SPAG9调控前列腺癌迁移侵袭能力的研究

目的探讨SPAG9对前列腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响及其分子机制。方法应用RNA干扰技术下调SPAG9在前列腺癌细胞中的表达,采用Western blot方法评估SPAG9基因干扰效果。采用Transwell实验比较SPAG9干扰前后前列腺癌细胞DU145、PC3的迁移与侵袭能力的改变。用CCK8细胞增殖实验分析SPAG9基因沉默对前列腺癌细胞DU145、PC3增殖能力的影响。用Western blot实验研究SPAG9基因沉默对前列腺癌细胞中MMP-2及TIMP-2蛋白表达的影响。结果特异性SPAG9基因的干扰RNA(siRNA)能够有效沉默DU145、PC3前列腺癌细胞株中SPAG9蛋白的表达。SPAG9敲低后的前列腺癌细胞株迁移与侵袭能力显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。siSPAG9组DU145和PC3细胞中MMP-2的蛋白表达水平比siCtrl组显著降低,两组比较差异有统计学意义(P0.05),而TIMP-2的表达量显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。SPAG9基因沉默后并不影响DU145及PC3细胞的增殖,组间差异无统计学意义(P0.05)。结论SPAG9基因通过激活MMP-2信号通路增强前列腺癌细胞的迁移与侵袭能力。     

siRNA靶向沉默OCT4基因对前列腺癌DU145和PC3细胞等生物学行为的影响

目的 观察siRNA靶向沉默OCT4基因对前列腺癌DU145细胞和PC3细胞的生物学行为影响.方法 通过脂质体介导的方法将OCT4 SiRNA分别转染人前列腺癌细胞株DU145细胞和PC3细胞,采用RT-PCR和Western-blot方法分别检测特异性siRNA对0ct4基因在mRNA和蛋白水平上的沉默效果,CCK8法测定细胞生长曲线观察细胞增殖的抑制情况,运用Transwell小室法检测细胞侵袭能力的变化.结果 转染OCT4 SiRNA的两组细胞OCT4的表达均低于阴性对照组(NC)与空白组(P＜0.05),OCT4SiRNA抑制两种细胞的增殖并降低细胞的侵袭能力.结论 OCT4-siRNA可以有效抑制DU45细胞和PC3细胞的OCT4基因的表达,从而抑制细胞增殖,抑制侵袭和迁移,表明OCT4基因在前列腺癌的发生发展中发挥重要作用.     

长链非编码RNA H19在前列腺癌中的表达及对前列腺癌细胞糖代谢与生长的影响

目的:探讨长链非编码RNA H19在前列腺癌组织中的表达及其对前列腺癌细胞DU145和PC-3糖代谢和生长的影响。方法:采用实时荧光定量PCR(q PCR)检测20例前列腺癌组织(高分化和低分化各10例)和5例良性前例腺增生组织中H19的表达水平。H19小干扰RNA(siRNA)转染前例腺癌细胞DU145和PC-3,以不转染载体和转染阴性载体作为空白对照组和阴性对照组,MTT法检测转染后DU145和PC-3细胞的生长情况,q PCR检测转染细胞中H19的表达水平,通过测定培养液中葡萄糖和乳酸的含量分析前例腺癌细胞糖代谢的变化。结果:高分化和低分化前例腺癌组织中H19的相对表达量(0.725±0.385、2.086±0.542)均显著高于BPH组织(0.210±0.068),P均0.01,且低分化前例腺癌组织显著高于高分化前列腺癌组织(P0.01)。转染H19 siRNA后,H19在DU145和PC-3细胞中的表达均显著低于空白对照组和阴性对照组(P均0.01);转染H19 siRNA后的DU145和PC-3细胞,生长能力、葡萄糖消耗量和乳酸生成量均较空白对照组和阴性对照组显著下降(P均0.01)。结论:H19在前列腺癌中呈现高表达,抑制其表达可有效抑制前列腺癌细胞的糖代谢和生长。     

微小核糖核酸miR-370-5p对前列腺癌细胞增殖影响的研究

目的 探讨微小核糖核酸miR-370-5p对前列腺癌细胞系PC3和DU145细胞增殖的影响.方法 将前列腺癌细胞系PC3和DU145分为2组:阴性对照组-转染随机序列(dsCon-trol);实验组-转染miR-370-5p或miR-370-5p+siP21.实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测各组细胞中p21 mRNA的表达及前列腺癌细胞系中miR-370-5p的基础表达情况;蛋白质印迹法检测p21蛋白的表达;集落形成实验检测各组单个细胞克隆增殖情况;细胞增殖实验检测转染后各组细胞的增殖能力.结果 与正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)比较,前列腺癌细胞系PC3和DU145中miR-370-5p表达下降;与阴性对照组相比,实验组PC3和DU145细胞中p21 mRNA的相对表达量分别提高了(2.457±0.392)倍和(1.844±0.295)倍.实验组PC3和DU145细胞中p21蛋白的相对表达分别为(0.52±0.09)和(0.63±0.14),阴性对照组为(0.18±0.06)和(0.24±0.05),两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).阴性对照组和实验组中PC3和DU145细胞的集落形成数目分别为(0.281±0.024)、(0.084±0.016)、(0.293±0.017)和(0.310±0.041)、(0.088±0.019)、(0.300±0.032),实验组在转染miR-370-5p后,细胞集落形成数目均较阴性对照组少;而在miR-370-5p+siP21共转染后,与转染miR-370-5p组相比较,PC3和DU145细胞集落形成数目均显著恢复,差异均有统计学意义(P<0.05).细胞增殖实验结果显示,实验组转染miR-370-5p后,PC3和DU145细胞在48、72、96 h的存活情况(用吸光度OD值表示)分别为(0.395±0.040)、(0.691±0.042)、(0.874±0.045)和(0.437±0.044)、(0.700±0.051)、(0.875±0.052),与阴性对照组相比,实验组细胞增殖能力明显下降(P<0.05);miR-370-5p+siP21共转染后48、72、96 h,PC3和DU145细胞的OD值分别为(0.675±0.041)、(1.072±0.124)、(1.323±0.136)和(0.633±0.106)、(1.072±0.167)、(1.337±0.102),与转染miR-370-5p比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 miR-370-5p能够通过上调p21蛋白的表达抑制前列腺癌细胞的增殖.     

Zeste增强子同源物2在前列腺癌中的表达及对前列腺癌细胞生物学功能机制研究

目的观察Zeste增强子同源物2(EZH2)在前列腺癌中表达情况和在体外对细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响, 并探究作用机制。方法通过肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库分析EZH2在前列腺癌组织和前列腺增生组织中表达差异和预后关系。DU145细胞来源于上海中国科学院细胞库。对DU145细胞进行小干扰RNA(siRNA) EZH2沉默, 并通过蛋白质印迹法(Western blot)和RT-qPCR检测干扰效率。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)和Transwell实验检测EZH2对DU145生物学行为的改变。通过Western blot检测EZH2与p21相关性。结果前列腺癌组EZH2的信使RNA(messenger RNA, mRNA)表达高于正常前列腺组织, 且EZH2表达水平和Glesaon分级正相关。前列腺癌细胞系DU145、PC3组中EZH2的mRNAs和蛋白水平表达高于WPMY-1细胞组, 且在DU145中表达高于PC-3。CCK-8实验结果显示, si-EZH2组增殖能力显著低于于Control组(t=4.17, P<0.05);Transwell实验结果表明, si-E...     

Ⅹ型胶原蛋白α1通过激活黏着斑激酶通路影响前列腺癌的进展

目的探讨Ⅹ型胶原蛋白α1(COL10A1)对前列腺癌细胞增殖、迁移的影响及其作用机制。方法分析TCGA数据库中497例前列腺癌组织和52例前列腺正常组织中基因COL10A1的表达差异。将人源前列腺癌细胞系22RV1和DU145作为研究对象, 分别转染空载质粒和COL10A1过表达质粒, 转染2 d后, 使用5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)染色实验、平板克隆形成实验和细胞计数试剂盒(CCK-8)实验验证细胞的增殖能力;使用Transwell实验、划痕愈合实验和蛋白质印迹实验验证细胞的迁移能力, 采用蛋白质印迹实验探索COL10A1与p-DDR2之间的关系, 并验证其对黏着斑激酶(FAK)通路的影响。两实验组间比较采用独立样本t检验, 多实验组间比较采用方差分析。结果对照组细胞EdU着色细胞比例低于实验组[22RV1:(14.760±2.255)%比(53.850±4.463)%, t=7.816, P<0.05;DU145:(20.560±3.198)%比(65.470±2.857)%, t=10.470, P<0.05]、培养96 h后吸光度低于实验组(22RV1:2....     

高表达微小RNA145前列腺癌细胞系PC-3的建立

目的建立高表达微小RNA145前列腺癌骨转移细胞系,为研究其在骨转移中的作用机制提供依据。方法构建pMSCV-miR-145质粒,制备逆转录病毒pMSCV-vector和pMSCV-miR-145并感染前列腺癌骨转移细胞株PC-3,筛选并鉴定稳定细胞株PC-3/pMSCV-vector与PC-3/pMSCV-miR-145。结果转染pMSCV-miR-145实验组和pMSCV-vector对照组的质粒转染率均为80%～90%。荧光实时定量RT-PCR显示实验组细胞miR-145表达水平与对照组比较差异达2000倍,差异有统计学意义（P〈0.05）。表明筛选出的稳定细胞株中,miR-145的表达水平升高。结论高表达微小RNA145前列腺癌细胞系的成功建立,为探索miR-145在前列腺癌骨转移中的作用奠定基础。     

长链非编码RNA-HOTAIR对前列腺癌细胞周期和侵袭影响的实验研究

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)——Hox基因的反义基因间RNA(HOTAIR)在前列腺癌细胞的表达情况并明确其对前列腺癌细胞生长及转移的影响。方法:采用定量RT-PCR(qRT-PCR)检测HOTAIR在人正常前列腺上皮细胞株RWPE-1和前列腺癌细胞株PC3和DU145中的表达水平;采用RNA干扰技术、流式细胞术和Transwell小室实验检测HOTAIR对前列腺癌细胞生长周期及侵袭能力的影响。结果:与人正常前列腺上皮细胞相比,前列腺癌细胞株PC3和DU145中HOTAIR表达分别增高3.2及5.7倍;在si-HOTAIR下调HOTAIR的表达水平后,前列腺癌细胞株均出现了G2期阻滞,同时伴有G1期下调;且前列腺癌细胞株的侵袭能力受到了明显的抑制,si-HOTAIR1和si-HOTAIR2处理后,PC3侵袭能力分别被抑制32%和44%,DU145被抑制43%和34%。结论:lncRNA-HOTAIR在前列腺癌中呈相对高表达,并且与前列腺癌细胞的生长及侵袭能力有关。HOTAIR有潜力成为诊断前列腺癌和判断其预后的新指标。     

DNA甲基转移酶1对前列腺癌细胞增殖和迁移侵袭的影响

目的探究DNA甲基转移酶1(DNMT1)对前列腺癌细胞增殖和迁移侵袭的影响。方法采用小干扰RNA(siRNA)沉默前列腺癌细胞株(PC3和DU145)中DNMT1表达, 通过定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测沉默效率。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞的体外增殖能力;TransWell检测细胞体外迁移和侵袭能力;Western blot检测si-DNMT1细胞后上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白表达。组间比较采用t检验。结果 qPCR和Western blot实验结果显示DNMT1在前列腺癌细胞中高表达, 并成功构建siDNMT1 PC3和DU145细胞系。4 d后, CCK-8结果显示, siDNMT1细胞增殖能力低于相应对照组[PC3:1.27±0.71和1.44±0.48比1.66±0.58, t=7.268、5.108, P<0.01;DU145:1.43±0.12和1.27±0.10比1.80±0.06, t=4.841、7.493、P<0.01]。Transwell显示, 与对照组细胞比较, siDNMT1细胞迁移和侵袭...     

小干扰RNA沉默Y盒结合蛋白-1基因对肺腺癌A549细胞株表皮生长因子受体表达的影响

目的 观察Y盒结合蛋白-1(YB-1)小干扰RNA (siRNA)对肺腺癌A549细胞株表皮生长因子受体(EGFR)的影响.方法 针对YB-1 mRNA设计特异性siRNA及Control siRNA序列转染至A549细胞株,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测空白组、单纯Lipofectamine 2000处理组、Control siRNA组及YB-1 siRNA组细胞中YB-1和EGFR在mRNA和蛋白水平的表达;通过噻唑蓝(MTT)、侵袭实验观察各组细胞的生物学行为变化.结果 RT-PCR和Western blot结果显示实验组YB-1与EGFR的mRNA和蛋白表达降低(分别为0.3820±0.0094、0.4690±0.0032和0.1820±0.0073、0.4210±0.0049),与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).MTT检测转染72 h后YB-1 siRNA组吸光度值为1.34 ±0.11,同时转染48 h后YB-1 siRNA组侵袭能力较对照组明显降低(P＜0.05).结论 YB-1 siRNA能抑制肺腺癌A549细胞株中EGFR的表达,影响肿瘤增殖和侵袭能力.     

PARP1特异性siRNA对前列腺癌PC3细胞增殖的影响及其机制研究

目的 研究多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP1)特异性小分子干扰RNA(siRNA)对雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞株增殖的影响并初步探讨其作用机制. 方法 设计合成3条PARP1特异性siRNA序列,进行脂质体转染后,通过RT-PCR、蛋白质印迹法检测其对PARP1的干扰效果,筛选出最佳干扰效果的2条siRNA序列;通过单溶液细胞增殖检测法检测干扰PC3细胞内源性PARP1表达对细胞增殖的影响,并检测细胞内Akt及其下游GSK3β活化水平的变化. 结果 与空白对照组相比,转染阴性对照序列对PARP1的mRNA和蛋白表达水平无明显影响,而转染RNA干扰序列1706、2003和2907均可以明显干扰PARP1的表达,其中mRNA抑制率分别为(52.07±4.65)％、(44.38 ±9.15)％和(22.05 ±6.65)％,蛋白抑制率分别为(86.86±4.94)％、(83.30±7.18)％和(63.05 ± 10.19)％.RNA干扰序列1706和2003对PC3细胞的增殖抑制率分别为(38.93 ±3.87)％和(34.93±1.21)％,并可以下调细胞内Akt、GSK3β的磷酸化水平. 结论 PARP1特异性siRNA可以明显干扰PC3细胞内源性PARP1的表达并抑制细胞增殖,该抑制作用与Akt的活化抑制以及其下游GSK3β的激活有关.     

长链非编码RNA Linc00662促进前列腺癌细胞生长的研究

目的:探讨Linc00662在前列腺癌的表达情况及对前列腺癌细胞生物学功能的影响。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对60例前列腺癌患者的前列腺癌组织标本以及正常前列腺上皮细胞(WPMY-1细胞)和前列腺癌细胞系(DU145、PC-3、LNCaP和22RV1)检测Linc00662的表达,并分析前列腺癌组织中Linc00662表达与患者临床病理特征的相关性。应用RNA干扰(siRNA)转染PC-3和DU145细胞,qRT-PCR验证干扰效率。通过CCK-8、Caspase 3/9活性测定、划痕试验、Transwell侵袭试验分别检测干扰Linc00662的表达对前列腺癌PC-3和DU145细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力的影响。结果:与邻近及正常组织前列腺上皮细胞相比,Linc00662在前列腺癌组织和细胞系的表达呈显著上调(P0.01)。Linc00662的高表达与肿瘤分期(P=0.002)、原发灶大小(P=0.006)、淋巴结转移(P=0.001)及远处转移(P=0.001)呈正相关。si-Linc00662转染PC-3和DU145细胞后,Linc00662的表达明显下降(P0.01)。与对照组相比, Linc00662干扰组在PC-3和DU145细胞中的增殖、侵袭及迁移能力均明显下降(P0.01),而凋亡增加(P0.01)。结论:Linc00662在前列腺癌组织及细胞中呈相对高表达,敲低Linc00662的表达可抑制前列腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移,并促进其凋亡,可作为前列腺癌新的标志物。     

E2F1对前列腺癌的细胞周期与凋亡的调控

目的探讨E2F1转录因子对前列腺癌细胞的细胞周期及凋亡的影响。方法从高通量基因芯片结果中获得前列腺癌相关差异表达基因E2F1,进一步通过E2F1抑制及过表达质粒转染前列腺癌细胞,运用流式细胞技术检测转染后前列腺癌细胞的细胞周期及细胞凋亡变化。结果DU145/LNCa P转染质粒后,对照于空白组,转染si E2F1的细胞株,E2F1表达量明显下降(DU145:抑制率=77.30%,P0.01;LNCa P:抑制率=79.89%,P0.01);转染了Hi-E2F1的细胞株,E2F1表达量明显升高(DU145:倍数=8681,P0.01;LNCa P:倍数=14424,P0.01)。细胞周期实验结果显示,与空白组对比,抑制E2F1表达后的DU145及LNCa P细胞株细胞周期明显被抑制(P0.05);高表达E2F1的LNCa P细胞株的细胞周期缩短(P0.05),而在DU145细胞株中无明显差异。细胞凋亡实验发现,抑制E2F1表达后的DU145和LNCa P细胞株细胞凋亡明显增加(DU145 P0.01;LNCa P P0.05);相反,高表达E2F1后,细胞凋亡明显减少(P0.05)。结论 E2F1可使前列腺癌细胞的细胞周期缩短,并抑制前列腺癌细胞凋亡,这说明E2F1在前列腺中确实起着促癌的作用。     

RBBP4对前列腺癌细胞生长和侵袭能力的影响

目的：研究视网膜母细胞瘤结合蛋白4(retinoblastoma binding protein4,RBBP4)对前列腺癌细胞侵袭、迁移、增殖及肿瘤生长等生物学行为的影响.方法构建 RBBP4过表达慢病毒载体转染及未转染 LNCaP、DU145细胞株,分别通过 Transwell 实验、Wound healing 实验、CCK8及流式细胞技术检测前列腺癌细胞的侵袭、迁移、增殖和凋亡,异体肿瘤种植模型研究RBBP4对前列腺癌细胞成瘤能力的影响.结果 RBBP4上调表达明显促进前列腺癌细胞的迁移(LNCaP：RBBP4 vs Ctrl ＝133．8±14．1 vs 48．6±11．9;DU145：RBBP4 vs Ctrl ＝118．2±10．5 vs 62．3±13．0,P ＜0．001)和侵袭(LNCaP：RBBP4 vs Ctrl ＝252．0±16．3 vs 82．5±12．6;DU145：RBBP4 vs Ctrl ＝232．8±9．2 vs 61．0±8．3,P ＜0．001)能力;RBBP4高表达可以刺激 DU145前列腺癌细胞的增殖并显著加快 DU145细胞移植瘤的生长速度(P ＜0．01).结论 RBBP4能刺激前列腺癌细胞的侵袭、迁移,促进前列腺癌的形成及生长.     

p65基因序列shRNA慢病毒载体构建及其作用功能的初步研究

目的 建立稳定阻断前列腺癌细胞株LNCaP中核因子NF-κB(p65)表达的shRNA序列,构建慢病毒载体,检测p65在前列腺癌细胞中的作用功能.方法 根据p65基因信息,设计siRNA1、siRNA2、siRNA3针对p65基因cds区的siRNA序列,组建shRNA对应的4对互补单链DNA将合成的序列插入空载体pSIH1-H1-copGFP shRNA Vector中转染前列腺癌细胞,采用RTPCR方法检测不同序列片断对p65 mRNA的抑制效率,免疫印迹方法检测其对p65蛋白表达的抑制效率.将获得的慢病毒载体感染LNCaP细胞,设对照组、空转组.采用MTT、流式细胞术、Transwell等方法检测p65的生物学作用.结果 设计的3条针对p65序列中,第3条序列对前列腺癌细胞株中p65 mRNA的干扰效率为59%,对蛋白表达的抑制率达81%.目的序列位于p65(NM_021975)的1096～1113,茎环序列为5'-GATCC GCCCTATCCCTTTACGTCATTCAAGAGAT-GACGTAAAGGGATAGGGCTTTTTG-3'.转染细胞后,细胞可以稳定低表达p65.MTT检测实验组细胞96 h内未出现对数增殖,生长能力低于对照组和空转组.流式细胞检测实验组G0～G1期细胞百分率为61.49%,高于对照组的44.89%和空转组的41.52%;而S期细胞百分率为28.58%,低于对照组的47.36%和空转组的46.10%,差异有统计学意义(P＜0.05).Transwell检测实验组透过细胞数为(16.5000±6.62076)个,低于对照组和空转组[(45.6333±13.54159)个,(36.8333±5.68412)个],差异有统计学意义(P＜0.05).结论 成功获得稳定阻断前列腺癌细胞株LNCaP中p65表达的shRNA序列,并构建慢病毒载体;初步验证了p65在前列腺癌细胞增殖、侵袭和转移中的促进作用.     

短发夹状RNA抑制缺氧诱导因子1α在前列腺癌细胞中的表达

目的:构建产生缺氧诱导因子1α(HIF-1α)特异性短发夹状RNA(shRNA)的载体并检测其抑制作用,探讨该技术在前列腺癌治疗中的应用前景。方法:设计、合成针对HIF-1α的特异性shRNA模板序列,将其插入含有U6启动子的psilencerTM2.1-U6载体中,得到shRNA表达载体psilencer-HIF,在脂质体介导下转染前列腺癌细胞株PC-3M,应用绿色荧光蛋白质粒pEGFP共转染评价转染效率,RT-PCR及Western印迹检测其对HIF-1α表达的影响。结果:重组质粒psilencer-HIF经测序分析证实与设计的完全一致,共转染24 h后质粒转染效率为(89.26±4.72)%,其产生的shRNA在PC-3M细胞中能诱导RNA干扰(RNAi),转染后48 h HIF-1αmRNA和蛋白水平分别下降82.09%和81.61%(P<0.01);而阴性对照组HIF-1α表达水平无明显改变(P>0.05)。结论:成功构建了HIF-1α基因shRNA表达质粒,其可有效抑制前列腺癌细胞中的HIF-1α的表达,为前列腺癌的基因治疗提供了新思路。     

靶向TRPV6的siRNA对前列腺癌LNCaP细胞抑制作用的体外研究

目的:运用RNA干扰(RNAi)技术阻断前列腺癌LNCaP细胞中瞬时感受器电位离子通道蛋白V亚家族6(TRPV6)基因的表达,探讨TRPV6基因沉默对LNCaP细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法:针对TR-PV6基因,构建2条小干扰RNA(siRNA)序列;在脂质体介导下转染前列腺癌LNCaP细胞,用RT-PCR测定TRPV6mRNA的表达;MTT法和流式细胞技术测定siRNA对LNCaP细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。结果:两条siRNA序列均能有效地阻断LNCaP细胞中TRPV6基因在mRNA水平上的表达(P<0.01),且mRNA表达随着转染时间的延长而减少,转染72h后TRPV6mRNA的表达减少至对照组的27%和23%;siRNA转染能显著抑制LNCaP细胞增殖,转染48h细胞增殖抑制率最高,分别为34.53%和29.32%,与转染24h和72h比较有统计学意义(P<0.05);转染48h后,siRNA转染组G0～G1期细胞增多,S期细胞数量明显减少,与空白对照组及阴性对照组相比有统计学差异(P<0.01);siRNA转染组细胞的凋亡率分别为14.45%和12.73%,显著高于空白对照组及阴性对照组3.78%和5.22%(P<0.05)。结论:针对TRPV6的siRNA在体外能有效地抑制LNCaP细胞TRPV6mRNA的转录,同时能够抑制前列腺癌LNCaP细胞增殖,使细胞周期出现G0/G1期阻滞,细胞凋亡率显著增加。     

siRNA诱导EZH2基因增强子的表观沉默及其对人前列腺癌细胞的增殖抑制

目的 通过小分子RNA(siRNA)介导靶基因沉默技术,干扰前列腺癌细胞中果蝇zeste基因增强子的人类同源物的表达,以探讨靶向EZH2基因的RNAi对前列腺癌细胞增殖抑制的效应.方法 设计靶向EZH2基因的RNA干扰(RNAi)载体,构建重组表达质粒并且转染人前列腺癌细胞22RV1.利用MTT比色法检测靶向沉默EZH2表达对于22RVl的增殖抑制的影响:利用qRealtime-PCR鉴定转染组与空白组细胞中EZH2基因mRNA的表达量;提取各组细胞的总蛋白,利用Western Blotting检测EZH2蛋白的表达情况.结果 在转染了靶向EZH2基因siRNA的细胞株中,可以检测到EZH2表达呈明显的下调趋势:而在空白对照组中其表达很稳定.另外,诱导EZH2基因沉默可以抑制该前列腺肿瘤细胞的增殖和生长.上述结果 在各组细胞间旱现明显的统计学差异(P<0.05).结论 siRNA诱导的RNAi可以有效的抑制其靶基因EZH2的表达,同时可以抑制前列腺癌细胞的增殖和生长,是一种潜在的基因治疗新方法 .     

大黄素甲醚通过miR-380-3p调控前列腺癌细胞周期和增殖

目的:探讨大黄素甲醚通过调节miR-380-3p表达影响前列腺癌DU145细胞株的细胞周期和增殖的作用机制。方法:采用50 μg/mL的大黄素甲醚处理前列腺癌DU145细胞,将其作为大黄素甲醚组;以不做任何处理的正常培养的DU145细胞作为对照组。流式细胞术检测DU145细胞的周期变化,MTT法检测DU145细胞的增殖...     

整合素β1对人表皮干细胞增殖与分化的影响

目的构建针对整合索(intergrin)β1特异性的siRNA表达载体,并转染人表皮干细胞(KSC),探讨整合素β1对KSC增殖与分化的影响。方法针对目的基因intergrinβ1,选择RNA干扰作用靶点特异性的寡核苷酸序列,构建到siRNA表达质粒pSilencer3.1/H1中,并转染人KSC,转染分组为转染siIntegrinβ1组、非转染组、转染空载体组、转染siNegative组。通过蛋白质印迹法观察intergrinβ1及外皮蛋白的表达变化;应用流式细胞仪观察细胞周期变化;挑选干细胞克隆传代培养14 d后用1%罗丹蓝染色计算克隆形成率。结果重组载体siIntegrinβ1转染人KSC能够抑制intergrinβ1的蛋白表达,抑制效率达70%;KSC中外皮蛋白表达较对照组增加50%;G_0/G_1期细胞较对照组明显减少(P<0.01)、G_2期及S期细胞较对照组增多(P<0.05);干细胞克隆形成率较对照组显著降低(P<0.01)。结论重组载体转染人KSC能下调intergrinβ1的表达,下调intergrinβ1的表达可能是表皮干细胞走向分化的重要调控因素之一。