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1.
利用HBV-DNA阳性血清喂饲中华按蚊,淡色库蚊及白纹伊蚊,分别在吸血后0、2、4、6、12、24和48h将蚊制成匀浆,用经典和粗提法提取HBV-DNA模板。经聚合酶链反应后,电分析扩增产物:结果;3种蚊虫各时点匀浆的扩增说物中的HBV-DNA均为阴性。 相似文献
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本文报道HBV基因扩增产物的限制性酶切分析和寡核苷酸探针杂交鉴定、应用血清HBVDNA的PCR扩增产物制备基因探针和单项抗HBc阳性血清的HBV基因扩增。PCR用adr、adw、ayw3种亚型HBV的C基因区共有序列为内外两对引物分单次或套式扩增,产物为66abp或428bp,两者序列中段共含-BgIⅡ酶切点并与一寡核苷酸探针同源。428bp产物被用以缺口平移标记32P探针作斑点和转印杂交检测。结合分子杂交的PCR结果从单项抗HBc阳性的8/42例慢性肝炎和2/12例无症状受测者血清中检出HBVDNA,证实病毒低度复制和传染性。 相似文献
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4.
应用聚合酶链反应(PCR)及其扩增产物的直接测序技术对2.2.15细胞中乙型肝炎病毒(HBV)基因前C和C区进行测序。结果表明,根据ayw亚型HBV基因设计的引物能够扩增2.2.15细胞中HBVDNA扩增产物位于221-298碱基对之间,而对adr亚型HBVDNA无扩增作用,说明PCR扩增是特异性的,所测到的132个碱基序列与awy1亚型HBVDNA完全符合,提示2.2.15细胞中HBVDNA属a 相似文献
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为探讨婴儿肝炎综合征(NHS)与疱疹病毒(HSV)感染的关系。在疱疹病毒高度同源序列DNA聚合酶基因中设计一对引物,能对HSV-I、HSV-Ⅱ、EBV和CMV四种疱疹病毒DNA进行扩增,继而用凝胶电泳和限制性内切酶BamHⅠ或SmaⅠ酶切分析扩增产物进行鉴别,建立了能一次性分型检测上述四种病毒的PCR-酶谱法。灵敏度可测到1fgDNA,且该引物仅对四种疱疹病毒扩增。用建立的PCR-酶谱法检测30例 相似文献
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EB病毒3种全基因的扩增,克隆及表达 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:扩增克隆及表达EB病毒(EBV)3种(DNA酶、甙激酶及HBRF1)全基因片段。方法:以B95-8细胞株DNA为模板,PCR扩增3种目的基因。酶切鉴定后分别与高效表达载体PBV221连接,用大肠杆菌JM103或HB101作为围论的宿主菌。抗氨苄青霉素培养形成单菌落后放大培养,根据重组质粒的电泳 行为粗筛,再双酶切。结果:各种阳性菌经30℃→42℃变温诱导培养,超声破碎后其上清液经十二烷基磺酸 相似文献
7.
以异硫氰酸胍裂解血清释放核酸使被二氧化硅吸附,经乙醇洗涤后用水悬浮,上清即含纯化DNA。结合双阶变温PCR建立一种简单快速的血清HBV-DNA检测方法。该法只需检测10ul血清,完成提取和扩增只要3h.操作很易掌握。用之检测56例HBsAg+/HBeAg+的血清、42例HBsAg+/HBeAg-的血清和54例HBsAg/HBeAg的血清,结果HBV-DNA检出率分别为86%、57%和13%。应用表明这是一种简捷有效的核酸纯化和扩增方法,适于对大量临床样本作检测之用。 相似文献
8.
人骨形成蛋白-3成熟肽cDNA的克隆、测序及表达 总被引:2,自引:2,他引:2
目的:扩增、克隆人骨形成蛋白-3(hBMP-3)成熟肽cDNA基因,利用大肠杆菌表达hBMP-3成熟肽.方法:PCR方法扩增hBMP-3成熟肽cDNA基因,双脱氧终止法测序正确后,克隆入大肠杆菌表达载体pDH,受控于PRPL启动子,重组质粒pDHB-3m以大肠杆菌DH5α为宿主菌在42℃进行温度诱导.结果:扩增出hBMP-3成熟肽cDNA基因,序列测定完全正确;含重组质粒pDH-B3m的工程菌诱导后在SDS-PAGE上出现一条新生蛋白带,分子质量为14.5ku,与预期hBMP-3成熟肽分子量大小一致,约占菌体总蛋白的28%.结论:成功扩增、克隆hBMP-3成熟肽cDNA基因,并可在大肠杆菌中得到高效表达 相似文献
9.
乙型肝炎病毒(HBV)和基因组为一松驰环状、部分双链DNA(RC-DNA)。在其负链的5与3端之间存在一缺口。当HBV进入宿主细胞后,基因组转变为共价闭合环状DNA(CCC-DNA)。我们根据HBV-RC-和CCC-DNA的结构特点,设计了PCR区别RC-和CCC-DNA。实验表明,该方法可有效地区别两种形式的HBVDNA》 相似文献
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乙型肝炎血清学指标阳性母亲母乳HBV—DNA检测 总被引:2,自引:0,他引:2
随机取50例乙肝血清学指标阳性母亲产后2-3d人的初乳,采用聚合酶链反应(PCR)技术检测初乳中HBV-DNA。结果:抗原阳性组乙肝病毒(HBV-DNA)的检出率为50%,抗体阳性组HBV-DNA检出率为7.7%。抗原阳性组中,HBsAg,HBeAg及抗-HBc3项阳性乾和HBsAg,HBeAg2基阳性者乳汁中HBV--DNA检出率为100%,说明该类乳汁具有极强传染性,抗体阳性组中单纯抗-HBs 相似文献
11.
用PCR法检测166例乙型肝炎病毒感染者血清HBV-DNA。结果显示:HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性,HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性和HEbAg阳性组,HBV-DNA阳性率分别为96.2%、28.6%、93.5%、HBsAg单项阳性者中,检出HBV-DNA阳性78例(孕妇占19.2%),阳性率81.3%。另外,在20例血清标志物全部阴性对照组中发现HBV-DNA阳性1例,阳性率5. 相似文献
12.
探讨病毒与人类基因组同源性问题。选用EB病毒(EBV),肠道病毒(EVs)、单纯疱疹病毒-1型(HSV-1),丙型肝炎病毒(HCV)特异性引物,以6份健康成人外周血DNA为模板,分别进行聚合酶链式反应(PCR)。初步结果表明:有5份DNA样品可通过EBV、HCV特异性引物扩增。EBV引物扩增后的片段大小在154~234bp之间;HCV引物扩增后的片段大小约200bp和120bp。提示病毒某些基因可能存在人类基因组中或两者具有很高的同源性。 相似文献
13.
30例慢性乙型肝炎患者中,有53.3%的病人用PCR可从清和白细胞中检测出HBV-DNA;HBeAg阳性和抗-NBc-IgM阳性的患者100%可以检出HBV-DNA,而仅抗-HBc-IgM阳性的患者HBV-DNA的检出率为66.7%。13例乙肝血清学复制标志阴性的病人中有5例(38.5%)也可检测出HBV-DNA。在HBsAg转阴的3例病人中有1例可从白细胞中检测出HBV-DNA。 相似文献
14.
应用聚合酶链反应检测281例各型乙型肝炎血清HBVDNA,检出率为61.9%。HBeAg阳性其HBVDNA检出率为90.6%,说明HBVDNA与HBeAg有密切关系;抗HBe阳性与抗HBs阳性其HBVDNA检出率分别为38.3%与33.3%,提示HBVDNA并非完全消失,只是含量减少;HBV-M均阴性者其HBVDNA检出率为55.8%,表明在HBV-M阴性的人群中亦可有HBV感染。 相似文献
15.
目的:扩增克隆及表达EB病毒(EBV)3种(DNA酶、胸苷激酶及BHRF1)全基因片段。方法:以B95-8细胞株DNA为模板,PCR扩增3种目的基因。酶切鉴定后分别与高效表达载体pBV221连接,用大肠杆菌JM103或HB101作为转化的宿主菌。抗氨苄青霉素培养形成单菌落后放大培养,根据重组质粒的电泳行为粗筛,再双酶切鉴定。结果:各种阳性菌经30℃→42℃变温诱导培养,超声破碎后其上清液经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE),分别新出现一条分子大小为52ku,67ku及17ku蛋白区带,符合EBV该3种全基因所编码蛋白质大小。凝胶中蛋白质定量扫描结果显示目的蛋白质分别占宿主菌总蛋白质的23%,67%和25%。结论:实现了EBV3种全基因的扩增、克隆及在原核体系的表达。 相似文献
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目的探讨乙型肝炎血清学标志物阳性产妇的初乳中HBV-DNA的检出与其血清中HBV标志物携带状态的关系。方法对51例乙型肝炎血清学标志物阳性产妇的血清及初乳,用酶免法检测HBV-M,用PCR法检测HBV-DNA,并与20例正常组进行对照。结果发现母血中传播性大的3项标志物:乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)及乙型肝炎核心抗体(抗-HBC)中后两项易进入乳汁。3项阳性及HBsAg、HBeAg两项阳性产妇的初乳中HBV-DNA检出率都高,而前者出现的例数更多(8/10)。初乳中HBV-DNA阳性者母血中的HBeAg均为阳性。结论对乙型肝炎血清学标志物阳性的产妇,最好直接检测其乳汁中的乙肝三项及HBV-DNA,以指导哺乳。 相似文献
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血清,白细胞HBV—DNA的PCR检测结果与HBV血清复制标志的关系 总被引:1,自引:0,他引:1
30例慢性乙型肝炎患者中,有53.3%的病人用PCR可从血清和白细胞中检测出HBV-DNA;HBeAg阳性和抗-HBc-IgM阳性的患者100%可以检出HBV-DNA,而仅抗-HBcIgM阳性的患者HBV-DNA的检出率为66.7%。13例乙肝血清学复制标志阴性的病人中有5例(38.5%)也可检测出HBV-DNA。在HBsAg转阴的3例病人中有1例可从白细胞中检测出HBV-DNA。 相似文献
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探讨病毒与人类基因组同源性问题。选用EB病毒(EBV),肠道病毒(EVs)、单纯疱疹病毒-1型(HSV-1),丙型肝炎病毒(HCV)特异性引的,以6份健康成人外周血DNA为模板,分别进行酶链式反应(PCR)。初步结果表明,有5份DNA样品可通过EBV、HCV特异性引物扩增,EBV引物扩增后的片段大小在154-234bp之间;HCV引物扩增的片段大小约200bp和120bp。提示病毒某些基因可能存在 相似文献
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在DIG标记及检测系统中,以Lumiget PPD作为AP底物,经dot-Blot杂交后进行化学发光法检测HCDMV DNA,并与NBT义物显色法比较,结果显示:Lumiget PPD法可检出0.1Pg,同源DNA,非同源性HBV DNA,HSV-Ⅰ,HSV-Ⅱ,DNA不能检出;Lumiget PPD底物作用只需3h即可获得清晰稳定的结果,优于NBT底物显色法。 相似文献
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郑华荣 《新疆医科大学学报》1994,(2)
用非放射性标记的HBV-DNA探针检测371份至少有一项HBV免疫学标志阳性血清和510份对照血清的HBV-DNA。结果表明:510份对照血清和79份仅抗-HBs阳性血清的HBV-DNA均为阴性,82份HBsAg阳性、HBeAg阳性血清的HBV-DNA检出率为100%,103份HBsAg阳性、HBeAg阴性血清的检出率为79.6%,76份HBsAg阳性。HBeAg阴性、但抗-HBe阳性血清的检出率为80.3%,292份HBV不同感染阶段血清总检出率为75%。非放射性分子杂交法可直接检测出HBV的复制,由于该法亦可定量,故还可用于判断血清传染程度和血清病毒的含量。 相似文献