重庆地区C/adrq+亚型 HBV流行株PreS/S、EnhII/CP/PreC标准参照序列的初步建立

目的：建立重庆地区基因型C／血清型adrq HBV流行株PreS/S、EnhII/CP/PreC基因标准参照序列，为HBV变异的研究奠定基础。方法：测定18例无症状携带者HBV的PreS/S、EnhII/CP/PreC序列，应用同源性分析和对齐比较等方法确定HBV亚型，并拟定基因型C／血清型adrq HBV的PreS/S、EnhII/CP/PreCC标准参照序列。结果：9株基因型B／血清型adw2、6株基因型C／血清型adrq ，3株基因型B／血清型aywl；建立的重庆地区HBV基因型C／血清型adrq HBV流行株PreS/S、EnhII/CP/PreC标准参照序列与东北华南地区同亚型的标准序列比较分别用13个、2个核苷酸差异，可引起4个、1个氨基酸差异。结论：初步建立了重庆地区基因型C／血清型adrq HBV流行株PreS/S、EnhII/CP/PreC基因标准照参照序列。     

经母婴传播获得HBV感染儿童及其母亲体内HBV EnhII/CP/PreC基因变异研究

目的:通过对经母婴传播获得HBV感染的子女及其母亲慢性携带者体内HBV EnhII/CP/PreC基因序列研究,了解来源相同的HBV毒株在不同程度病毒血症情况下EnhII/CP/PreC基因变异特点。方法:选择15对母子AsC,根据HBV病毒血症高低分为3组,每组5对母子,即Ⅰ组(母子均为高病毒血症)、Ⅱ组(子女为高病毒血症、母亲为低病毒血症)和Ⅲ组(子女为低病毒血症、母亲为高病毒血症)。同对母子HBV亚型相同,各组中有4/5对母子为B/adw2、1/5对母子为C/adrq+亚型。应用T-A克隆技术构建重组质粒pGEM-EnhII/CP/PreC、双酶切鉴定,每个病人选2个酶切鉴定正确的克隆测序并分析。结果:高病毒血症组间或低病毒血症组间HBV EnhII/CP/PreC基因变异数目及位点均无明显差异,低病毒血症病人变异数目及位点明显高于高病毒血症。高病毒血症中16例B/adw2亚型的32个EnhII/CP共有6个变异位点;4例C/adrq+亚型的8个克隆中有4个变异位点,均无热点变异;PreC无变异。低病毒血症中8例B/adw2亚型病人的16个克隆共有26个变异位点,变异与年龄无关。结论经母婴传播获得HBV感染儿童及其母亲无症状携带者中,HBVEnhII/CP/PreC变异与病毒血症高低有关,低病毒血症病人变异明显高于高病毒血症。HBV的低复制状态是CP、EnhII及X蛋白等结构和功能改变综合影响的结果,与年龄无关。     

经母婴传播获得HBV感染儿童及其母亲体内HBV EnhⅡ/CP/PreC基因变异研究

目的：通过对经母婴传播获得HBV感染的子女及其母亲慢性携带者体内HBV EnhⅡ/CP/PreC基因序列研究,了解来源相同的HBV毒株在不同程度病毒血症情况下EnhⅡ/CP/PreC基因变异特点.方法：选择15对母子AsC,根据HBV病毒血症高低分为3组,每组5对母子,即Ⅰ组（母子均为高病毒血症）、Ⅱ组（子女为高病毒血症、母亲为低病毒血症）和Ⅲ组（子女为低病毒血症、母亲为高病毒血症）.同对母子HBV亚型相同,各组中有4/5对母子为B/adw2、1/5对母子为C/adrq＋亚型.应用T-A克隆技术构建重组质粒pGEM-EnhⅡ/CP/PreC、双酶切鉴定,每个病人选2个酶切鉴定正确的克隆测序并分析.结果：高病毒血症组间或低病毒血症组间HBV EnhⅡ/CP/PreC基因变异数目及位点均无明显差异,低病毒血症病人变异数目及位点明显高于高病毒血症.高病毒血症中16例B/adw2亚型的32个EnhⅡ/CP共有6个变异位点;4例C/adrq＋亚型的8个克隆中有4个变异位点,均无热点变异;PreC无变异.低病毒血症中8例B/adw2亚型病人的16个克隆共有26个变异位点,变异与年龄无关.结论经母婴传播获得HBV感染儿童及其母亲无症状携带者中,HBV EnhⅡ/CP/PreC变异与病毒血症高低有关,低病毒血症病人变异明显高于高病毒血症.HBV的低复制状态是CP、EnhⅡ及X蛋白等结构和功能改变综合影响的结果,与年龄无关.     

HBsAg阳性孕妇血清中乙肝病毒前S/S基因的相似株现象

目的：探讨HBsAg阳性孕妇体内HBV病毒前S/S基因变异的状况。方法：应用全长PCR技术从4例表面抗原阳性孕妇血清中扩增出HBV全长基因,将其克隆于pUC19载体,每例随机筛选5个阳性克隆,对其前S/S区进行序列分析。结果：4例患各克隆间均存在碱基的差异,此类患体内HBV株同源性较差。结论：HBsAg阳性孕妇体内HBV株呈“相似株”分布。     

昆明地区HBsAg与抗-HBs双阳性慢性HBV感染患者流行病学调查及PreS/S基因突变特征

目的 探讨昆明地区HBsAg与抗-HBs(Anti-HBs)双阳性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者流行病学及PreS/S基因突变特征。方法 选择2018年5月—2022年4月于云南大学附属医院住院及门诊定量检测乙肝两对半的438例慢性HBV感染患者为观察对象,将202例HBsAg(+)/抗-HBs(+)患者作为观察组,将236例HBsAg(+)/抗-HBs(-)患者作为对照组,对比两组患者临床特征。使用巢式聚合酶链反应扩增出PreS/S基因全长序列,确定基因型并分析PreS/S基因突变特征。结果 观察组患者在<10岁及高于80岁人群中的流行率较高,而对照组在20～49岁人群中的流行率较高。与对照组比较,观察组患者年龄、HBsAg<250 IU/mL比例、C型HBV感染及乙肝携带者比例均显著增加(P<0.05)。成功扩增PreS/S并测序成功的观察组样本共132例,其中B型基因81例,C型基因51例;对照组样本中B型基因110例,C型基因65例。B型基因患者中,与对照组比较,观察组N末端区域突变率明显增加(P<0.05)。C型基因患者中,与对照组比较,观察组MHR、...     

HBV S基因、PreS2/S基因真核重组载体的构建与鉴定

[目的]构建包含人乙型肝炎病毒(HBV)S基因与PreS2／S基因的重组载体。[方法]设计合成2对寡核苷酸引 物,以adr亚型HBV质粒pHBV DNA为模板,采用PCR法分别扩增HBV S基因、PreS2／S基因片段;用HindⅢ和BamHⅠ双酶 切后,分别连接到质粒pcDNA3.1相应酶切位点,转化宿主菌JM109,分别用上述内切酶双酶切及DNA测序鉴定重组质粒。 [结果]酶切鉴定示所切下的片段大小均与预计相符。测序结果与文献报道序列及预计结果一致。[结论]成功构建了S基因与 PreS2／S基因的重组载体。     

HBV S基因与IL-12基因联合免疫小鼠的免疫应答

目的 观察小鼠对IL-12基因表达质粒与HBVS基因疫苗联合免疫的免疫应答。方法 用已构建的HBVS基因疫苗（pCR3.1-S)和表达IL-12p35和p40蛋白的真核表达载体pWRG3169分别给BALB/c小鼠多点肌肉注射,2wk后追加免疫1次,用ELISA法及MTT法检测小鼠血清抗-HBs及脾细胞对HBsAg的特异性增殖反应。结果 免疫接种2wk后小鼠血甭抗-HBs滴度及脾细胞对HBsAg的刺激指数均明显高于对照组,pWRG3169 pCR3.1-S组明显高于单纯pCR3.1-S注射组。结论 IL-12表达质粒可以增强pCR3.1-S基因疫苗诱导的体液和细胞免疫应答强度,尤以细胞免疫增高明显。     

乙型肝炎病毒外膜基因插入变异株及野株的全序列测定和系…

用核酸序列分析技术，测定１例乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）阴性中国人感染的乙型肝炎病毒ＨＢＶ／ａｄｗ亚型全基因充列。该变异株一列为３２２４个碱基戌从同一地区２例ＨＢｓＡｇ阳生携带者得到的ａｄｗ和ａｄｒ全序同源性分别为９８．０％和９２．５％，与已出版的Ａ－Ｅ基因组比较，进行了病毒的系统树分析，该变异毒株除在外膜基因Ａ决定族胶有９个碱基插入外，在多种调控元件，包括自动因子ＳＰＬＳＰＩＬＣＰ、ＸＰ、增强     

HBV相关肝细胞癌患者HBV前S/S基因变异的分析

目的:研究肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)患者体内乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)前S/S基因变异特点.方法:分别对9例乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性肝癌患者及其家族中11例HBsAg阳性者血清乙肝病毒前S/S基因PCR扩增克隆.测序并进行结构分析.找出基因变异活跃位点,再对两组资料作统计学分析.结果:除对照组中1例未能扩增出前S/S基因,仅能扩增出S基因,其它样本均扩增出前S/S基因片段.所有HBV株均为B或C基因型和adrq 或adw2血清型.肝癌患者来源的HBV在包膜蛋白抗体结合区点突变发生率较高,但与对照组相比,没有统计学差异(P＞0.05).肝癌组4例发生HBV前S区删除变异,具有特异性.与对照组(0/10)相比,有统计学差异(P＜0.05).结论:HBV前S/S区点突变可能与肝癌发生没有相关性,而前S区删除变异可能与肝癌发生有密切联系,应当对HBV感染者进行前S区基因变异监测.     

HBVS基因、PreS2/S基因真核重组载体的构建与鉴定

[目的]构建包含人乙型肝炎病毒(HBV)S基因与PreS2/S基因的重组载体.[方法]设计合成2对寡核苷酸引物,以adr亚型HBV质粒pHBVDNA为模板,采用PCR法分别扩增HBVS基因、PreS2/S基因片段;用HindⅢ和BamHⅠ双酶切后,分别连接到质粒pcDNA3.1相应酶切位点,转化宿主菌JM109,分别用上述内切酶双酶切及DNA测序鉴定重组质粒.[结果]酶切鉴定示所切下的片段大小均与预计相符.测序结果与文献报道序列及预计结果一致.[结论]成功构建了S基因与PreS2/S基因的重组载体.     

乙型肝炎病毒感染者PreS1-Ag、PreS2-Ag与HBV测定分析

目的：研究乙型肝炎病毒（HBV）感染者PreS1-Ag和PreS2-Ag与HBV-M之间的关系。方法：用ELISA法对316例HBV感染者血清进行PreS1-Ag和PreS2-Ag及HBV-M检测。结果：对照组的血清PreS1-Ag和PreS2-Ag与HBV-M为阴性，而HBV感染者血清PreS1-Ag和PreS2-Ag在三种主要模式中的检出率分别为88．8％，76．3％；70．3％，55．4％；68．2％，55．7％。结论：PreS1-Ag和PreS2-Ag更敏感地反映了HBV的感染和复制程度，对乙肝血清标志物检测起重要的补充作用。     

中国大陆柯萨奇病毒A组16型全基因参照序列的初步建立和分析

目的建立中国大陆柯萨奇病毒A组16型(CoxA16)流行株的全基因参照序列。方法从GenBank中获得CoxA16中国大陆分离株的所有全基因序列和氨基酸序列,用DNAstar/MegAlign软件对所得序列进行多序列比对和进化分析,按照参照序列标准拟定CoxA16的全基因参照序列和氨基酸序列,并与参考序列进行比对分析。结果中国大陆分离的CoxA16毒株全基因序列共8株,分离于2005-2009年,其中2008年5株,广东省5株;通过序列比对获得了大陆CoxA16全基因和氨基酸参照序列;参考毒株间核苷酸序列同源性介于79.0%～98.8%,氨基酸序列同源性为94.3%～99.9%,与参照序列的核苷酸同源性为79.7%～97.0%,氨基酸同源性介于95.1%～99.5%之间,同源性最低的为2008年安徽阜阳的FY18株。结论比对分析了中国大陆CoxA16毒株全序列,成功建立了中国大陆CoxA16全基因和氨基酸参照序列。     

乙型肝炎病毒前-C区1896和基本C区启动子区1762、1764 双突变及YMDD变异对拉米呋啶治疗的影响

目的:研究乙型肝炎病毒前-C区G1896A突变和基本C区启动子区A1762T、G1764A双突变对拉米呋啶治疗的影响。 方法:采用直接测序法对服药前、中、后的血清标本的逆转录多聚酶区及前-C、基本C区启动子区进行检测。 结果:①前-C区G1896A和基本C区启动子区A1762T、G1764A双突变在出现治疗中病毒学反弹与未出现治疗中病毒学反弹患者间及发生血清学转移与未发生血清学转换患者间差异无显著性(P>0.05);②G1896A突变在发生YMDD变异和未发生YMDD变异的患者间差异有显著性(P<0.05),发生YMDD变异的患者很少伴有G1896A突变率低(9%);③出现治疗中病毒学反弹的患者YMDD变异增加,与未出现治疗中病毒学反弹的患者比较差异有显著性(P<0.05)。 结论:前-C区G1896A和基本C区启动子区A1762T、G1764A双突变对拉米呋啶治疗后出现的治疗中病毒学反弹和血清学转换没有影响;在G1896A突变株YMDD变异减少;YMDD变异株的出现对治疗后出现的治疗中病毒学反弹有影响;YMDD变异可能是加剧肝细胞损伤引起治疗中病毒学反弹的因素之一。     

乙型肝炎病毒前S1、前S2抗原及e抗原与病毒DNA之间的相关分析

目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV）血清学标志物及HBV DNA之间的相关性。方法 应用定量PCR内标法检测HBV DNA,筛选出100例未经干扰素和核苷（酸）类似物治疗、丙氨酸氨基转移酶（ALT）／天冬氨酸氨基转移酶（AST）正常且HBV DNA阳性的慢性乙型肝炎患者。用微粒子酶免分析法、ELISA方法检测乙肝血清学标记物。筛选出40名健康人作为质控对照。结果 HBV DNA阳性乙肝患者：（1）乙肝e抗原（HBeAg）阳性率为75％;乙肝e抗体（抗-HBe）阳性率25％;乙肝前s1抗原（PreS1-Ag）阳性率为69％;乙肝前S2抗原（PreS2-Ag）阳性率为77％;（2）75例HBeAg阳性患者中PreS1-Ag阳性54例,PreS2-Ag阳性60例;25例抗-HBe阳性患者中PreS1-Ag阳性14例,PreS2-Ag阳性17例。PreS1-Ag、PreS2-Ag阳性率在两种情况下的差异均无统计学意义（均P〉0．05）;（3）HBeAg阳性时,PreS1-Ag、PreS2-Ag均阴性的阴性率（8％）低于抗-HBe阳性时的阴性率（28％）,差异有统计学意义（P〈0．05）;（4）PreS1-Ag与PreS2-Ag同为阳性、阴性的72例。结论 慢性乙型肝炎患者HBeAg、PreS1-Ag、PreS2-Ag阳性与HBV—DNA阳性的符合率较高。PreS1-Ag、PreS2-Ag阳性率与HBeAg的阳性无明确相关。PreS1-Ag、PreS2-Ag阴性率与抗-HBe阳性有较好的相关性。     

术前筛查HBeAg阴性HBV感染者检测乙肝大蛋白的意义

目的了解肝功能正常、HBeAg阴性HBV感染的术前筛查患者乙肝大蛋白(HBV-LP)阳性情况,评判血清HBV-LP检测在这类乙型肝炎患者中的意义。方法使用ELISA法检测180例HBeAg阴性HBV感染的术前筛查患者HBV-LP、乙肝前S1(HBVpreS1),同时采用实时定量PCR法做HBVDNA水平检测。结果 180份HBeAg阴性HBV感染血清PreS1-Ag、HBV-LP和HBVDNA检测阳性率分别为21.1%、34.4%和32.7%,χ2检验显示三组检测阳性率差异有统计学意义(χ2=9.1457,P=0.0103),用Scheffe法做率的两两比较显示:PreS1-Ag检测阳性率明显低于HBV-LP和HBVDNA(P<0.05),而HBV-LP和HBVDNA检测阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。HBV-LP和HBVDNA配对检测显示结果差异无统计学意义(χ2=0.1739,P=0.6767),同时相关性分析示良好相关性(χ2=95.655,P=0.0000,r=0.7217)。49例HBVDNAcopies/ml常用对数值与HBV-LP定量OD值的散点图显示正相关(r=0.6192)。结论对术前筛查HBeAg阴性乙型肝炎携带者,HBV-LP在反应病毒复制方面是一个优于HBVpreS1检测的良好指标,与HBVDNA检测有良好的相关性,在不能开展HBVDNA检测的基层单位可作为评价乙型肝炎传染性的一种替代与补充。     

HBV大分子表面蛋白基因真核重组载体的构建与鉴定

目的构建包含人乙型肝炎病毒(HBV)大分子表面蛋白基因的重组载体，以便进一步研究其基因免疫以及对宿主细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)p38等信号传导通路的影响。方法设计合成2对寡核苷酸引物，以adr亚型HBV质粒pHBVDNA为模板，采用PCR法分别扩增HBV大分子表面蛋白基因(preS1／S2／S基因)片段；用HindⅢ和BamHⅠ双酶切后，连接到质粒pcDNA3．1( )相应酶切位点，转化宿主菌DH5α，分别用上述内切酶双酶切及DNA测序鉴定重组质粒。结果酶切鉴定示所切下的片段大小均与预计相符。测序结果与文献报道序列及预计结果一致。结论成功构建了HBV大分子表面蛋白基因的重组载体。     

重庆地区儿童乙型肝炎病毒感染状况分析

目的:初步了解重庆地区儿童乙型肝炎病毒的感染状况.方法:对来重庆医科大学儿童医院就诊的8060例儿童用ELISA方法检测乙肝6项.结果:HBsAg阳性率为4.44%,抗-HBs阳性率为46.56%,两对半全阴性儿童3795人,占47.08%;大三阳259人,占3.21%;小三阳80人,占0.99%.Pre-S1阳性率为3.51%.结论:来我院检查的8060例儿童,乙肝病毒感染率为4.44%,低于我国成人乙肝病毒携带率;Pre-S1与HBeAg有一定相关性,能在一定程度上反映乙肝病毒增殖情况和传染性.