P型谷胱甘肽转硫酶基因多态性与帕金森病遗传易患性的关系

目的:阐明Ｐ型谷胱甘肽转硫酶(ＧＳＴＰ１)基因多态性与易患帕金森病之间的关系。方法:帕金森病组:１１３例;对照组:７７例,两组人员年龄与性别是基本匹配。利用聚合酶链反应．限制性片断长度多态性技术检测ＧＳＴＰ１基因多态性。结果:经二值多元Ｌｏｇｉｓｉｔｉｃ回归分析,帕金森病组ＧＳＴＰ１的等位基因Ａ和基因型Ａ/Ａ的频率均高于对照组,且罹患帕金森病的危险率比对照组增加２．１６倍。结论:本研究结果提示ＧＳＴＰ１的基因多态性可能与帕金森病的遗传易患有关。     

硫化氢／3-巯基丙酮酸转硫酶在癫痫患者颞叶中的表达

目的探讨硫化氢(H_2S)/3-巯基丙酮酸转硫酶(3-MST)在癫痫患者颞叶中的表达。方法难治性癫痫患者(实验组)外侧颞叶标本15例,高颅压患者(对照组)内减压切除的正常外侧颞叶脑组织标本15例。检测外侧颞叶脑组织中H_2S含量,采用免疫荧光及Western blotting技术检测3-MST表达,观察H_2S/3-MST在癫痫患者外侧颞叶及高颅压患者正常外侧颞叶脑组织中的表达变化。结果实验组外侧颞叶脑组织细胞中H_2S/3-MST表达显著高于对照组,差异均具有统计学意义(均P0.05)。结论在癫痫的病理生理过程中,H_2S/3-MST的高表达可能与其在癫痫中神经保护作用相关。     

粒细胞集落刺激因子对百草枯干预小鼠黑质纹状体通路的影响

目的探讨粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对百草枯干预小鼠脑内黑质纹状体通路的影响。方法 C57BL/6小鼠随机分为百草枯组、G-CSF干预组和对照组(均n=8)。高效液相色谱分析测定纹状体多巴胺含量,同时采用免疫组化ABC法观察黑质部酪氨酸羟化酶(TH)阳性表达神经元。结果腹腔注射百草枯20 mg·kg~(-1)·d~(-1),连续5 d后,小鼠自发性活动明显减少,纹状体多巴胺含量明显减少,黑质部TH阳性表达明显减少,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05);给予G-CSF干预后纹状体多巴胺含量和黑质部TH阳性表达明显增加,与百草枯组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 G-CSF干预后小鼠纹状体的多巴胺含量升高,黑质部TH阳性表达增加,提示G-CSF对小鼠黑质纹状体通路多巴胺能神经元可能具有一定的保护作用。     

小鼠慢性暴露于百草枯对其脑线粒体呼吸链复合酶活性的影响

目的 :探讨百草枯对黑质细胞线粒体呼吸链的影响和导致黑质细胞损害的可能机制。方法 :测定通过口服途径亚慢性暴露于百草枯、MPTP或等量生理盐水的小鼠脑内线粒体呼吸链中复合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ及柠檬酸合成酶的活性。结果 :百草枯和MPTP干预组小鼠黑质部及纹状体线粒体呼吸链中复合酶Ⅰ的活性显著降低 ,额叶和小脑中该酶的活性无变化。各组小鼠黑质部、纹状体、额叶及小脑中复合酶Ⅱ、Ⅳ及柠檬酸合成酶的活性均无显著差异。结论 :百草枯透过血脑屏障后选择性地导致黑质部和纹状体中线粒体功能障碍。     

百草枯对小鼠纹状体区多巴胺D1受体信号转导的影响

目的观察百草枯对小鼠纹状体区多巴胺D1受体信号转导的影响.方法用口服百草枯的途径,建立小鼠帕金森病模型;应用液闪测定技术测定百草枯对小鼠纹状体区DARPP-32(Mr=32 000)磷酸化程度的影响.结果给予小鼠口服百草枯10 mg*kg-1*d-1连续4个月后,纹状体区DARPP-32的32P结合位点增加77.4%(P＜0.01).结论百草枯可能通过cAMP/PKA系统减弱体内DARPP-32的磷酸化程度,调节其对多巴胺D1受体信号转导途径的作用.     

百草枯对小鼠黑质纹状体通路囊泡单胺转运体2的影响

目的 :探讨囊泡单胺转运体 2 (vesicularmonoaminetransporter 2 ,VMAT2 )是否参与百草枯所致帕金森病 (Parkinson’sdisease ,PD)的发病机制。方法 :用口服百草枯的途径 ,建立小鼠PD模型 ;应用免疫组织化学和原位杂交法分别观察小鼠纹状体区VMAT2的水平和黑质部基因表达的变化。结果 :每天口服百草枯 10mg·kg-1的C5 7BL/ 6小鼠 ,2个月后自发性活动明显减少。纹状体区的VMAT2含量较口服盐水对照组减少 5 1 7% (P <0 0 1) ,黑质部VMAT2mRNA的表达降低 5 2 7% (P <0 0 1)。结论 :百草枯可造成小鼠PD样的行为表现 :黑质纹状体通路VMAT2含量和基因表达的降低 ,提示VMAT2参与了百草枯所致的PD发病机制。     

去铁胺对百草枯处理小鼠脑内多巴胺含量和氧化应激的影响

目的:探讨铁螯合剂去铁胺对百草枯干预小鼠脑内多巴胺(DA)含量和氧化应激的影响。方法:C57BL/6小鼠随机分为百草枯组、去铁胺干预组和正常对照组,高效液相色谱分析(HPLC)测定纹状体DA含量,化学比色法分别测定中脑黑质部位超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶活性(GSH-Px),以及丙二醛(MDA)含量的变化。结果:腹腔注射百草枯20mg·kg-1·d-1连续3d后,小鼠自发性活动明显减少,纹状体DA含量明显减少,黑质部SOD和GSH-Px的活性明显下降,MDA含量明显升高,与正常对照组比差异有统计学意义(P<0.05);给予去铁胺干预后小鼠纹状体DA含量和黑质部SOD和GSH-Px的活性明显增加,MDA含量明显降低,与百草枯组比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:去铁胺干预后使小鼠纹状体的DA含量升高,氧化应激程度减轻。提示去铁胺对小鼠黑质纹状体通路DA能神经元可能具有一定的保护作用。     

百草枯对小鼠黑质多巴胺能神经元的选择性损害

目的:探讨百草枯对黑质部多巴胺能神经元的损害是否具有选择性。方法:用口服百草枯的途径,建立小鼠帕金森病模型;应用原位杂交技术观察DAT和VMAT2在不同脑区的mRNA表达水平并测定两者的比值,采用细胞计数观察百草枯干预后多巴胺能神经元的损害。结果:在黑质部DATmRNA和VMAT2mRNA的比值最高;在红核和下丘脑室旁核区域DATmRNA与VMAT2mRNA的比值和黑质部相比较低(P<0·01)。百草枯干预后黑质部的多巴胺能神经元减少37·7%;红核和下丘脑室旁核区的多巴胺能神经元分别减少12·2%和13·1%。结论:百草枯对黑质部多巴胺能神经元的损害具有相对选择性,其原因可能与黑质部DATmRNA和VMAT2mRNA的比值高有关。     

大鼠脑出血早期脑组织神经元型一氧化氮合酶mRNA表达及中药抵当汤干预对其的影响

目的 探讨大鼠脑出血（ICH）早期脑组织神经元型一氧化氮合酶（nNOS）mRNA表达,以及中药抵当汤干预对其的影响。方法 将72只大鼠随机分为ICH组、抵当汤组、NOS抑制剂组和对照组,采用立体定向技术注入自体不凝血建立实验性ICH模型,对照组注入等量的生理盐水;术后6h、24h及72h用Bederson3级标准法对大鼠进行神经功能障碍评定;然后断头取脑,以原位杂交方法检测脑组织中nNOS mRNA阳性细胞的表达。结果 神经功能缺损程度评分术后72h时ICH组与抵当汤组均见明显改善（均P〈0.05）,但抵当汤组的改善明显优于ICH组（P〈0．05）;ICH后6h血肿侧大脑皮质nNOS mRNA阳性细胞的表达较对照组已有明显增高,24h达高峰,72h时下降,但仍明显高于对照组（均P〈0．05）;抵当汤组血肿侧大脑皮质nNOS mRNA阳性细胞表达在各时间点较ICH组明显减少（均P〈0．05）,且与NOS抑制剂组变化规律一致。结论 抵当汤具有与NOS抑制剂相似的作用,通过抑制ICH后脑组织中nNOS mRNA的表达而产生脑保护作用。     

百草枯对PC12细胞的活化素和受体ⅡA表达的影响

目的:观察百草枯对PC12细胞的活化素不同亚基和受体表达的影响。方法:将百草枯加入体外培养的PC12细胞中,用RTPCR法检测细胞的活化素βAmRNA、βBmRNA、抑制素αmRNA和受体ⅡAmRNA表达水平的变化,并以锥虫蓝排斥法检测细胞活力的变化。结果:百草枯损害后PC12细胞的活化素βAmRNA、βBmRNA和受体ⅡAmRNA表达水平明显下调,抑制素αmRNA的表达水平无明显变化。细胞活力在百草枯损害后12和24h下降。结论:百草枯可能通过引起PC12细胞的活化素和受体表达水平的下调,而导致细胞的损害。     

百草枯诱导小鼠α-突触核蛋白表达升高并聚集的实验研究

目的观察除草剂百草枯诱导小鼠黑质细胞α-突触核蛋白(α—synuclein，α-syn)表达及聚集，探讨环境因素在帕金森病(Parkinsondisease，PD)发病中的作用机制。方法C57BL小鼠按体重10mg／kg经腹腔注射百草枯，应用原位杂交、RT—PCR分析α—syn mRNA表达．免疫组化、免疫荧光双标染色观察黑质区α—syn显色．并进一步确定表达rsyn的神经元表型及α—syn聚集。结果注射百草枯组小鼠黑质区α—syn mRNA表达量升高，rsyn阳性细胞数相对增加；rsyn与硫磺素、酩氨酸羟化酶(tyroxine hydroxylase，TH)及硫磺素复合染色的阳性细胞数均升高。结论百草枯诱导小鼠黑质细胞α—syn表达升高并出现蛋白聚集可能是导致PD发病的机制之一。     

Peripheral Lipopolysaccharide Administration Induces Cytokine mRNA Expression in the Viscera and Brain of Fever-Refractory Mice Lacking Microsomal Prostaglandin E Synthase-1

We examined the expression of interleukin (IL)-1β, IL-6 and tumour necrosis factor (TNF) α in mice lacking microsomal prostaglandin E synthase-1 (mPGES-1), which neither produce prostaglandin E₂, nor mount a febrile response upon immune challenge. Intraperitoneal lipopolysaccharide (LPS) injection resulted in a strongly induced expression of all three cytokines in the brain and viscera, similar to wild-type animals. Several brain regions additionally showed modest induction of receptors for these cytokines in both genotypes. Telemetric recordings of body temperature showed that the mPGES-1 deficient mice remained afebrile upon LPS challenge, in contrast to the prominent fever displayed by the wild-type mice. These data demonstrate that LPS-induced cytokine expression occurs independently of prostaglandin E₂, and imply that endogenously expressed IL-1β, IL-6, and TNFα are not pyrogenic per se , supporting the role of prostaglandin E₂ as the final and obligatory mediator of LPS-induced fever.     

百草枯所致帕金森病小鼠黑质纹状体通路多巴胺转运体减少

目的 :探讨多巴胺转运体 (dopaminetransporter ,DAT)是否参与百草枯所致PD的发病机制。方法 :用口服百草枯的途径 ,建立小鼠帕金森病模型 ;应用免疫组织化学和原位杂交方法分别观察小鼠纹状体区DAT的水平和黑质部基因表达的变化。结果 :每天口服百草枯 10mg·kg-1的C5 7BL/6小鼠 ,2个月后自发性活动明显减少。纹状体区的DAT含量较口服盐水对照组减少 42 % (P <0 0 1) ,黑质部DATmRNA的表达降低 3 7 2 % (P <0 0 1)。结论 :百草枯可造成小鼠帕金森病样的行为表现。黑质纹状体通路DAT含量和基因表达的降低 ,提示DAT参与了百草枯所致的帕金森病发病机制     

血管性痴呆小鼠海马NMDA受体mRNA表达特征及石杉碱甲的影响

目的　观测石杉碱甲对血管性痴呆小鼠海马神经元N-甲基D-天门冬氨酸受体原位杂目的　观测石杉碱甲对血管性痴呆小鼠海马神经元N-甲基D-天门冬氨酸受体原位杂交变化的影响,以探讨其在血管性痴呆发病中的作用及石杉碱甲干预作用的机制。方法　双侧颈总动脉线结,反复缺血-再灌注法制备模型,药物组用石杉碱甲溶液灌胃,跳台试验和水迷宫试验观测其行为学改变,采用原位杂交技术观测小鼠海马神经元 N-甲基 D-天门冬氨酸受体的表达变化。结果　石杉碱甲组小鼠学习、记忆成绩优于模型组(P < 0.01),其海马 N-甲基 D-天门冬氨酸受体 mRNA表达也明显增高(P <0.01)。结论　石杉碱甲改善血管性痴呆小鼠学习、记忆成绩与其恢复海马低水平的N-甲基D-天门冬氨酸受体mRNA有关。     

小鼠亚慢性暴露于百草枯后产生帕金森病样表现

目的 :观察成年C5 7b1小鼠较长时间口服百草枯对其黑质纹状体系统的影响。方法 :将 48只成年C5 7b1小鼠随机分为 3组 ,每组 16只。MPTP组 :喂食MPTP 2 0mg·kg-1;百草枯组 :喂食百草枯 10mg·kg-1;对照组 :喂食等量生理盐水。每组小鼠每日喂食相应的毒物或生理盐水 ,共 2个月。观察小鼠的自发性行为、黑质部多巴胺能神经元以及纹状体中多巴胺、5 HT及其代谢产物含量的变化。结果 :MPTP 2 0mg·kg-1体重组及百草枯 10mg·kg-1体重组C5 7BL小鼠的自发性活动减少、纹状体中DA及其代谢产物含量降低、中脑黑质细胞数量减少。结论 :成年C5 7BL小鼠长期口服大剂量的百草枯可产生类似于帕金森病的行为 ,黑质纹状体也发生相应的生化病理改变