β-乳香酸对海马神经元细胞氧糖剥夺损伤的改善作用

目的:研究β-乳香酸对大鼠海马神经元细胞氧糖剥夺损伤的改善作用.方法:将大鼠海马神经元细胞分为正常对照组、模型组和β-乳香酸低、中、高浓度组(1、10、100μmol/L),除正常对照组外,其余各组细胞加入相应含药培养基,并进行氧糖剥夺培养以复制氧糖剥夺损伤模型.采用MTT法检测细胞的存活率,采用化学比色法检测细胞上清...     

天麻活性成分减轻大鼠神经元氧糖剥夺/复糖复氧损伤的作用机制

目的 研究天麻活性成分3,4-二羟基苯甲醛（3,4-DD）对大鼠脑微血管内皮细胞（BMECs）-大鼠肾上腺嗜铬细胞PC12共培养体系氧糖剥夺/复糖复氧（OGD/R）损伤的改善作用机制。方法 采用Transwell小室共培养BMECs与PC12细胞，然后分为对照组、模型组、丁苯酞组（阳性对照组，0.1 mmol/L）、3,4-DD组（0.1μmol/L），除对照组外，其余各组共培养体系均复制OGD/R损伤模型。同时，共培养体系以相应药物或培养基干预BMECs 24 h，然后检测体系跨膜电阻（TEER）以及PC12细胞中乳酸脱氢酶（LDH）活性、脑源性神经营养因子（BDNF）水平以及TrkB、Plc-γ、Map-2、GAP-43 mRNA表达水平。结果 与对照组比较，模型组共培养体系TEER以及PC12细胞中LDH活性、BDNF水平均显著降低（P<0.01）,PC12细胞中TrkB、Plc-γ、Map-2、GAP-43 mRNA表达水平均显著升高（P<0.01）；与模型组比较，3,4-DD组、丁苯酞组共培养体系TEER以及PC12细胞中LDH活性、BDNF水平和TrkB、Plc...     

脉络宁对原代大鼠海马神经元在氧糖剥夺/复氧中的保护作用

目的:观察脉络宁对氧糖剥夺/复氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)诱导的SD大鼠原代培养海马神经元损伤的保护作用及可能机制。方法:原代培养从新生24 h内SD乳鼠取材的海马神经元,建立氧糖剥夺30 min/复氧8 h海马神经元损伤模型。实验分为正常对照组、OGD/R模型组、脉络宁低、中、高剂量组(5,10和20μg.mL-1)。采用Hoechest33258染色测定细胞凋亡,免疫细胞化学检测各组细胞中脑红蛋白(neuroglobin,NGB)及Bcl-2的表达,PCR检测其mRNA的表达情况。结果:与OGD/R模型组比较,各剂量脉络宁组神经元凋亡率均不同程度降低(P<0.01),且随药物浓度的升高而降低;NGB和Bcl-2蛋白表达不同程度地升高(P<0.01),且随药物浓度升高而升高;NGB及Bcl-2蛋白的mRNA亦升高(P<0.01)。结论:脉络宁发挥神经保护作用可能的机制之一是抑制OGD/R诱导的海马神经元细胞凋亡,促进NGB和Bcl-2蛋白的表达。     

可乐定对原代培养大鼠皮质神经元氧糖剥夺损伤的保护作用

目的：研究可乐定对原代培养大鼠皮质神经元氧糖剥夺( OGD)损伤的保护作用。方法取培养8 d的皮质神经元,分为正常对照组、模型对照组、可乐定(1.0,3.0,10.0μmol·L-1)预处理组。神经元氧糖剥脱损伤模型通过化学性缺氧、孵育液缺糖的方法建立。神经元损伤程度采用噻唑蓝( MTT)染色法和检测乳酸脱氢酶( LDH)的释放量来进行评价,观察预给予可乐定(1.0,3.0,10.0μmol·L-1)对神经元损伤的保护作用。结果显微镜下,正常对照组细胞密集,胞体饱满,边缘光滑,有较强折光性;神经元存活率(100.00±32.12)％,LDH释放比率(100.00±37.51)％。模型对照组细胞核固缩,细胞膜不完整,折光性差,MTT染色吸光度值明显降低,神经元存活率(53.61±7.62)％,LDH释放量显著增加,释放率为(166.07±9.65)％。可乐定(1.0,3.0,10μmol·L-1)预处理可明显逆转ODG损伤所致细胞形态的改变,剂量依耐性升高MTT染色吸光度值,神经元存活率分别为(67.53±10.54)％,(71.50±9.79)％和(87.48±5.29)％,同时可明显降低LDH的释放量,释放率分别为(136.45±25.72)％,(130.92±24.94)％和(121.63±32.68)％。结论可乐定对原代培养大鼠皮质神经元ODG损伤具有良好的保护作用。     

槲皮黄酮对原代皮层神经元细胞氧糖剥夺损伤的保护作用

目的探讨槲皮黄酮对原代皮层神经元细胞氧糖剥夺损伤的保护作用及其作用机制。方法体外原代培养小鼠皮层神经元细胞,氧糖剥夺方法构建原代皮层神经元细胞的局部缺血/再灌注损伤,低(10μg/mL)、中(20μg/mL)、高(40μg/mL)剂量槲皮黄酮治疗24 h后,采用CCK-8试剂盒检测神经元细胞的相对存活率;免疫印迹技术检测凋亡相关蛋白及Traf6/TAK1信号通路蛋白表达水平;Traf6质粒及空白质粒瞬时转染神经元细胞,使Traf6蛋白在细胞中发生过表达,然后利用槲皮黄酮处理细胞,观察凋亡蛋白及Traf6/TAK1信号通路相关蛋白的表达情况。结果低、中、高剂量槲皮黄酮处理后细胞相对存活率显著增加(P<0.05),表现出浓度依赖性;促凋亡蛋白Bax、Traf6及p-TAK1表达显著降低,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平显著升高(P<0.05);瞬时转染了Traf6重组质粒的细胞中,Traf6蛋白发生过表达,经槲皮黄酮处理后,Bax、Traf6、p-TAK1蛋白水平显著降低,而Bcl-2表达水平显著升高(P<0.05)。结论槲皮黄酮对原代皮层神经元细胞氧糖剥夺损伤具有较好的保护作用,其作用机制可能与抑制Traf6/TAK1信号通路活化有关。     

丁基苯酞抗大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧损伤及其机制

本研究探讨丁基苯酞抗大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧损伤及其机制。原代培养大鼠大脑皮质神经元，建立氧糖剥夺/复氧模型(OGD/R)，采用MTT法、酶学检查、免疫组化、RT-PCR等观察丁基苯酞(各浓度组)的保护作用及其机制。在氧糖剥夺4 h/复氧8 h时丁基苯酞各浓度组可增加神经元的细胞活力和减少神经元LDH(乳酸脱氢酶)的释放，可显著降低神经元表达iNOS mRNA(诱生型一氧化氮合酶)和NF-κB(核因子κB) p65蛋白(增加)。不同剂量丁基苯酞(100、 10、 1和0.1 μmol·L^-1)在增加细胞活力、减少LDH释放及降低神经元表达iNOS mRNA等方面，高浓度的作用强于低浓度，且丁基苯酞100 μmol·L^-1组与吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC) 100 μmol·L^-1组差异显著。在OGD 4 h/R 8 h时丁基苯酞可能抑制iNOSmRNA的表达及NF-κB的活化，从而有效保护氧糖剥夺/复氧中损伤的大脑皮质神经元。     

活性多肽GRGDS对氧糖剥夺诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制研究

目的 研究活性多肽GRGDS对氧糖剥夺(OGD)损伤模型中大鼠神经细胞(PC12细胞)的保护作用,并探讨其作用机制.方法 将PC12细胞分成对照组、ODG组、活性多肽GRGDS治疗组,通过氧糖剥夺模拟体外脑缺血建立损伤模型.用噻唑蓝(MTT)比色法和流式细胞仪检测氧糖剥夺后细胞凋亡情况,酶联免疫吸附试验法(ELISA)...     

丁苯酞抑制原代大鼠海马神经元氧糖剥夺/复氧诱导的凋亡

目的:观察丁苯酞对氧糖剥夺/复氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)诱导的SD大鼠原代培养海马神经元损伤的保护作用。方法:原代培养新生24 h内SD乳鼠海马神经元,建立氧糖剥夺30 min/复氧8 h海马神经元损伤模型。实验分为正常对照组、OGD/R模型组、丁苯酞低、中、高剂量组(0.1,1,10μmol·L-1)。采用Hoechest33258染色测定细胞凋亡,免疫细胞化学检测各组细胞中Bcl-2蛋白的表达情况。结果:与OGD/R模型组比较,各丁苯酞给药物组神经元凋亡率均不同程度降低(P<0.01),且随药物浓度升高而降低;Bcl-2蛋白表达不同程度地增高(P<0.01),且随药物浓度升高而升高。结论:丁苯酞能抑制OGD/R诱导的海马神经元细胞凋亡,其可能通过增加神经元内Bcl-2凋亡抑制蛋白的表达而抑制凋亡,进而保护神经元。     

盐酸法舒地尔对体外培养星形胶质细胞氧糖剥夺损伤的保护作用

目的研究盐酸法舒地尔(FH)对大鼠皮质星形胶质细胞氧糖剥夺损伤(OGD)的保护作用。方法传代培养的大鼠皮质星形胶质细胞与无糖Na2S2O42 mmol·L-1孵育4 h,制备OGD模型。FH 5和10μmol·L-1在OGD前2 h加入。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活;比色法检测乳酸脱氢酶(LDH);乙炔基脱氧尿苷(Ed U)掺入法检测星形胶质细胞DNA合成;Hoechst染色和丫啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)荧光双染观察细胞凋亡;2,7-二氯氢化荧光素(DHCF-DA)荧光染色和硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果与正常对照组比较,OGD模型组星形胶质细胞存活率为(24±6)%,下降了4倍(P<0.01);OGD模型组LDH释放量显著升高至(366±7)U·L-1(P<0.01)。加入FH 5和10μmol·L-1的预处理组,细胞存活率分别上升至(42±5)%和(43±5)%,LDH释放分别下降至290±18和(268±20)U·L-1(P<0.01),细胞Ed U阳性率由OGD模型组的(47±6)%,分别下降到(35±6)%和(29±5)%(P<0.01)。Hoechst染色及AO/EB双染实验结显示,FH能显著减少OGD损伤后细胞的凋亡及坏死,使晚期凋亡细胞比例减少(P<0.05);DCFH-DA荧光和NBT还原实验显示,FH降低OGD损伤后ROS水平,且FH10μmol·L-1的预处理组降低的幅度比5μmol·L-1的预处理组更明显,但两组差异无统计学意义。结论FH对传代培养的大鼠皮质星形胶质细胞OGD具有保护作用,其作用机制可能与降低细胞内ROS水平有关。     

毛蕊异黄酮抑制氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞凋亡研究

目的研究毛蕊异黄酮对氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞凋亡的影响。方法将对数生长期PC12细胞随机分为4组:正常对照组(Control)、模型组(Model)、毛蕊异黄酮组(Calycosin,0.07μmol·L~(-1))和尼莫地平组(Nimodipine,5.00μmol·L~(-1),阳性对照药组)。用CCK-8检测细胞存活率;流式细胞术和TUNEL染色检测细胞凋亡率和凋亡指数;免疫荧光染色检测细胞Bax/Bcl-2比值;Western blot检测细胞凋亡蛋白caspase-3表达。结果与Control组相比,Model组细胞存活率明显降低(P<0.05),细胞凋亡率和凋亡指数明显升高(P<0.05),Bax/Bcl-2比值和caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.05);与Model组相比,Calycosin组和Nimodipine组细胞存活率均明显升高(P<0.05),细胞凋亡率和凋亡指数均明显降低(P<0.05),Bax/Bcl-2比值和caspase-3蛋白表达均明显降低(P<0.05),差异有统计学意义。结论毛蕊异黄酮可明显提高氧糖剥夺/复氧复糖PC12细胞存活率,抑制细胞凋亡,其作用机制与毛蕊异黄酮调控凋亡蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3表达有关。     

不同浓度丹参酮对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用

目的:探讨不同浓度丹参酮对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用及其机制。方法:建立大鼠脑片缺氧缺糖损伤模型,设立对照组、缺氧缺糖损伤组、丹参酮20mg·L-1组和丹参酮200mg·L-1组。利用2,3,5三苯基氯化四氮唑(TTC)染色定量比色、乳酸脱氢酶(LDH)、免疫组化、电镜评价不同浓度丹参酮对脑损伤的保护作用。同时激光共聚焦显微镜测定脑片胞内钙变化。结果:不同浓度丹参酮(20、200mg·L-1)抑制脑片OGD损伤所致的TTC染色降低,减少LDH释放,减轻神经元凋亡,改善神经元超微结构的病理损伤。OGD损伤增加bax和bcl2蛋白表达和胞内钙离子浓度。不同浓度丹参酮(20、200mg·L-1)进一步上调bcl2蛋白表达,降低bax蛋白表达,同时抑制胞内钙离子浓度。与丹参酮20mg·L-1相比,丹参酮200mg·L-1作用较强。结论:不同浓度丹参酮具有脑保护作用,能够抑制缺氧缺糖损伤导致的大鼠脑片神经元损伤及其凋亡过程,且丹参酮对于胞内钙离子的调控可能是其发挥保护作用的重要机制之一。     

不同浓度芬太尼对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用

目的探讨高浓度芬太尼对大鼠脑片缺氧缺糖损伤的保护作用及其机制。方法建立大鼠脑片缺氧缺糖损伤模型,设立对照组(Control)、缺氧缺糖损伤组(OGD)、芬太尼50μg.L-1组(F50)、芬太尼500μg.L-1组(F500)。利用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色定量比色、乳酸脱氢酶(LDH)、免疫组化、电镜评价高浓度芬太尼对脑损伤的保护作用。同时激光共聚焦显微镜测定脑片胞内钙变化。结果不同浓度芬太尼(50、500μg.L-1)抑制脑片OGD损伤所致的TTC染色降低;减少LDH释放;减轻神经元凋亡,改善神经元超微结构的病理损伤。OGD损伤增加bax和bc l-2蛋白表达,增加胞内钙离子浓度。不同浓度芬太尼(50、500μg.L-1)进一步上调bc l-2蛋白表达,降低bax蛋白表达,同时抑制胞内钙离子浓度。与芬太尼500μg.L-1相比,芬太尼50μg.L-1作用较强。结论高浓度芬太尼具有脑保护作用,能够抑制缺氧缺糖损伤导致的大鼠脑片神经元损伤及其凋亡过程,且芬太尼对于胞内钙离子的调控可能是其发挥保护作用的重要机制之一。随着芬太尼的剂量增加,其保护作用减弱,但在临床应用的剂量范围内未见明显的毒性作用。     

抗血小板溶栓素对缺糖缺氧再灌注损伤大鼠原代皮质神经细胞保护作用

目的 探讨抗血小板溶栓素(APT)对原培养大鼠皮质神经细胞缺糖缺氧损伤的保护作用及其机制。方法 大鼠原代皮质神经细胞培养6 d后,经APT 80μg/mL、40μg/mL、20μg/mL、Toll样受体4(TLR4)阻断剂HTA12510μg/mL预处理24 h,皮质神经细胞缺糖缺氧3 h,恢复正常培养24 h,建立缺糖缺氧再灌注损伤模型。实验分为正常组,模型组,APT低、中、高组,HTA组。倒置显微镜下观察细胞形态,免疫组化染色鉴定神经元。MTT法检测细胞存活率。比色法检测细胞培养液中丙二醛(MDA)含量和乳酸脱氢酶(LDH)活性。G-LISA法检测细胞中Rho蛋白A(RhoA)活性,Western-bloting检测细胞中TLR4、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)蛋白表达水平。结果 细胞培养6 d后,免疫组化鉴定显示神经细胞纯度达90%以上;与模型组比较,APT低、中、高剂量能明显增加神经细胞存活率;中、高剂量能明显降低培养液中MDA含量和LDH活性,降低细胞中RhoA活性,抑制细胞中TLR4,ROCK1/2蛋白表达。结论 APT对大鼠原代皮质神经细胞缺糖缺氧再灌注损伤有较好的保护作用,其机制与抑制TLR4、RhoA、ROCK信号通路有关。     

牛磺酸对皮质神经元急性氧糖缺失所致损伤的保护作用(英文)

目的已证实牛磺酸对在体脑缺血有保护作用,本研究观察其对缺失氧糖的离体神经元是否有直接的保护作用及可能的作用机制。方法制备离体大鼠脑皮质神经元的氧糖缺失模型。在氧糖缺失前20 h及氧糖缺失4 h过程中,分别给予牛磺酸5,10和20 mmol·L-1。MTT法和流式细胞术检测神经元的死亡率;Fura-2/AM负载检测神经元内游离钙离子水平([Ca2 +]i);高效液相色谱法检测培养基中谷氨酸水平。结果氧糖缺失可致神经元死亡增加,[Ca2 +]i和培养基中谷氨酸水平异常升高;牛磺酸处理可使氧糖缺失引起的神经元死亡率明显降低,抑制氧糖缺失引起的神经元[Ca2 +]i和胞外谷氨酸浓度的异常升高。结论牛磺酸可以减轻氧糖缺失引起的大鼠皮质神经元损伤,其机制可能与其抑制胞内钙超载和抑制谷氨酸释放或漏出有关。     

Cannabinoid modulation of neuronal function after oxygen/glucose deprivation in area CA1 of the rat hippocampus

Endocannabinoids released during cerebral ischemia have been implicated as neuroprotective agents. We assessed the role of cannabinoid receptors in modulating the response of neurons to oxygen/glucose deprivation (OGD), a model for in vitro ischemia, in rat hippocampal slices using extracellular recording techniques. Under control conditions, 15 min OGD resulted in only 50% recovery of CA1 field excitatory postsynaptic potentials (fEPSPs) 60 min post-insult. This post-OGD depression of function was primarily NMDA receptor-dependent as the NMDA receptor antagonist MK-801 (50 microM) promoted recovery of synaptic transmission to 76% of the baseline. Treatment with the CB1 receptor antagonist AM251 (1 microM), which prevented the depression of excitatory synaptic transmission caused by WIN55,212-2 (1 microM), also markedly enhanced recovery of function (71% of control). The enhanced recovery after OGD in the presence of AM251 was independent of both GABA(A) receptors and NMDA receptors since co-application of AM251 with either bicuculline (10 microM) or MK-801 (50 microM) did not alter recovery, or further improved recovery, respectively. These results suggest endocannabinoids released during OGD may modulate synaptic transmission and post-OGD neuronal outcome via activation of an AM251-sensitive cannabinoid receptor.     

Effects of scutellarin on PKCγ in PC12 cell injury induced by oxygen and glucose deprivation

Aim： To evaluate the neuroprotective effect and mechanisms of scutellarin （Scu） against PC12 cell injury after oxygen and glucose deprivation followed by reperfusion （OGD-Rep）. Methods： Undifferentiated rat pheochromocytoma PC12 cells, exposed to oxygen and glucose deprivation followed by reperfusion （OGD- Rep）, used as an in vitro model of ischemia/reperfusion. Cell survival was evaluated by diphenyltetrazolium bromide （MTT） assay and the amount of LDH release was determined using assay kits. [Ca^2＋]i was monitored using a fluorescent Ca^2＋ - sensitive dye Fura-2 acetoxymethyl ester. Cell apoptosis was detected by a DNA ladder and by flow cytometric detection. The expression of protein kinase C （PKC）T was determined usiiag both RT-PCR and Western blotting. The translocation of PKCT was assayed by subcellular fractionation and Western blotting. Results： OGD-Rep injury significantly elevated the level of LDH release, [Ca^2＋]i, mRNA expression and the translocation of PKCγ compared in the PC12 cells with those of the normal group. Scu （10-100 μmol/L） exerted a protective effect against OGD-Rep injury by reducing LDH release, [Ca^2＋]i, the percent of apoptosis, and the translocation of PKCγ. Conclusion： Scu inhibits the increase of [Ca^2＋]i and the activation of PKCγ, exerting protective effects against PC12 cell injury induced by OGD-Rep.     

杨梅叶总黄酮对培养大鼠皮质神经元缺糖缺氧损伤的影响

目的探讨杨梅叶总黄酮对原代培养大鼠皮质神经元缺糖缺氧损伤的影响。方法采用原代培养的大鼠皮质神经元,随机分为正常组、神经元缺糖缺氧(oxygen-glucose deprivation,OGD)模型组和杨梅叶总黄酮高、中、低质量浓度(100、10、1 mg.L-1)给药组,MTT法观察神经元的存活率,比色法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放量、过氧化氢(hydrogen perox-ide,H2O2)含量,并检测细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性及丙二醛(malondi-aldehyde,MDA)含量。结果杨梅叶总黄酮可显著提高受损伤神经元的存活率和皮质神经元细胞内SOD活性,降低神经元细胞LDH的释放、细胞内MDA含量和细胞培养液中H2O2含量。结论杨梅叶总黄酮对缺糖缺氧所致皮质神经元损伤具有明显的保护作用。