人牙周膜细胞不同生物学特性的表达

目的：观察人牙周膜细胞生物学特性表达。方法：采用细胞克隆技术,以细胞的牙骨质附着蛋白（ Ｃ Ａ Ｐ） 亲和力、碱性磷酸酶（ Ａ Ｌ Ｐ） 表达率和细胞的钙化能力为指标,对５ 名患者的５ 个正常前磨牙的牙周膜（ Ｐ Ｄ Ｌ） 细胞进行了初步的鉴定。结果：在接种的６６９ 个克隆细胞中,仅有４３ ．６ ％ 的克隆细胞具有持续增殖潜力。在这些生长克隆细胞中,非钙化细胞所占比例要多于钙化细胞,但这两类细胞中分别存在着 Ａ Ｌ Ｐ 表达和 Ｃ Ａ Ｐ 亲和力有着不同表现的细胞。结论：牙周膜中存在有不同表现型的细胞。提示牙周组织再生是一复杂的过程。这些细胞在牙周组织再生中起着什么作用,尚待进一步研究。     

rhBMP-2对人牙周膜细胞骨桥蛋白表达的影响

目的　深入了解牙周膜细胞 (periodontalligamentcells,PDLC)的成骨样细胞特性 ,以及非胶原蛋白在牙周组织矿化中的作用。方法　在体外培养条件下 ,观察重组人骨形成蛋白 2(recombinanthumanbonemorphogeneticprotein 2 ,rhBMP 2 )作用前后是否对矿化相关蛋白之一的骨桥蛋白 (osteopontin ,OPN)在人PDLC中的存在及表达情况产生影响。在小玻片上培养第 5代PDLC ,分为加rhBMP 2 (5 0 μg/L)刺激的实验组和不加任何因子的空白对照组 ,以地高辛标记的OPNcDNA探针 ,采用原位杂交技术对PDLC中OPN的表达情况进行检测 ;同时做PBS替代探针和RNA酶预处理的方法学对照。结果　对照组、替代对照和RNA酶预处理的PDLC均显示为阴性反应 ,没有显示出OPN的阳性表达信号 ;实验组PDLC的胞浆中可见明显的OPN阳性反应 ,表达信号较强。结论　rhBMP 2的刺激作用可使PDLC表达出较强的OPN阳性信号 ;表明在一定条件和外界因子的诱导下 ,PDLC具有向成骨特性方向转变的潜能 ,对牙周组织再生有促进效应。     

TNF-α对人牙周膜细胞表达Asporin的影响

目的：检测TNF-α对人牙周膜细胞Asporin表达的影响,初步探讨Asporin在牙周炎致病过程中扮演的角色,为牙周炎的发病机制研究提供线索.方法：改良酶消化法体外分离培养人牙周膜细胞,qRT-PCR检测在不同浓度TNF-α （0.5、1、2、5、10 ng/mL）作用下牙周膜细胞Asporin的表达及使用1 ng/mL的TNF-α作用于牙周膜细胞3、6、24和48 h后,牙周膜细胞中Asporin的表达;应用免疫细胞化学检测Asporin在牙周膜细胞中表达定位和在TNF-α作用下的表达变化,其结果用Image-Pro Plus （IPP）软件分析.结果：qRT-PCR结果显示,1ng/mL TNF-o能最大程度降低人牙周膜细胞中Asporin的表达（P＜0.05）,TNF-α作用后3h开始,Asporin表达下降,作用24 h,48 h后,其表达降低最为明显（P＜0.05）.免疫细胞化学的检测结果与qRT-PCR一致.结论：TNF-α能显著下调人牙周膜细胞Asporin的表达,推测Asporin可能参与了牙周炎的发生发展过程.     

不同培养基对人牙周膜细胞生物学行为的影响

目的:研究α-MEM、DMFM-LG、RPMl 1640三种培养基对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)生物学行为的影响,为体外培养人牙周膜细胞寻找合适的培养基.方法:采用改良组织块培养法,分别用α-MEM、DMEM-LG、RPMl 1640三种培养基对hPDL...     

不同培养基对人牙周膜细胞生物学行为的影响

目的：研究α—MEM、DMEM—LG、RPMI1640三种培养基对人牙周膜细胞（human periodontal ligament cells,hPDLcs）生物学行为的影响,为体外培养人牙周膜细胞寻找合适的培养基。方法：采用改良组织块培养法,分别用α-MEM、DMEM—LG、RPMI1640三种培养基对hPDLcs进行体外培养,比较三组细胞在游出成功率、增殖及矿化等方面的差异。结果：α-MEM促进hPDLcs增殖作用最强。α—MEM组培养的细胞表达的碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）含量最高,与其它两组间有显著差异。DMEM—LG组矿化结节形成个数最多且体积大。结论：α-MEM促进hPDLcs增殖,DMEM—LG促进hPDLcs分化。应根据实验要求选择合适培养基。     

牙周膜相关蛋白1在人牙周膜细胞成骨分化过程中的表达

目的 研究牙周膜相关蛋白1（PLAP-1）在人牙周膜细胞（PDLC）成骨分化过程中的表达变化,为明确PLAP-1 在牙周组织中的作用奠定基础.方法 酶消化法培养人PDLC,免疫细胞化学染色鉴定其来源和PLAP-1 的表达,茜素红染色和碱性磷酸酶（ALP）实验鉴定其成骨分化能力,定量反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测其成骨分化过程中,PLAP-1、Periostin、RGD-CAP、RUNX2、OCN 和OPN mRNA 表达变化,Western blot 检测PLAP-1、RUNX2 和OCN 蛋白表达变化并进行统计分析.结果 培养的人PDLC 来源于间充质;人PDLC 矿化诱导21 d 后茜素红染色阳性,矿化诱导后7、14、21 d 时ALP 活性较对照组明显增高（P ＜ 0.05）,具有成骨分化能力;PLAP-1 免疫细胞化学染色阳性;定量RT-PCR 和Western blot 结果显示,人PDLC 在mRNA 和蛋白水平均表达PLAP-1,且mRNA 表达量随人PDLC 成骨分化过程发生变化,诱导14 d上调,诱导21 d 下调,较对照组有明显差异（P ＜ 0.05）,Western blot 检测蛋白表达显示类似的表达趋势.结论 PLAP-1 在基因及蛋白水平均高表达于人PDLC,其表达量随人PDLC 成骨分化成一定模式,提示其参与调控牙周膜的功能与稳定,但其精细的调控功能还有待进一步深入研究.     

不同加力时间点人牙周膜细胞中核心结合因子（Cbfal）mRNA的表达变化

目的　核心结合因子Cbfal是决定间充质干细胞向成骨细胞系分化的特异性转录因子 ,本研究观察人牙周膜细胞在间歇性牵张力作用下CbfalmRNA的表达变化。方法　系列酶消化法培养人牙周膜细胞 ,采用体外细胞加力装置施加间歇性牵张力 ,半定量RT -PCR反应检测cbfalmRNA在加力不同时间点的表达。结果　正常人牙周膜细胞在不受力的情况下cbfalmRNA有微弱表达 ,加力后表达增强 ,并具有时效性。结论　间歇性牵张力诱导人牙周膜细胞向成骨方向分化 ,而Cbfal则在机械力诱导成骨分化的启动阶段发挥作用。     

周期性张应力对人牙周膜细胞Periostin表达的影响

目的:研究在机械力作用下人牙周膜细胞(h PDLCs)内Periositn(PN)m RNA和蛋白的表达变化。方法:采用组织块酶消化法培养h PDLCs,经鉴定后将第4代细胞随机分为4个实验组和1个对照组(非加力组),4个实验组分别采用Flexcell-5000 Tension System应力加载系统对h PDLCs加载6、12、24、48 h的周期性张应力;然后采用q RT-PCR、Western blot分别检测各组h PDLCs中PN m RNA和蛋白的表达变化。结果:在正常h PDLCs中表达PN m RNA和蛋白;与对照组相比,加力6 h后,PN m RNA和蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05);加力12 h后,PN m RNA和蛋白的表达均逐渐升高,并持续至24 h达最高水平(P<0.05);而在加力48 h时,PN m RNA和蛋白表达均明显下降,并恢复至对照组的表达水平(P>0.05)。结论:机械力可诱导h PDLCs中PN的表达增强及活化,且具有时间依赖性;提示PN可能参与了细胞内生物力学信号的转导。     

人牙周膜细胞和牙周膜组织的初级纤毛观察

目的:观察牙周膜组织和体外培养的牙周膜细胞的初级纤毛情况。方法:切取人牙根中1/3的牙周膜组织的冰冻切片和切取小鼠切牙牙周膜组织石蜡切片,原代培养人牙周膜细胞至P3,采用acet-α-tubulin利用间接免疫荧光的方法观察初级纤毛结构。结果:人及小鼠牙周膜组织以及人牙周膜细胞均可见绿色短棒状荧光信号,位于细胞核附近,长度约2~3 μm。 结论:牙周膜组织及体外培养的人牙周膜细胞均含有初级纤毛结构     

人牙周膜细胞及炎症龈组织中mCD14表达的免疫组化研究

目的研究人PDLC及炎症龈组织中mCD14表达情况。方法采用免疫组化SABC方法。结果正常人牙周膜细胞mCD14染色为阳性反应，但细胞经脂多糖刺激2天后，胞浆染色要比未刺激的细胞染色深。健康牙龈组织中mCD14表达阴性；边缘性龈炎和牙周炎龈组织上皮棘层细胞mCD14呈强阳性表达，增生性龈炎也呈阳性表达。结论mCD14可在非髓样细胞中表达；mCD14可能在局部作为脂多糖受体参与牙周组织的破坏。     

脂多糖对人牙周膜细胞COX-2蛋白表达的影响

目的：观察脂多糖对人牙周膜成纤维细胞COX-2表达的影响,探讨牙周病发生发展过程中脂多糖（LPS）与COX-2的关系。方法：使用不同浓度LPS刺激体外培养人牙周膜成纤维细胞,免疫组织化学法检测细胞COX-2蛋白表达,灰度分析并进行统计学处理。结果：LPS组COX-2蛋白表达明显高于对照组,并且LPS浓度越高,COX-2表达越强。结论：LPS能够诱导人牙周膜成纤维细胞COX-2表达上调,随着LPS刺激浓度增高,COX-2表达逐渐增强,这一机制很可能在牙周炎发生发展过程中扮演重要角色。     

不同浓度血清对人牙周膜细胞生长特性的影响

目的探讨人牙周膜细胞在不同浓度血清培养液中的生长特性。方法用倒置显微镜和MTT法观察人牙周膜细胞在10%、5%、2%浓度血清培养液中的生长和增殖变化,使用流式细胞仪检测不同血清浓度对细胞周期的影响。结果人牙周膜细胞在2%血清培养液中增殖速率与增殖指数均最低,在10%血清培养液中最高,3组细胞的增殖速率具有显著性的统计学差异。结论体外培养人牙周膜细胞的增殖具有血清浓度依赖性,高血清浓度培养液的促增殖效应强。     

人白介素－1β水平与人牙周膜细胞OPG表达关系

目的：检测不同浓度重组人白介素－1β（recombinant human interleukin－1β,rhIL－1β）对体外培养人牙周膜细胞（human periodontal ligament cells,HPDLCs）表达骨保护因子（osteoprotegerin,OPG）的影响,研究rhIL－1β水平对牙周膜细胞骨向分化的作用。方法：正畸需要而拨除的健康前磨牙牙周膜,体外传代培养HPDLCs;ELISA法和RT－PCR法测定不同浓度rhIL－1β（0、5、10、15μg／L）下HPDLCs的OPG分泌量及mRNA表达。结果：ELISA和RT－PCR法检测结果显示,5、10、15μg／L rhIL－1β作用于HPDLCs均会下调其OPG蛋白分泌和mRNA表达。同一时间点与0μg／L对照组比较,5、10、15μg／L组OPG蛋白分泌和mRNA表达依此下调,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论：rhIL－1β水平升高会增强对HPDLCs的OPG表达抑制,对牙槽骨健康产生不利影响。     

SOST基因在人牙周膜细胞矿化诱导过程中的表达

目的:探讨SOST基因在人牙周膜细胞矿化诱导过程中的表达变化,为进一步研究SOST基因在牙周组织中的作用提供理论基础。方法:在体外培养条件下,将矿化诱导液作用于人牙周膜细胞(7、14、21d),检测细胞矿化能力、SOST基因以及成骨标志基因的表达变化。采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:随着诱导时间的增加,人牙周膜细胞的碱性磷酸酶染色及矿化钙结节染色程度增加,成骨标志基因以及SOST基因的表达量在矿化诱导第14天及21天后明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05),并具有时间依赖性。结论:牙周膜细胞在mRNA水平能够表达SOST,而且矿化诱导作用对人牙周膜细胞中SOST基因的表达有促进作用。提示SOST参与人牙周膜细胞的成骨分化过程,并对牙周组织改建有重要作用。     

孕酮上调人牙周膜成纤维细胞中ALP的表达

目的:用碱性磷酸酶染色及碱性磷酸酶活性分析的方法,研究孕酮对人牙周膜成纤维细胞(hPDLCs)中碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)表达的影响。方法:原代培养hPDLCs,取第4～6代细胞用于实验。分为空白对照组,孕酮组,抑制剂组。检测普通培养液和成骨诱导培养液中各组细胞在孕酮作用后ALP染色的变化。用碱性磷酸酶活性分析法检测不同浓度的孕酮对hPDLCs中ALP表达的影响。结果:孕酮能够促进hPDLCs中ALP染色阳性面积的表达,且能够提高hPDLCs中ALP的活性,具有时间及剂量依赖性,抑制剂组各指标减小。结论:孕酮能够上调hPDLCs中碱性磷酸酶的表达。     

碱性成纤维细胞生长因子受体在人牙周膜细胞表面的表达

已有研究表明,局部应用碱性成纤维细胞生长因子(bFGF或FGF-2)可促进实验动物牙周损伤的再生修复。本实验对牙周膜(PDL)细胞表面FGF受体表达情况作研究,进一步探讨FGF-2对PDL细胞作用的生物学机制。 材料和方法 取正畸拔除的健康第一前磨牙根中部牙周膜组织,采用组织块培养法,建立人PDL细胞系,第4～5代用于以下实验:①荧光法测定PDL细胞标准培养23 d中DNA含量变化。②以p-NP为底物测定PDL细胞生长过程中不同时间碱性磷酸酶(ALP)活性,并计算每微克DNA所对应的ALP活性单位。③测定在加入FGF-2条件下不同时间ALP活性,并与无     

Osterix过表达对人牙周膜细胞骨向分化的影响

目的 研究Osterix（Osx）过表达对人牙周膜细胞受力后骨向分化的影响,探讨Osx与正畸牙周组织骨改建的关系。方法 采用组织块法培养人牙周膜细胞,用重组质粒pcDNA3.1 flag- Osx 转染人牙周膜细胞。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot方法检测未转染组、转染空质粒组、转染Osx组细胞Osx mRNA和蛋白表达水平;并观察核心结合因子α1（Cbfα1）、碱性磷酸酶（ALP）、骨桥素（OPN）、骨钙素（OC）、骨涎蛋白（BSP）和a1（I）型胶原蛋白（Col I）的mRNA表达情况。3组细胞加载6 h离心力后,观察上述检测指标的变化。结果 转染24 h后,相对未转染组,转染空质粒组Osx mRNA和蛋白水平无明显变化（P>0.05）;而转染Osx组Osx mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,同时5个成骨标志基因的mRNA表达亦均明显升高（P<0.05,P<0.01）。加力6 h后,3组Osx和成骨标志基因表达水平均明显升高,但是转染Osx组Osx mRNA和蛋白表达增强更加显著,增加量约为其他两组的2倍,其 ALP、OPN、OC、BSP和Col I的mRNA表达亦升高更显著。结论 Osx过表达可以促进人牙周膜细胞在机械力作用下向成骨样细胞分化。Osx可能通过调控多种成骨基因的表达,从而在正畸牙周组织的骨改建过程中发挥着重要的作用。