AnnexinⅤ在低氧滋养细胞中的表达下调

目的探讨膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)在体内低氧滋养细胞中的表达及其意义。方法采用免疫组化、流式细胞术等实验技术测定低氧滋养细胞内膜联蛋白Ⅴ的表达。结果 1)体内低氧状态下滋养细胞AnnexinⅤ的表达显著低于正常滋养细胞。2)体外实验显示随着AnnexinⅤ浓度的增加,其抗凝功能呈梯度性变化。结论低氧滋养细胞中AnnexinⅤ表达呈明显下调,可能影响胎盘滋养细胞的生理功能,导致多种不良妊娠结局。     

AnnexinⅤ/PI法定量检测胎盘细胞凋亡

目的:探讨AnnexinⅤ/PI法检测细胞凋亡较PI法的优越性。方法:三十份正常足月胎盘的滋养细胞标本同时进行AnnexinⅤ/PI法和PI法染色,经流式细胞仪检测分析细胞凋亡的百分数。结果:AnnexinⅤ/PI法和PI法检测的结果分别为3.71±1.86%、0.69±0.48%,二者有显著性差异(P<0.01)。结论:AnnexinⅤ/PI法可检测出细胞早期的凋亡,其灵敏、准确,是目前检测细胞凋亡较好的方法。     

Annexin V在低氧滋养细胞中的表达下调

目的 探讨膜联蛋白V( Annexin V)在体内低氧滋养细胞中的表达及其意义.方法 采用免疫组化、流式细胞术等实验技术测定低氧滋养细胞内膜联蛋白V的表达.结果 1)体内低氧状态下滋养细胞Annexin V的表达显著低于正常滋养细胞.2)体外实验显示随着Annexin V浓度的增加,其抗凝功能呈梯度性变化.结论 低氧滋...     

胎盘Hofbauer细胞在HBV母婴垂直传播的作用

目的探讨胎盘Hofbauer细胞在乙型肝炎病毒(HBV)母婴垂直传播的作用。方法垂直传播组(母亲及其新生儿血HBsAg和HBV-DNA均为阳性)、非垂直传播组(母亲血HBsAg和HBV-DNA阳性而新生儿阴性)和对照组(母亲及其新生儿血HBsAg和HBV-DNA均为阴性)各30例,透射电子显微镜观察其胎盘Hofbauer细胞超微结构变化及其与HBV颗粒的关系。结果①对照组未发现Hofbauer细胞:在垂直传播组和非垂直传播组,Hofbauer细胞散在分布于胎盘间质中。②在垂直感染组,Hofbauer细胞肿胀,胞浆突起减少,胞浆空泡变大;粗面内质网及高尔基复合体萎缩,线粒体缩小,溶酶体少见;胞核增大,染色质浓缩、边聚。在非垂直感染组,Hofbauer细胞呈圆形或卵圆形,细胞表面有大量胞浆突起,排列着微吞饮小体,细胞胞浆内有圆形空泡;线粒体呈杆状,峭排列紧密,溶酶体较多,高尔基体及粗面内质网欠发达;胞核偏位,核仁显著,染色质分布均匀。③在Hofbauer细胞胞质空泡、细胞间隙内存在单个或多个成熟病毒颗粒、病毒包涵体和病毒抗原颗粒。结论HBV可引起胎盘Hofbauer细胞超微结构改变,并经Hofbauer细胞介导引起母婴垂直传播。     

Annexin V/PI法定量检测胎盘细胞凋亡

目的探讨Annexin V/PI法检测细胞凋亡较PI法的优越性.方法三十份正常足月胎盘的滋养细胞标本同时进行Annexin V/PI法和Pl法染色,经流式细胞仪检测分析细胞凋亡的百分数.结果Annexin V/PI法和PI法检测的结果分别为3.71±1.86%、0.69±0.48%,二者有显著性差异(P＜0.01).结论Annexin V/PI法可检测出细胞早期的凋亡,其灵敏、准确,是目前检测细胞凋亡较好的方法.     

胎盘组织TLR9分布与表达及与HBV宫内感染的关系

目的了解TLR9在外周血HBsAg阳性母亲胎盘组织中的表达及分布,探讨其与HBV宫内感染的关系。方法Abbott化学发光法检测新生儿外周血HBsAg;ELISA法检测母亲外周血HBV标志物;SABC免疫组织化学方法检测胎盘组织HBsAg和TLR9的表达和分布。结果胎盘HBV感染率77.27%(17/22),HBsAg分布于蜕膜细胞、滋养层细胞、间质细胞、绒毛毛细血管内皮细胞。TLR9在外周血HBsAg阴性母亲胎盘滋养层细胞表达,在外周血HBsAg阳性母亲胎盘滋养层细胞、间质细胞、绒毛毛细血管内皮细胞均有表达。外周血HBsAg阳性组比阴性组胎盘组织TLR9表达强,差异有统计学意义(P<0.05);而外周血HBsAg阳性母亲的胎盘,未感染HBV者比感染HBV者TLR9表达强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论初步认为,胎盘组织TLR9表达与HBV宫内感染有一定关系,TLR9可能是HBV宫内感染的保护因素之一。     

HBeAg对慢性乙型肝炎孕妇胎盘组织TLR4表达的作用研究

目的探讨HBeAg对慢性乙肝孕妇胎盘组织Toll样受体4（TLR4）表达的作用,及TLR4表达与胎盘持续感染HBV的关系。方法选取22例HBeAg阳性和24例HBeAg阴性慢性乙肝孕妇,及正常孕妇25例。以实时荧光定量RT-PCR（qRT-PCR）和免疫组化法检测胎盘组织中TLR4的表达,并采用实时荧光定量PCR和微粒子酶免疫分析法（MEIA）分别检测其血清HBV DNA和HBeAg水平。结果HBeAg阳性孕妇胎盘组织中TLR4mRNA的表达水平明显低于正常对照组和HBeAg阴性组（P〈0.01）,但与正常对照组相比,其血清HBeAg和HBV DNA水平则显著升高（P〈0.01）;胎盘组织中TLR4 mRNA表达与HBeAg水平呈负相关,而与血清HBV DNA水平无显著相关性。结论HBeAg对胎盘组织TLR4表达起负调节作用,胎盘组织中TLR4的表达与其持续感染HBV有一定关系。     

FcγRⅢ在乙型肝炎病毒胎盘感染中作用的研究

目的研究FCγRⅢ在乙型肝炎病毒胎盘感染中的作用。方法收集早孕、中孕,足月胎盘各15例,进行免疫荧光检测FcγRⅢ的表达情况;并随机选取经免疫组化PV-9000法检测为HBsAg( )的足月胎盘15例,进行免疫荧光双标检测HBsAg/FcγRⅢ的分布。结果早孕绒毛组织未见FcγRⅢ表达,中孕胎盘有11例表达,其中最早的为孕17w,足月胎盘均有明显表达;HBsAg/FcγRⅢ在胎盘屏障各层细胞上可分布于同一部位。结论孕17w后胎盘组织开始表达FCγRⅢ,使胎盘具有转运IgG的功能:HBV可能是以免疫复合物的形式经由滋养细胞表面FCγRⅢ的介导而感染胎盘的。     

miR-150在胎盘表达与复发性流产的关系研究

目的探讨miR-150通过靶向血管内皮生长因子(VEGF)表达调控胎盘血管生成参与复发性流产的关系。方法选择华中科技大学同济医学院附属梨园医院妇产科单胎晚期妊娠分娩的产妇40例为对照组(年龄23~29岁,平均年龄26.72岁),同期选择于该院妇产科3次或更多次自然流产的妇女40例为病例组(年龄23~29岁,平均年龄26.18岁)。测定两组胎盘组织miR-150 mRNA表达水平及VEGF表达水平。设立HTR-8/SVNEO细胞组、miR-150mimics组、miR-150 inhibitor组,测定3组细胞活力、凋亡水平、血管形成水平、miR-150 mRNA表达水平及VEGF表达水平。建立正常小鼠组、miR-150 mimics小鼠组、miR-150 inhibitor小鼠组模型,测定3组小鼠平均流产数、胎鼠质量、胎盘质量、胎盘毛细血管数目、miR-150 mRNA及VEGF表达水平。结果病例组胎盘组织miR-150 mRNA表达水平高于对照组胎盘组织,VEGF表达水平低于对照组胎盘组织(P <0.05)。miR-150 mimics组光密度(OD)值、细胞存活率、相对总血管长度、相对总血管数目、VEGF表达水平低于HTR-8/SVNEO细胞组(P <0.05);miR-150 inhibitor组OD值、细胞存活率、相对总血管长度、相对总血管数目、VEGF表达水平高于HTR-8/SVNEO细胞组和miR-150 mimics组(P <0.05)。miR-150 mimics组细胞凋亡率、miR-150 mRNA表达水平高于HTR-8/SVNEO细胞组(P <0.05),miR-150 inhibitor组细胞凋亡率、miR-150 mRNA表达水平低于HTR-8/SVNEO细胞组和miR-150 mimics组(P <0.05)。miR-150 mimics小鼠组平均流产数、miR-150 mRNA水平高于正常小鼠组(P <0.05),胎鼠质量、胎盘质量低于正常小鼠组(P <0.05)。miR-150inhibitor小鼠组平均流产数、miR-150 mRNA水平低于正常小鼠组和miR-150 mimics小鼠组(P <0.05),胎鼠质量、胎盘质量高于正常小鼠组和miR-150 mimics小鼠组(P <0.05)。miR-150 mimics小鼠组平均胎盘毛细血管数目水平、VEGF表达水平低于正常小鼠组(P <0.05),miR-150 inhibitor小鼠组平均胎盘毛细血管数目、VEGF表达水平高于正常小鼠组和miR-150 mimics小鼠组(P <0.05)。结论复发性流产患者胎盘组织中miR-150表达水平升高,VEGF表达水平降低;miR-150靶向抑制胎盘中VEGF表达水平进而抑制胎盘中血管的生成可能是复发性流产的发病机制之一。     

腺病毒载体介导HBsAg基因在哺乳动物细胞中的表达

目的　探讨腺病毒载体介导乙型肝炎病毒 (HBV)前S2 S(preS2/S)基因在几种哺乳动物细胞中的表达。方法　制备携带HBVpreS2/S基因的非复制型重组腺病毒Ad-HBs ,体外转染人胚肾细胞 (2 93)、绿猴肾细胞 (Vero)、肝癌细胞系 (HepG2 )和间质干细胞 (MSCs) ,荧光显微镜观察EGFP的表达 ,同时采用RT-PCR检测目的基因的转录 ,ELISA法检测目的基因的表达。结果　MOI为 2 0的重组腺病毒Ad-HBs转染 2 93、Vero、HepG2 细胞和MSCs ,4 8h后 90 %以上的细胞表达EGFP ,同时细胞表达高滴度的HBsAg(A值 >3 2 2 9)。结论　腺病毒载体不仅能够介导HBVpreS2 S基因于连续细胞系细胞中高效表达 ,也能介导HBVpreS2 S基因于干细胞中高效表达     

HBV感染人胎盘滋养层细胞机制的初步探讨

目的 采用透射电镜观察HBV体外感染人胎盘滋养层细胞的超微结构变化.方法 HBV体外感染人胎盘滋养层细胞.ELISA检测培养上清中HBsAg,PCR检测细胞培养上清和滋养层细胞中的HBV DNA.HBV荧光定量PCR检测细胞培养上清中HBV DNA量(拷贝/ml).透射电镜观察滋养层细胞的超微结构.结果 感染组滋养层细胞培养上清中HBsAg在PBS清洗后12 h时A值为0.942,96 h时上升为1.264.PCR检测感染组细胞培养上清和感染组细胞HBV DNA均为阳性.PBS彻底清洗后0、12、36、60、84 h感染组细胞培养上清的HBV DNA分别为:＜103,3×104,6×105,5×105,3×105拷贝/ml.透射电镜观察到感染组滋养层细胞膜附近存在包涵素(Clathrin)形式的内吞小体形成,并且发现内吞小体内存在病毒颗粒样结构.在感染组细胞粗面内质网内发现HBsAg特异性的纤维丝状结构.结论 HBV可能经包涵素依赖的细胞内吞形式进入滋养层细胞,进而实现感染细胞或通过胞释作用将病毒排至细胞的对侧而实现穿越滋养层细胞屏障.     

胎盘生长因子在妊娠期高血压疾病胎盘组织中的定位及定量分析

目的探讨胎盘生长因子(placental growth factor,PLGF)在妊娠期高血压疾病胎盘中定位及定量表达。方法选择妊娠期高血压疾病患者46例,其中子痫前期重度23例,子痫1例;慢性高血压并发子痫前期1例,选择同期正常妊娠妇女20例作为对照组。采用免疫组织化学染色法和免疫印迹(Western blot)方法检测两组患者胎盘PLC蛋白定位及定量表达。结果 (1)免疫组织化学染色发现PLGF蛋白在妊娠期高血压疾病组及正常妊娠组胎盘中分布范围基本一致, 主要分布在绒毛合体滋养细胞和间质细胞的胞浆,部分血管合体膜上也有PLGF阳性染色。(2)Western blot方法检测妊娠期高血压疾病组子痫前期轻、重度胎盘绒毛PLGF蛋白表达低于正常妊娠组(0.3±0.4 vs 0．6±0．4、0．2±0．5 vs 0．6± 0．4),差异有统计学意义(P<0．01);妊娠期高血压患者胎盘中PLGF蛋白的表迭为0．5±0．6,与对照组比较,差异无显著性(P>0．05)。结论胎盘PLGF蛋白表达异常在妊娠期高血压疾病发病中可能具有重要的作用。     

ERBB4/HER4在子痫前期胎盘中的表达

目的探讨子痫前期患者胎盘滋养细胞人表皮生长因子受体4(ERBB4/HER4)的表达及意义。方法采用RT-PCR法检测35例子痫前期患者(子痫前期组)胎盘ERBB4的表达及其与胎盘重量及新生儿出生体重的关系,并与20例正常妊娠妇女(正常妊娠组)比较。结果在子痫前期患者胎盘中,ERBB4 mRNA表达明显高于正常妊娠胎盘,两者有显著性差异(P<0.05)。结论子痫前期患者胎盘ERBB4表达显著增高,与子痫前期的发病密切相关。     

人瘦素基因在胎盘中的分离鉴定及在大肠杆菌中的融合表达

目的 克隆人瘦素(leptin)基因,构建融合表达载体,实现在大肠杆菌中的高效表达.方法 从人胎盘中提取RNA,利用反转录聚合链式反应(RT-PCR),克隆到人的leptin基因编码序列,对该基因片段进行T载体克隆、酶切和PCR鉴定,并且对其进行序列分析.将leptin基因插入到原核表达载体PET-28a中,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG进行诱导,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析,并利用脱氧胆酸钠对表达蛋白进行纯化.结果 DNA序列分析表明,从胎盘中克隆的人leptin序列与文献报道的一致,酶切鉴定证实leptin基因正确地插入到了表达载体中,经IPTG诱导和SDS-PAGE电泳分析,人leptin基因在大肠杆菌中实现了高效融合表达,表达产物的分子量为20kD,经过纯化,得到了较纯的融合表达蛋白.结论 从人胎盘中成功克隆了leptin基因,构建了原核表达载体,实现了在大肠杆菌中的高效表达,为进一步研究leptin的生物学功能奠定基础.     

FibroScan(R)在乙型肝炎病毒感染者中的应用现状

FibroScan(R)是一种评估肝纤维化程度的新型超声影像学方法,具有无创、快速、可重复性高的特点,国内外研究均显示其对慢性肝病肝纤维化诊断具有较高的临床诊断价值.文章主要对FihroScan(R)在慢性乙型肝炎病毒感染者中的临床应用及该检查的影响因素做一综述,同时将其与其他无创性模型及影像学检查进行比较.     

VEGF在不同类型子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）在不同类型子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学SP法检测18例正常孕妇（对照组），36例子痫前期患者（子痫前期组，其中轻度子痫前期患者18例，重度子痫前期患者18例）胎盘组织中VEGF的表达强度。结果VEGF主要表达于胎盘绒毛滋养细胞；重度子痫前期患者胎盘绒毛滋养细胞VEGF表达强度明显低于对照组及轻度子痫前期患者（P＜0．05），而轻度子痫前期患者与对照组比较，无显著性差异（P＞0．05）。结论VEGF在胎盘中主要由绒毛滋养细胞分泌，子痫前期患者VEGF分泌减少，尤其是重度子痫前期的患者,这可能是引起局部胎盘绒毛及血管痛变的原因。     

解整合素金属蛋白酶19/ADAM19在子痫前期胎盘组织中的表达及其对滋养细胞分泌MMPs的调节

目的通过对子痫前期及正常孕妇胎盘组织中解整合素金属蛋白酶19（ADAM19）的检测及ADAM19对绒毛滋养细胞分泌MMP2,9的调节,探讨ADAM19与子痫前期发病的关系。方法应用免疫组织化学（免疫组化）链霉素抗生物素-过氧化物酶法、免疫印迹技术和RT-PCR技术检测24例正常胎盘组织及46例子痫前期（其中26例为重度子痫前期,20例为轻度子痫前期）胎盘组织中ADAM19蛋白及mRNA的表达;用明胶酶谱方法检测抗ADAM19抗体作用后滋养细胞MMP2,9的分泌变化。结果胎盘组织中,ADAM19主要分布在多种滋养层细胞中,包括细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞一和些绒毛间质结缔组织细胞、毛细血管中,其阳性信号不仅定位于细胞膜上,在细胞质中也有分布。正常胎盘中ADAM19的蛋白表达量为0.372±0.016,重度和轻度子痫前期组ADAM19蛋白定量分别为0.766±0.029和0.693±0.041,轻、重度子痫前期组分别与正常组比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）,轻度子痫前期与重度子痫前期比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。ADAM19mRNA在正常组胎盘中的量为0.205±0.084,在重度和轻度子痫前期组中分别为0.481±0.057和0.454±0.033,轻、重度子痫前期组分别与正常组比较,差异均有统计学意义（P〈0.01）,轻度子痫前期与重度子痫前期比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。在体外培养的滋养层细胞中,100μg/L浓度的抗ADAM19抗体在作用12h即可以抑制滋养细胞MMP2,MMP9的分泌,其作用呈浓度依赖。结论子痫前期胎盘组织中ADAM19过表达可能与子痫前期的发生和发展有关;在子痫前期的发生中,ADAM19可能是在妊娠早期抑制滋养细胞的浸润而导致胎盘浅着床的。     

胎盘生长因子(PlGF)的生物学功能

胎盘生长因子 (PlGF)属于VEGF家族成员之一 ,最近的研究发现PlGF及其受体Flt 1在治疗性血管新生方面有很大的潜能。PlGF还能通过动员VEGFR 1/Flt 1+ 的干细胞达到造血重建的目的     

胎盘生长因子（PIGF）的生物学功能

胎盘生长因子(PIGF)属于VEGF家族成员之一,最近的研究发现PIGF及其受体Flt-1在治疗性血管新生方面有很大的潜能.PIGF还能通过动员VEGFR-1/Flt-1+的干细胞达到造血重建的目的.