束缚应激对Pg-LPS诱导的大鼠腹腔 巨噬细胞释放细胞因子的影响

目的：检测束缚应激对牙龈卟啉菌内毒素（路LPS）诱导的大鼠腹腔巨噬细胞释放IL-IB、IL-2、IL-6、IL-10等细胞因子的影响，初步探讨应激影响牙周疾病的机制。方法：采用束缚应激方式，将大鼠随机分为正常对照组、应激组，于应激结束时处死，常规收集腹腔液。巨噬细胞于贴壁纯化后用RPMI-1640培养液，RPMI-1640培养液＋1μg／mLPg-LPS继续培养。于24h后分别收集上清，用Luminexl00检测仪测定上清液中IL-IB、IL-2、IL-6、IL-10等的水平。结果：①12d应激组大鼠腹腔巨噬细胞数量较无应激组及1d应激组显著下降。②1天应激组各细胞因子水平与无应激组比较均无显著差异。12d应激组的IL-18水平比无应激组显著增加（P〈0．05）、IL-6水平比无应激组显著降低（P〈0．05）；IL-2水平比1天应激组显著降低（P〈0．05）。IL-10在各组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：慢性束缚应激可引起大鼠腹腔巨噬细胞总量减少；慢性束缚应激可改变应激宿主对牙龈卟啉单胞菌感染的反应，这可能是慢性应激引起牙周疾病的机制之一。     

釉基质衍生物对脂多糖作用下牙周膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的研究釉基质衍生物（enamel matrix derivatives,EMD）对牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide,Pg-LPS）作用下的人牙周膜成纤维细胞（human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs）增殖和凋亡的影响。方法从正畸治疗需拔除的前磨牙中,分离培养人hPDLFs,传至第4代;实验组培养液中分别加入100μ/mLEMD、10μg／,mL Pg-LPS或者100μ/mL EMD＋10 μg／mL Pg-LPS,对照组不加入刺激物;以四甲基偶氮唑盐[3-（4,5-dimethy1-2-thiazolyl）-2,5-diphenyl．2H-tetrazoliumbromide,MTT]法检测hPDLFs的增殖,采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法分析细胞凋亡。结果原代hPDLFs生长良好,加入刺激后第3天时,第4代hPDLFs的Mrrr值由高至低分别是：EMD组、对照组、EMD＋LPS组、LPS组。刺激48h后,LPS组凋亡率（12．10％±2．80％）大于EMD＋LPS组（8．07％±2．04％）、EMD组（3．68％±1．73％）和对照组（3．87％±1．27％）（P〈0．05）。结论EMD能减弱Pg-LPS对hPDLFs增殖的影响,并且降低Pg-LPS所导致的hPDLFs凋亡,可能是其促进牙周组织再生的重要机制。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对高脂血症兔腹腔巨噬细胞炎症相关因子基因表达的影响

目的 比较牙龈卟啉单胞菌脂多糖(Porphyromonas gingivalis on lipopolysaccharide,Pg-LPS)对健康和高脂血症兔腹腔巨噬细胞炎症相关因子基因表达的影响.方法 将健康新西兰兔12只随机分为2组,分别给予普通饲养喂养(健康兔)和高脂饲料喂养,6周后建立高脂血症模型(高脂兔).采用腹腔灌洗法分别获得健康和高脂兔巨噬细胞,将健康和高脂兔巨噬细胞均随机分为对照组、Pg-LPS组(1μg/mL)及阳性对照组大肠杆菌-脂多糖(Escherichia,E.coli-LPS)组(1μg/mL),24 h后采用实时PCR法分别检测各组巨噬细胞中C-反应蛋白(C-reaction protein,CRP)、白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素6(interleukin-6,IL-6)、白介素8(interleukin-8,IL-8)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)mRNA的表达水平.结果 高脂兔对照组巨噬细胞的CRP、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平高于健康兔对照组巨噬细胞;相较于对照组,高脂兔和健康兔Pg-LPS组巨噬细胞的CRP、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α表达均升高,且高脂兔Pg-LPS组巨噬细胞以上因子的表达水平高于健康兔Pg-LPS巨噬细胞(P<0.05).结论 Pg-LPS可增强高脂血症兔巨噬细胞炎症相关因子mRNA的表达.     

RPMI-1640和DMEM／F12培养基对大鼠颈环上皮细胞培养的比较研究

目的：比较大鼠颈环上皮细胞在不同培养基中的生长状况。方法：分离培养大鼠颈环上皮细胞,分别采用RPMI-1640和DMEM／F12两种培养基培养,用倒置显微镜观察细胞的生长状态,MTT比色法检测细胞增殖活性。结果：倒置显微镜下,两组细胞在接种24h后细胞大量贴壁并伸展,14d时RPMI-1640组细胞呈现明显的凋亡现象,DMEM／F12组细胞生长状态良好。两种方法培养的颈环上皮细胞增殖活性差异有显著性意义∽〈0．05）。结论：DMEM／F12培养基较RPMI-1640更适合颈环上皮细胞的贴壁及增殖。     

IL-10对Pg-LPS刺激下兔枯否氏细胞凋亡的影响

目的:探讨IL-10对Pg-LPS刺激下兔枯否氏细胞凋亡的影响。方法:新西兰兔3只,收集枯否氏细胞(Kupffer cell,KC),分为空白对照组:RPMI1640+KC,Pg-LPS组:1mg/LPg-LPS+KC,IL-10+Pg-LPS组:0.1mg/L IL-10+1mg/L Pg-LPS+KC,刺激24h后,荧光定量PCR法检测凋亡相关基因Caspase-3、Fas、p53的表达量。结果:1mg/L Pg-LPS可促进兔KC的凋亡,Caspase-3、Fas、p53表达量增多(P<0.05);IL-10干预处理可减少兔KC的凋亡,抑制Caspase-3、Fas的表达(P<0.05),但对p53的表达无明显作用。结论:Pg-LPS可通过外源性/内源性凋亡途径导致兔KC凋亡,而IL-10可能主要通过抑制外源性死亡受体途径从而达到抑制KC凋亡的作用。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖刺激巨噬细胞表达髓样细胞触发受体-1的研究

目的 探索牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Pg-LPS）刺激的巨噬细胞中髓样细胞触发受体-1（TREM-1）、可溶性TREM-1（sTREM-1）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达,探讨TREM-1与牙周炎发病机制的可能关联。方法 使用豆蔻酰佛波醇乙酯诱导人单核细胞系细胞THP-1分化为巨噬细胞,分别予以0（空白对照）、0.5、1.0 μg·mL ^-1的Pg-LPS刺激,并根据不同时间分组：孵育4、6、12、24 h组。实时定量聚合酶链反应检测巨噬细胞中TREM-1 mRNA的表达,Western blot分析TREM-1蛋白表达的差异,细胞免疫荧光染色检测TREM-1在巨噬细胞中的表达部位,并通过酶联免疫吸附试验对细胞培养液中的sTREM-1及TNF-α进行检测。结果 与空白对照组相比,Pg-LPS刺激巨噬细胞后TREM-1 mRNA、TREM-1蛋白及细胞培养上清液中的sTREM-1表达均显著增强（P<0.05）;1.0 μg·mL ^-1 Pg-LPS组TREM-1 mRNA、TREM-1蛋白及细胞培养上清液中的sTREM-1表达量高于0.5 μg·mL ^-1组,且分别从6、4、4 h时间点开始差异具有统计学意义（P<0.05）;细胞免疫荧光染色结果显示,Pg-LPS（1.0 μg·mL ^-1）刺激巨噬细胞24 h后,可见TREM-1蛋白呈阳性染色,且TREM-1的染色部位主要位于巨噬细胞的细胞膜区域;Pg-LPS刺激巨噬细胞后TNF-α的分泌水平升高（P<0.05）,其中1.0 μg·mL ^-1 Pg-LPS组表达量高于0.5 μg·mL ^-1组,且从12 h开始差异具有统计学意义（P<0.05）;0.5 μg·mL ^-1 Pg-LPS刺激巨噬细胞后TREM-1 mRNA、TREM-1蛋白、sTREM-1间表达呈正相关（r=1,P<0.05）,但与TNF-α表达不存在相关性;在1.0 μg·mL ^-1 Pg-LPS刺激巨噬细胞后检测到了具有统计学意义的sTREM-1与TNF-α表达的正相关性（r=1,P<0.05）。结论 巨噬细胞受到Pg-LPS刺激后可出现Pg-LPS浓度依赖性的TREM-1 mRNA、TREM-1蛋白及细胞培养上清液中的sTREM-1表达上调,且能观测到三者之间表达的正相关性;同时细胞培养上清液中的TNF-α也出现Pg-LPS浓度依赖性的表达上调,在高浓度Pg-LPS（1.0 μg·mL ^-1）刺激下与sTREM-1表达量呈正相关。该结果提示,TREM-1作为促炎受体蛋白,可能通过调节巨噬细胞TNF-α的表达来实现牙周炎发展的促进作用。     

牙龈卟啉单胞菌脂多糖对髓系细胞触发受体的激活作用

目的:研究牙龈卟啉单胞菌(Pg)脂多糖(LPS)对巨噬细胞中髓系细胞触发受体-1(TREM-1)和-2的激活作用。方法:分离培养小鼠腹腔巨噬细胞,并以1 mg/L的Pg-LPS刺激。采用实时荧光定量PCR技术检测TLR-2、TLR-4、TREM-1和TREM-2转录水平的变化,流式细胞术检测蛋白水平的变化,酶联免疫反应检测培养液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和巨噬细胞炎症蛋白-lα(MIP-lα)水平的变化。 结果:Pg-LPS刺激巨噬细胞2 h后,巨噬细胞内TLR-2和TREM-1的转录水平均表达上调;流式细胞检测显示24 h后,细胞内TREM-1和TLR-2水平显著上调;TLR-4和TREM-2在实验中未见显著变化;Pg-LPS刺激巨噬细胞24 h后,TNF-α和MIP-1α水平显著上升组;TREM-1的抑制物LP-17多肽显著抑制了Pg-LPS的炎症刺激作用。结论:TLR-2和TREM-1参与了巨噬细胞应答Pg-LPS的先天免疫过程。     

rhBMP-2诱导成肌细胞表达成骨表型的研究

目的：检测不同浓度rhBMP-2对诱导成肌细胞成骨表型表达的影响，探索诱导成肌细胞表达成骨表型的rhBMP-2的最适浓度。方法：采用双重酶消化法获取SD大鼠乳鼠的成肌细胞，纯化后，在含15％胎牛血清的DMEM培养液中培养。取第3代培养细胞，按培养液中不同rhBMP-2浓度分组，分为0、0．1、0．5、1．0、1．5和5．0μg／ml共6组（0μg/ml组为对照组1，培养1、2和4周。收集不同时期细胞培养上清液和细胞爬片进行检测，检测指标为：细胞形态和数量、碱性磷酸酶（ALP）活性、骨钙素（OCN）含量、Ⅰ型胶原合成量和钙化结节染色。采用SPSS10．0统计软件包进行统计分析。各组间比较采用方差分析（ANOVA）。结果：应用rhBMP-2后，梭形成肌细胞减少，圆形或多突形成肌细胞明显增加，细胞呈集结性生长，培养4周可形成不透光结节。低、中浓度（0．1-1．5μg／ml）rhBMP-2组细胞数量和对照组之间无显著性差异（P〉0．05），但高浓度（5．0μg／ml）rhBMP-2组细胞数量显著下降（P〈0．05）。0．1～1．5μg／ml 4组rhBMP-2均能促进成肌细胞合成分泌ALP、OCN和Ⅰ型胶原（所有组与对照组比较，P〈0．05），其中0．5和1．0μg/ml 2组促进作用更显著。细胞培养4周后，茜素红S染色法示结节呈红色钙阳性反应。结论：低、中浓度（0．1～1．51μg／ml）rhBMP-2对成肌细胞增殖无显著影响，但高浓度（5．0μg/ml）rhBMP-2可显著抑制成肌细胞增殖。rhBMP-2可有效诱导成肌细胞表达成骨细胞各项表型并能体外成骨，其中0．5～1．01μg／ml是一个较为适宜的诱导浓度。     

中药补肾固齿丸对牙周炎治疗作用机制的探讨

目的研究补肾固齿丸水提液对LPS影响人牙周膜成纤维细胞生长及分泌IL-1β作用的调节能力,初步探讨补肾固齿丸的治病作用机理,以期为更好的利用中药治疗牙周病提供理论依据。方法人牙周膜成纤维细胞分别与脂多糖LPS 50μg／ml、LPS 50μg／ml＋补肾固齿丸水提液12．5μg／ml、LPS 50μml＋补肾固齿丸水提液25μml、LPS 50μg／ml＋补肾固齿丸水提液50μg／ml共同孵育6、72h,于6h收集细胞培养上清液,应用ELISA法检测细胞IL-1β分泌水平;72h应用MTT法检测存活细胞数量,评价细胞生长增殖情况。结果LPS可显著抑制牙周膜成纤维细胞生长（OD=0．198±0．097）,并刺激细胞IL-1β分泌水平显著升高（1．122±0．370pg／ml）（P〈0．01）;而补肾固齿丸水提液25μg／ml和50μg／ml则可显著抑制LPS的细胞毒性作用（OD=0．354±0．055,OD=0．368±0．029）、细胞IL-1β泌量也显著降低（0．685±0．168pg／ml,0．525±0．143pg／ml）,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论补肾固齿丸有效治疗牙周病的作用机理可能与降低细菌对宿主细胞生长抑制的毒性作用以及调节宿主免疫反应作用有关。     

TGF-β1对炎症状态下人牙周膜成纤维细胞的调控作用

目的 探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对在牙龈卟啉单胞菌来源脂多糖（lipopolysaccharide from Porphyromonas gingivalis,Pg-LPS）刺激模拟炎症状态下的人牙周膜成纤维细胞（human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs）的调控作用。方法 获取hPDLFs并进行免疫组化鉴定,通过qRT-PCR与CCK-8确定Pg-LPS的刺激浓度。将hPDLFs分成4组：空白对照组,单纯100μg/mL Pg-LPS;低浓度组,1 ng/mL TGF-β1+100μg/mL Pg-LPS;中浓度组,10 ng/mL TGF-β1+100μg/mL Pg-LPS;高浓度组100 ng/mL TGF-β1+100μg/mL Pg-LPS。CCK-8检测细胞增殖情况;划痕实验与Transwell小室实验检测hPDLFs细胞迁移能力;流式细胞术检测hPDLFs的细胞周期;qRT-PCR检测hPDLFs的转录因子叉头盒p3(forkhead/winged h...     

Evidence of the validity of a model of determinants of quality of restorative dental care

A model describing the relationship between self-reported quality of restorative dentistry and dentist characteristics for 119 Montana general dentists is presented. The best predictors formed a significant model explaining 22% of the variance of the quality measure. Results are contrasted with a previous estimation of the model for 102 Washington general practitioners. Evidence for the external validity of the model is presented.     

口底癌34例临床分析

目的探讨口底癌的临床特性、治疗方法及预后。方法对我院自1992—2002年住院治疗的34例口底癌患者进行回顾性分析。结果34例口底癌患者中,男28例(82.4%),女6例(17.6%),男女比为4.7∶1,平均发病年龄58岁。发病部位:前口底22例(64.7%),后口底12例(35.3%)。淋巴结转移率41.2%。单纯手术组、化疗加手术组、放疗加手术组、化疗加手术加放疗组的5年生存率分别为45.5%、60.0%、50.0%、62.5%。结论口底癌以中老年患者好发,男性居多。易发生淋巴结转移,综合疗法疗效较好。     

Results of treatment of cancer of the lip

A study was carried out in Sancti Spiritus Province in the 1984-1986 period about the results of the treatment of lip cancer. Male patients were the most affected by lip cancer (CIE 8-140) in our series. The place of the tumor was predominantly the lower lip (p less than or equal to 0.001). Surgical treatment was used in 96.8% of the cases and the cuneiform (wedge-shaped) exeresis was the most commonly used method in the early stages of the disease (T1 y T2). Casta?ón keloplasty was the reconstructive procedure used in 18.7% of the patients. Local sepsis was present in 31.2% of the patients undergoing surgery, occurring most frequently in upper lip tumors.     

不同剂型玻璃离子水门汀溶解性比较研究

目的:研究、比较不同剂型玻璃离子水门汀的溶解性和表面微观形态改变,为临床使用提供依据.方法:将3M树脂加强型玻璃离子水门汀(水粉剂型)、GC玻璃离子水门汀(水粉剂型)及GC玻璃离子水门汀(双糊剂型)分别在人工唾液中浸泡30 d,冷热循环15000次,烘干测重,比较前后质量变化,计算溶解率,并用扫描电镜观察表面微观改变.结果:不同剂型的玻璃离子水门汀溶解率由高到低分别为3M树脂加强型玻璃离子水门汀(水粉剂型)、GC玻璃离子水门汀(水粉剂型)、GC玻璃离子水门汀(双糊剂型).3种玻璃离子水门汀经浸泡溶解后,SEM扫描表面微观形态可观察到GE玻璃离子水门汀(双糊剂型)表面形态改变较少,其他2组玻璃离子水门汀表面微观改变较多.结论:双糊剂型玻璃离子水门汀理化性能及溶解率均低于传统水粉剂型,是未来临床修复治疗的的良好选择.     

平阳霉素对血管内皮细胞急性损伤后酶活性变化的实验研究

目的：探讨平阳霉素损伤血管内皮细胞的机制,为临床应用提供组织学依据。方法：选用成年Wistar大白鼠42只（其中6只为正常对照）,经肠系膜静脉分别注入平骒霉素（24只）或鱼肝油酸钠（12只）后,分别于注药后0．5,1,2,4,8,24h,切取肝脏组织,通过酶组化染色法测定肝窦内皮细胞的5’－核苷酸酶,肝细胞的琥珀酸脱氢酶（SDH）及乳酸脱氢酶（LDH）活性,结果：注入药液后,肝窦内皮细胞的5’－核苷酸酶,肝细胞的SDH和LDH活性随时间逐渐下降,其中平阳霉素组下降较轻微,结论：平阳霉素和鱼肝油酸钠都可对血管内皮细胞产生损伤,损伤的性质一样,均为非特异性,但平阳霉素损伤程度轻微,而鱼肝油酸钠严重。