缓释降解支架复合碱性成纤维细胞生长因子诱导心肌血管再生的作用☆

摘要 背景：研究证实碱性成纤维细胞生长因子具有刺激血管再生及侧支重建的作用，但是，以往多通过外周静脉、左心房或冠脉介入途径给药，心肌局部难以达到有效治疗浓度。 目的：基于高分子材料聚乳酸/乙醇酸的降解特性，复合碱性成纤维细胞生长因子，保证蛋白生长因子在局部组织中靶向释放，观察其诱导心肌血管再生效果。 方法：以聚乳酸、乙醇酸为原料，二氯甲烷溶解后加入重组人碱性成纤维细胞生长因子，通过模具塑形，制成外径/内径分别为3.0/ 2.8 mm、壁厚0.1 mm、长度10 mm的圆柱形中空管状支架备用。于小型猪冠脉前降支中、远端1/3交界处阻断，局部心肌颜色变为暗紫色，超声观察前壁心尖局部室壁运动异常证实模型制作成功，随机分至空白支架对照组和碱性成纤维细胞生长因子支架组，支架通过自主设计的机械打孔装置植入。6周后，免疫组织化学染色量化分析血管重建的增殖细胞数量，并结合Image Pro Plus软件量化各组新生血管密度，SPECT结合软件Emory Cardiac Toolbox分析灌注缺损区域质量百分率的变化。 结果与结论：6周后碱性成纤维细胞生长因子支架组增殖细胞数量、新生血管密度较空白支架组显著增加(P < 0.001)，心肌核素显像显示灌注质量缺损百分率较空白支架组显著减少(P < 0.001)。结果证实，复合碱性成纤维细胞生长因子的聚乳酸/乙醇酸支架能够显著增加新生血管密度，进而改善缺血部位心肌血流灌注。 关键词：心肌缺血；药物缓释；碱性成纤维细胞生长因子；支架；血管再生；生物医用可降解高分子材料 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.21.045     

壳聚糖-明胶-碱性成纤维细胞生长因子 三维大孔支架对骨髓间充质干细胞 增殖的影响**☆

背景：干细胞的分化潜能与培养条件有密切关系，改变支架材料的表面特性，三维结构，增加生长因子均可实现对干细胞增殖分化的控制。 目的：制备适合骨髓间充质干细胞附着生长的、具有最佳孔隙率和孔隙结构的药物缓释组织工程支架——三维大孔支架，提供能促进多能干细胞生长的微环境。 设计：重复测量设计。 单位：广州中医药大学基础医学院解剖教研室。 材料：实验所用健康成年SD大鼠由广州中医药大学实验动物中心提供。壳聚糖、碱性成纤维细胞生长因子购自Sigma公司。 方法：实验于2003-03/2006-12主要在广州中医药大学基础医学院解剖教研室完成。采用冷冻干燥的方法，用不同比例的壳聚糖-碱性成纤维细胞生长因子-明胶依次混匀，通过控制冷冻、复温和干燥时间处理使其具有最佳孔隙率和孔结构，制备具缓释碱性成纤维细胞生长因子功能的三维大孔支架。取SD大鼠股骨和胫骨骨髓，分离、培养骨髓间充质干细胞并移植于缓释碱性成纤维细胞生长因子的三维大孔支架上进行三维培养，与无碱性成纤维细胞生长因子的支架对照。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。 主要观察指标：用ELISA和扫描电镜观察支架的三维结构和缓释性能，用苏木精-伊红染色、MTT、细胞计数及扫描电镜方法观察缓释碱性成纤维细胞生长因子的三维大孔支架对骨髓间充质干细胞生长状态和细胞活力的影响。 结果：含有碱性成纤维细胞生长因子的三维大孔支架有碱性成纤维细胞生长因子缓释性能，孔隙尺寸与不含碱性成纤维细胞生长因子的支架三维结构相比，差异无显著性意义（P > 0.05）。含有碱性成纤维细胞生长因子的三维大孔支架能提高在支架上立体培养的骨髓间充质干细胞存活率，促进骨髓间充质干细胞黏附、增殖和活力，与不含碱性成纤维细胞生长因子的支架相比，差异有显著性意义（P < 0.05）。 结论：含有碱性成纤维细胞生长因子的三维大孔支架能缓释碱性成纤维细胞生长因子，有利于在支架上立体培养的骨髓间充质干细胞存活，为其在组织工程中的应用打下基础。     

生物可降解聚合物结合碱性成纤维细胞生长因子对内皮细胞粘附的研究

目的 探讨利用可降解聚己内酯接枝肝素材料,体外负载碱性成纤维细胞生长因子,观察其对于内皮细胞粘附的影响。方法 采用可降解聚己内酯接枝肝素材料,电纺丝技术纺织血管支架,体外负载碱性成纤维细胞生长因子。采用低密度内皮细胞短期静态种植,观察负载细胞生长因子的可降解聚己内酯材料对内皮细胞的粘附影响。结果 利用可降解聚己内酯接枝肝素材料,电纺丝技术成功体外构建可降解血管支架,体外负载碱性成纤维细胞生长因子。内皮粘附实验证实,负荷生长因子的可降解支架材料,利于内皮细胞粘附。结论 可降解聚己内酯接枝肝素材料负荷碱性细胞生长因子(b-FGF)支架,利于内皮细胞粘附,可用于小口径组织工程血管的支架的研究。     

构建组织工程瓣膜支架中3种去垢剂的比较

背景：目前,组织工程瓣膜去细胞支架的制备方法和效果各不相同,但总的来说,酶结合去垢剂法显示出一定的优势作用。 目的：探讨脱氧胆酸钠、十二烷基硫酸钠、曲拉通3种去垢剂结合酶消化法对于猪主动脉瓣膜脱细胞的效果以及去细胞后对支架的影响。 方法：将新鲜猪主动脉瓣膜用抗生素溶液浸泡12 h后,置于胰蛋白酶和EDTA溶液中12 h,再分别用脱氧胆酸钠、十二烷基硫酸钠、曲拉通进行处理,最后转入核酸酶溶液中浸泡12 h,以达到去除内皮细胞和间质细胞的目的,常规苏木精-伊红染色观察内皮细胞是否除完全,Masson染色观察胶原纤维和弹力纤维损害程度,电子扫描显微镜观察纤维结构以评价效果。 结果与结论：3种去垢剂结合酶消化法均能彻底去细胞,但脱氧胆酸钠对支架胶原纤维和弹力纤维的损害较轻微,十二烷基硫酸钠次之,曲拉通对支架的损害作用最大。提示脱氧胆酸钠结合酶消化法是一种较合理的组织工程瓣膜支架构建方法。 关键词：脱氧胆酸钠;十二烷基硫酸钠;曲拉通;去垢剂;酶消化法;组织工程;支架材料;心脏瓣膜 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.08.005     

脱细胞天然骨基质的制备及其移植免疫分析

背景：同种异体骨来源广泛，便于大量加工贮存，如能去除其免疫排斥反应用于骨支架修复骨缺损，将很好地解决骨源问题，但目前去除免疫排斥的方法不尽理想。 目的：为修复骨缺损寻找去除动物骨中的免疫排斥反应方法进而提供理想的骨支架材料。 方法：取大鼠股骨经低渗-脱细胞、过氧化氢处理基质制备天然脱细胞骨支架，再通过苏木素-伊红和甲苯胺蓝染色、扫描电镜与透射电镜观察、有机成分分析、洗脱剂残留量测定和移植免疫分析的方法评估处理效果。 结果与结论：组织学观察可见处理后的脱细胞骨基质中胶原纤维排列规则，骨陷窝空虚，未见细胞，纤维连接蛋白和层黏连蛋白多存留在骨陷窝周边部。扫描电镜观察见处理组骨基质板层连接疏松，板层之间出现大量孔隙；透射电镜见骨陷窝区已无高密度影；高效液相色谱仪检测TritonX-100在脱细胞骨基质中几无残留；淋巴细胞刺激实验表明新鲜骨引起的免疫排斥反应要明显强于脱细胞骨基质（p<0.01）。说明联合应用低渗-脱细胞和过氧化氢处理基质的方法去除免疫排斥反应较为理想，为进一步制备组织工程骨支架材料进行动物移植实验打下基础。     

超高压脱细胞方法制备组织工程 血管支架**☆○

背景：构建组织工程血管支架的研究多集中于生物可降解支架和脱细胞同种或异种血管支架方面，但存在急需解决的若干问题：如生物可降解支架生物降解速度的控制以及植入脱细胞天然血管支架可能带来供体来源病毒细菌感染受体问题等。 目的：采用超高压结合核酸酶洗涤方法（超高压脱细胞技术）处理同种异体血管，观察该方法的脱细胞效果以及猪内源性反转录病毒的去除情况。 设计：对比观察实验。 单位：日本国立心血管病中心研究所。 材料：实验于2004-04/2005-04在日本国立心血管病中心研究所完成。选用健康雄性迷你猪幼猪，由日本九州鹿儿岛Japan Farm 食用猪养殖场提供, 体质量3~5 kg，猪龄1~3个月。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准。实验涉及的主要试剂和仪器：Hoechst 33258为日本同仁化学研究所产品；超高压设备KOBELCO为神户制钢所产品；PCR 为 GENEAMP PCR SYSTEM 9700产品。 方法：实验于2004-04/2005-04在日本国立心血管病中心研究所完成。无菌条件下取出猪降主动脉血管，用超高压设备以981 MPa超高静水压（4 ℃）将供体来源细胞压碎，结合核酸酶的消化作用，PBS的搅拌洗涤，脱去细胞残片形成血管生物支架。 主要观察指标：①利用 Hoechst 33258 荧光探针，定量检测超高压脱细胞血管中DNA含量；用JEMl00cx型透射电镜观察血管组织细胞成分去除和支架纤维保留情况；用JBM5200型扫描电镜观察支架的超微结构；100倍光镜下观察血管壁形态结构。即从组织学、分子生物学、免疫组组织化学水平评估超高压脱细胞方法的抗原去除效果。②用PCR方法检测幼猪脱细胞血管中的猪内源性反转录病毒（PERV)前病毒DNA，评估超高压脱细胞方法对以猪内源性反转录病毒为代表的病原微生物的杀灭效果。 结果：①血管壁形态结构：血管壁纤维波浪状结构保存完好，组织内的细胞均被除去。②细胞去除效果：透射电镜见细胞成分均已消失。但保留有胶原纤维和弹性纤维。扫描电镜可见细胞已被完全脱去，只剩脱细胞支架。③病原微生物的杀灭效果：经过超高压处理，猪内源性反转录病毒被成功灭活，无法测出。而采用表面活性剂脱细胞组无法将猪内源性反转录病毒灭活。④ DNA含量：超高压脱细胞处理前，血管中DNA含量为（31.7±3.5）mg/L; 超高压脱细胞处理后，DNA含量为(1.16±0.23) mg/L,DNA含量显著降低（P < 0.01）,提示超高压脱细胞方法已将细胞核及内容物大部分除去。 结论：实验证明采用超高压脱细胞方法可基本除去支架内细胞成分，可以将病源微生物杀灭（将猪内源性反转录病毒成功灭活）。     

心血管支架置入后血管内皮损伤的修复与再内皮化

心血管支架置入后常发生冠状动脉无再流、急性和亚急性血栓形成、栓塞等心血管事件。在血管内皮损伤后,内皮祖细胞能归巢至损伤血管内皮局部,加快损伤血管再内皮化,抑制病理性新生内膜形成,在血管内皮损伤修复中起着重要作用。通过内皮细胞种植、内皮祖细胞动员分化、加速宿主内皮细胞的增殖迁移等途径可实现血管支架再内皮化。血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子、粒细胞集落刺激因子以及相关化学药物、抗体等均可加速血管支架再内皮化。同时,黏附蛋白、黏附多肽等能够促进内皮的黏附。支架内皮化的效果,取决于种植的内皮细胞数、细胞黏附率、贴壁细胞暴露于血流后的保留率,其中如何提高内皮细胞的黏附率,是目前最需要解决的问题。     

血管内皮生长因子/纳米晶胶原基骨缓释系统与人骨髓间充质干细胞的体外生物相容性

背景：利用载体或缓释系统负载生长因子,既能保护生长因子的生物活性,又可以使生长因子缓慢释放,从而持续促进细胞生长及组织修复再生,是目前控制释放载体材料应用研究的方向之一。 目的：观察血管内皮生长因子/纳米晶胶原基骨缓释系统的体外缓释效果及与种子细胞的生物相容性。 方法：人骨髓间充质干细胞经体外诱导培养、扩增后种植于血管内皮生长因子+肝素/纤维连接蛋白+纳米晶胶原基骨支架(实验组)和单纯的纳米晶胶原基骨支架(对照组)行体外培养。测定缓释支架材料上血管内皮生长因子的释放量和持续时间;种植细胞后细胞的黏附率;培养3,7,10,14 d时支架材料中细胞数、碱性磷酸酶活性以及细胞在材料上的生长状况。 结果与结论：①该缓释支架具有一定的血管内皮生长因子缓释效果,持续时间可达14 d。②第3代人骨髓间充质干细胞经成骨诱导培养,可表达成骨细胞表型：碱性磷酸酶细胞化学染色、I型胶原免疫荧光染色均为阳性。③体外实验显示该缓释支架与人骨髓间充质干细胞具有优良的生物相容性：相同时间点实验组的细胞黏附率、支架上细胞数量及细胞碱性磷酸酶活性均明显高于对照组;扫描电镜发现两组材料上均有细胞生长,但实验组的细胞生长状况明显好于对照组。 关键词：血管内皮生长因子;肝素;纤维连接蛋白;纳米晶胶原基骨;人骨髓间充质干细胞 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.25.019     

以肝素固化脱细胞支架构建的小口径抗凝人工血管

背景：目前临床上直径< 6 mm的小口径人工血管因生物相容性差、远期通畅率低，使用效果并不理想。 目的：通过对脱细胞血管支架表面固化肝素，制备一种具有抗凝血功能的小口径生物人工血管。 设计、时间及地点：细胞学、组织病理学体外观察，于2005-12/2007-12在鼓楼医院实验室完成。 材料：普通成年杂种犬8只，雌雄不限，体质量约20 kg。 方法：采用去污剂-酶消化法制备犬颈动脉脱细胞支架，并将肝素分子交联至支架表面。将制备的肝素固化血管和脱细胞血管基质植入犬颈动脉进行异体血管移植实验。 主要观察指标：通过血小板黏附实验和细胞接触实验评价其血液、生物相容性能；经异体血管移植实验观察其早期血栓形成情况。 结果：脱细胞支架细胞成分去除完全，而胞外基质保留完整；经肝素固化后具有良好的抗凝血性能，细胞接触实验未显示细胞毒性；植入异体犬颈动脉1个月后，发现肝素固化组移植血管均维持通畅，而植入单纯脱细胞血管基质者因血栓形成而闭塞。 结论：对同种异体脱细胞血管支架进行表面肝素固化，可获得一种具有良好生物相容性和血液相容性的小口径人工血管。     

脱细胞血管基质制备及体内外生物相容性

背景：利用脱细胞血管基质作为血管支架具有以下优点：脱细胞血管基质保留了自然血管的复杂三维结构;脱细胞基质表面的生长因子和结构域有利于细胞的黏附和浸润。 目的：制备脱细胞血管基质并对其体内外生物相容性进行评价。 方法：采用胰蛋白酶、Triton X-100逐步处理猪颈动脉制备脱细胞血管基质。采用皮下植入实验、急性毒性实验和体外细胞毒性实验等评价其生物相容性。 结果与结论：脱细胞基质材料具有良好的化学稳定性,未释放对红细胞产生破坏溶解作用的有害元素,未引起急性溶血反应,对细胞的生长无毒性影响。脱细胞基质材料在动物体内植入后早期有较多炎性细胞浸润,到实验观察的后期无明显炎性细胞浸润,脱细胞基质内可见成纤维细胞。另外,脱细胞基质材料对周边组织未产生毒性作用,伤口Ⅰ期愈合。同时组织学切片显示：支架材料与周边组织相容性好,未产生排斥反应。说明脱细胞基质材料在动物体内具有很好的生物相容性。 关键词：血管支架;生物相容性;生物材料;脱细胞血管基质;相容性 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.16.010     

去细胞同种异体神经支架种植许旺细胞的体外培养

摘要 背景：前期的研究中分别探讨了使用复合酶消化法及差速贴壁法对许旺细胞培养的影响以及聚氧乙烯辛烷基酚(Triton X-100)制备同种异体神经支架。 目的：通过化学萃取法制备同种异体神经支架,并将培养的许旺细胞与支架进行体外结合培养。 方法：取Wistar大鼠双侧坐骨神经,运用30 g/L三硝基甲苯和40 g/L脱氧胆酸钠分别萃取1,2和3次,在萃取神经和未萃取神经的中段取材,行苏木精-伊红染色,S-100及Laminin免疫组织化学染色及透射电镜检测。取SD胎鼠坐骨神经及臂从神经,使用复合酶消化,差速贴壁及Arab-c抑制成纤维细胞生长的培养方法获得大量高纯度的许旺细胞。再把许旺细胞注入同种异体神经支架内,并行透射电镜及扫描电镜观察。 结果与结论：用三硝基甲苯和脱氧胆酸钠萃取后,坐骨神经内细胞和髓鞘被清除,神经基底膜被保留。电镜下可见萃取后的神经由空的神经基底膜管和管之间的胶原纤维构成。萃取次数增加后,神经内残留的S-100蛋白显著减少,但反复萃取后支架结构受破坏。去细胞同种异体神经支架适合许旺细胞体外生长,并有迁移排成行的特性。结果提示,用三硝基甲苯和脱氧胆酸钠萃取2次可去除细胞而保留神经基底膜管,是制备具有仿生结构神经支架的理想方法。神经支架种植许旺细胞后可能成为一种理想的神经缺损修复材料。     

碱性成纤维细胞生长因子对许旺细胞在小肠黏膜下层支架上黏附及增殖的影响*☆◆

摘要 背景：许旺细胞复合小肠黏膜下层是构建人工神经的可行方法,碱性成纤维细胞生长因子有促进许旺细胞增殖的作用。 目的：验证碱性成纤维细胞生长因子对许旺细胞在小肠黏膜下层支架材料表面的细胞增殖及黏附状态的影响。 方法：将体外分离培养的2代SD乳鼠许旺细胞接种于小肠黏膜下层支架材料上并加入50 μg/L的碱性成纤维细胞生长因子复合培养为实验组,以单纯的许旺细胞复合小肠黏膜下层作为对照组,分别用MTT法测定细胞增殖能力,细胞黏附率检测细胞在支架上的黏附情况,用流式细胞仪测定细胞分裂周期,并用苏木精-伊红染色及描电镜观察细胞形态及与材料的贴附情况。 结果与结论：MTT显示实验组的细胞增殖吸光度值明显高于对照组(P < 0.05),实验组的细胞黏附率为(69.47±3.17)%,对照组为(44.58±1.76)%(P < 0. 05),细胞周期显示实验组比对照组的G2/M+S期细胞百分含量高(P < 0.05),培养7 d后的苏木精-伊红染色及扫描电镜显示实验组比对照组材料上聚集的细胞数量多,细胞形态伸展更明显,细胞贴附力更好。因此碱性成纤维细胞生长因子可明显地改善许旺细胞在小肠黏膜下层上的增殖及黏附能力,能促进许旺细胞与小肠黏膜下层支架的复合而构建人工神经导管。 关键词：碱性成纤维细胞生长因子;许旺细胞;小肠黏膜下层;增殖;黏附 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.21.007     

5000/等离子体处理脱细胞血管支架血液相容性研究

目的 研究兔腹主动脉脱细胞支架等离子体处理后血液相容性的改变。 方法 酶解方法制备兔腹主动脉脱细胞支架，利用等离子体处理引发脱细胞支架表面改性，通过光镜观察兔腹主动脉脱细胞支架等离子体处理前后结构的变化；电镜观察处理前后支架表面形态的改变；通过表面接触角仪测定两组支架表面的亲水性；血小板黏附实验观察处理前后支架表面血液相容性。 结果 兔腹主动脉脱细胞处理后，光镜和电镜检测见血管壁保留胶原纤维和弹力纤维，未见明显细胞残留；兔腹主动脉脱细胞支架等离子体处理前后光镜检测未见明显异常，电镜检测见脱细胞支架表面呈沟槽样，沟槽间表面光滑，经等离子体处理后表面仍呈沟槽样，但沟槽间表面粗糙；兔腹主动脉脱细胞支架经等离子体处理后接触角明显减小，统计学有差异（p＝0.00）；血小板黏附实验中，脱细胞血管组见多量血小板黏附，而等离子体处理脱细胞支架组有相对较少血小板黏附。 结论 兔腹主动脉脱细胞支架通过等离子体处理后，具有良好的亲水性和抗凝血性。     

可降解性聚乙醇酸血管外支架抑制移植静脉内膜的增生

背景：冠状动脉旁路移植后,自体大隐静脉桥的再狭窄是急需解决的问题。国内外研究已表明,应用血管外支架是预防再狭窄的一种可行办法。 目的：以犬双侧后腿股静脉-股动脉旁路移植动物模型为基础,观察可降解性聚乙醇酸血管外支架抑制移植静脉内膜增生的作用。 方法：24只草犬随机抽签法分为3组,对照组直接进行双侧后腿股动脉移植,聚乙醇酸外支架组移植静脉后外套聚乙醇酸外支架,涤纶外支架组移植静脉后外套非限制性非可降解材料(涤纶)外支架。移植后4,6周取出移植静脉,测量其内膜、中膜的厚度。同时检测增殖细胞核抗原与血管内皮生长因子,计算其细胞增殖情况与滋养血管生长情况。 结果与结论：聚乙醇酸外支架和涤纶外支架均与移植静脉壁之间形成了富含毛细血管的新生外膜,移植静脉中膜及内膜厚度均小于对照组(P < 0.05);中膜血管内皮生长因子表达显著降低(P < 0.05),而外膜血管内皮生长因子表达显著增高(P < 0.05),中膜增殖细胞核抗原表达显著降低(P < 0.05)。聚乙醇酸外支架组移植静脉中膜及内膜厚度小于涤纶外支架组(P < 0.05),增殖细胞核抗原阳性细胞数低于涤纶外支架组(P < 0.05)。提示可降解性聚乙醇酸血管外支架在血管移植后可以明显抑制移植静脉内膜和中膜增生,进而预防移植静脉再狭窄,是一种良好的可用于抑制移植血管再狭窄的外支架材料。     

心血管支架与支架置入后的血管快速内皮化

血管支架已被广泛应用于临床治疗心血管疾病,但由此产生的并发症也日益显露出来，支架置入后血管内皮化是影响支架材料与人体生物相容性的关键因素。支架置入后血管内皮功能异常，引发内皮层剥脱，导致血小板聚集、炎症反应、血管平滑肌细胞增殖迁移、细胞外基质形成等一系列病理反应，造成支架内再狭窄，因此促进血管内皮细胞损伤、修复及功能改变在支架内再狭窄中起着重要作用。为了进一步了解所选用的支架置入人体后如何发生快速的血管内皮化反应及寻找如何解决支架置入后血管内皮化的途径，文章通过检索大量文献，来对支架置入后的快速血管内皮化进行探讨分析，以寻求较好的解决途径。     

碱性成纤维细胞生长因子促进冻干肌腱移植重建前交叉韧带的早期血管生成：组织学表现

背景：以往实验已证实碱性成纤维细胞生长因子在体内外均有促新生血管形成的作用。冻干法可以减低移植物的抗原性，经冻干处理后的移植物保存时间长并且运输方便，更容易商品化。冻干肌腱补充活性细胞生长因子有望加速新血管的生成。 目的：拟验证碱性成纤维细胞生长因子促进冻干肌腱移植重建前交叉韧带后早期血管的生成作用。 设计、时间及地点：对照观察动物实验，于2006-06/2007-06在解放军第四军医大学西京医院骨科研究所完成。 材料：选用健康成年家犬14只。 方法：取2只犬，无菌手术取其双下肢伸趾长肌腱16条，冻干处理后供实验用。将其余12只犬左、右侧膝关节分别移植单纯冻干肌腱和复合100 μg/L碱性成纤维细胞生长因子后冻干肌腱重建前交叉韧带。 主要观察指标：分别于移植后1，2，3，4，5，6周取材，每次取2只。进行苏木精-伊红染色，通过图像分析仪定性观察新生血管的生成情况。 结果：复合碱性成纤维细胞生长因子冻干肌腱组移植后两三周出现新生血管，四五周达到高峰；单纯冻干肌腱组移植后四五周出现新生血管。复合碱性成纤维细胞生长因子冻干肌腱组新血管长入肌腱的时间先于对照组，深度深于对照组。 结论：复合100 μg/L碱性成纤维细胞生长因子的冻干肌腱移植重建前交叉韧带后，在新血管形成的时间及长入肌腱的深度方面均优于单纯冻干肌腱。     

三种组织工程鼓膜支架材料的生物相容性

背景：自体组织修复鼓膜穿孔存在增加手术创伤、取材有限等缺点，构建组织工程鼓膜是鼓膜穿孔治疗的发展方向。 目的：构建3种不同材料的组织工程鼓膜支架材料，并评价其生物相容性。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，细胞学体内观察，于2004-08/2005-02在解放军第四军医大学组织工程中心完成。 材料：将健康小猪的硬脑膜、真皮及人羊膜进行脱细胞处理。 方法：将预先培养的豚鼠鼓膜成纤维细胞种植于3种材料表面，观察成纤维细胞的生长状态；18只豚鼠随机分为3组，于右侧背皮下分别埋植制备的脱细胞硬脑膜、真皮及人羊膜。 主要观察指标：3种脱细胞生物支架材料的显微结构及组织相容性。 结果：3种脱细胞材料均为网状结构，无任何细胞及细胞残核存在；豚鼠鼓膜成纤维细胞能够很好地贴附于3种脱细胞材料生长，无细胞毒性；将3种组织材料分别埋植于豚鼠皮下后，无埋植材料排出现象，1周时植入材料周围有较明显炎症反应，其中以脱细胞真皮周围组织反应较轻，4周时炎症反应消失。 结论：通过脱细胞方法可以成功建立具有良好生物相容性的组织工程鼓膜支架材料；3种材料中以脱细胞猪真皮的生物相容性最佳。     

重组胸腺素β4通过调节血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子促进皮肤创伤愈合

背景：由于机体自身修复愈合的能力极其有限，一旦发生损伤或者病变很难自愈。近年来，胸腺素β4促进创伤愈合的作用受到关注，为创伤愈合药物的研究提供了一个新方向。 目的：通过制作大鼠皮肤全层创伤模型，观察局部给予重组胸腺素β4对创面血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子表达的调节作用，并分析其剂量效应。 设计、时间及地点：细胞因子水平的随机对照动物实验，于2007-03/2008-01在南开大学医学院解剖教研室完成。 材料：胸腺素β4由北京诺思兰德生物技术有限公司提供。 方法：纳入雄性SD大鼠60只，采用直径8 mm的自制打孔器在大鼠脊柱两侧脊肋角处各制备1个全层皮肤缺损模型。将大鼠随机分为胸腺素β4 40，120，360 mg/L组及对照组，每组15只。分别于模型制备后即刻、每天早7：00、晚7：00给每个伤口表面滴加相应剂量的胸腺素β4 50 μL及等量磷酸盐缓冲液。 主要观察指标：于造模后2，4，7 d，每组每时相点取5只大鼠背部全层皮肤标本行苏木精-伊红和三原染色观察组织形态学变化，采用免疫组织化学法检测血管内皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子的表达。 结果：创面组织形态观察结果示，与对照组相比，胸腺素β4各剂量组造模后毛细血管增多，成纤维细胞、胶原纤维、网状纤维增多，排列较规则，以胸腺素β4 120 mg/L组最明显。胸腺素β4处理后4 d血管内皮生长因子表达最多，造模后7 d表达减少，胸腺素β4 120 mg/L组血管内皮生长因子表达强度保持在较高水平，阳性血管面积大于 40，360 mg/L组(P < 0.05~0.01)。胸腺素β4 120 mg/L组造模后2 d碱性成纤维细胞生长因子表达较强，造模后4，7 d表达逐渐减弱(P < 0.01)。 结论：实验中120 mg/L胸腺素β4可使血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子持续稳定较高表达。在愈合早期促进血管再生，促进肉芽组织生长和成纤维细胞的增殖、分化，在愈合晚期，下调血管内皮生长因子的表达，同时抑制碱性成纤维细胞生长因子过度表达。     

体内胶原网架生物学转归中碱性成纤维细胞生长因子的表达

摘要 背景：脱细胞真皮基质作为一种新型的真皮替代物,用于组织缺损的修复,但对于脱细胞真皮基质在长期生物学转归过程中碱性成纤维细胞生长因子的表达变化规律,国内外尚未见相关报道。 目的：观察体内胶原网架长期生物学转归中碱性成纤维细胞生长因子的表达变化规律。 方法：选用成年雄性Wistar大鼠21只用于制备脱细胞真皮基质。取84只大鼠,于脊柱左侧作一深至深筋膜表面、面积为2.5 cm×2.5 cm的创口,回植脱细胞真皮基质至成年雄性Wistar大鼠背部皮下,以对侧正常皮肤做对照。于术后3,5,7,10 d,2,3,4,6,8,10周,4,6,8,10个月取材,采用免疫组织化学方法检测碱性成纤维细胞生长因子的表达。 结果与结论：碱性成纤维细胞生长因子3 d时开始出现阳性表达,并于10 d达到峰值,4周后趋于稳定,8周后各组未见明显变化,与正常皮肤表达一致。提示在脱细胞真皮基质长期的生物学转归过程中,脱细胞真皮基质的改建首先从周边开始逐渐向中央迁移,并于6~8周后改建趋于稳定,被视为自身组织,并参与机体正常组织代谢过程。 关键词：碱性成纤维细胞生长因子;脱细胞真皮基质;吸光度;免疫组织化学;转归 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.47.020     

国产颅内血管内支架组织相容性研究

目的探讨国产血管内支架对血管壁的影响。方法在7只体重为28～37 kg的杂交香猪的上颌动脉或舌动脉内放置国产Q/TETA15-2002不锈钢颅内血管内支架,于放置后的第1、3、5、7个月取材,采用光镜及扫描和透射电镜,观察支架表面被覆的新生内膜及血管壁组织相容性。结果支架放置后第1、3、5、7个月未观察结果: (1)大体所见支架置入后被完全包裹,内膜层增厚,由新生内皮及胶原纤维覆盖;(2)光镜下见支架金属丝侧平滑肌细胞增生明显,未见以单核巨噬细胞浸润为特征的组织变性、坏死、变态反应性炎症现象;(3)电镜下可见新生内皮及胶原纤维覆盖支架;(4)血管内支架置入后血管损伤修复造成血管内径损失百分比有降低趋势。结论国产Q/TE- TA15-2002不锈钢颅内血管内支架组织相容性好,血管内壁表面光滑,未见血栓形成,血管内径损失程度低。