙沙星与牛血清白蛋白的相互作用

血清白蛋白是血浆中含量最丰富的重要载体蛋白 ,药物进入血浆后 ,首先与血清白蛋白结合 ,然后再被运送到身体的各部位。随着药代动力学及临床药理学迅猛发展 ,药物 蛋白质结合对药代动力学影响 ,又有了更深刻的认识。因此 ,研究药物与血清白蛋白的相互作用有重要意义[1] 。本文应用荧光光度法研究了生理ｐＨ值条件下 ,环丙沙星与牛血清白蛋白 (ＢＳＡ)的相互作用 ,利用环丙沙星对蛋白质荧光的猝灭求出环丙沙星与蛋白质的结合常数 ,考察了药物对蛋白质构象的影响 ,并根据热力学参数确定了它们之间的主要作用力类型。这对阐明药物在体内的输…     

荧光光谱法研究芒柄花素与牛血清白蛋白的相互作用

在模拟动物体生理条件下,用荧光光谱法研究芒柄花素(hq-2)与牛血清白蛋白(BSA)的结合作用.结果 表明,芒柄花素对BSA荧光猝灭属于静态猝灭;并求得结合常数Ka为5.27×104L·mol-1,结合位点数为1.热力学数据表明该药物与牛血清白蛋白的相互作用是一个吉布斯自由能降低的自发过程,且二者之间的主要作用力类型为...     

“新冠三方”的体外抗氧化作用比较

目的 平行比较“新冠三方”(清肺排毒汤、化湿败毒方和宣肺败毒方,以下简称“三方”)的体外抗氧化作用。方法在非细胞体系中,采用FRAP法考察三方的总抗氧化能力;通过DPPH法考察三方对DPPH自由基的清除作用;采用NBT还原法考察三方对超氧阴离子的清除作用;通过基于终产物丙二醛的荧光测定法考察三方对羟自由基的清除作用;用FeSO4体外诱导大鼠肝匀浆MDA法考察三方对抗脂质过氧化的作用。依据以上5个抗氧化指标,平行比较三方提取物在非细胞体系的抗氧化能力。进一步地,在脂多糖活化的RAW264.7细胞模型上,分别使用L-012探针和MitoSOX线粒体超氧化物红色荧光探针检测胞质与线粒体活性氧(reactive oxygen species,ROS)的生成情况;通过光泽精探针检测胞质NADPH氧化酶活性,以平行比较三方提取物在细胞体系的抗氧化能力。结果 在非细胞体系中,三方均能剂量依赖地清除DPPH自由基、超氧阴离子和羟自由基,并且能有效对抗脂质过氧化的发生。在等提取物浓度下,三方对DPPH自由基与超氧阴离子的清除作用相当,总抗氧化能力相当,而化湿败毒方在清除羟自由基和对抗脂质过氧化方面表现更...