灯盏花素对氯化钾诱导的培养平滑肌细胞内游离钙的影响

目的:观察灯盏花素对氯化钾诱导的培养的家兔平滑肌细胞内游离钙的影响.方法:用RF_5000荧光光度仪检测Fura-2AM负载的培养平滑肌细胞内游离钙的浓度.结果:在有细胞外钙存在时,静息条件下细胞内游离钙为330±100nmol·L-1,灯盏花素能轻度降低静息状态下细胞内游离钙,但无统计学意义.氯化钾50mmol·L-1将细胞内游离钙增加到420±104nmol·L-1,而灯盏花素10-6、10-5、3×10-5mol·L-1能进一步加强由氯化钾引起的细胞内游离钙的增加.然而,在无细胞外钙时,灯盏花素对细胞内游离钙却没有影响.结论:灯盏花素通过电压依赖性钙通道加强钙离子内流.     

5-羟色胺对培养胃底平滑肌细胞内游离钙动员的影响

目的　研究 5 - HT诱导胃底平滑肌细胞内钙动员的机制 .方法　采用 Ca2 +指示剂 Fluo- 3/ AM作为细胞内钙离子的荧光探针负载培养的胃底平滑肌细胞 ,共聚焦技术检测细胞内钙荧光强度的变化 .结果　基础状态下 SFSMC[Ca2 + ]i 荧光强度 (FI)为 2 6 4± 15 ,5 - HT 10μmol· L- 1 使荧光强度的变化 ΔFI为 16 .5± 2 .6 ;细胞外无钙时 ,5 - HT升高[Ca2 + ]作用被减弱 ,但除去细胞外钙 ,并使用内罗啶 (ryan-odine)孵育后 ,5 - HT 不再引起荧光强度的变化 ;10μmol· L- 1 米安舍林 (mianserin)可部分拮抗 5 - HT升高[Ca2 + ]i 的作用 ,赛更定 (cyprohetadine)不能抑制 5 - HT升高的胞内钙 ;Mn92 0 2和拉西地平 (lacidipine)均能完全抑制 5 -HT升高 [Ca2 + ]i 的作用 .结论　 5 - HT可通过促进外钙内流及钙池 (SR)释放使 [Ca2 + ]i 升高 ;在胃底平滑肌 5 - HT升高胞内钙部分通过 5 - HT2 受体 ,而不是通过 5 - HT1 C受体 ;5 -羟色胺通过 L型钙通道促外钙内流 ;二氢吡啶类钙拮抗剂能通过阻滞 L 型钙通道 ,而完全抑制 5 - HT促胞内钙升高的作用     

PDGF-BB引起系膜细胞内游离钙浓度变化的机制探讨

目的研究血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)引起的肾小球系膜细胞内游离钙浓度变化及其离子流动机制.方法以体外培养的系膜细胞为研究对象,激光共聚焦显微术结合Fura-3染色法动态测定细胞内游离钙浓度.结果PDGF-BB可浓度依赖性地引起肾小球系膜细胞内游离钙浓度的升高,细胞内钙库释放抑制剂TMB-8、无钙缓冲液和钙通道阻滞剂硝苯地平均可抑制PDGF-BB引起的细胞内钙浓度变化,但其抑制作用发挥的时间和程度均有显著不同.结论PDGF-BB引起肾小球系膜细胞内游离钙浓度的升高在初期是通过细胞内钙释放与细胞外钙内流共同参与,而在其后的维持升高阶段主要是通过细胞外钙内流,特别是通过电压依赖式钙通道内流引起.     

PDGF-BB引起系膜细胞内游离钙浓度变化的机制探讨

目的 研究血小板衍生生长因子BB(PDGF—BB)引起的肾小球系膜细胞内游离钙浓度变化及其离子流动机制。方法 以体外培养的系膜细胞为研究对象，激光共聚焦显微术结合Fura-3染色法动态测定细胞内游离钙浓度。结果 PDGF-BB可浓度依赖性地引起肾小球系膜细胞内游离钙浓度的升高，细胞内钙库释放抑制剂TMB-8、无钙缓冲液和钙通道阻滞剂硝苯地平均可抑制PDGF—BB引起的细胞内钙浓度变化，但其抑制作用发挥的时间和程度均有显著不同。结论 PDGF—BB引起肾小球系膜细胞内游离钙浓度的升高在初期是通过细胞内钙释放与细胞外钙内流共同参与，而在其后的维持升高阶段主要是通过细胞外钙内流，特别是通过电压依赖式钙通道内流引起。     

灯盏花素抑制去甲肾上腺素-而增强高钾-锈发的细胞内钙升高

目的观察灯盏花素(Breviscapine,Bre)对去甲肾上腺素(NA)、高钾所致的血管平滑肌细胞内游离钙浓度[Caa+]i的影响。方法利用钙荧光指示剂Fura-2／AM负载的家兔血管平滑肌细胞,动态地观察Bre对NA及高钾所诱发[Caa+]i的改变。结果Bre可抑制含Ca2+液中NA所诱发的[Caa+]i的升高,但对高钾所致[Caa+]i的升高却有增强作用。结论Bre可能通过抑制受体依赖性钙通道而降低[Caa+]i,但却能增强电压依赖性钙通道而增高[Caa+]i。     

灯盏花素对离体大鼠胸主动脉环的作用

采用雄性大鼠胸主动脉环，研究灯盏花素舒张血管的机制。结果表明，灯盏花素（1×10－6mol／L～1×10－3mol／L）对去甲肾上腺素（1×10－6mol／L）的收缩反应呈剂量依赖性的松弛作用，与内皮无关，也不受普萘洛尔（1×10－6mol／L）所影响。灯盏花素能拮抗去甲肾上腺素诱发的依外钙与依内钙的双相反应，而且对后者的抑制作用较强。揭示灯盏花素诱发血管舒张可能与受体操纵性钙通道和细胞内Ca2 释放的抑制有关。灯盏花素作用后不同时间未引起肌条cAMP、cGMP含量的规律性改变。在高钾所致的主动脉环收缩反应中，灯盏花素在正常的Kred's液中表现出兴奋作用，不受酚妥拉明（1×10－5mol／L）影响。     

灯盏花素对离体大鼠胸主动脉环的作用

本实验采用雄性大鼠胸主动脉环，研究灯盏花素舒张血管的机制。结果表明：灯盏花素（１×１０＾－６～１０＾－３ｍｏｌ／Ｌ）对去甲肾上腺素（１×１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ）的收缩反应呈剂量依赖性的松驰作用，与内皮无关；也不受普萘洛尔（１×１０＾－５ｍｏｌ／Ｌ）的影响。灯盏花素对拮抗去甲肾上腺素诱发的依外钙与依内钙的双相反应，而且对后者的抑制作用较强。结果提示，灯盏花素诱发血管舒张可能与受体操纵性钙通道和细胞内Ｃ     

脂氧素A4对Jurkat T细胞游离钙浓度变化及增殖的影响

目的 研究脂氧素A4(LXA4)对Jurkat T细胞内游离钙离子浓度变化及细胞增殖的影响.方法 钙离子荧光探针Fluo-3/AM负载细胞后,用激光共聚焦扫描显微镜动态检测活细胞内游离钙离子浓度的变化;CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,并结合流式细胞仪进行细胞周期分析.结果 ①采用含钙细胞外液时,LXA4降低正常Jurkat T细胞内游离钙离子浓度,而用无钙细胞外液时,细胞内游离钙离子浓度下降不明显;②LXA4呈剂量依赖性抑制钙池操纵钙通道(SOC)激活剂thapsigargin(TG)引起的Jurkat T细胞内游离钙离子浓度的增高,100 nmol/L LXA4也能抑制抗CD3单抗(a-CD3)引起的细胞内钙离子浓度的增高,SOC阻滞剂2-Aminoethoxydiphenylborate(2-APB)能显著抑制TG引起的钙内流;③LXA4呈剂量依赖性抑制a-CD3和抗CD28单抗(a-CD28)诱导的Jurkat T细胞增殖,细胞周期分析发现LXA4阻止JurkatT细胞由G1期进入S期,降低S期细胞比例、细胞增殖指数(PI)和DNA含量.结论 LXA4可能通过抑制Jurkat T细胞钙池操纵的钙通道引起的胞质内游离钙浓度的升高而抑制其增殖.     

益智仁氯仿抽提物对兔主动脉螺旋条收缩反应的影响

益智仁氯仿抽提物(简称益智仁)不仅能剂量依赖性地抑制高钾去极化所致的兔主动脉条收缩,使氯化钙累积量效曲线非平行右移,而且能剂量依赖性地抑制去甲肾上腺素(NE)所致的兔主动脉条收缩,使NE累积量效曲线非平行右移。小剂量益智仁抑制NE依赖细胞内钙性收缩,大剂量益智仁则对NE依赖细胞内钙性收缩和依赖细胞外钙性收缩产生抑制作用,提示益智仁对电位依赖性钙内流和受体操纵性钙内流均有抑制作用。     

疏肝饮提取物对大鼠结肠平滑肌收缩的抑制作用

目的：研究疏肝饮（SGY）提取物对大鼠结肠平滑肌收缩的影响,并探讨其与钙通道的关系。方法：应用常规的离体张力测定方法,观察不同浓度的SGY提取物对乙酰胆碱（ACh）、氯化钾（KCI）和细胞内钙耗竭后外钙内流引起的大鼠结肠平滑肌收缩的作用。结善：SGY提取物能够抑制ACh、KCI和细胞内钙耗竭后外钙内流引起韵大鼠结肠平滑肌收缩。结论：疏肝饮具有抑制大鼠结肠平滑肌收缩的作用,机制可能涉及通过阻断电压门控钙通道（VDC）、受体操纵性钙通道（ROC）和钙库调控性钙通道（SOC）抑制胞外Ca^2＋内流,同时涉及抑制胞内Ca^2＋的释放。     

适于膜片钳实验的心肌细胞分离方法及维拉帕米对钙电流的作用

目的：建立适应于膜片钳实验的大鼠单个心室肌细胞的分离方法,探讨L-型钙通道在大鼠心肌电活动中的作用.方法：采用改进Langendorff装置,酶解法分离单个心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞L-型钙电流及维拉帕米的作用.结果：该法分离到的心肌细胞存活率达80％～90％,高倍镜下细胞呈杆状,边缘清楚,表面光滑,纹理清晰;成功记录到典型L-型钙电流（Ica-L）,给予维拉帕米（0.3、3、30 μmol/L）后呈浓度依赖性抑制钙电流,其抑制率分别为（44.35±5.52）％,（61.06±2.99）％,（71.88±4.45）％.结论：改进心肌细胞的分离方法可获得大量耐钙心室肌细胞,这些细胞具有正常的电生理特性.     

人参皂苷单体Rb1对缺血心室肌细胞动作电位及L-型钙离子通道的影响

目的: 观察人参皂苷单体Rb₁对豚鼠缺血心室肌细胞动作电位（AP）和L-型钙离子通道的影响。方法: Langendorff离体心脏逆向灌流法分离豚鼠心室肌细胞，随机选取心室肌细胞分为正常对照组、缺血组及Rb₁100、200和400 μmol•L^-13个剂量组。应用全细胞电流钳模式记录心室肌细胞动作电位，应用电压钳模式记录L-型钙离子通道电流（I_ca-L。结果: Rb₁ 100、200和400 μmol•L^-1组缺血心室肌细胞动作电位复极50%（APD₅₀）和动作电位复极90%（APD₉₀）明显低于给药前（P<0.05或P<0.001），缺血后的心室肌细胞L-型钙离子通道峰值电流明显低于给药前（P<0.05或P<0.01）。Rb₁抑制缺血心室肌细胞钙离子通道的开放，随浓度增加钙电流显著降低，具有浓度依赖性。结论：Rb₁缩短缺血心肌细胞AP时程和抑制钙通道的作用，可能是其抗心肌缺血的机制之一。     

犬心房肌细胞分离及其L型钙通道电流检测的研究

目的探讨一种稳定可靠的犬心房肌细胞的分离方法,提高膜片钳的实验成功率并检测L型钙通道电流。方法采用改良Langderoff灌流系统行主动脉逆行灌注,采用选择性冠状动脉插管的方法,获得单个心房肌细胞。在显微镜下观察细胞形态,并应用膜片钳全细胞模式记录L型钙通道电流。结果分离细胞存活率为70%～80%,复钙后细胞存活率为30%～40%,耐钙细胞形态呈杆状,折光性强,横纹清晰,并能稳定记录L型钙通道电流。结论改良Langderoff技术有助于稳定分离出存活率高、具有正常电生理特性的犬心房肌细胞,能用于心房肌细胞离子通道的研究。     

Blocking effect of puerarin on calcium channel in isolated guinea pig ventricular myocytes

Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＴｏｉｄｅｎｔｉｆｙｗｈｅｔｈｅｒＰｕｅｒａｒｉｎ（Ｐｕｅｒ）ｈａｓｂｌｏｃｋｉｎｇｅｆｆｅｃｔｓｏｎＬｔｙｐｅｃａｌｃｉｕｍｃｈａｎｎｅｌＭｅｔｈｏｄｓ　ＷｅｕｓｅｄｗｈｏｌｅｃｅｌｌｒｅｃｏｒｄｉｎｇｏｆｐａｔｃｈｃｌａｍｐｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｔｏａｎａｌｙｓｅｃａｌｃｉｕｍｃｈａｎｎｅｌｃｕｒｒｅｎｔｉｎｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒｍｙｏｃｙｔｅｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍＬａｎｇｅｎｄｏｒｆｆｇｕｉｎｅａｐｉｇｈｅａｒｔｓｂｙｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅＲｅｓｕｌｔｓ　Ｉ…     

大鼠心室肌细胞单通道钙电流的记录及其电生理学特性分析

 目的分离大鼠心室肌细胞,记录大鼠心室肌细胞的单通钙电流,并分析其基本电生理学性质。方法胶原酶法分离大鼠心室肌细胞;应用膜片钳技术细胞贴附式和内膜向外式记录L-型钙通道的电流,并用pClamp10分析软件进行分析。结果分离得到了大鼠心室肌细胞,细胞存活形态良好,呈杆状或柱状,具有清晰的横纹。记录到的L-型钙通道单通道电流,平均电流幅度为（1.13±0.01）pA,电导为19pS,平均开放时间常数为（1.35±0.03）ms,平均关闭时间常数为（46.75±10.04）ms。此外,还记录到了L-型钙通道的Run-down现象。结论本实验分离得到的大鼠心室肌细胞适用于膜片钳单通道记录模式;记录到的L-型钙通道的基本电生理学性质与文献报道相符。     

丹参复方液对大鼠肥大心肌L型钙电流的影响

【目的】探讨丹参复方液对高血压性肥大心肌L型钙电流的影响。【方法】利用腹主动脉缩窄法建立高血压性心肌肥大模型,利用灌胃法给予丹参复方液,采用离体大鼠心脏Langendorff灌注法急性分离心肌细胞,利用膜片钳全细胞技术记录L型钙电流,比较正常对照组、高血压未治疗组和丹参复方液组之间的区别。【结果】高血压未治疗组的L型钙电流密度显著高于正常对照组（P〈0．05）,丹参复方液组显著小于高血压未治疗组（P〈0．05）,丹参复方液组与正常对照组相比无显著性差异（P〉0．05）。【结论】丹参复方液具有逆转高血压性肥大心肌L型钙电流的药理作用。     

AngⅡ对心肌细胞Kv4．2钾通道蛋白表达的影响及机制

【目的】体外培养新生大鼠心肌细胞,观察AngⅡ在诱导细胞肥厚过程中对Kv4．2蛋白表达的影响,及钙离子在其细胞内信号传导通路中的作用。【方法】AngⅡ心肌细胞肥大模型,用激光共聚焦显微镜检测AngⅡ对心肌细胞胞浆钙离子浓度的影响,用流式细胞仪检测AngⅡ诱导心肌细胞肥厚过程中细胞Kv4．2表达的变化。【结果】AngⅡ明显增加细胞的蛋白总量,诱导心肌细胞肥大,AngⅡ能增加心肌细胞胞浆钙离字浓度,下调Kv4.2编码的通道蛋白的表达含量。【结论】AngⅡ在诱导心肌细胞肥大过程中,可能通过细胞内钙离子以外的信号通路下调Ito通道蛋白Kv4．2。     

蛋白激酶C调节的1,4,5-三磷酸肌醇受体磷酸化在胆囊收缩素介导的胃窦平滑肌细胞钙动员中的作用

目的研究八肽胆囊收缩素（CCK-8）对大鼠胃窦平滑肌细胞（SMC）胞内钙释放和胞外钙内流的作用及对其具体相关机制的探讨。方法（1）多导生理记录仪记录大鼠离体胃窦肌条在不同条件下的收缩活动;（2）免疫印迹法和免疫沉淀法检测胃窦SMC的三型1,4,5-三磷酸肌醇受体（InsP3113）及其磷酸化水平;（3）Fura-2／AM标记胃窦SMC,观察CCK-8S对胞内钙离子浓度（[Ca^2＋]i）的影响;（4）全细胞膜片钳检测胃窦SMC的L-型电压门控钙通道电流（ICa-L）的变化情况。结果（1）CCK-8S作用下胃窦肌条收缩幅值和频率改变明显[增长率分别为（62±13）％和（58±17）％,均P〈0．01],可被CCK-A受体拮抗剂和钙泵抑制剂所阻断;（2）蛋白激酶C（PKC）上调InsP3R3磷酸化水平,抑制CCK-8S介导的内钙释放;（3）CCK-8S引起的[Ca^2＋]i显著升高[从（69±7）mol／L升至（472±36）nmol／L,P〈0．01]分别可被CCK-A受体或胞内钙泵抑制剂和PKC激动剂所阻断;去除外钙或给予L-型钙通道阻滞剂时CCK-8S仍可引起[Ca^2＋]i升高;（4）CCK-8S显著增强胃窦SMC的IICa-t。[从（-56±7）pA升至（-89±6）pA,P〈0．01],可分别被ICa-L阻滞剂、胞内钙泵抑制剂和钙依赖性氯通道阻滞剂所阻断。结论CCK-8S引起的大鼠胃窦SMC的[Ca^2＋]i升高依赖于PKC介导的InsP3R3磷酸化作用调节下的细胞内钙离子释放。胞内钙释放可激活ICl-Ca,引起细胞膜去极化而活化ICa-L引起胞外钙内流,最终引起SMC收缩效应。     

M_3受体激动剂胆碱对大鼠心肌细胞内钙离子的影响

目的研究M3受体激动剂胆碱对大鼠心肌细胞内钙离子的影响。方法采用钙荧光染料Fluo-3/AM负载心肌细胞,在激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)上测定细胞[Ca2+]i的变化。结果胆碱不影响静息状态下的细胞[Ca2+]i,对咖啡因和三磷酸肌醇(IP3)介导的细胞内钙的释放均无作用。5.0 mmol/L胆碱可以抑制KCl除极诱导的心肌[Ca2+]i的升高幅度,2.0 nmol/L 4-DAMP可以阻断这一作用。结论 M3受体激动剂胆碱通过阻断心肌细胞膜电压依赖性钙通道降低心肌细胞[Ca2+]i,从而发挥心肌保护作用。