双歧杆菌对NOD小鼠胰岛Fas和FasL表达的影响

目的观察口服双歧杆菌对NOD小鼠1型糖尿病和胰岛炎发生情况的影响以及口服双歧杆菌后胰岛Fas和FasL表达的情况。方法将4周龄雌性NOD小鼠40只,随机分为两组:实验组(20只)给予双歧杆菌0.25mg/g体重/天(制备成活菌悬液0.5ml),对照组(20只)给予等容积的磷酸盐缓冲液(PBS)。4周龄开始给药至30周龄,于15周龄时各组分别处死6只小鼠,取胰腺组织HE染色进行胰岛炎评分,采用免疫组化方法观察口服双歧杆菌后NOD小鼠胰岛组织Fas和FasL的改变情况。其余小鼠30周龄时观察发病率,同时观察胰岛炎、Fas和FasL的变化。结果双歧杆菌明显减轻NOD小鼠胰岛炎,减少糖尿病的发生(P<0.05),双歧杆菌组胰岛Fas的表达少于对照组(P<0.01);FasL的表达也有显著差异(P<0.01)。结论早期应用双歧杆菌可以减少NOD小鼠胰岛炎和延缓糖尿病的发生,其机制与Fas/FasL系统介导的胰岛β细胞凋亡有关。     

胸腺内注射Fas抗体对心脏移植大鼠Fas/FasL表达的影响

目的研究受体胸腺内注射Fas抗体对心脏移植大鼠Fas/FasL表达的影响。方法应用大鼠同种异位腹腔心脏移植模型,将24只模型动物随机均分为三组,A组移植前后不给处置,B组给环孢素A,按每日8mg/kg的剂量于术前一天开始口服,C组胸腺注射Fas抗体。观察术后移植心脏局部的Fas及FasL的表达情况（免疫组化法和RT-PCR法）。结果与A组相比,C组移植心脏局部的Fas/FasL基因表达（RT-PCR法半定量结果P＜0.05）和蛋白表达减少（免疫组化法P＜0.05）。结论受体胸腺内注射Fas抗体是一种有效的抑制心脏移植急性排斥反应的方法,引起移植心肌局部Fas/FasL表达下调。     

Fas/FasL系统与肿瘤

Fas(CD95)属于肿瘤坏死因子(TNF)和神经生长因子(NGF)受体超家族成员,它在多种细胞表面均有表达。Fas与其天然配体结合可引起表达Fas的细胞凋亡。在多种肿瘤细胞出现Fas表达下调和Fas配体(FasL)表达上调的现象,这与清除肿瘤浸润性淋巴细胞和抑制抗肿瘤免疫反应有关,参与了肿瘤的免疫逃逸。而且,特殊的肿瘤微环境也参与了肿瘤的进展和转移。通过各种药物或基因转染的方法可恢复Fas-FasL介导的肿瘤细胞凋亡,为肿瘤治疗开辟了广阔的前景。     

胃癌组织Fas、FasL的表达及其临床意义

目的　探讨细胞凋亡相关蛋白Fas、FasL在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法　对 74例手术切除胃癌标本 ,应用免疫组化SP法检测Fas、FasL蛋白在癌组织中的表达。结果　在高、中分化型胃癌Fas和FasL的阳性表达率一致性显著高于低分化型胃癌 (P <0 .0 5)。而在早期和进展期胃癌间 ,有淋巴结转移和无淋巴结转移胃癌间Fas和FasL的阳性表达率无显著性差异 (P >0 .0 5)。结论　Fas和FasL的异常表达可能是胃粘膜癌变过程中细胞凋亡抑制的重要机制之一 ,并与胃癌的分化和免疫逃逸有关     

HPV感染对宫颈鳞癌组织Fas/FasL表达的影响

[目的]探讨人乳头状瘤病毒（HPV）感染对宫颈癌组织Fas/FasL（Fas配体）表达的影响。[方法]用免疫组化链霉菌抗生物素过氧化物酶（SP）法检测55例宫颈鳞癌和27例宫颈炎组织HPV及Fas、FasL蛋白的表达。[结果]在宫颈鳞癌和宫颈炎组,HPV感染率分别为76.4%和85.2%（P〉0.05）,Fas表达阳性率分别为50.9%和75.0%（P〈0.05）,FasL分别为72.7%和83.3%（P〉0.05）。在宫颈癌HPV感染和未感染组,Fas表达阳性率分别为40.6%和61.9%（P〈0.05）;FasL分别为76.2%和21.4%（P〈0.05）。在宫颈炎HPV感染和未感染组,Fas表达阳性率分别为67.2%和96.7%（P〈0.05）;FasL分别为75.0%和45.2%（P〈0.05）。[结论]HPV感染可能会使宫颈癌细胞Fas基因表达下调,FasL表达上调,使癌细胞发生免疫逃避,从而促进宫颈癌的发生。     

食管鳞癌Fas/FasL的表达及意义

目的 研究Fas/FasL在食管鳞癌组织中的表达,并探讨其生物学意义.方法 采用免疫组织化学方法对食管鳞癌组织和癌旁正常组织的Fas/FasL表达进行检测,并测定鳞癌组织的细胞凋亡率.结果 Fas在鳞癌中的阳性表达率为73.8%,显著低于癌旁正常组织的92.9%(P＜0.05);FasL在鳞癌中的阳性表达率为90.5%,显著高于癌旁正常组织的66.7%(P＜0.05);低分化鳞癌组织Fas的阳性表达率为54.5%,显著低于中分化鳞癌(79.1%)和高分化鳞癌(85.7%),均P＜0.05.鳞癌分化程度越高,癌细胞凋亡率越高.结论 食管鳞癌中存在Fas表达的下调和FasL表达的上调,Fas/FasL系统在食管鳞癌发生、发展中发挥作用.     

Fas/FasL与肿瘤免疫逃逸

近年研究显示 ,与凋亡相关的Fas(factorofas sociatedsuicide ) /FasL(FasLigand)系统在肿瘤免疫逃逸中有重要作用。研究人员证实在许多肿瘤组织内均有高水平的FasL表达 ,而表达Fas的淋巴细胞浸润肿瘤组织后不仅未能杀伤肿瘤细胞 ,反被诱导凋亡。这一发现 ,不仅为认识肿瘤免疫逃逸提供了新途径 ,而且能部分解释伴随肿瘤患者的免疫功能低下。本世纪五六十年代 ,Burnet和Thomas提出免疫监视 (immunosurvellance)学说 ,认为机体免疫系统可以通过细胞免疫机制杀灭肿瘤细胞。此后 ,许多学者支持并丰富了这一学说。目前认为 ,T细胞、B细胞、…     

Fas/FasL介导的胰岛β细胞凋亡的研究进展

细胞凋亡是细胞在生理和病理情况下的一种死亡模式,凋亡过程受基因严格控制。胰岛β细胞凋亡对各种促凋亡刺激非常敏感,在糖尿病的的发病中扮演了重要角色。Fas和FasL为近年来研究较多的凋亡调控基因,在胰岛β细胞凋亡中起着重要的调节作用。现主要通过探讨糖尿病胰岛β细胞凋亡与Fas/FasL的关系,以深入认识糖尿病的发病机制,更好地防治糖尿病。     

高浓度葡萄糖对小鼠囊胚Fas/FasL蛋白表达的影响

目的 探讨高浓度葡萄糖对小鼠囊胚Fm/FmL蛋白表达的影响.方法 通过促超排卵,获取妊娠 3.5 d小鼠囊胚,随机分成3组,即对照组(空白)、低糖组(葡萄糖浓度为7.5 mmol/L)和高糖组(葡萄糖浓度为28.0 mmol),分别培养在含0、7.5和28.0 mmol/L葡萄糖的M199培养基中,培养24 h后,然后再吸出囊胚.每组随机吸取30个囊胚用免疫组织化学S-P法,检测不同浓度葡萄糖对小鼠囊胚Fas/FasL蛋白的表达状况,利用HPIAS-1000图像分析系统测定Fas/FasL蛋白在以上3组中表达的平均光密度和平均阳性面积率.结果 Fas/FasL蛋白表达结果:空白组中囊胚细胞胞浆中可见少量浅棕黄色颗粒,Fas/FasL的表达呈弱阳性.低糖组中囊胚细胞胞浆未见着色,Fas/FasL蛋白的表达呈阴性.高糖组囊胚细胞胞浆中可见较多的棕黄色颗粒,Fas/FasL的表达呈强阳性.空白组与低糖组囊胚Fas/FasL表达的阳性面积率及平均光密度差异无显著性(P>0.05),高糖组与空白组和低糖组相比均差异存在显著性(P<0.01).结论 高浓度葡萄糖可诱导凋亡蛋白Fas/FasL的过度表达,导致囊胚细胞数目过度减少,从而影响囊胚的正常发育和着床.     

NOD鼠胰岛细胞FasL/Fas凋亡通路的动态变化

目的:观察雌性NOD鼠在不同病程时,胰腺细胞因子mRNA和凋亡因子mRNA的表达,及胰岛内细胞因子和凋亡因子蛋白的表达.方法:54只雌性NOD鼠随要分为C1、C2、C3三组各18只,分别于4周龄,15周龄和30周龄(或发病时)处死,摘取胰腺.RT-PCR法检测胰腺IFN-γ、IL-10、Fas,FasL和CPP32mRNA的表达水平.HE染色观察胰岛炎程度.SP免疫组化染色观察胰岛内胰岛细胞及炎症细胞Fas,FasL及CPP32蛋白表达水平.结果:随病程的进展胰腺Fas、IFN-γ mR-NA的表达水平增加(P＜0.05),IL-10mRNA三组间无显著性差异.C2和C3组胰腺FasL、CPP32mRNA水平较C1组明显增强(FasL、P＜0.05;CPP32,P＜0.01),C2与C3组比较无显著差异.胰腺Fas、CPP32mRNA与IFN-γmRNA的表达水平呈正相关(相关系数γ=0.677,0.530),与IL-10mRNA的表达不相关(γ=-0.427,-0.464).免疫组化染色显示:C1、C2、C3组胰岛细胞FasL均高表达,三组间无显著差异(P＞0.05),Fas、CPP32的表达在C1组组弱表达,C2、C3组表达增强.C2、C3与C1组之间均有统计学差异(P＜0.05),C2与C3组比较无显著差异.C1组几无炎症细胞浸润,C2与C3组之间比较炎症细胞Fas、FasL、CPP32的表达无显著性差异.结论:在NOD鼠糖尿病发病中Th1细胞因子起主导作用;FasL/Fas凋亡通路参与NOD鼠胰岛β细胞的破坏;Th1细胞因子IFN-γ能上调胰腺FasL/Fas凋亡通路.     

Fas-FasL在NOD小鼠胰岛炎中的作用

目的分析Fas-FasL在NOD小鼠胰岛炎中的作用。方法取32只分属不同周龄的雌性NOD小鼠,观察其血糖、胰岛HE染色、免疫组织化学染色———检测胰岛素、CD8、Fas、FasL的表达。在分析NOD小鼠胰岛炎中以胰岛或相关细胞为研究单位,从而减少了混杂因素的影响。结果雌性NOD小鼠自6周龄起出现胰岛炎,其评分逐渐增加(P<0.0005),14周龄出现糖尿病。随着胰岛炎的加重:胰岛素阳性细胞减少(P<0.0005),与胰岛炎评分呈负相关(P<0.05);Fas 胰岛细胞增加(P<0.0005),与评分呈正相关(P<0.01);FasL 胰岛细胞出现并逐渐增加(P<0.0005),与评分呈正相关(P<0.01);浸润细胞表达FasL、CD8,均逐渐增加(P<0.0005)。胰岛细胞的Fas与胰岛素表达之间呈负相关、胰岛素与FasL呈负相关、Fas与FasL呈正相关,浸润细胞的CD8与FasL表达呈正相关,P值均小于0.01。结论在NOD小鼠胰岛炎中,Fas-FasL可能参与β细胞损伤及自身免疫负调节。     

NOD 小鼠胰岛的分离及其在体内外的生物学特性

目的 建立分离纯化非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠胰岛的方法,并对其体内外生物学特性进行研究?方法 采用改良的胶原酶消化结合Ficoll 密度梯度离心方法,分离纯化NOD 小鼠胰岛?应用体外糖刺激实验检测分离纯化的胰岛功能,以及通过监测移植小鼠的血糖?体重变化及糖耐量实验对移植胰岛的体内生物学功能进行分析,并通过HE 染色和免疫荧光染色检测肾被膜下移植胰岛的存活情况?结果 胰岛产率为(116 ±12)个胰岛/胰腺,纯度>90%?体外糖刺激实验结果显示,NOD 小鼠胰岛的糖刺激胰岛素释放水平明显低于KM 小鼠胰岛?胰岛移植实验显示,移植胰岛能有效改善糖尿病小鼠的血糖?体重和糖耐量,但改善作用一般仅能维持2 周左右?HE 染色和免疫荧光染色结果显示,肾被膜下可见胰岛素阳性的胰岛细胞团,并且在残存的移植胰岛细胞团周围存在大量淋巴细胞浸润?结论 通过改良的小鼠胰岛分离方法可由NOD 小鼠分离得到大量较高纯度的胰岛,可用于今后探索如何阻断自身免疫损伤保护移植胰岛的研究?     

雷公藤多甙对非肥胖糖尿病小鼠胰腺和脾脏Fas及其配体表达的影响

目的 观察雷公藤多甙(TWP)对非肥胖糖尿病(NOD)小鼠1型糖尿病的早期干预作用及探讨可能的机制.方法 用环磷酰胺加速发病的NOD小鼠1型糖尿病动物模型,TWP组(30只)小鼠于实验第0～3天和第13～16天每日2次、第4～12天和第17～26天每日1次腹腔注射TWP,每次5 mg/kg;对照组(33只)腹腔注射等量0.9%氯化钠溶液.监测血糖,记录糖尿病发病率,采用末端脱氧核苷酸转移酶标记法检测胰岛细胞凋亡,免疫组织化学法检测B细胞胰岛素含量,半定量逆转录聚合酶链反应检测胰腺和脾脏Fas及其配体(FasL)mRNA的表达.结果 TWP组实验结束时的糖尿病发病率为43.3%,显著低于对照组的69.7%(P<0.05).TWP组的凋亡指数为(5.06±0.85)%,显著低于对照组的(9.04±1.02)%(P<0.01).TWP组胰岛素表达阳性细胞所占百分比为(57.25±11.69)%,略高于对照组的(46.50±11.25)%(P>0.05).TWP组的胰腺组织Fas mRNA半定量值为0.30±0.11,略低于对照组的0.35±0.05(P>0.05);TWP组的胰腺组织FasL mRNA半定量值为0.80±0.11,显著低于对照组的1.33±0.17(P<0.05).TWP组的脾脏组织Fas和FasL mRNA半定量值分别为0.40±0.,9和1.29±0.17,均显著高于对照组的0.27±0.06和1.06±0.10(P值均<0.05).结论 TWP可预防NOD鼠糖尿病的发生,其机制可能与增加脾脏T淋巴细胞Fas和FasL表达及凋亡,降低胰腺Fas和FasL表达,减少胰岛B细胞凋亡有关.     

双歧杆菌脂磷壁酸对 B16 荷瘤小鼠 Fas/FasL 表达的影响

目的 探讨双歧杆菌脂磷壁酸(lipoteichoic acid of bifidobacterium,BLTA)对黑色素瘤B16小鼠Fas/FasL表达的影响. 方法将黑色素瘤B16细胞接种于C57BL/6小鼠(n=40)皮下,待触及肿块后于荷瘤小鼠瘤周注射不同剂量的BLTA.实验动物分为4组,每组10只:生理盐水(对照)组、低浓度BLTA(50 mg/L BLTA)组、中浓度BLTA(100 mg/L BLTA)组、高浓度BLTA(150 mg/L BLTA)组.采用MTT法检测荷瘤小鼠CTL杀伤活性;免疫组织化学染色检测肿瘤组织浸润的CD4+ 、CD8+ 淋巴细胞的表达情况;用RT-PCR检测肿瘤组织和脾脏组织Fas、FasL mRNA 的表达变化;免疫组织化学染色和Western blot检测肿瘤组织和脾脏淋巴细胞Fas、FasL 蛋白的表达变化. 结果 与对照组比较,BLTA处理各组荷瘤小鼠的CTL杀伤率明显增加(P<0.05),肿瘤组织内Fas、FasL mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.05),而荷瘤小鼠脾脏组织的Fas 、FasL mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05),肿瘤组织内CD8+淋巴细胞的浸润增多(P<0.05),并具有剂量依赖性. CD4+淋巴细胞的浸润无明显增加(P>0.05). 结论 BLTA能够通过调节Fas/FasL系统,增强CTL细胞的杀伤活性,促进肿瘤细胞的凋亡,逆转荷瘤小鼠的肿瘤免疫逃逸现象,进而提高机体的抗肿瘤作用.     

Fas/FasL在宫颈癌组织中的表达及意义

宫颈癌(Cervical Carcinoma)是最常见的妇科恶性肿瘤之一(仅次于乳腺癌),占女性生殖系统恶性肿瘤的半数以上,其死亡率居女性恶性肿瘤的首位,是严重危害妇女健康和生命的主要疾病之一.其发病是多种因素作用导致多基因改变的结果,很多因素与宫颈癌的发生、发展及预后有关.     

阿拉瑞林对GnRH受体阳性肝癌细胞Fas/FasL基因表达的影响

目的　探讨Fas Fasl系统在LHRH类似物抑制肝癌细胞增殖过程中的作用。方法　用免疫组织化学方法检测SMMC772 1肝癌细胞中GnRH受体的表达 ;用半定量RT PCR方法 (QRT PCR)观察LHRH类似物对SMMC772 1肝癌细胞中Fas FasL系统mRNA表达的变化。结果　SMMC772 1肝癌细胞呈GnRH及其受体免疫反应阳性。PCR反应产物均与预期长度相符合。Fas FasL mRNA水平随LHRH类似物浓度增加而增大 ,经方差分析各组间有显著性差异 (Fas ,F =16.5 18FasL ,F =111.5 83 ,P <0 .0 1)。结论　SMMC772 1肝癌细胞具有自分泌GnRH的功能 ;Fas FasL系统可能参与了LHRH类似物对肝癌细胞增殖的抑制作用     

人胚胎干细胞体外定向诱导分化胰腺前体细胞及胰岛细胞移植治疗NOD/SCID糖尿病小鼠

目的 探讨人胚胎干细胞（human embryonic stem cells,hESCs）体外定向诱导分化胰腺前体细胞及胰岛细胞移植治疗非肥胖糖尿病/严重联合免疫缺陷（non-obese diabetic/severe combined immunodeficient,NOD/SCID）小鼠的可行性.方法 体外分4阶段诱导hESCs定向分化为胰岛细胞：①诱导分化形成定型内胚层;②诱导胰腺细胞定向分化;③扩增胰腺前体细胞;④促进胰岛细胞成熟.观察诱导各阶段细胞形态变化、免疫荧光鉴定胰十二指肠同源异型盒基因（PDX-1）、胰高糖素（glucagon）、胰岛素（insulin）、C肽（C-peptide）、葡萄糖转运子2（Glut-2）的表达.3阶段及4阶段分化形成的细胞分别植入链脲菌素（streptozotocin,STZ）诱导形成的NOD/SCID糖尿病小鼠一侧附睾脂肪垫内,观察血糖变化.结果 hESCs诱导4阶段细胞表达胰高血糖素、胰岛素、Glut-2;共表达PDX-1和C肽;流式鉴定诱导4阶段胰岛素阳性细胞为17.1％;体外检测有葡萄糖刺激的胰岛素释放反应;3阶段及4阶段分化形成的细胞分别植入NOD/SCID 糖尿病小鼠体内可逆转其高血糖至少12周.结论 体外定向诱导hESCs分化形成的胰腺前体细胞及胰岛细胞分别植入NOD/SCID小鼠可逆转其高血糖.     

口腔鳞癌细胞Fas/FasL的表达及对癌细胞凋亡的影响

目的:研究凋亡相关蛋白Fas、FasL在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及对癌细胞凋亡的影响。方法:采用免疫组织化学方法检测10例正常口腔黏膜、38例不同分化程度口腔鳞癌组织Fas、FasL的表达;脱氧核糖核酸末端转移酶介导的原位末端标记(TUNEL)技术,检测鳞癌细胞的凋亡。结果:Fas在正常口腔黏膜中广泛表达,鳞癌组织表达明显下调(P<0.05);FasL在正常口腔黏膜不表达,鳞癌组织表达明显上调(P<0.01);Fas、FasL表达与口腔鳞癌分化程度无关;口腔鳞癌细胞Fas表达阴性组癌细胞凋亡指数(Apop-toticIndex,AI)明显低于Fas表达阳性组(P<0.01),Fas表达阳性组中,随Fas表达的下降,癌细胞AI逐步降低,各组间AI差异有显著性(P<0.01);口腔鳞癌细胞FasL表达阳性组癌细胞AI明显低于FasL表达阴性组(P<0.01);不同程度FasL表达间的癌细胞凋亡指数有差异。结论:口腔鳞癌细胞Fas、FasL的表达与癌细胞的凋亡及肿瘤的形成有密切关系。     

阻断白介素-17对博来霉素诱导小鼠肺纤维化及肺组织Fas/FasL表达的影响

目的：探讨阻断白介素-17(interleukin-17,IL-17)对博来霉素(bleomycin,BLM)诱导小鼠肺纤维化、细胞凋亡和肺组织Fas/FasL表达的影响。方法：80只C57BL/6小鼠随机分为4组,分别为假手术组(SG)、BLM组(BG)、中和抗体组(NG)和抗体对照组(IG),经小鼠气管内一次性注入BLM诱导肺纤维化的形成,假手术组则给予等量生理盐水。NG和IG小鼠分别从造模前1天每隔3 d通过尾静脉给予抗鼠IL-17单克隆中和抗体或同型对照抗体,SG和BG则给予等量PBS。于造模后28 d,处死各组小鼠,取肺组织,通过Masson染色及羟脯氨酸含量测定评价各组小鼠肺纤维化程度,用流式细胞仪和免疫组织化学法分别检测肺组织细胞凋亡和Fas/FasL的表达情况。结果：与BG和IG相比,NG小鼠肺纤维化程度明显减弱(P＜0.01),羟脯氨酸含量显著下降(P＜0.01),细胞凋亡率和Fas/FasL表达亦显著降低(P＜0.01)。结论：内源性IL-17被阻断后,能显著改善BLM诱导的肺纤维化,降低细胞凋亡率和Fas/FasL表达,表明阻断IL-17对BLM诱导的小鼠纤维化改善与Fas/FasL凋亡通路有关。