白藜芦醇诱导肺腺癌A549细胞凋亡的作用机制

目的探讨白藜芦醇(Res)对肺腺癌A549细胞凋亡的作用及其机制。方法常规培养肺腺癌A549细胞(购于中国科学院细胞生物学研究所)至对数生长期,加入不同浓度的Res(终浓度分别为3、10、30、60、100、200、300 mg/L),以Res 0 mg/L为对照组,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的Res对A549细胞的吸光度值,计算细胞的生长抑制率;采用Annexin-Ⅴ/PI双染法检测Res对肺腺癌A549细胞凋亡的影响;采用逆转录酶-聚合酶联反应(RT-PCR)检测端粒酶mRNA和β-actin mRNA的相对活性。结果 MTT检测显示Res呈剂量依赖性抑制A549细胞增殖。与对照组比较,不同浓度(10、30、100 mg/L) Res可抑制A549细胞增殖; Annexin-Ⅴ/PI检测结果显示,与对照组比较,随着Res剂量(10、30、100 mg/L)的增加,A549细胞的凋亡数升高,差异有统计学意义(P <0. 05);与对照组比较,不同剂量Res(10、30、100 mg/L)诱导端粒酶mRNA相对含量明显下降,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论 Res可诱导肺腺癌A549细胞凋亡,其机制可能与抑制端粒酶活性有关。     

三七皂苷诱导人肺腺癌A549细胞凋亡作用

目的 探讨三七皂苷（panax notoginseng saponins,PNS）对人肺腺癌A549（hA549）细胞的致凋亡作用.方法 体外培养的hA549细胞,经不同浓度的PNS或联合应用磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）特异性抑制剂LY294002处理.采用MTT比色法检测肺腺癌A549细胞存活率,Hoechst33258荧光染色法检测其细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测凋亡抑制基因Bcl-2、Bax和蛋白激酶B（Akt）蛋白的表达.结果 PNS能降低肺腺癌细胞的存活率,且其效应随剂量和作用时间的增加有增强的趋势;在PNS组可见细胞核出现固缩、边集和凋亡小体,并发现肺癌细胞凋亡率提高,细胞内Bax蛋白表达上调,Bcl-2、Akt蛋白表达下调.各浓度PNS组与空白对照组及溶剂对照组相比,差异均有统计学意义（P＜0.05）;PNS与LY294002联合应用则具有协同作用,可进一步促进肺癌细胞的凋亡及其细胞内的Bax蛋白表达上调和Bcl-2及Akt蛋白表达下调,与单用PNS组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）.结论 PNS具有降低肺癌细胞存活率、诱导癌细胞凋亡的作用,并与PI3K特异性抑制剂LY294002具有协同作用,这可能与抑制PI3K/Akt信号通路、促进凋亡蛋白表达有关.     

蟛蜞菊内酯通过抑制JAK2/STAT3信号通路诱导人肺腺癌A549细胞凋亡

目的 探讨蟛蜞菊内酯对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响及作用机制.方法 不同浓度蟛蜞菊内酯(0、5、10、20、40μmol/L)作用于A549细胞12、24、48 h,M T T检测细胞的增殖情况.将细胞分为对照组,甲氨蝶呤组(2μg/mL甲氨蝶呤),蟛蜞菊内酯组(20μmol/L蟛蜞菊内酯).流式细胞术检测细胞凋亡和...     

Ku70乙酰化在硒诱导人肺腺癌A549细胞凋亡中的作用

目的探讨Ku70乙酰化在硒诱导人肺腺癌A549细胞凋亡中的作用。方法将体外培养的人肺腺癌A549细胞分为对照组(用含体积分数10%胎牛血清的达尔伯克改良伊格尔培养基培养)和1、5、10μmol·L~(-1)硒处理组(分别用含1、5、10μmol·L~(-1)硒的达尔伯克改良伊格尔培养基培养),分别培养24、48 h,通过Western blot法检测Ku70表达,免疫沉淀法检测乙酰化Ku70和Ku70-Bax、Bax-Ku70的表达。将Ku70 siRNA转染后的人肺腺癌A549细胞分为对照组和1、5、10μmol·L~(-1)硒处理组,通过Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果与同一时间点对照组比较,1μmol·L~(-1)硒处理组Ku70、Bax、Bcl-2、乙酰化Ku70、Ku70-Bax和Bax-Ku70表达差异无统计学意义(P>0.05);与同一时间点对照组、1μmol·L~(-1)硒处理组比较,5、10μmol·L~(-1)硒处理组Ku70、Bcl-2、Ku70-Bax和Bax-Ku70表达均减少(P<0.01),Bax、乙酰化Ku70表达均增加(P<0.01);与同一时间点5μmol·L~(-1)硒处理组比较,10μmol·L~(-1)硒处理组Ku70、Bcl-2、Ku70-Bax和Bax-Ku70表达均减少(P<0.01),Bax、乙酰化Ku70表达均增加(P<0.01)。与本组24 h时比较,48 h时1μmol·L~(-1)硒处理组Ku70、Bax、Bcl-2、乙酰化Ku70、Ku70-Bax和Bax-Ku70表达差异无统计学意义(P>0.05);与本组24 h时比较,48 h时5、10μmol·L~(-1)硒处理组Ku70、Bcl-2、Ku70-Bax和Bax-Ku70表达减少(P<0.05),Bax、乙酰化Ku70表达增加(P<0.05)。结论硒通过促使Ku70乙酰化诱导Bax依赖性人肺腺癌A549细胞凋亡。     

奥沙利铂对A549肺腺癌细胞系生长抑制作用和细胞凋亡的实验研究

目的　观察奥沙利铂对肺腺癌细胞系A5 4 9的药物敏感性和诱导细胞凋亡作用。方法　将不同浓度的奥沙利铂与A5 4 9作用 2 4、36、4 8h ,用MTT法计算细胞生长抑制率 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果　奥沙利铂对A5 4 9的细胞生长抑制率随作用浓度和作用时间的增加而增大。 12 .5、2 5、5 0、10 0 μg/ml奥沙利铂对A5 4 9作用 2 4h ,细胞凋亡率分别为 35 %、13.6 %、2 .6 %、1.4 %。结论　奥沙利铂对A5 4 9细胞有生长抑制作用 ,呈剂量依赖性和时间依赖性 ;能引起细胞凋亡 ,细胞凋亡率呈剂量依赖性 ,与细胞生长抑制率呈正相关关系 (P <0 .0 1)。     

磷脂酰肌醇3激酶信号传导通路在溃疡性结肠炎发病中的作用

目的探讨磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt信号传导通路在溃疡性结肠炎(UC)和小鼠葡聚糖硫酸钠(DSS)结肠炎发病中的作用。方法1收集40例UC患者肠黏膜活检组织,20例结肠癌旁正常组织标本,采用体外组织培养法观察PI3K/Akt信号传导通路抑制剂Wortmannin对UC患者肠黏膜活检组织TNF-α表达的影响。236只BALB/c小鼠随机分成4组:正常对照组、DSS模型组、DMSO载体组和Wortmannin干预组,以5%DSS溶液构建DSS小鼠结肠炎模型,观察各组小鼠的疾病活动指数(DAI)和Wortmannin对小鼠肠黏膜组织TNF-α表达的影响。结果1与未用Wortmannin处理的UC组比较,Wortmannin处理后UC患者肠黏膜组织分泌TNF-α的水平明显降低(P<0.05)。2Wortmannin干预组小鼠的DAI评分和肠黏膜TNF-α的水平明显低于DSS模型组和DMSO载体组,高于正常对照组(P<0.05),而DSS模型组和DMSO载体组小鼠的DAI评分和TNF-α水平差异无统计学意义。结论PI3K/Akt信号传导通路参与了促炎性细胞因子TNF-α的调控与释放,Wortmannin能阻断PI3K/Akt信号传导通路。     

胰岛素对肺腺癌A549细胞放疗增敏作用的研究

目的探讨胰岛素能否提高体外肺腺癌A549细胞的放疗敏感性。方法将胰岛素直接作用于体外培养的A549细胞，再将此细胞放于直线加速器下行X线照射，采用甲基噻唑基四唑（MTT）、流式细胞仪等检测肺腺癌A549细胞的凋亡情况。结果仅给予胰岛素作用该细胞时，MTT检测结果表明，给予胰岛素的细胞光密度（OD）值与未给予胰岛素的细胞OD值之间无明显差异（P〉0．05）。同时给予胰岛素及X线照射后，给予不同浓度胰岛素的细胞与未给予胰岛素的细胞相比凋亡率有差异（P〈0．05），其中4、8、16mU／mL浓度组有明显差异（P〈0．01）。结论不同浓度的胰岛素液并不会长时间地促进A549细胞的增殖，胰岛素可提高该肿瘤细胞的放疗敏感性，促进肿瘤细胞的凋亡，为胰岛素充当放疗增敏剂运用于临床治疗提供一定的理论依据。     

白藜芦醇诱导人肺腺癌A549细胞细胞凋亡及其与p38 MAPK信号途径的联系

目的 探讨白藜芦醇( Res)诱导人肺癌A549细胞株凋亡及其与p38 MARK信号通路的联系. 方法 CCK-8 法检测 Res 对人肺癌 A549 细胞增殖抑制作用, Annexin V-FITC/PI双染法检测Res对肺癌A549 细胞凋亡率, Western blot 法检测 Res 对人肺癌 A549 细胞 Caspase 剪切片断(Caspase-1、Caspase-3)表达的影响,及其对丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)通路蛋白(p38、p-p38)表达的影响.结果 Res对人肺癌A549细胞株生长呈浓度依赖性的抑制作用,48 h的Res作用肺癌A549的半数抑制浓度( IC50 ) 值为( 10. 6 ±1. 2)μmol/L. 用10 μmol/L Res处理 A549 细胞24、36、48 h,细胞凋亡率较对照组明显增加( P<0. 01 ). Res作用于A549 细胞 48 h 后, Western blot 法检测显示 Caspase-1、Caspase-3蛋白出现断裂片断,p38、p-p38表达亦增高. 结论Res明显诱导人肺癌A549细胞毒作用,诱导A549细胞凋亡,其机制与激活p-p38 MAPK途径有关.     

紫草素诱导肺腺癌A549细胞凋亡及其机制的研究

目的 研究紫草素(shikonin, SK)诱导肺腺癌A549细胞凋亡及其作用机制。方法 不同浓度紫草素作用于肺腺癌A549细胞后,CCK-8法检测细胞的增殖情况;DAPI荧光染色法和FCM检测细胞凋亡;Western blotting检测紫草素处理48h后Bax、Bcl-2、p-Akt、p-ERK1/2的蛋白水平。结果 紫草素显著抑制肺腺癌A549细胞的增殖活性(P<0.05),诱导细胞凋亡,与空白对照组比较,紫草素处理组Bax表达上调(P<0.05),Bcl-2、p-Akt、P-ERK1/2表达下调(P<0.05)。结论 紫草素可以显著抑制肺腺癌A549细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与线粒体凋亡途径,PI3K/Akt信号通路和ERK 1/2信号通路有关。     

扶正消癌合剂对人肺腺癌A549细胞作用研究

目的:研究扶正消癌合剂对肺腺癌A549细胞增殖的影响及PI3K/Akt信号通路的作用机制。方法:制备大鼠含药血清,采用CCK8法对A549进行观察,了解其增殖抑制情况,了解其对细胞周期的影响,以及如何造成细胞凋亡。利用Western-Blot法检测含药血清对PI3K,Akt及P-Akt蛋白表达产生的作用。结果:扶正消癌合剂能抑制A549细胞增殖,呈现时间-浓度依赖关系,与顺铂呈正相关,48 h、72 h、96 h的抑制率分别是28.26%、39.62%和37.89%;扶正消癌合剂可以促进A549细胞发生变化,出现凋亡的情况,并且随着浓度的增高而有所增加,镜下观察G2/M期细胞明显增多,所占的比例也相应增加,相对于另一组来说差异有统计学意义(P<0.05)。其在诱导过程中,随着细胞逐渐凋亡,下调PI3K、P-Akt蛋白表达。结论:扶正消癌合剂可以抑制人肺腺癌细胞A549增殖,可能与抑制PI3K/Akt信号通路中PI3K、P-Akt蛋白表达有关。     

Effects of paclitaxel on cell proliferation and apoptosis and its mechanism in human lung adenocarcinoma A549 cells

INTRODUCTION Primary bronchogenic carcinoma is one of thecommonest malignancy tumors in the world.The incidence and mortality rate are rising in recent30 years. Adenocarcinoma accounts for about 25%of all primary bronchogenic carcinomas, the curativerate is not ideal by traditional chemotherapy and ra-diotherapy[1-4]. Paclitaxel is a extensive anti-cancerdrug whose mechanism is anti-microtubules and sta-bilizes cell microtubules specially, and has also beenused widely in ovarian cancer, b…     

PEDF对人肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨不同浓度色素上皮衍生因子( PEDF)作用不同时间对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度(0、80、160、320、640 nmol/L)的重组人PEDF蛋白对体外培养的人肺腺癌细胞株A549进行干预,在处理24、48、72 h后,分别用MTT法检测PEDF对A549细胞增殖的抑制率并比较;在作用48 h后,以流式细胞仪检测技术计算、分析 A549细胞凋亡率。结果不同浓度PEDF(0、80、160、320、640 nmol/ L)干预A549细胞相同作用时间(24、48、72 h)情况下,随着PEDF 浓度的增加,PEDF 对 A549细胞的增殖抑制率递增(P <0.05);相同PEDF 浓度(80、160、320、640 nmol/ L)情况下,除了80、160 nmol/ L PEDF 作用24 h 和48 h 的细胞增殖抑制率间差异无统计学意义外,随着PEDF 作用时间的延长,PEDF 对A549细胞的增殖抑制率也基本呈递增趋势(P <0.05)。上述不同浓度的PEDF 处理A549细胞48 h,细胞凋亡率随着PEDF 浓度的升高呈递增趋势(P <0.05)。结论摇PEDF 在体外能抑制人肺腺癌细胞株A549的增殖并诱导其凋亡。PEDF 抑制细胞增殖作用可能和PEDF 浓度及作用时间有关,PEDF 诱导细胞凋亡作用的强弱也与PEDF 浓度有一定关系。     

CA916798基因通过PI3K/AKT/mTOR通路参与顺铂耐药的机制分析

摘要：目的观察阻断PI3K/AKT/mTOR通路对人肺腺癌细胞A549 及多药耐药人肺腺癌细胞A549/CDDP内CA916798 基因
mRNA表达的影响。方法以雷帕霉素、LY294002分别作用于人肺腺癌细胞A549和多药耐药人肺腺癌细胞A549/CDDP,检测
顺铂作用后细胞生长及增殖情况,RT-PCR 检测CA916798 基因mRNA表达水平。结果以雷帕霉素和LY294002 分别阻断
A549、A549/CDDP细胞的PI3K/AKT/mTOR通路后,细胞对于顺铂的耐药性均显著下降（P<0.05）,CA916798基因的表达均显
著下调（P<0.05）。结论CA916798基因位于PI3K/AKT/mTOR通路下游,可能是CA916798诱导肺癌顺铂耐药的机制之一。
     

不同培养方式中肺腺癌细胞系A549表达E-钙粘素的差异及其意义

目的初步探讨E-钙粘素在肿瘤群集耐药中的可能机制.方法采用旋转培养瓶结合台式水浴恒温振荡器旋转培养的方法,进行肺腺癌细胞A549体外立体培养,同时进行普通平面培养,通过流式细胞技术、Western blot、原位细胞凋亡检测试剂盒、四唑盐(MTT)比色法及血球计数器计数法检测细胞周期,E-钙粘素的表达,细胞凋亡率及对阿霉素(ADM)敏感性.结果①立体培养细胞存在E-钙粘素的高表达;②同平面培养比较,立体培养细胞出现细胞周期G1期阻滞、细胞凋亡率低、对ADM敏感性低等表现,给予E-钙粘素阻滞剂SHE78-7后,两者差异明显缩小.结论 E-钙粘素介导的细胞-细胞粘附作用可通过调控细胞周期以及细胞凋亡,影响肺腺癌A549细胞对ADM的敏感性,在肿瘤群集耐药中发挥作用.     

塞来昔布联合培美曲塞对人肺腺癌A549细胞株增殖、凋亡及PI3K/AKT信号通路 相关蛋白的影响

目的 探讨塞来昔布（Cele）联合培美曲塞（Pem）对人肺腺癌A549细胞株增殖、凋亡的影响及其可能的机制。方法 分别采用不同浓度的Cele和Pem作用于A549细胞,48?h条件下,CCK-8法检测光密度（OD）值,计算半抑制浓度（IC50）作为后续实验的药物浓度;实验分组：对照组（加入培养液）和实验组（分别加入IC50浓度的Cele、IC50浓度的Pem、IC50浓度的Cele+Pem）;Cele、Pem单独用药或者联合用药在不同时间条件下（24、36和48?h）作用于A549细胞,CCK-8法检测细胞增殖,择最佳作用时间作为后续实验的干预时间,金氏法评估两药之间的相互关系,流氏细胞仪检测细胞凋亡及周期分布,Western blotting检测AKT、p-AKT蛋白表达情况。结果 与对照组比较,Cele和Pem组呈浓度依赖性抑制A549细胞的增殖,但低浓度Cele组（5?μmol/L） 与对照组比较,差异无统计学意义（P?>0.05）。Cele IC50值为30.51?μmol/L,Pem IC50值为1.33?μmol/L;与对照组比较,Cele和Pem组呈时间依赖性抑制A549细胞增殖,且Cele+Pem组效果最佳。最佳干预时间为48?h,Cele与Pem联合抑制A549细胞增殖;Cele+Pem组与对照组、Cele组及Pem组比较,Cele+Pem组细胞凋亡率和G0/G1期细胞比例升高,p-AKT/GAPDH值下调（P?<0.05）,而AKT/GAPDH值各组间差异无统计学意义（P?>0.05）。结论 Cele与Pem联合可抑制A549细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与诱导细胞G0/G1期阻滞及抑制PI3K/AKT信号通路相关蛋白AKT活性相关。     

肺腺癌A549细胞培养上清液对人单核细胞衍生树突状细胞的影响

目的：观察肺腺癌A549细胞培养上清液（TSN）对人单核细胞衍生树突状细胞（MoDC）的表型、增殖和抗肿瘤A549免疫应答的影响。方法：制备人肺腺癌A549细胞的TSN、灭活TSN和冻融抗原；人MoDC培养按照不同培养条件组合分为7组，分别于培养全程或晚期（第7d）加入TSN或第4d加入冻融抗原冲击致敏，制备MoDC瘤苗，第9d收获细胞。检测各组MoDC表型、MoDC凋亡率、体外混合淋巴细胞反应（MLR）、MoDC诱导的细胞毒性T细胞（CTL）抑瘤活性、培养上清液中IL－12含量。结果：培养全程加TSN的MoDC，相对特异性表型CD80、CD83和人类白细胞抗原（HLA－DR）明显下调，凋亡率明显升高，同时，激活T细胞增殖能力、诱导CTL抑瘤活性及分泌IL－12的量均显著低于正常培养组；培养晚期加TSN的MoDC及培养全程加入灭活TSN的MoDC，均无上述影响；脱离TSN影响、体外正常制备的MoDC瘤苗，表型明显上调、各项免疫指标明显升高，诱导出了高效的抗A549免疫应答。结论：TSN能干扰MoDC成熟过程，下调基表型表达，诱导其凋亡发生、抑制其介导的抗肿瘤免疫应答；而脱离TSH影响、体外正常制备的MoDC瘤苗能够诱导出高铲的抗瘤免疫应答。     

昆明山海棠总生物碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡与细胞周期改变

目的 为探讨昆明山海棠总生物碱(alkaloidsfrom Tripterygium Hypoglaucum Hutch,THHa)抗肺癌机制,研究THHa诱导肺腺癌A549细胞凋亡与细胞周期改变的关系.方法 应用形态学观察、DNA凝胶电泳、流式细胞仪检测分析肺腺癌A549细胞凋亡及细胞周期改变.结果 THHa能够诱导肺腺癌A549细胞凋亡并主要作用于细胞周期S期(S期细胞增多).结论 THHa可能通过诱导细胞凋亡而抑制A549细胞增殖,这种作用与细胞周期有关,这些有助于将来肺癌治疗方案的合理设计.     

苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶表达的影响

目的观察苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达的影响。方法以终质量浓度为0.1、0.2、0.4、0.6 mg/mL的苦参碱作用肺腺癌A549细胞48 h后,通过台盼蓝拒染法计数细胞的生长抑制率;以终质量浓度为0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48、72、96 h后,经透射电镜和DNA Ladder实验了解到细胞凋亡的发生,PCR-TRAP法检测端粒酶活性,实时RT-PCR检测hTERT的mRNA表达水平。结果各种质量浓度的苦参碱作用A549细胞48 h后,均显著抑制细胞的增殖且呈浓度依赖性;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞不同时间后,经透射电镜形态学检测和DNA Ladder实验,均显示A549细胞发生了凋亡改变;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48 h后,端粒酶活性明显受抑,hTERT mRNA表达显著降低。结论苦参碱能抑制肺腺癌A549细胞的生长并诱导其凋亡,其机制可能与下调hTERT基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关。