转化生长因子β1对人胚肺成纤维细胞平滑肌肌动蛋白α表达的影响

在肺纤维化动物模型以及人类特发性肺纤维化(IPF)中,纤维化肺组织局部不仅转化生长因子β1(TGF β1)水平升高,而且还聚集了大量表达平滑肌肌动蛋白α(αSMA)的肌成纤维细胞。肌成纤维细胞与肺纤维化进展过程密切。本研究拟探讨外源性TGF β1对人胚肺成纤维细胞αSMA蛋白和mRNA表达水平的影响。材料与方法　材料:人胚肺成纤维细胞系(HLF 0 2 )由我校细胞中心构建[1] 。TGF β1为Peprotech公司产品,小鼠αSMA单克隆抗体购自Novocastra公司,RTKit为Promega产品,TrizolRNA提取试剂购自LifeTechnology公司,SPKit则由北京中山公…     

血小板源生长因子β受体反义寡核苷酸对血小板源生长因子诱导大鼠血管平滑肌细胞迁移的影响

为研究血小板源生长因子β受体反义寡核苷酸对血小板源生长因子诱导的大鼠血管平滑肌细胞迁移的影响和作用机制,利用激光共聚集显微镜观察平滑肌细胞对异硫氰酸荧光素标记的反义寡核苷酸的摄取和细胞内定位,改良Boden's小室法观察平滑肌细胞迁移。结果发现,加入反义寡核苷酸培养24h及48h后荧光分别位于细胞浆内和细胞核内,5umol/L以上浓度反义寡核苷酸作用36h后,被血小板源生长因子诱导迁移通过Boyden's小室碳纤维素膜的细胞数量小于空白对照组;正义,错义寡核苷酸和5umol/L以下浓度反义寡核苷酸迁移抑制不明显,提示血小板源生长因子β受体反义寡核苷酸在细胞核内呈时间和浓度依赖性抑制血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞迁移。     

老年冠心病碱性成纤维细胞生长因子和纤维连接蛋白的变化

目的:成纤维细胞生长因子(FGF)是一种结构相关的肽生长因子家族,具有很强的促细胞生长作用。本文探讨老年冠心病患者碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、纤维连接蛋白(Fn)的变化及临床意义。方法:对象共42例,冠心病非心绞痛组12例,心绞痛组15例,急性心肌梗死(AMI)组5例,陈旧性心肌梗死组5例,缺血心肌病组5例。用ELISA法测定bFGF、Fn。结果:冠心病非心绞痛组、心绞痛组、AMI组bFGF、Fn分别为177.5±20.2μg/ml,350.2±26.4ug/ml,430.4±8.5tμg/ml;230.3±28.9μg/ml,240.2±27.4μg/ml,360.7±38.4μg/ml,与对照组比较有显著差异(P<0.05-0.01)。结论:bFGF水平:AMI组>心绞痛组>冠心病非心绞痛组。bFGF、Fn对了解冠心病的病情及预后有一定意义。     

血管钙化大鼠模型肾脏β-Klotho及成纤维细胞生长因子受体1表达研究

目的:观察血管钙化对大鼠肾功能的损伤情况,及其与肾脏组织局部β-Klotho[成纤维细胞生长因子21(FGF21)的辅助因子]、成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)表达变化关系,探讨β-Klotho及FGFR1在血管钙化肾脏损伤中的作用和意义。方法:实验动物按电脑随机数字表法分为正常对照组和钙化组,每组6只。钙化组采用维生素D3联合尼古丁诱导大鼠血管钙化模型。以肌氨酸氧化酶法检测大鼠血清肌酐浓度,以紫外-谷氨酸脱氢酶法检测大鼠血清尿素氮浓度,以生化法检测大鼠血钙及血磷浓度,以碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测大鼠肾脏组织ALP活性,以酶联免疫吸附法检测大鼠肾脏组织β-Klotho及FGFR1蛋白含量。结果:与正常对照组比较,血管钙化组大鼠血清肌酐及尿素氮水平升高[(35.200±4.087)μmol/L vs(26.000±5.0990)μmol/L,(P0.05);(6.900±0.623)mmol/L vs(5.400±0.803)mmol/L,(P0.05)];大鼠肾脏组织局部ALP活性升高[(60.510±31.090)U/g vs(26.590±8.664)U/g,(P0.05)];肾脏组织β-Klotho蛋白表达量增加[(9.052±1.238)ng/mg vs(6.860±1.036)ng/mg,(P0.05)],而血钙及血磷浓度及大鼠肾脏组织FGFR1蛋白含量较正常对照组未见明显变化。结论:大剂量维生素D3肌肉注射联合尼古丁灌胃可导致大鼠肾脏组织局部钙超载及微血管钙化形成,并导致肾功能不全,出现早期慢性肾脏病(CKD)临床表现。同时病变肾脏组织局部β-Klotho表达量上调,而FGFR1在肾脏组织局部未见明显变化,提示FGF21在血管钙化大鼠肾脏组织局部的调节作用可能不是通过增加其受体FGFR1的数量,而是通过上调其结合辅助因子β-Klotho的表达而实现的。同时提示β-Klotho参与了血管钙化肾脏损伤的早期调节过程,可能为预测机体钙超载情况及CKD早期的预警信号,对CKD的早期诊断具有一定价值。     

亚砷酸钠抑制血小板源性生长因子受体β介导的细胞迁移及其机制

目的研究亚砷酸钠(NaAsO2)对血小板源性生长因子受体β(PDGFRβ)介导细胞迁移的影响及其作用机制。方法用脂质体介导的细胞转染技术将人PDGFRβ表达载体转染体外培养的不表达PDGFRβ的PAE细胞,G418抗性筛选建立稳定转染的细胞株,采用RT-PCR检测PDGFRβ的表达;用细胞损伤修复实验观察细胞损伤24 h完全修复所需的PDGFBB最低浓度;划痕实验观察加入不同浓度NaAsO224 h后,细胞迁移的抑制率;RT-PCR分析不同浓度NaAsO2组中MMP3 mRNA表达水平。结果 RT-PCR检测转染组细胞表达PDGFRβ;细胞损伤修复实验检测细胞损伤24 h完全修复所需的血小板源性生长因子BB(PDGFBB)最低浓度为10μg/L;NaAsO2明显抑制了PDGFRβ介导的细胞迁移,呈典型的剂量效应关系;同时显著下调MMP-3 mRNA表达水平。结论下调MMP3基因表达在NaAsO2抑制PDGFRβ介导的细胞迁移中起重要作用。     

老年大鼠肺成纤维细胞表型改变和转化生长因子-β1水平变化

目的 对比观察老年大鼠和成年大鼠肺脏成纤维细胞表型的改变和转化生长因子(TGF)-β1水平的变化,寻找肺间质纤维化发病率随年龄增长而增高的可能机制.方法 免疫组化法测定大鼠肺组织内α-平滑肌肌动弹白(α-SMA)含量,观察成纤维细胞表型的改变.ELISA法测定TGF-β1蛋白水平.荧光定量PCR(realtime PCR)技术测定TGF-β1 mRNA表达量的变化.结果 老年大鼠肺脏较成年大鼠肺脏肌成纤维细胞比例增加(P＜0.01),TGF-β1蛋白水平升高[分别为(999.54±246.11)pg/g和(755.7±160.38)pg/g](P＜0.05),TGF-β1 mRNA(P＜0.01)表达水平降低.结论 老年大鼠肺脏肌成纤维细胞比例增加和TGF-β1蛋白水平升高可以构成肺间质纤维化随年龄增长发病率增高的基础,老化肺脏内TGF-β1水平升高是受到mRNA转录后调控机制的影响.     

左归丸对大鼠转化生长因子-α、β及其受体表达的影响

为探讨左归丸通过调节神经-内分泌-免疫网络而影响肝再生的作用机制，采用免疫组织化学法、地高辛标记探针原位杂交法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)加Dot Blot定量法对实验大鼠下丘脑弓状核(ARN)、再生肝的转化生长因子(TGF)-α、TGF-β及其受体的表达进行了研究。     

肿瘤生长因子β1及血小板衍生生长因子对肝窦内皮细胞整合素α6β1及黏着斑激酶表达的影响

目的：观察肿瘤生长因子β1(TGFβ1）及血小板衍生生长因子（PDGF）对大鼠肝窦内皮细胞（sinusoidal endothelial cell,SEC)整合素α6β1表达及黏着斑激酶（focal adhesion kinase,FAK)活性的影响。方法：用胶原酶原位灌注、Prercoll不连续密度梯度离心法分离大鼠SEC,并进行体外培养。采用细胞－ELISA和免疫沉淀－蛋白质酪氨酸激酶活性测定法,分别观察TGFβ1及PDGF对SEC表面整合素α6β1表达及FAK活性的影响。结果：经TGFβ1及PDGF作用24h后,α6β1蛋白表达明显强于对照组（P＜0．05）,且呈剂量依赖性。作用至48h,表达继续增强,细胞中FAK的活性也明显增高（P＜0．05）,虽于48h后回落,但仍明显高于对照组。结论：TGFβ1及PDGF可促进SEC表面整合素α6β1的表达及FAK活性增高,可能是它们参与肝纤维化发生的机制之一。     

二甲双胍对正常饮食大鼠血清成纤维细胞生长因子19、21及胰腺成纤维细胞生长因子受体1的影响

目的探讨二甲双胍(METF)对血清成纤维细胞生长因子(FGF)19和FGF21及胰腺成纤维细胞生长因子受体(FGFR)1和Akt通路上分子的影响。方法给予8周龄健康雄性Wistar大鼠(40只)标准饮食,随机分为正常对照(Con)组和METF(500 mg·kg~(-1)·d~(-1))。在24 w末检测血清生化学指标及FGF19和FGF21水平。蛋白免疫印迹检测胰腺组织FGFR1,Akt、磷酸化的Akt(p-Akt),FoxO1、磷酸化的FoxO1(p-FoxO1)的表达水平。结果 METF干预可以减轻大鼠的体重,降低大鼠空腹血糖、低密度脂蛋白和胆汁酸水平。METF组大鼠血清FGF21较Con组明显升高(P<0.05),而FGF19较Con组明显减低(P<0.05)。此外,胰腺FGFR1的表达水平及Akt及FoxO1的磷酸化水平在METF干预后明显升高(均P<0.05)。结论 METF可以降低血清FGF19、升高血清FGF21水平,对两者产生相反的作用。此外,METF可能通过增加FGFR1的表达、Akt及FoxO1的磷酸化对胰腺功能产生影响。     

成纤维细胞生长因子9及其受体对骨骼的作用

成纤维细胞生长因子-9（FGF-9）最初发现于人类神经胶质瘤细胞，具有三叶草核心结构，而且必须与肝素结合才能活化受体。FGF受体（FGFR）均为单链酪氨酸激酶受体，FGF-9主要与FGFR-2和FGFR-3结合。FGF-9分布广泛，具有多种生理功能。在骨组织，FGFR-2主要表达于成骨细胞系，FGFR-3主要表达于软骨细胞系，FGF-9可能通过活化FGFR-2促进膜内成骨，通过活化FGFR-3抑制软骨内成骨。     

成纤维细胞生长因子9及其受体对骨骼的作用

成纤维细胞生长因子-9(FGF-9)最初发现于人类神经胶质瘤细胞,具有三叶草核心结构,而且必须与肝素结合才能活化受体。FGF受体(FGFR)均为单链酪氨酸激酶受体,FGF-9主要与FGFR-2和FGFR-3结合。FGF-9分布广泛,具有多种生理功能。在骨组织,FGFR-2主要表达于成骨细胞系,FGFR-3主要表达于软骨细胞系,FGF-9可能通过活化FGFR-2促进膜内成骨,通过活化FGFR-3抑制软骨内成骨。     

纤维溶解酶原激活物抑制剂-1对大鼠胚肺成纤维细胞的影响

目的 研究纤维溶解酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)对大鼠胚肺成纤维细胞增殖、转化及胶原合成的影响,探讨PAI-1在肺纤维化发生中的作用.方法 体外分离培养Wister 待产孕大鼠胚肺成纤维细胞,应用四甲基偶氮唑盐试验观察不同浓度(5、10、20、40、80 μg/L)的PAI-1刺激12、24和48 h后成纤维细胞的增殖率;选用PAI-1最适浓度20 μg/L刺激48和72 h后,细胞免疫化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达;实时PCR法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原24和48 h时mRNA表达的变化.结果各浓度PAI-1刺激成纤维细胞后,以20 μg/L 12 h增殖率及吸光度值最高,分别为62.6%和0.573±0.039.在12 h中,不同浓度组较对照组差异有统计学意义(F=111.112,P=0.000),选择20 μg/L为最适浓度.免疫细胞化学法检测20 μg/L PAI-1刺激48、72 h后,PCNA表达的积分吸光度值分别为3685±686和2530±477,较对照组差异有统计学意义(F=7.85,P=0.020).PAI-1刺激成纤维细胞24和48 h后,α-SMA表达上调(230±11)%和(159±9)%,较对照组差异有统计学意义(F=39.92,P=0.000).Ⅰ型胶原表达上调(92±8)%和(65±12)%,差异有统计学意义(F=32.61,P=0.001).结论 PAI-1可以促进成纤维细胞增殖、转化及胶原合成,可能促进肺间质纤维化的发生和发展.

Abstract：

Objective To explore the effect of plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) on the proliferation and conversion of rat embryonic lung fibroblasts and the synthesis of collagen, and therefore to explore the function of PAI-1 in pulmonary fibrosis.Methods The embryonic lung fibroblasts from pregnant Wistar rats were isolated and cultured in vitro. The reproduction rate of fibroblasts at 12 h, 24 h, and 48 h after being stimulated by PAI-1 with different concentrations (5, 10, 20, 40, 80, and 100 μg/L) was measured by MTT assay. After being stimulated by PAI-1 with the most suitable concentration (20 μg/L) for 48 h and 72 h, the expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) was measured by immunocytochemical technique, and the mRNA expression of α-SMA and type-1 collagen at 24 h and 48 h was measured by real-time PCR. Results PAI-1 with different concentrations stimulated the proliferation of fibroblasts. The highest proliferation rate and absorbance in concentration of 20 μg/L and at 12 h were 62.6% and 0.573±0.039. The comparison of different concentrations showed that the difference was significant(F=111.112,P=0.000). Therefore, 20 μg/L was selected as the most suitable concentration. Using immunocytochemical method, the optical density of PCNA at 48 h and 72 h were 3685±686 and 2530±477 after being stimulated with 20 μg/L PAI-1.The comparison showed significant difference(F=7.85,P=0.02). The expression of α-SMA increased (230±11)% and(159±9)% at 24 h and 48 h after being stimulated with 20 μg/L PAI-1, and the difference was significant(F=39.92, P=0.0003). The expression of type-1 collagen increased(92±8)% and (65±12)%, the difference being significant(F=32.61,P=0.0006). Conclusion PAI-1 can promote the proliferation and conversion of fibroblasts and the synthesis of collagen, which may be involved in the pathogenesis of pulmonary interstitial fibrosis.     

α1受体阻断剂对慢性心力衰竭大鼠心肌转化生长因子β1表达的影响

目的评价α1受体阻断剂(特拉唑嗪)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌转化生长因子β1(TGF-β1)表达水平的影响。方法选30只雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照组(n=6)和模型组(n=24)。模型组应用阿霉素腹腔注射的方法制作CHF模型,并随机分成特拉唑嗪组(n=12)和安慰剂组(n=12)。特拉唑嗪组在造模第5周接受特拉唑嗪灌胃治疗,0.4mg·kg-1.d-1,安慰剂组用淀粉代替特拉唑嗪,疗程6w;第10周末处死所有大鼠。RT-PCR和免疫组化染色方法评价各组大鼠左室心肌TGF-β1表达水平。结果安慰剂组大鼠心肌TGF-β1mRNA和蛋白表达水平比对照组明显升高(P<0.01);特拉唑嗪组心肌TGF-β1mRNA和蛋白表达水平较对照组升高值明显低于安慰剂组(P<0.05)。结论CHF大鼠心肌TGF-β1表达水平明显升高;特拉唑嗪治疗能够阻止CHF大鼠心肌TGF-β1升高,有助于改善CHF大鼠心肌重构。     

内源性一氧化碳对缺氧大鼠肺组织血小板源性生长因子-B基因表达的影响

血小板源性生长因子 (ＰＤＧＦ)能促进肺动脉平滑肌细胞增殖 ,肺动脉平滑肌细胞的过度增殖是造成慢性阻塞性肺疾病缺氧性肺动脉高压肺血管重构的主要原因。我们以往的实验发现 ,氯血红素可以促进内源性ＣＯ的产生 ,抑制大鼠缺氧性肺动脉高压的形成。本研究观察了氯血红素对缺氧大鼠肺组织ＰＤＧＦ Ｂ基因表达的影响。一、材料和方法1 模型复制与分组 :常压缺氧 15ｄ复制缺氧性肺动脉高压动物模型。雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠 2 4只 ,体重 2 0 0～ 30 0ｇ ,随机分为 3组 ,每组 8只。Ａ组 :正常对照组 ,不做任何处理 ;Ｂ组 :单纯缺氧组 ,在每次缺氧…     

血小板源性生长因子及其受体在心血管疾病中的作用

血小板源性生成因子（PDGFs）及其受体（PDGFRs）在心血管疾病中发挥着重要作用,二者不仅参与了动脉粥样硬化（AS）的形成,而且在血管生成、心肌纤维化过程中也扮演了重要角色。PDGFRs被其配体PDGFs激活后,在血管平滑肌细胞、纤维母细胞、内皮细胞等中的表达上调,通过细胞内信号转导通路,促使该类靶细胞增殖分化,从而参与AS、血管生成和心肌纤维化的发生。本文就PDGFs/PDGFRs在心血管疾病中的研究进展做一综述。     

大黄酸对慢性移植肾肾病大鼠转化生长因子β1、结缔组织生长因子和纤维连接蛋白的影响

目的:探讨中药大黄酸对大鼠慢性移植肾肾病(CAN)模型肾功能、组织学、转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)和纤维连接蛋白(FN)表达的影响.方法:F344近交系大鼠为供体、Lewis近交系大鼠为受体,左肾原位肾移植,建立30只CAN大鼠模型.将30只移植大鼠分成模型组(16只)和大黄酸治疗组(14只);在移植后1月、2月及4月分别收集大鼠的血、尿标本,检测肾功能及尿蛋白定量.移植后2月及4月分别宰杀大鼠,观察各组大鼠移植肾组织学变化及大黄酸对模型动物TGF-β1、CTGF和FN表达的影响.另取5只Lewis大鼠作对照组,行右肾切除,术后4月末行相应指标检测.结果:与模型组比较(1)大黄酸治疗组大鼠肾功能改善;肾组织学示肾间质纤维化及间质炎症明显改善;(2)大黄酸治疗组大鼠肾组织CTGF表达降低,细胞外基质FN明显降低.结论:大黄酸能改善CAN大鼠肾功能及肾组织慢性病变,降低CTGF表达,减轻肾脏纤维化.     

雄激素对老龄大鼠血管平滑肌组织雄激素受体及血小板源性生长因子受体基因表达的影响

2001年10月至2003年2月，我们通过本试验探讨不同剂量的庚酸睾酮(TE)对衰老雄性大鼠血管平滑肌组织中雄激素受体(AR)及血小板源性生长因子受体β(PDGFR-β)基因表达的影响。     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠心脏微血管内皮细胞血管形成及血管内皮生长因子受体1的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子对诱导大鼠心脏微血管内皮细胞形成管腔样结构的影响,以及对血管内皮生长因子受体Flt-1的作用。方法分离、培养大鼠心脏微血管内皮细胞。应用Matrigel检测不同浓度碱性成纤维细胞生长因子作用后心脏微血管内皮细胞形成管腔的情况。逆转录聚合酶链反应检测各组血管内皮细胞Flt-1mRNA的表达量。结果应用Matrigel可诱导心脏微血管内皮细胞管腔样结构形成,随着碱性成纤维细胞生长因子浓度升高(0、51、0和20μg/L),管腔样结构形成的数量逐渐增多,当碱性成纤维细胞生长因子浓度达到40μg/L时管腔样结构的数量有所减少(P<0.05)。Flt-1 mRNA的表达量随碱性成纤维细胞生长因子作用浓度的升高(0、5、10和20μg/L)而逐渐增高,当碱性成纤维细胞生长因子浓度达到40μg/L时其mRNA水平有所降低(P<0.05)。结论应用Matrigel可在体外诱导培养的大鼠心脏微血管内皮细胞形成管腔样结构。碱性成纤维细胞生长因子对大鼠心脏微血管内皮细胞形成管腔样结构有促进作用,并在一定范围内呈剂量依赖性关系。碱性成纤维细胞生长因子影响大鼠心脏微血管内皮细胞膜受体Flt-1的表达,在一定范围内亦呈剂量依赖性,且这种剂量依赖性同微血管内皮细胞管腔样结构形成的数量一定范围内呈现一致性。     

转化生长因子－β对人胚肺成纤维细胞胶原表达的影响

转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）是一族多功能的细胞因子，具有调节细胞外基质代谢的功能，在肺间质纤维化的形成中具有重要作用。胚原是细胞外基质的主要成分。胶原积聚是肺间质纤维化的一个重要特征。为了进一步探讨肺间质纤维化形成的机制，在体外观察了ＴＧＦ－β对人胚胎肺成纤维细胞胶原蛋白合成及胶原Ｉ、胶原ＩＩｌｍＲＮＡ表达的影响。结果发现：ＴＧＦ－β能刺激胶原蛋白的合成，胶原Ｉ、胶原ＩＩＩｍＲＮＡ的表达。而对成纤维细胞的增殖影响不明显。因此认为ＴＧＦ－β可能与肺间质纤维化时胶原积聚有关。ＴＧＦ－β胶原合成的调节是通过ｍＲＮＡ水平。     

凝血酶对大鼠血管平滑肌细胞血小板源生长因子受体基因表达的影响

为了研究凝血酶对血管平滑肌细胞血小板源生长因子受体基因表达的影响 ,探讨凝血酶刺激血管平滑肌细胞增殖的机制 ,通过培养SD大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 ,用斑点杂交检测凝血酶对血管平滑肌细胞血小板源生长因子受体mRNA的表达。结果发现培养的血管平滑肌细胞在基础状态下可表达血小板源生长因子α受体和 β受体mRNA ,凝血酶在作用于血管平滑肌细胞 2～ 12h抑制了血管平滑肌细胞血小板源生长因子α受体 β受体mRNA的表达 ,2 4～ 48h后血管平滑肌细胞血小板源生长因子α受体 β受体mRNA的表达恢复到基础状态。提示凝血酶对血管平滑肌细胞具有较强的促增殖作用 ;凝血酶显著降低了血管平滑肌细胞血小板源生长因子α受体 β受体mRNA的表达